人骨髓间充质干细胞中Notch信号上调对破骨细胞增殖的调控

目的通过研究Notch信号上调的人骨髓间充质干细胞(human Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,hBMSCs)对破骨细胞增殖调控的机制,探讨Notch信号在成骨-破骨偶联中的作用。方法用装载Notch信号胞内域NICD1的慢病毒载体(Lentivirus,Lv)转染hBMSCs,收集其分泌的条件培养液(Conditioned Medium,CM)。培养前破骨细胞系RAW264.7,模拟共培养环境。定量RT-PCR和ELISA测定转染前后hBMSCs表达和分泌的M-CSF的情况。cck-8和单板克隆试验测定RAW264.7的增殖情况。结果转染慢病毒后,hBMSCs表达和分泌的M-CSF均有所上调(分别为P0.01和P0.05);CCK-8和单板克隆试验的结果显示hBMSCs分泌的CM使RAW264.7的细胞数量增加(均为P0.01)。结论 Notch信号上调的hBMSCs可以通过影响M-CSF的表达和分泌,作用于破骨前体细胞,促进其增殖。     

低浓度TNF-α对大鼠髓核间充质干细胞增殖及迁移的影响

[目的]探讨低浓度TNF-α对大鼠髓核间充质干细胞(nucleus pulposus derivedstem cells,NPSCs)增殖及迁移特性的影响。[方法]差速贴壁法从SD大鼠尾椎髓核组织中分离NPSCs,体外培养,镜下观察细胞形态和生长状况;取P3代细胞利用流式细胞仪鉴定干细胞表面抗原;使用诱导培养基进行三系诱导分化,3周后分别用茜素红、油红O、阿利辛蓝染色观察成脂、成骨、成软骨能力。用含不同浓度(0、0.1、1、10 ng/ml)TNF-α的血清培养液培养P3代细胞,0、1、3、5、7 d后CCK-8法检测细胞增殖活力(OD值),划痕实验及Transwell迁移实验比较各组细胞迁移能力。[结果]P0代细胞呈集落样生长,细胞形态呈纺锤状。P3代细胞免疫表型鉴定MSCs表面分子标记CD90、CD29、CD44表达比例分别高达96%、99%、97%以上,低表达CD45、CD34(低于5%和4%)。茜素红、油红O及阿利新蓝染色证实分离的细胞可向骨、脂肪及软骨分化。按照ISCT有关MSCs的判定标准,分离的细胞即NPSCs。用含TNF-α培养液培养髓核间充质干细胞1、3、5、7 d后,与对照组相比,低浓度的TNF-α均促进了NPSCs的增殖。Transwell及划痕实验表明随着TNF-α浓度的增加,NPSCs的迁移能力上升。[结论]低浓度的TNF-α(0.1~10 ng/ml)能促进NPSCs增殖及迁移能力。     

OGP和IGF-1对人牙周膜细胞增殖和总蛋白含量的影响

目的 探讨成骨生长肽(OGP)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对体外培养的人牙周膜细胞(PDLC)增殖及其总蛋白含量的影响.方法 体外培养人PDLC与不同浓度的OGP和IGF-1单独或联合应用,用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)观察人PDLC增殖的情况,用考马斯亮蓝染色法检测细胞内总蛋白含量的变化.结果 OGP明显促进人PDLC增殖,第3天最大显效浓度为10-9mol/L,最小显效浓度为10-11mol/L.IGF-1也促进人PDLC增殖,第3天最大显效浓度为100ng/ml,最小显效浓度为1ng/ml.在第1、3、6天,OGP与IGF-1最大显效浓度联合和最小显效浓度联合,对人PDLC增殖活性和细胞内总蛋白合成的促进作用均较对照组增加.结论 OGP和IGF-1均可促进人PDLC增殖和细胞内总蛋白含量的提高,在一定范围内呈浓度时间依赖关系,二者联合具有协同效应.     

炎症微环境作用下BMPs-ERK5信号通路对牙周膜干细胞成骨分化的影响

目的 探讨炎症微环境作用下骨形态发生蛋白-细胞外信号调节激酶5(Bone morphogenetic proteins-extracellular signal-regulated kinase 5,BMPs-ERK5)信号通路对人牙周膜干细胞(Human periodontal ligament stem cells...     

