免疫组化和核酸原位杂交在尖锐湿疣病理诊断中的意义

目的　探讨免疫组化和核酸原位杂交检测人乳头瘤病毒 (HPV)在尖锐湿疣 (CA)病理诊断中的意义。方法　 44例病理形态学诊断为尖锐湿疣的石蜡包埋组织标本 ,用 HPV多克隆抗体和 HPV- 11单克隆抗体行免疫组化染色 ;用分别针对 HPV6和 HPV11- DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果　 1免疫组化染色 :37/4 4例(84.1%) HPV多克隆抗体染色阳性 ;6 /4 4例 (13.7%) HPV- 11单克隆抗体染色阳性 ;2原位杂交 :有 38/4 4例(86 .4%)表达 HPV- DNA,其中既表达 HPV6 - DNA又表达 HPV11- DNA者 2 6例 (5 9.1%) ;3联合应用免疫组化和原位杂交技术检测 ,有 43/4 4例 (97.7%)呈阳性反应。结论　免疫组化和原位杂交技术检测 HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段 ,二者的联合使用明显提高了 HPV的检出率。在临床应用中结合形态学改变 ,可提高尖锐湿疣诊断的准确性。     

免疫组化和核酸原位杂交在尖锐湿疣病理诊断中的意义

目的 探讨免疫组化和核酸原位杂交检验人乳头瘤病毒（HPV）和尖锐湿疣（CA）病理诊断中的意义。方法 44例病理形态学诊断为尖锐湿疣的石蜡包埋组织标本。用HPV多克隆抗体和HPV-11单克隆抗体行免疫组化染色，用分别针对HPV6和HPV11-DNA的寡核苷酸探针行原位杂交。结果 ①免疫组化染色：37/44例（84.1%)HPV多克隆抗体染色阳性；6/44型（13.7%）HPV-11单克隆抗体染色阳性；②原位杂交：有38/44例（86.4%)表达HPV-DNA，其中既表达HPV6-DNA又表达HPV11-DNA者26例（59.1%) ；③联合应用免疫组化和原位杂交技术检测，有43/44例（97.7%）呈阳性反应。结论 免疫组化和原位杂交技术检测HPV是病理诊断尖锐湿疣的重要辅助手段，二者的联合使用明显提高了HPV的检出率。在临床应用中结合形态学改变，可提高尖锐湿疣诊断的准确性。     

原位杂交技术对37例不典型尖锐湿疣的回顾性分析

目的:比较免疫组化和原位杂交在形态学不典型尖锐湿疣病理诊断中的意义。方法:对桂林医学院附属医院2002~2004年37例形态学不典型尖锐湿疣的病例,进行回顾性分析,应用地高辛标记HPV 6/11型探针对其进行检测,发现HPV 6/11( )即确诊为尖锐湿疣。结果:其中免疫组化检测HPV-CA g( )18例,HPV-CA g(-)19例。两种方法比较,原位杂交技术阳性率和阳性细胞数均显著高于免疫组化技术。结论:HPV DNA原位杂交技术在不典型的尖锐湿疣的诊断中具有重要意义。     

免疫组化和原位杂交法诊断尖锐湿疣的对比研究

目的：探讨原位杂交（ISH）和免疫组化（IHC）方法诊断尖锐湿疣（CA）的敏感性与特异性,并与组织病理相比较;了解湘潭地区CA患者感染人乳头瘤病毒（HPV）的基因类型及分布。方法：分别用原位杂交和免疫组化方法对临床和（或）病理组织学诊断CA的124例病例进行检测。结果：IHC检测HPV-P阳性84例,HPV16阳性82例,总阳性率为69.4%（86/124）,阳性细胞主要分布在棘细胞上层及颗粒细胞层;ISH检测HPV6/11阳性108例（87.09%）,HPV16/18阳性14例（11.29%）,HPV16/18阳性的12例中有6例合并有HPV6/11阳性（4.8%）。ISH总阳性率为93.5%（116/124）,HPV6/11、HPV16/18同时感染42.85%,阳性细胞广泛出现在棘层中上层、颗粒层及角化不全细胞核内,在角化不全层被挤压的细胞核内也可见到阳性表达可见。结论：原位杂交和免疫组化是诊断尖锐湿疣的重要辅助手段;原位杂交法检测HPV6/11、HPV16/18比免疫组化法敏感性和特异性都要高,且定位准确、背景清晰,能对感染有准确的组织学定位,更有助于HPV分型研究,因此是诊断和研究CA的较好和先进的方法。湘潭地区CA以HPV11和6感染为主,有较高的混合感染率。     

