miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制

BACKGROUND:It has been proved that miR-34a plays an inhibitory role in the growth of lung cancer stem cells, but the underlying mechanism remains unclear. OBJECTIVE:To explore the inhibitory effect of miR-34a on lung cancer stem cells and the underlying mechanism. METHODS:The CD133⁺ lung cancer stem cells were separated from lung cancer A549 cell lines using magnetic activated cell sorting method. And miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were established by liposome transfection technology. Besides, the targeted relationship between miR-34a and Notch1 was analyzed by the dual-luciferase reporter. Afterwards, Notch1 silencing was performed by gene knockout, and its effect on lung cancer stem cells was determined. RESULTS AND CONCLUSION:After sorted and detected by immunomagetic selection and flow cytometry assay respectively, a high rate of CD133⁺ lung cancer stem cell was obtained. And qRT-PCR detected that the expression level of miR-34a in CD133⁺ lung cancer stem cells was significantly lower than that in CD133^- lung cancer stem cells. Moreover, miR-34a-overexpressing CD133⁺ lung cancer stem cells were successfully constructed and miR-34a significantly inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. Dual-luciferase reporter assay indicated that Notch1 mRNA was a target of miR-34a. In addition, Notch1 silencing obviously inhibited proliferation and induced apoptosis of lung cancer stem cells. These findings suggest that miR-34a can inhibite lung cancer stem cells via the Notch1 signaling pathway.     

高糖刺激对人足细胞miR-34a和相关蛋白表达的影响

目的探讨高糖刺激对人足细胞miR-34a以及Notch信号通路相关基因表达的影响。方法以分化成熟的人足细胞作为研究对象,采用25mM D-葡萄糖分别作用24h、48h、72h,另外将miR-34a mimics转染至HPC细胞,采用流式细胞术检测高糖刺激对HPC细胞凋亡的影响;采用qRT-PCR和western blot法检测高糖刺激以及miR-34a对HPC细胞Notch1、Jagged1和NICD1基因和蛋白表达的影响。结果高糖刺激HPC细胞的凋亡率明显高于空白对照组(P0.05);且随着作用时间的延长,HPC细胞凋亡率逐渐增加;而miR-34a mimics转染组细胞凋亡率与对照组细胞比较无明显差异, P0.05。经高糖(25mM)作用于HPC细胞48h后,miR-34a表达量明显降低,而Notch1、Jagged1、NICD1基因和蛋白的表达量明显上调,与空白对照组细胞比较,差异有统计学意义(P0.05);而转染miR-34a mimics后,HPC细胞Notch1、Jagged1、NICD1基因和蛋白表达量明显低于空白对照组和高糖作用细胞(P0.05)。结论高糖刺激促使足细胞miR-34a表达下调,从而促使Notch信号通路的激活,诱导足细胞损伤作用     

miR-146调控TLR2通路拮抗脂多糖对滋养细胞损伤及其机制研究

目的 探讨miR-146调控Toll样受体2(TLR2)通路拮抗脂多糖(LPS)对滋养细胞损伤及其机制.方法 体外培养HTR-8/Svneo细胞,试验分为5组:对照组、LPS组(0.1 ng/L LPS)、LPS+miR-146 NC组、LPS+miR-146 mimics组、LPS+miR-146 mimics+Pa...     

脑缺血的损伤机制及相关信号通路的研究进展

<正>脑缺血具有高发病率、高致残率、高死亡率等特点,为人类三大死亡疾病之一。脑缺血或缺血性脑中风是指脑内血液供应障碍导致的大脑区域性的缺血缺氧。脑缺血后将引发氧化应激、兴奋性氨基酸、离子超载、膜脂质降解、DNA损伤和炎症反应损伤等一系列的病理生理学变化,最终导致神经细胞凋亡[1]。研究表明线粒体功能障碍与脑缺血后细胞凋亡也有关联[2]。近年来,亦有研究表明脑缺血损伤多与某些信号通路有关,如转录因子NF-κB和MAP激酶p38/     

