甘油保存鼠坐骨神经异体移植诱导神经再生的研究

为制备既无明显抗原性.又具备完整神经内膜管结构,且便于长期保存的神经移植物.我们用甘油保存鼠坐骨神经异体移植.诱导神经再生.现将实验结果报道如下.     

兔化学去细胞神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的：以化学去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损，从而探索化学去细胞异种神经移植修复神经缺损的可能性；方法：以30％TritonX-100和40%脱氧胆酸钠顺序处理新鲜取材的兔神经(直径15nm左右)，移植修复成年wistar大鼠l.0cm坐骨神经缺损．4个月后行电生理及组织学检查，观察神经再生情况；结果：移植神经未被宿主排斥，大量再生的神经纤维长过移植物，并恢复电传导功能；结论：化学去细胞异种神经可以作为修复周围神经缺损的一种很有前途的方法。     

去细胞异体神经和碱性成纤维细胞生长因子修复神经缺损

目的　研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对去细胞异体神经修复神经缺损的促进作用。　方法　根据bFGF因子用药浓度分为 10 0 0、5 0 0、2 5 0和 10 0U/ml与盐水对照组每组 5只日本大耳白兔。采用抗神经微丝免疫组化染色观察各组神经纤维再生的距离 ,抗S 10 0免疫组化染色观察许旺细胞的分布。研究不同浓度和剂量的外源性bFGF对去细胞支架移植后早期神经再生的影响。　结果　高浓度bFGF组 (10 0 0U/ml和 5 0 0U/ml)的神经再生距离在术后 10d明显大于盐水对照组 ,(P <0 0 1)。而低浓度bFGF组 (2 5 0U/ml和 10 0U/ml)与盐水对照组无明显差别 (P >0 0 5 )。　结论　去细胞异体神经移植后早期应用一定浓度和剂量的bFGF能明显提高再生轴突在支架内的生长速度。     

异体神经段皮下包埋对坐骨神经再生影响的研究

目的　探讨异体周围神经段皮下包埋对坐骨神经再生的影响。　方法　 Wistar大鼠 30只 ,雄性。 6只为供体 (C组 ) ,余随机分为两组。实验组 (A组 ) 12只 ,于右大腿后侧皮下行异体坐骨神经 (15 mm)包埋 ,2周后取出 ,修整为 10 mm的片段移植于左侧新鲜的坐骨神经缺损处 (10 m m)。对照组 (B组 ) 12只 ,于右腿相应部位皮肤切口直接缝合 ,左侧新鲜坐骨神经 (10 mm)原位吻合。术后 2、4、8和 14周行组织学观察 ,14周作电生理测定和电镜观察。　结果　术后 2周 ,A组炎性反应稍重于 B组 ;至 4周时两组的炎性反应程度相似 ,近端少许胶原纤维增生 ;8周时两组的炎性反应基本停止 ,胶原纤维增生稍明显 ;14周时两组神经外膜构成完整 ,束膜、内膜结构无明显差异。再生大量的有髓神经纤维及少量的无髓神经纤维。髓鞘结构完整。再生轴突数目、面积差异无统计学意义 ,束膜厚度、分布及范围相似。运动神经传导速度、峰值及潜伏期差异无统计学意义 (P>0 .0 5 )。　结论　皮下包埋的异体周围神经段虽有一定的炎性反应 ,但仍具有与自体神经移植相似的神经再生引导作用。     

优化法去细胞大鼠神经同种异体移植修复坐骨神经缺损

[目的]以优化法去细胞大鼠神经移植,修复同种异体坐骨神经缺损,观察术后动物的免疫排斥、早期功能恢复及神经再生情况。[方法]以优化去细胞方法处理新鲜取材的成年SD大鼠坐骨神经,移植修复同种异体1.0cm坐骨神经缺损,以自体神经和新鲜异体神经移植为对照,术后1个月行坐骨神经功能指数评价、神经电生理和组织学检查,观察动物在功能恢复、免疫排斥及神经再生方面的情况。[结果]自体神经和去细胞异体神经移植组动物的坐骨神经功能指数无显著差异(P>0.05),大体观察均可见神经连续性良好。电生理检测表明2组动物移植神经均已恢复电传导能力,在传导速度(CV)上无显著差异(P>0.05),但均未达到正常神经水平(P<0.05)。组织学观察则显示2组再生神经纤维均已长入移植段远端。S-100免疫组化显示两者在雪旺氏细胞数、形态和排列等方面无明显差异。2组在CD8 T细胞和巨噬细胞免疫组化染色阳性面积百分比上差异无统计学意义(P>0.05)。计算移植神经中段轴突密度后表明两者无显著差异(P>0.05),但都比正常神经小(P<0.05),比新鲜异体神经移植组大(P<0.05)。[结论]优化去细胞神经移植组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异。优化法去细胞神经在移植修复同种异体神经缺损时,可以达到免疫耐受,其早期功能恢复和神经再生情况良好,在修复周围神经缺损时可以作为自体神经移植的一种替代疗法。     