原位杂交与免疫组化技术在HPV检测中的应用

目的：对两种HPV检测技术DNA原位杂交和免疫组化染色方法进行对比观察。方法：选取本院外阴尖锐湿疣病例95例，组织经固定、脱水、石蜡包埋、切片，分别采用原位杂交和免疫组化技术进行检测。结果：HPV—DNA阳性率为94．7％(90／95)，阳性反应由鳞状上皮表层的空泡细胞核内延伸至棘层中下部近基底层的细胞核内；HPV—Ag阳性率为63．1％(60／95)，阳性反应主要位于鳞状上皮表层的空泡细胞核内及角质层内。个别阳性细胞可在棘层出现。结论：原位杂交技术在敏感度、阳性率及阳性强度、背景染色等方面均优于免疫组化方法，为尖锐湿疣的确诊及临床治疗提供更准确、可靠的依据。     

湘潭地区尖锐湿疣人乳头瘤病毒感染的分型研究

目的了解湘潭地区尖锐湿疣(Condyloma Acuminatum,CA)患者感染人乳头瘤病毒(hunan papilooma virus,HPV)的基因类型及分布。方法分别用原位杂交(In situ hybridization,ISH)和免疫组化(immunohistiochemistry,IHC)方法对临床和/或病理组织学诊断CA的266例病例进行检测。结果 IHC检测HPV-P阳性166例,HPV-16阳性32例,总阳性率为65.41%(174/266),阳性细胞主要分布在棘细胞上层及颗粒细胞层;ISH检测HPV6/11阳性235例,HPV16/18阳性42例,HPV16/18阳性的42例中有24例合并有HPV6/11阳性。ISH总阳性率为95.11%(253/266),HPV6/11、HPV16/18同时感染57.14%,阳性细胞广泛出现在棘层中上层、颗粒层及角化不全细胞核内。结论本地区CA以HPV6/11感染为主,少数为高危型HPV16/18型;有较高的混合感染率。两种检测方法相比较,原位杂交技术阳性率和阳性细胞数均显著高于免疫组化技术,因此是诊断和研究CA的较好和先进的方法。     

女阴尖锐湿疣及宫颈病变免疫组化与原位杂交HPV DNA的对比研究

目的　检测非妊娠期、妊娠期尖锐湿疣、子宫颈上皮内瘤变 (CIN)、宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 (HPVDNA)的表达 ,为临床诊治提供依据。方法　收集非妊娠期、妊娠期尖锐湿疣标本各 30例 ,宫颈上皮内瘤变 (其中CINⅠ 12例、CINⅡ 9例、CINⅢ 7例 )及宫颈癌各 2 8例 (高、中、低分化鳞癌分别为 7、16、5例 )采用免疫组化SP及原位杂交法检测HPV 6 /11DNA及HPV 16 /18DNA。结果　 (1)人乳头瘤病毒感染组织不同 ,HPVDNA的阳性率有显著差异 (P <0 .0 5 ) ;(2 )原位杂交法检测优于免疫组化法。结论　 (1)人乳头瘤病毒感染广泛存在于外阴尖锐湿疣、宫颈上皮内瘤变 (CIN)、宫颈癌中 ;(2 )人乳头瘤病毒与宫颈癌关系密切 ;(3)原位杂交法检测HPVDNA有助于尖锐湿疣、CIN、宫颈癌的诊断与治疗。     

PCR快速准确的诊断女阴尖锐湿疣

女阴尖锐湿疣和湿疣样病变共400例,用HPV—PCR进行检测。结果:306例HPV—DNA阳性诊断为女阴尖锐湿疣,占76.5%。94例HPV—DNA阴性诊断为湿疣样病交,占23.5%。应用HPV—DNA—PCR技术对尖锐湿疣和湿疣样病变进行鉴别诊断和诊断,具有快速准确的特点。另外,本文还对尖锐湿疣和非湿疣性外阴赘生物(湿疣样病变)的肉眼形态特点作了描述。     