辛伐他汀对人牙髓干细胞增殖和分化的影响

目的:研究辛伐他汀对人牙髓干细胞(dental pulpstem cells,DPSCs)增殖和成骨分化的影响。方法:将第3代人DPSCs在矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀(1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L),噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况,碱性磷酸酶试剂盒检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,茜素红染色鉴定成骨分化。结果:各浓度辛伐他汀均抑制人DPSCs增值,辛伐他汀浓度为1×10-5mol/L时,抑制作用最明显。适宜浓度辛伐他汀(1×10-6mol/L、1×10-7mol/L、1×10-8mol/L)促进人DPSCs向成骨细胞分化,其中,1×10-7mol/L的辛伐他汀促进ALP活性的作用最明显。结论:辛伐他汀抑制人DPSCs的增值,适宜浓度的辛伐他汀可有效促进人DPSCs的成骨分化。     

胶质细胞源性神经营养因子对哺乳动物精原干细胞增殖及分化的影响

胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)是转化因子β(TGF-β)超家族的一个相关成员,在哺乳动物睾丸中由支持细胞分泌,对精原干细胞(SSCs)的增殖和分化具有非常重要的作用。体外培养SSCs时培养液中添加适量的GDNF能够促进SSCs的增殖。GDNF介导多种信号通路调节SSCs的自我更新和分化。本文就GDNF对哺乳动物精原干细胞增殖与分化的作用及其所介导的信号通路进行了综述。     

RGDS对人牙周膜成纤维细胞生物学行为的研究

目的：观察精氨酸-甘氨酸-天门冬氨酸-丝氨酸（RGDS）对人牙周膜细胞生物学行为的影响,探讨RGDS的作用机制及其应用于牙周治疗的可行性。方法：采用细胞培养、固相结合分析等方法,观察RGDS对牙周膜细胞的黏附、伸展以及增殖、碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果：RGDS可促进牙周膜细胞的黏附、伸展,在浓度为25-100mg／L时作用显著（P〈0．01）,在浓度为50-100mg／L时可明显促进PDL细胞增殖（P〈0．05）,浓度为25-100mg／L时显著提高PDL细胞的ALP活性（P〈0．05）。结论：RGDS对牙周膜细胞的黏附、伸展、增殖及ALP活性均有促进作用,且其促黏附、伸展的作用更为显著。     

miR-124靶向调控Notch 1通路影响肝癌细胞的增殖和迁移

[摘 要] 目的 探索微小RNA-124（miR-124）通过Notch1信号通路对肝细胞性肝癌（HCC）细胞增殖和迁移的影响。方法 将肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞HL7702作为受试对象。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法检测细胞中miR-124的表达。HepG2细胞转染miR-124模拟物（miR-124 mimic）后,CKK-8法检测细胞增殖活性,Transwell法检测细胞迁移能力。Western blotting检测Notch1信号通路表达。结果 在HepG2细胞中,miR-124表达低于人正常肝细胞HL7702[（1.00±0.00） vs （21.32±1.02）;P < 0.05];与对照组（无处理的HepG2细胞）相比,miR-124 mimic转染组中Hep G2细胞增殖明显降低[（0.44±0.01） vs（0.21±0.01）;P < 0.05],细胞迁移能力也降低[（12.00%±2.00%） vs （5.67%±1.52%）;P < 0.05];miR-124过表达可以明显抑制Hep G2细胞内Notch1信号通路蛋白表达[（100.00%±0.00%） vs （36.46%±2.36%）;P <0.05]。结论 本研究显示,miR-124可靶向抑制Notch1表达,进而抑制HCC的增殖和迁移。     

姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及作用机制

目的:探讨姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移的影响及其作用机制。方法:体外培养人结肠癌SW480细胞株、人结肠癌SW620细胞株至对数生长期,选用不同浓度的姜黄素分别处理两种结肠癌细胞,采用MTT、克隆、流式细胞术、Transwell、Western blot等实验观察姜黄素对结肠癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学作用的影响。结果:MTT实验和克隆实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的增殖,流式细胞术实验结果表明姜黄素可诱导结肠癌细胞的凋亡,Transwell实验结果表明姜黄素能够抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭,Western blot实验结果表明姜黄素可抑制P13K/AKT信号通路。结论:姜黄素可显著抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移,诱导结肠癌细胞凋亡,其机制可能与抑制P13K/AKT信号通路有关。     

Notch1信号通路对小鼠触液神经元体外增殖能力的调节作用

目的:探讨Notch 1信号通路在调节小鼠触液神经元增殖中的作用.方法:(1)取出生24h内C57BL/6小鼠延髓组织,消化后提取细胞,经流式细胞分选得到触液神经元(cerebrospinal fluid-contacting neurons,CSF-cNs).将CSF-cNs悬浮培养并传代.(2)将CSF-cNs传至...     