同种异体神经复合体修复兔坐骨神经缺损的研究

目的 用种植胎兔雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体修复兔缺损的坐骨神经,观察坐骨神经再生及功能恢复.方法 健康成年新西兰白兔48只,体质量1.5-2.0 kg,随机分成2组.两组动物均切除一段坐骨神经,造成2.0 cm长的缺损.实验组:用种植胎兔雪旺细胞的同种异体神经复合体修复坐骨神经.对照组:仅用去细胞同种异体神经修复.术后4、8、16周进行大体观察、标本光镜和电镜观察且进行量化分析、肌湿重检测.结果 手术区局部均未出现明显的排斥反应,实验组足部溃疡愈合情况优于对照组,实验组再生神经纤维数目、有髓神经纤维轴突直径、髓鞘厚度4、8、16周分别为(906.25±30.68,1726.25±51.89,2825.13±22.79)、(5.35±0.62,5.46±0.38,5.59±0.80),(1.65±0.37,1.75±0.41,1.83±0.49)均优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).小腿三头肌湿重于术后4周两组间差异无统计学意义(P>0.05),实验组术后8、16周分别为(5.62±0.99,7.38±0.26)恢复优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 种植雪旺细胞的去细胞同种异体神经复合体对神经再生及功能恢复有更好的促进作用.     

人脱细胞异体神经移植物修复上肢高位创伤性神经缺损的初步观察

目的:观察人脱细胞异体神经修复材料(hANG)修复上肢高位创伤性神经缺损的有效性。方法:自2017年3月至2019年1月,采用hANG修复创伤性上肢神经缺损8例,其中男6例,女2例;年龄21 ~53岁,平均35.4岁。臂远端桡神经缺损2例,前臂段正中神经缺损4例,骨间后神经缺损1例,前臂段尺神经缺损1例;合并臂肌肉损伤...     

犬化学去细胞神经同种异体移植的神经再生研究

目的 观察犬去细胞异体神经移植后近期神经再生的情况。谅15只家犬分成实验组（去细胞神经移植组，6只犬），对照组I（自体神经移植组，6只犬），对照组Ⅱ（新鲜异体神经移植组，3只犬），制成犬坐骨神经缺损5.0cm的模型，以上述3种神经移植物桥接修复。术后6个月行神经再生的组织学观察。结果 实验组移植段内有大量的新生神经纤维，新生血管及雪旺细胞；远端胫神经内出现大量的有髓神经纤维；靶肌肉运动终板的数量，形态及分布均良好。实验组和对照组I非常相似。结论 化学去细胞神经作为同种异体神经移植物，在修复术的粗大和长段神经缺损时不会被宿主排斥和吸收，其神经再生与自体神经移植无明显差别。     

人工组织神经移植物辅加神经生长因子修复大鼠坐骨神经缺损

目的 探索壳聚糖与聚乙醇酸联合制成的人工组织神经移植物辅加神经生长因子（NGF）修复大鼠外周神经缺损的可能性。方法 壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维制备成人工组织神经移植物并辅加NGF，修复大鼠的坐骨神经10mm缺失。术后24周，进行足迹试验，电生理学测试，形态学观察。用自体神经，硅胶管以及壳聚糖套管与聚乙醇酸纤维等分别作为对照组，结果 术后24周内，实验动物均未出现明显炎症及排斥反应。实验组的各检测指标均优于除自体神经组外的各对照。结论 壳聚糖和聚乙醇酸与外周神经组织有良好的生物相容性；辅加NGF的人工组织神经移植物对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