尖锐湿疣、鲍温样丘疹病与Bowen病的临床及实验研究

目的分析鲍温样丘疹病与尖锐湿疣、Bowen病的临床特征,探讨其鉴别诊断。方法对尖锐湿疣、鲍温样丘疹病和Bowen病患者进行临床资料采集和分析,同时用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测上述组织中HPV6/11、HPV16/18DNA。结果①鲍温样丘疹病与尖锐湿疣的临床表现相似,病理学形态差异较大;鲍温样丘疹病与Bowen病的临床表现不同,病理学形态相似。②35例尖锐湿疣中HPV6/11DNA阳性33例(阳性率94.29%);35例鲍温样丘疹病中HPV16/18DNA阳性29例(阳性率82.86%);16例Bowen病中HPV16/18DNA阳性4例(阳性率25.00%)。结论鲍温样丘疹病与尖锐湿疣的鉴别主要依靠病理学检查;HPV的不同类型有助于鲍温样丘疹病与尖锐湿疣的鉴别诊断。鲍温样丘疹病与Bowen病的鉴别必须结合临床及病理形态特点。     

p16蛋白在预测尖锐湿疣癌变中的应用

目的探讨p16基因的表达产物—p16蛋白在早期诊断和预测尖锐湿疣癌变中的价值。方法应用免疫组化法检测p16蛋白在15例正常皮肤黏膜、35例尖锐湿疣、12例尖锐湿疣合并非典型增生以及3例尖锐湿疣癌变组织中的表达情况,同时用荧光定量PCR(FQ-PCR)方法检测上述相同组织中HPV6/11、HPV16/18 DNA。结果正常皮肤组与尖锐湿疣组比较,p16蛋白表达的差异有显著性(P<0.05);正常皮肤组与尖锐湿疣合并非典型增生及癌变组比较,p16蛋白表达的差异有显著性(P<0.01);尖锐湿疣组与尖锐湿疣合并非典型增生及癌变组比较,p16蛋白表达的差异有显著性(P<0.01)。结论尖锐湿疣患者p16蛋白的强阳性表达提示有癌变的可能,检测p16蛋白可能是早期诊断和预测尖锐湿疣癌变的方法之一。     

原位核酸杂交技术在人乳头瘤病毒检测中的应用

目的:评价原位核酸杂交技术在人乳头瘤病毒(HPV)检测中的敏感性。方法:用原位核酸杂交和免疫组织化学技术对60例外阴尖锐湿疣病例进行检测,并对检测结果进行了对比分析。结果:免疫组织化学检测出阳性反应37例,阳性率为61.67%;原位核酸杂交检测出阳性反应56例,阳性率为93.33%,且阳性细胞数及阳性表达强度均高于免疫组织化学检测,背景清晰。结论:原位核酸杂交技术用于HPV的检测中敏感性高,阳性细胞反应与背景显色对比清晰,可克服免疫组织化学检测中假阴性高的弊端。     

人乳头状瘤病毒感染状态与外阴恶性肿瘤发病关系的探讨

目的探讨人乳头状瘤病毒（human papilloma virus,HPV）感染与外阴恶性肿瘤的关系,为外阴恶性肿瘤的防治提供指导。方法本研究选取手术切除治疗并病理确诊的30例外阴恶性肿瘤患者的临床和病理资料,分别用免疫组织化学法（immunohistochemistry,IHC）和原位分子杂交（in situ hybridization,ISH）方法,检测切片中HPV感染情况。结果 30例外阴恶性肿瘤患者中IHC检测HPV表达均为阴性;ISH法检测1例HPV16/18（1/30 3.33%）低度阳性表达,其余均为阴性。结论外阴恶性肿瘤组织中HPV感染率较低,外阴恶性肿瘤发生可能与HPV感染无关。     

宫颈鳞状上皮病变中HPV感染与P16、Ki-67蛋白表达

目的：探讨HPV在宫颈鳞状上皮病变中的感染情况及其与P16、Ki-67蛋白表达的关系。方法：采用原位杂交及免疫组化方法,检测HPV、P16和Ki-67蛋白在200例不同程度宫颈鳞状上皮病变中的表达情况。结果：HPV在宫颈鳞状上皮病变中总检出率为64%（128/200）,HPV 6/11在尖锐湿疣组中检出率最高,HPV 16/18在宫颈鳞状细胞癌、CIN组中尤其在CINⅡ～Ⅲ组中阳性率显著性增高。随着宫颈病变程度的加重,P16和Ki-67蛋白的阳性表达也呈递增趋势。结论：高危型HPV16/18感染与宫颈鳞状上皮内瘤变密切相关;抑癌基因P16蛋白的表达上调参与蛋白对宫颈鳞状细胞癌的发生发展过程;P16蛋白还可作为鉴别宫颈肿瘤性及非肿瘤性增生的标记物;联合检测P16和Ki-67蛋白对宫颈CIN的诊断及分级具有辅助诊断价值。     