三种组织块法培养人牙周膜细胞的比较研究

目的提高人牙周膜细胞(Human periodontal ligament cells,HPDLCs)原代培养的成功率,并缩短培养周期。方法以高血清培养基组织块法、传统组织块法和玻片覆盖组织块法等3种方法原代培养HPDLCs。通过镜下观察细胞形态,免疫组化方法鉴定细胞来源,及绘制细胞生长曲线等方面,对各种方法的成功率进行比较。结果 3种方法所培养的原代细胞均生长良好,呈梭形,波形丝蛋白和碱性磷酸酶染色阳性、角蛋白染色阴性,符合HPDLCs的形态和生物学特征。高血清培养基组织块法的原代培养的成功率为84.21%,明显高于其他2种方法 (P0.01)。结论高血清培养基组织块法能显著提高HPDLCs原代培养的成功率。     

Generation of Human-Induced Pluripotent Stem Cells From Anterior Cruciate Ligament

Human-induced pluripotent stem cells (hiPSCs) are reprogrammed somatic cells and are an excellent cell source for tissue engineering applications, disease modeling, and for understanding human development. HiPSC lines have now been generated from a diverse range of somatic cell types and have been reported to retain an epigenetic memory of their somatic origin. To date, the reprogramming of a true ligament has not been reported. The aim of this study is to generate iPSCs from human anterior cruciate ligament (ACL) cells. ACL cells from three above-knee amputation donors, with donor matched dermal fibroblasts (DFs) were tested for reprogramming using an existing DF reprogramming protocol. ACL cells were, however, more sensitive than donor matched DF to transforming growth factor-β (TGF-β); displaying marked contraction, increased proliferation and increased TNC and COMP expression in vitro, which hindered reprogramming to iPSCs. Modification of the protocol by scoring the cell monolayer or by removal of TGF-β during ACL reprogramming resulted in emerging colonies being easier to identify and extract, increasing reprogramming efficiency. Following 30 passages in culture, the generated ACL derived iPSCs displayed pluripotency markers, normal karyotype and can successfully differentiate to cells of the three embryonic germ layers. This study illustrates it is possible to generate hiPSCs from ligament and identifies optimized ligament reprogramming conditions. ACL derived iPSCs may provide a promising cell source for ligament and related tissue engineering applications. © 2019 The Authors. Journal of Orthopaedic Research® published by Wiley Periodicals, Inc. on behalf of Orthopaedic Research Society J Orthop Res 38:92–104, 2020     

大黄酸对胰腺癌细胞增殖和迁移的影响及机制研究

目的:研究大黄酸对人胰腺癌细胞增殖和迁移的影响,并探讨其作用机制.方法:用不同浓度的大黄酸处理人胰腺癌MiaPaCa-2细胞,CCK8法检测大黄酸对MiaPaCa-2细胞增殖的影响;于常氧和缺氧条件下培养MiaPaCa-2细胞,Transwell法检测大黄酸对胰腺癌细胞迁移的影响,并用Western blot法检测细胞...     

miR‐196a Regulates Proliferation and Osteogenic Differentiation in Mesenchymal Stem Cells Derived From Human Adipose Tissue