化学去细胞异体神经修复神经缺损长度的实验研究

[目的]研究神经长度是否影响化学去细胞神经的质量及化学去细胞异体神经修复犬神经缺损的适当长度范围。[方法]切取犬的坐骨神经全长，截取直径近似段长度12cm，去除神经外膜的脂肪组织及血管，在5．0％Triton X-100和5．0％脱氧胆酸钠中重复消化得到化学去细胞神经；部分神经用于组织学评价，将12cm神经按顺序切割为6段，石蜡包埋制备切片，厚度5μm。HE染色和Fastblue染色，观察去细胞程度、神经细胞外基质结构完整性、髓鞘染色强度，观察每段神经的差异。在体内实验中，用化学去细胞异体神经桥接犬的坐骨神经缺损，缺损长度分别为8、10cm组，每组各有6条成年犬，随访时间12个月。观察动物肢体功能恢复、肌电图变化及再生神经组织学表现，包括HE染色、S-100免疫组织化学染色、乙酰胆碱酯酶染色。[结果]去细胞神经全长各段在去细胞程度、结构完整性及残余髓鞘染色综合评价中无差异。体内移植实验结果显示8cm去细胞异体神经移植组的犬在术后12个月踝关节可直立行走，而10cm去细胞异体神经移植组犬12个月时踝关节不能直立行走。肌电图检查结果显示，两组动物的手术肢体均可记录到诱发的运动和感觉电位。肌电图波幅、时限及运动神经传导速度结果显示，8cm移植组明显高于10cm移植组（P〈0．05）。组织学检查显示8cm移植组再生的神经轴突通过移植段神经到达远侧的神经中，并与所支配的肌肉建立新的运动终板联系，坐骨神经支配的小腿三头肌中有大量新生的运动终板形成。在10cm移植组有部分再生的神经纤维通过移植段神经进入远端的神经，小腿三头肌中新生的运动终板数量和大小明显低于8cm移植组（P〈0．05）。[结论]在化学去细胞神经的制备中，神经的长度对去细胞的质量无影响；化学去细胞异体神经修复神经缺损的长度若不超过8cm可取得较满意的功能康复结果。     

优化法去细胞兔神经移植修复大鼠坐骨神经缺损

目的 以优化法去细胞兔臂丛神经，移植修复大鼠坐骨神经缺损，观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况。方法 以优化法处理新鲜取材的新西兰大白兔臂丛神经分支，移植修复成年sD大鼠坐骨神经1．0cm缺损，分别于术后1个月及3个月行功能评价、电生理和组织学检查，观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况。结果 实验组与自体神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面无显著差异，却明显优于新鲜兔神经移植组。3个月取材时的神经再生及功能恢复情况优于1个月取材时。结论 优化法去细胞神经在移植修复异种神经缺损时，可以达到免疫耐受，其早期功能恢复和神经再生情况良好，在修复周围神经缺损时有望作为自体神经移植的一种替代疗法。     

化学萃取自体骨骼肌桥修复神经缺损初步研究

目的 观察化学萃取自体骨骼肌桥修复大鼠坐骨神经缺损的可行性。方法 用化学萃取方法制备自体肌骼肌的无细胞基底膜管，修复大鼠坐骨神经１５ｍｍ神经缺损，与冻融肌作骼肌桥作对照，用免疫组织化学方法及碱性磷酸酶组织化学方法观察神经及血管再生的情况。结果 化学萃取自体骨骼肌桥在修复神经缺损伤后，其物理性能，移植物血管化过程和神经再生速度与质量均优于冻融肌桥。     

猪与人去细胞神经结构与成分的对比研究

目的 研究猪与人的周围神经脱细胞处理后其结构与成分的差别,为以猪去细胞神经替代人去细胞神经用于修复神经缺损作前期探索.方法 取健康成年猪和下肢截肢患者的胫神经,用化学去垢剂按一定程序进行脱细胞处理.通过大体观察、HE染色、甲苯胺蓝染色、免疫组织化学染色和透射电镜检查,比较猪与人的周围神经去细胞处理前后其结构、许旺细胞与轴突标志蛋白以及细胞外基质的变化.结果 经脱细胞处理后,猪与人的神经结构均略变疏松,仍保留较好的弹性和伸展性.显微镜下观察,两者均未见细胞或其碎屑残留,髓鞘消失,纤维性支架结构保持良好,S-100蛋白和神经丝蛋白（neurofilament,NF）的表达较处理前显著减弱,而层粘蛋白（laminin,LN）的表达无显著变化,神经基底膜管和神经组织的支持结构保留完好.与人去细胞神经比较,猪去细胞神经结构更疏松,神经束间细胞间质更丰富,但成分差异无显著性.结论 猪去细胞神经与人去细胞神经的结构和成分相近,可能取代人去细胞神经用于修复神经缺损.     

优化法去细胞神经同种异体及异种移植的比较

目的 分别以优化法去细胞(OA)大鼠坐骨神经及兔臂丛分支移植修复大鼠坐骨神经缺损,观察免疫排斥情况、早期功能恢复及神经再生情况,以比较此优化法处理的同种异体及异种神经移植物修复周围神经缺损的能力. 方法 以新鲜新西兰大白兔臂丛分支、自体坐骨神经、OA处理过的新鲜取材的SD大鼠坐骨神经及新西兰大白兔臂丛分支,移植修复成年SD大鼠坐骨神经1.0 cm缺损,即新鲜异种神经移植组、自体神经移植组、OA异种神经移植和OA异体神经移植组,分别于术后1个月及3个月行功能评价(SFI)、电生理(CV)和组织学检查,观察免疫排斥、功能恢复及神经再生情况. 结果 术后1个月,OA异体和OA异种神经移植组的SFI、CV、轴突密度分别为:61.38±5.59、(32.23±0.91)m/s、(22.26±1.74)m/s和(0.782±0.081)(个/100 μm2),3个月分别为59.00±5.40、(31.80±0.99)m/s、(23.35±2.40)m/s和(0.778±0.046)(个/100μm2);术后1个月,异体和异种神经移植CD8+T细胞和巨噬细胞染色阳性百分比分别为0.17385±0.01805、0.09299±0.01565和0.30223±0.09449、0.19537±0.02010.同种异体神经移植组与异种神经移植组在免疫排斥、功能恢复及神经再生方面差异无统计学意义(P＞0.05),且都明显优于未处理新鲜神经移植组(P＜0.05).3个月时的神经再生及功能恢复情况优于1个月组(P＜0.05). 结论 优化去细胞法处理的同种异体及异种神经移植物在修复周围神经缺损时,均可以达到免疫耐受,移植动物早期功能恢复和神经再生情况良好.     