氟比洛芬酯对放射性心脏损伤模型大鼠NF-κB/TGF-β1信号通路的影响

目的：探究氟比洛芬酯（FA）对放射性心脏损伤（RIHD）模型大鼠NF-κB/TGF-β1信号通路的影响。方法：50只大鼠按随机数字法分为对照组、照射组、FA低剂量组、FA中剂量组、FA高剂量组,每组10只。除对照组不照射外,其余各组心脏照射20 Gy,放疗结束当天给药,FA低、中、高剂量组尾静脉分别注射5、10、20 mg/kg FA,直至放疗后4周结束。试剂盒检测大鼠血清中肌钙蛋白T(cTnT)、肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平、心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量、髓过氧化物酶（MPO）活性;HE染色观察大鼠心肌组织形态;ELISA检测血清中TNF-α、IL-6、IL-10水平;RT-qPCR和免疫组化检测心肌组织中NF-κB、TGF-β1 mRNA和蛋白水平。结果：照射组大鼠心肌细胞出现明显水肿现象、心肌缺血、坏死严重,并伴有大量炎症浸润,横肌消失,核固缩或溶解;随着FA剂量升高,细胞逐渐恢复正常,排列规律,仅出现少量炎症浸润现象。与对照组相比,照射组血清中cTnT、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织病理评分、心肌组织中MDA含量、MPO活性,...     

microRNA-34家族在肺癌中的作用机制

在许多癌症中, miR?34家族成员充当着极具潜力的具有肿瘤抑制活性的作用。例如,在肺癌中,外源性高表达miR?34a能够抑制肺癌细胞的增殖并诱导其凋亡。预示着利用miR?34a的恢复疗法（ replace?ment therapy）治疗肺癌具有良好的前景,其作用机制也正在逐渐阐明。许多研究发现, miR?34a家族成员与肺癌细胞的增殖、转移、凋亡、细胞周期的调控息息相关。因此, miR?34a家族成员在肺癌的早期诊断、治疗、预后及发病机制的研究中发挥着重要作用。文章综述了miR?34家族的研究现状,重点总结了 miR?34家族在肺癌中的作用机制。     

miR-34a调控HMGB1表达对人膀胱癌细胞增殖的影响

目的探讨miR-34a对膀胱癌T24细胞增殖的影响。方法合成miR-34a的模拟物并转染膀胱癌T24细胞,荧光显微镜下观察转染效率,实时荧光定量PCR法检测转染48 h后,T24细胞中miR-34a的表达情况,MTT法检测转染24、48和72 h后T24细胞的增殖情况,实时荧光定量PCR法和western blot方法检测转染48 h后膀胱癌细胞内源性HMGB1 m RNA及蛋白的表达变化。结果 miR-34a的模拟物转染至T24细胞的效率为80%,转染miR-34a模拟物48 h后,T24细胞内miR-34a的表达显著升高(P0.05),T24细胞的增殖率显著低于阴性对照组(P0.05),且呈时间依赖性,HMGB1 m RNA及蛋白的表达水平明显低于阴性对照组(P0.05)。结论 miR-34a抑制膀胱癌T24细胞增殖可能与靶向HMGB1基因相关。     

miR-34a 调控MSR1 蛋白对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-34a 通过MSR1 对前列腺细胞迁移和侵袭的影响。方法:Western blot 检测前列腺癌PC3 细胞中MSR1 表达情况;qPCR 检测前列腺癌PC3 细胞中miR-34a 的表达情况,使用双荧光素酶实验检测miR-34a 和MSR1 之间的相关性;Transwell 侵袭实验检测miR-34a 和MSR1 对前列腺癌细胞侵袭能力的影响;划痕愈合实验检测miR-34a 和MSR1 对前列腺癌细胞迁移能力的影响。结果:Western blot 检测前列腺癌PC3 细胞中MSR1 的表达水平相对较高;qPCR 检测前列腺癌PC3 细胞中miR-34a 的表达水平相对较低;双荧光素酶检测miR-34a 和MSR1 之间有直接的结合位点,miR-34a 可以调控MSR1 的表达水平,划痕愈合试验和Transwell 侵袭试验检测过表达miR-34a 后前列腺癌PC3 细胞的迁移和侵袭能力受到相应的抑制,过表达MSR1 后可以逆转miR-34a 对前列腺癌PC3 细胞的迁移和侵袭能力的抑制作用。结论:miR-34a 可以通过MSR1 蛋白来调控前列腺癌细胞的迁移和侵袭行为。     