The elucidation of the molecular mechanisms that govern the differentiation and proliferation of human adipose tissue‐derived mesenchymal stem cells (hASCs) could improve hASC‐based cell therapy. In this study, we examined the roles of microRNA (miRNA)‐196a on hASC proliferation and osteogenic differentiation. Lentiviral overexpression of miR‐196a decreased hASC proliferation and enhanced osteogenic differentiation, without affecting adipogenic differentiation. Overexpression of miR‐196a decreased the protein and mRNA levels of HOXC8, a predicted target of miR‐196a. HOXC8 expression was decreased during osteogenic differentiation of hASCs, and this decrease in HOXC8 expression was concomitant with an increase in the level of miR‐196a. In contrast, inhibition of miR‐196a with 2′‐O‐methyl‐antisense RNA increased the protein levels of HOXC8 in treated hASCs and was accompanied by increased proliferation and decreased osteogenic differentiation. The activity of a luciferase construct containing the miR‐196a target site from the HOXC8 3′UTR was lower in LV‐miR196a‐infected hASCs than in LV‐miLacZ‐infected cells. RNA interference‐mediated downregulation of HOXC8 in hASCs increased their proliferation and decreased their differentiation into osteogenic cells, without affecting their adipogenic differentiation. Our data indicate that miR‐196a plays a role in hASC osteogenic differentiation and proliferation, which may be mediated through its predicted target, HOXC8. This study provides us with a better knowledge of the molecular mechanisms that govern hASC differentiation and proliferation.     

Mesen PRO RS Medium对人脂肪干细胞增殖与分化的影响

目的探讨MesenPRO RS Medium对人脂肪干细胞增殖与分化的影响。方法应用MesenPRO RS Medium与DMEM＋10％FBS两种培养基培养人脂肪干细胞,比较两者在细胞形态、体外增殖能力、成纤维细胞集落形成（CFU—F）能力及多向分化潜能的差异。结果MesenPRO RS Medium培养的人脂肪干细胞具有良好的细胞形态,在增殖速度、细胞集落,以及成脂、成骨及成软骨能力等方面均优于DMEM＋10％FBS。结论MesenPRO RS Medium是人脂肪干细胞优良的培养基。     

凝血酶活化的富血小板血浆促进人骨髓间充质干细胞增殖

目的探索凝血酶活化的富血小板血浆(Thrombin-activated platelet-rich plasma,tPRP)替代牛血清,进行人骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stme cells,MSC)分离及培养扩增的可行性。方法分别用MTT法和羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯标记细胞技术,观察人骨髓MSC在含有tPRP和胎牛血清培养体系中的增殖状态:利用流式细胞学技术检测细胞表面表型;细胞化学染色法分析不同培养体系所获细胞的成骨及成脂细胞分化能力。结果tPRP培养的人骨髓MSC呈典型的成纤维细胞样形态,且tPRP促MSC增殖能力优于筛选后的胎牛血清。tPRP培养的MSC均表达CD29、CD73、CD166和HLA-ABC,而不表达CD31、CD34、CD45和HLA-DR。体外分化实验显示,利用tPRP培养的MSC具有体外成骨和成脂能力。结论tPRP可以替代胎牛血清,用于人骨髓MSC的培养。     

异丙酚通过调控miR-506对骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡的影响

目的:研究异丙酚是否通过调控微小RNA(miRNA/miR)-506影响骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭及凋亡。方法:骨肉瘤HOS细胞分为NC组(未处理)、Pro-L组(1 μg/mL异丙酚)、Pro-M组(5 μg/mL异丙酚)、Pro-H组(10 μg/mL异丙酚)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-506组(转染miR-506 mimic)、Pro+anti-miR-NC组(转染antimiR-NC+10 μg/mL异丙酚)、Pro+anti-miR-506组(转染miR-506 inhibitor+10 μg/mL异丙酚)。应用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法测定细胞增殖,免疫印迹实验(Western blotting)评估细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达,Transwell实验检测迁移侵袭,流式细胞术分析细胞凋亡,荧光定量PCR测定miR-506表达。结果:与NC组比较,Pro-L、Pro-M、Pro-H组HOS细胞的抑制率、p21、Bax蛋白水平、凋亡率和miR-506表达水平逐渐增加,CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平、迁移细胞数和侵袭细胞数逐渐减少,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-506组HOS细胞的抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平比miR-NC组升高,迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平比miR-NC组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。Pro+anti-miR-506组较Pro+anti-miR-NC组降低HOS细胞中miR-506表达水平、抑制率、凋亡率、p21、Bax蛋白水平,提高迁移细胞数、侵袭细胞数、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、Bcl-2蛋白水平,差异有统计学意义(P<0.05)。结论: 1、5、10 μg/mL异丙酚上调miR-506的表达,抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移侵袭,并且促进其凋亡。