石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变

目的研究石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4/SMAD4/MADH4基因的改变。方法用PCR-SSCP、PCR产物直接测序法检测46例石蜡包埋人胰腺癌组织中DPC4基因改变情况,用原位杂交(ISH)、免疫组织化学(IHC)检测56例石蜡包埋人胰腺癌组织DPC4的mRNA、SMAD4蛋白表达情况。结果胰腺癌DPC4基因第1、2、3、4、8、11外显子的纯合性缺失率为28.26%,突变率为21.74%,测序显示有3例无义突变,5例错义突变,1例插入、缺失及错义突变,1例插入突变。ISH、IHC显示胰腺癌DPC4/SMAD4阳性率分别为53.57%、58.93%,而对应正常胰腺阳性率分别为91.07%、89.29%。统计学分析表明胰腺癌与正常胰腺有显著性差异(P<0.05)。32例胰腺癌进行了PCR-SSCP、测序、ISH和IHC实验,四者结果一致者28例,符合率为87.50%,其中基因改变与ISH符合率为87.50%,基因改变与IHC符合率为96.88%。56例胰腺癌的ISH与IHC符合率为91.07%,统计学分析显示上述三组阳性率间均无显著性差异(P>0.05)。结论人胰腺癌纯合性缺失和突变是DPC4失活的主要机制,胰腺癌与正常胰腺相比,SMAD4表达明显下降,DPC4作为一种抑癌基因,其改变可能为胰腺癌的重要分子事件,在胰腺癌的形成中可能起重要作用。     

乳头状瘤病毒与人类肿瘤

本课题组近3年来,以食管癌为主,用PCR、RNA原位杂交及免疫组化的方法检测了人类乳头状瘤病毒(HPV)在肿瘤组织及癌前病变中的存在,发现在食管癌、乳腺癌和卵巢癌中均有很高比例的HPV检出率(63%、66%及50%)以及活跃的病毒mRNA或蛋白表达.在食管癌高发人群的普查标本上,随着食管癌上皮癌前病变程度的加重,HPV检出率和表达率逐渐增高.我们同时发现选择不同的病毒靶位开展PCR会得到不同的检出率.E6/E7片段可较真实地反映HPV感染情况. 我们的结果提示:HPV-16与食管癌、乳腺癌和卵巢癌的发生密切相关;HPV DNA的存在和活跃的表达与细胞癌变相关;HPV-16E6/E7与L1片段相比,检出率大大提高.我们认为HPV与人类肿瘤的关系应该受到更多的关注,结合对HPV感染的人群筛选遗传易感基因,对高危人群识别、预防、早诊和治疗,以降低肿瘤的发病率具有重要意义.     

原位杂交检测宫颈活检组织HPV感染的临床意义

目的探讨原位杂交（ISH）检测宫颈活检组织中人类乳头瘤病毒（HPV）感染对宫颈癌早期诊断的临床意义。方法对128例宫颈活检的石蜡标本,分别行常规检测和ISH-HPV检测。结果①二种方法检测慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变（CIN）、宫颈鳞状细胞癌（SCC）HPV感染检出率分别为2.5%与8.9%、37.5%与55.0%和66.6%与90.0%,检出率SCC〉CIN〉慢性宫颈炎,ISH法明显优于常规检测法（χ2=7.5625,P〈0.01）。②在所检测的128例宫颈活检组织标本中,21～30岁患者的HPV感染率明显高于其它年龄组。结论慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞状细胞癌与HPV6/11/16/18/31/33密切相关,随着病变程度的加重,HPV感染的检出率明显升高。ISH方法对早期宫颈HPV感染患者在分子病理学水平作出准确、特异、快速的诊断,同时具有细胞阳性定位功能。通过HPV感染的检测,可以积极预警年轻人群中宫颈癌的发生。