过表达miR-34a增加血肿瘤屏障通透性机制的研究

目的探讨过表达miR-34a增加血肿瘤屏障通透性的机制。方法将miR-34a模拟物转染至培养的人脑微血管内皮细胞NKIM-6,采用实时荧光定量PCR方法检测miR-34a的表达。用miR-34a模拟物转染的NKIM-6细胞和U87胶质瘤细胞建立体外血肿瘤屏障模型,跨内皮电阻测量系统检测血肿瘤屏障跨内皮阻抗值的变化;western blot和免疫荧光法检测体外血肿瘤屏障NKIM-6细胞中,紧密连接相关蛋白ZO-1和claudin-5的表达。结果经miR-34a模拟物转染后,NKIM-6细胞中miR-34a的表达水平显著升高;血肿瘤屏障跨内皮阻抗值显著下降;体外血肿瘤屏障NKIM-6细胞中紧密连接相关蛋白ZO-1和claudin-5的表达水平分别显著降低,在细胞膜上呈不连续分布。结论过表达miR-34a显著增加血肿瘤屏障的通透性,其机制之一可能与降低紧密连接相关蛋白相关。     

miR-145介导Notch2/Jagged-2信号通路改善心肌缺血-再灌注大鼠心肌损伤

目的 探讨miR-145对心肌缺血再灌注(I/R)大鼠心肌损伤的保护作用及可能的机制.方法 按随机数字表法将30只SD大鼠分为假手术组(Sham)、模型组(I/R)和miR-145 mimic组(miR-145);HE染色检测各组大鼠心肌组织病理变化;TUNEL染色检测各组大鼠心肌细胞凋亡情况;ELISA试剂盒检测大鼠肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、血清乳酸脱氢酶(LDH)、白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;qPCR检测各组大鼠心肌miR-145、Notch2及Jagged-2 mRNA的表达;Western blot检测大鼠心肌中Notch2及Jagged-2蛋白表达.结果 miR-145可减轻大鼠心肌病理损伤,降低心肌细胞凋亡,使大鼠体内CK-MB、cTnT及LDH水平显著降低,抑制炎症反应,降低IL-6、IL-1β及TNF-α水平,抑制Notch2及Jagged-2 mRNA及蛋白表达.结论 miR-145对I/R大鼠心肌组织损伤有一定的改善作用,可能是通过抑制Notch2/Jagged-2信号通路活性实现的.     

MicroRNA-34a靶向SIRT1参与阿霉素诱导的心肌细胞凋亡

目的:研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其作用靶基因。方法:建立阿霉素(doxorubicin,Dox)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡模型;TUNEL染色观察H9c2细胞凋亡;双萤光素酶报告实验检测miR-34a与潜在靶基因沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)3'端非翻译区(3'-untranslated region,3'UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR检测miR-34a和SIRT1 mRNA表达水平,Western blot检测SIRT1和凋亡相关蛋白表达水平。结果:阿霉素处理H9c2细胞之后,细胞发生凋亡,miR-34a的表达显著增强;双萤光素酶报告实验提示miR-34a与SIRT1 3'UTR可相互作用,并证实miR-34a可在转录后水平抑制SIRT1的表达,SIRT1蛋白水平在阿霉素处理的心肌细胞中显著下调;过表达miR-34a及沉默SIRT1均能一致性抑制Bcl-2表达,促进Bax和p66shc的表达,而过表达SIRT1能有效抑制阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡。结论:SIRT1是miR-34a的靶基因,并介导了miR-34a在阿霉素诱导的心肌细胞凋亡中的作用。     