猕猴去细胞同种异体神经体内移植的组织学观察

目的观察去细胞同种异体神经体内移植后组织形态学改变,寻找合适的人工神经支架材料。方法共使用成年猕猴9只,随机取其中的6只,培养自体Scs,应用已经制备好的去细胞神经为支架材料,体外构建组织工程化周围神经移植体修复猕猴尺神经40mm缺损。分实验组、空白组、正常对照组3组。术后5个月取材,观察大体形态、HE染色、免疫组织化学染色及组织形态学改变。结果3组移植物表面均有不同程度的血管化,HE染色均有细胞核和髓鞘的蓝染成份出现,NF免疫组织化学染色后,均有淡黄色神经微丝出现。实验组、正常对照组效果相似,它们均优于空白组、实验组,正常对照组再生神经纤维的数量差异均无统计学意义（P〉0．05）。但在实验组与空白组间的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论去细胞同种异体神经具有良好的生物相容性和促进神经再生能力,是最具应用前景的神经修复材料之一。     

成年大鼠许旺细胞复合去细胞神经支架修复坐骨神经缺损

目的  探讨成年许旺细胞(SC)复合去细胞神经支架构建的组织工程化人工神经移植治疗外周神经损伤的效果。方法  从Wallerian变性1周的成年SD大鼠远侧端神经中分离培养得到SC, 复合去细胞神经支架构建组织工程化人工神经。移植分为SC+去细胞SD大鼠神经支架组(SC治疗组)和空细胞SD大鼠神经支架组(阴性对照组), 每组各5只。比较两组大鼠术后2、4、8周损伤侧坐骨神经功能指数(SFI), 术后8周损伤侧坐骨神经传导功能和小腿三头肌湿重恢复率等修复效果的指标。结果  SC治疗组术后2、4、8周损伤侧SFI, 术后8周损伤侧坐骨神经传导功能和小腿三头肌湿重恢复率均优于或高于阴性对照组(均为P < 0.05)。结论  采用成年SC复合去细胞神经支架的人工神经移植治疗外周神经缺损, 可有效促进损伤神经的功能恢复。     

Vascular endothelial growth factor promotes peripheral nerve regeneration after sciatic nerve transection in rat

Objective：To evaluate the local effect of vascular endothelial growth factor （VEGF） on transected sciatic nerve regeneration.Methods：Sixty male white Wistar rats were divided into four experimental groups randomly （n=15）.In transected group the left sciatic nerve was transected and the stump was fixed to adjacent muscle.In treatment group the defect was bridged using a silicone graft filled with 10μL VEGF.In silicone group the graft was filled with phosphate-buffered saline.In sham-operated group the sciatic nerve was exposed and manipulated.Each group was subdivided into three subgroups with five animals in each and nerve fibers were studied 4,8 and 12 weeks after operation.Results：Behavioral test,functional study of sciatic nerve,gastrocnemius muscle mass and morphometric indices confirmed a faster recovery of regenerated axons in VEGF group than in silicone group （P〈0.05）.In immunohistochemical assessment,reactions to S-100 in VEGF group were more positive than that in silicone group.Conclusion：Local administration of VEGF will improve functional recovery and morphometric indices of sciatic nerve.     

电针对大鼠坐骨神经再生影响的功能评价

目的从功能恢复评价电针对神经再生的促进作用。方法建立大鼠坐骨神经损伤模型，将９０只ＳＤ大鼠随机分为损伤对照组和电针组两组。分别于术后２、４、６、１０周测定运动神经传导速度、小腿三头肌肌力及坐骨神经功能指数，并以自身健侧作对照得出其恢复率。同时测定术后１周感觉神经再生的距离。结果电针组术后１周感觉神经再生距离及２、４、６、１０周运动神经传导速度、肌力、ＳＦＩ等的恢复率均明显优于对照组。结论电针可以促进损伤神经的再生，明显提高神经功能的恢复