miR-34a调控的M2型巨噬细胞极化对食管癌细胞迁移和凋亡的影响

目的探究miR-34a在调控M2型巨噬细胞极化中的作用及其对食管癌细胞迁移和凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR检测不同分化状态下的巨噬细胞miR-34a的表达水平;在M2型巨噬细胞中转染对照microRNA（miR-NC）和miR-34a mimics,使用荧光定量PCR检测CD163、CD206、CCL18和CCL22 m RNA的表达水平,使用酶联免疫吸附实验检测培养基中IL-10和TGF-β的表达水平;细胞划痕实验检测EC109细胞迁移能力;流式细胞术检测5-氟尿嘧啶（5-FU）诱导的EC109细胞凋亡水平;MTT法检测5-FU的半数抑制计量(IC₅₀)。结果与THP-1和M0型巨噬细胞相比,M2型巨噬细胞极化过程中miR-34a表达水平显著下降;与对照组细胞相比,转染miR-34a mimics的M2巨噬细胞CD163、CD206、CCL18和CCL22 mRNA表达水平显著下降,分泌到培养基中的IL-10和TGF-β含量显著下降。与对照组相比,使用过表达miR-34a的M2巨噬细胞条件培养基培养的食管癌EC109细胞迁移水平显著下降,5-FU诱导的细胞凋...     

血清miR-34a表达水平预测乳腺癌新辅助化疗疗效

目的探讨血清miR-34a对乳腺癌新辅助化疗疗效的预测价值。方法本研究包括78名确诊的原发性乳腺癌患者和30名健康志愿者。每位患者在化疗开始前,第二个周期结束和新辅助化疗结束时抽取6ml静脉血。实时定量PCR检测血清miR-34a的表达,其与化疗响应的关系被分析。结果血清miR-34a的表达水平在乳腺癌患者化疗开始前显著高于健康志愿者。在治疗有效组和无效组,血清miR-34a的表达水平在化疗开始前,两周期结束时和化疗结束时均无显著差异。而血清miR-34a表达水平的变化是与治疗反应显著相关的。在治疗有效组,患者的血清miR-34a水平在化疗第二周期后和化疗结束时均低于化疗开始前(P=0.023和P=0.036),而无效组无显著变化。ROC曲线显示血清miR-34a表达水平的变化能准确地预测新辅助化疗的疗效。结论血清miR-34a是一个新的、非侵入性的生物标记物,能够准确地预测乳腺癌新辅助化疗的疗效。     

介导糖尿病肾病线粒体损伤的相关信号通路

<正>糖尿病(diabetes mellitus,DM)是一组由于胰岛素的作用和(或)分泌缺欠而引起的以慢性高血糖和葡萄糖不耐受为主要特征的代谢性综合征。根据世界糖尿病联盟统计,2017年糖尿病的世界发病率(20～79岁)为8.8%,预计到2045年会达到9.9%。2017年,中国大陆糖尿病患病率为10.9%,约有1.144亿糖尿病患者(20～79岁),位居世界第一,占世界糖尿病患者总数的1/4以上。     

miR-200a通过调节PTEN影响小鼠肝细胞中AKT/GSK信号通路活性

目的 肝胰岛素抵抗能够导致严重的糖脂代谢紊乱,同2型糖尿病的发病密切相关.miR-200a属于miR-200家族,广泛表达于各个组织中,在许多癌症细胞中高表达.此研究探讨miR-200a通过下游靶基因PTEN调节AKT/GSK信号通路活性的机制,从microRNA角度阐明肝胰岛素抵抗的机制,为胰岛素抵抗的防治提供新的思路.方法 ① 脂质体在小鼠肝脏细胞株HEP1-6中转染miR-200a mimic和miR-200a inhibitor,用Real-time PCR检测细胞中miR-200a水平,并且检测AKT/GSK信号通路;② 用生物信息学方法预测miR-200a的下游靶基因;以双荧光素酶报告分析和Western印迹明确miR-200a的下游基因PTEN.③ 在HEP1-6细胞中共同转染miR-200a和si-PTEN,验证miR-200a通过PTEN调节AKT/GSK信号通路活性.结果 ① 用miR-200a mimic转染HEP1-6细胞,miR-200a水平升高,AKT/GSK信号通路活性增强;用miR-200a inhibitor转染HEP1-6细胞,miR-200a水平降低,AKT/GSK信号通路活性受到抑制;② 双荧光素酶报告分析和Western印迹结果表明,miR-200a能够直接同PTEN3′-UTR结合,抑制PTEN蛋白表达;③ 在HEP1-6细胞中沉默PTEN促进AKT/GSK信号通路活性;同时转染miR-200a和si-PTEN,能够逆转miR-200a inhibitor对AKT/GSK信号通路的抑制作用.结论 在HPE1-6细胞中miR-200a通过调节下游靶基因PTEN影响AKT/GSK信号通路活性.     

结直肠癌细胞来源的外泌体miR-34a对M2型巨噬细胞极化的影响北大核心CSCD

目的:探究结直肠癌来源的外泌体对巨噬细胞极化的影响及其作用机制。方法:建立THP-1来源的M2型巨噬细胞体外诱导分化模型,利用流式细胞染色实验检测细胞分化效率;通过与结直肠癌细胞共培养、结直肠癌细胞外泌体干预M2型巨噬细胞分化,利用实时荧光定量PCR实验检测ARG1、IL-10和NLRP3 mRNA的表达水平。结果:体外诱导分化的M2型THP-1巨噬细胞CD163阳性细胞比例显著升高;与对照组相比,与结直肠癌细胞HCT8和HCT116共培养的M2型巨噬细胞ARG1、IL-10表达水平显著升高,NLRP3表达水平下降。与转染阴性对照microRNA(miR-NC)组相比,转染miR-34a inhibitor的HCT8和HCT116共培养或外泌体刺激下,M2型巨噬细胞ARG1、IL-10表达水平下降,NLRP3表达水平升高;与miR-NC组相比,转染miR-34a inhibitor的THP-1细胞ARG1、IL-10表达水平显著下降,NLRP3表达水平显著升高。结论:结直肠癌细胞来源的外泌体miR-34a可以抑制巨噬细胞NLRP3的表达,促进巨噬细胞M2型极化。     

基于miR-34a/HMGB1轴探讨七氟醚对胃癌细胞恶性生物学活性的机制

目的 基于miR-34a/HMGB1轴探究七氟醚对胃癌细胞恶性生物学活性的影响。方法 将胃癌细胞分为NC组,SEV-1.7%组、SEV-3.4%组、SEV-5.1%组。miR-34a组、SEV-5.1%+anti-miR-34a组、SEV-5.1%+pcDNA-HMGB1组和SEV-5.1%+pcDNA-HMGB1+miR-34a组。CCK-8、Transwell小室法分别检测细胞增殖和侵袭移能力;qRT-PCR检测miR-34a表达;蛋白质印迹检测细胞中HMGB1蛋白表达;双荧光素酶报告系统实验检测miR-34a和HMGB1的靶向关系。结果 和GES-1细胞系相比,胃癌SGC-7901细胞（0.23±0.03）中miR-34a表达降低,HMGB1蛋白（0.85±0.10）表达升高（P<0.05）。和NC组相比,SEV-1.7%组、SEV-3.4%组、SEV-5.1%组细胞中miR-34a表达均升高,细胞存活率、细胞侵袭数目和HMGB1蛋白表达均降低（P<0.05）。和SEV-5.1%组相比,SEV-5.1%+anti-miR-34a组细胞存活率[24 h、48 h分别为（...     

miR-223通过作用CDK2及ERK信号通路参与Lewis肺癌细胞周期调控

目的研究miR-223对Lewis肺癌细胞（LLC）周期调控作用及其分子机制。方法将miR-223真核表达载体转染至LLC细胞中,应用流式细胞仪检测其细胞周期分布变化,实时定量PCR、western blot检测对CDK2表达和ERK信号通路的影响。结果流式细胞周期检测显示miR-223过表达导致G0/G1细胞由53.8%减少到45.3%,G2细胞由4.29%增加到13.2%;实时定量PCR及western blot显示,miR-223过表达抑制CDK2 mRNA及蛋白表达,并下调ERK信号通路。结论 miR-223通过作用CDK2及ERK通路参与Lewis肺癌细胞周期调控。     

丹皮酚调控miR-21对骨癌痛大鼠的镇痛作用及对MAPK信号通路的影响

目的 探讨丹皮酚(Paeonol)对骨癌痛大鼠的镇痛作用及其可能作用机制.方法 通过左后肢胫骨注射Walker256乳腺癌细胞悬液的方法建立大鼠骨癌痛模型.观察各组大鼠机械缩足反射阈值变化;qPCR检测各组大鼠脊髓处miR-21表达情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠脊髓中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细...