改良大鼠离体肝脏灌注模型在供肝冷保存中的应用研究

背景:供肝冷保存和缺血再灌注损伤是影响肝移植患者预后的关键因素,建立稳定的冷保存再灌注动物模型是开展相关研究的基础。目的:建立适用于综合评价供肝质量的改良大鼠离体肝脏灌注模型,为供肝冷保存研究提供合适的离体再灌注模型。方法:12只Sprague-Dawley大鼠随机分为两组,对照组正常获取供肝后进行离体灌注90 min,实验组供肝经30 min热缺血后获取,冷保存24 h后再行离体灌注。离体灌注期间监测灌注液转氨酶水平、电解质浓度和pH值;以压力感受器监测供肝门静脉压力;以超微自由基探针监测肝组织过氧化氢(HPO)水平。灌注结束后记录胆汁流出量,检测供肝组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(Cu/Zn SOD)水平及其组织病理学改变和肝细胞凋亡情况。结果:与对照组相比,实验组供肝AST、ALT水平、门静脉压力和HPO水平明显增高,胆汁流出量显著减少,肝组织Cu/Zn SOD水平显著降低。对照组供肝组织病理学损伤和肝细胞凋亡相对较轻。结论:经热缺血和冷保存后,供肝的肝功能和抗氧化能力均明显降低。本研究构建的改良大鼠离体肝脏灌注模型可有效监控和评估大鼠供肝冷保存再灌注损伤情况。     

一氧化氮合酶抑制剂对深低温停循环后脑再灌注损伤的保护作用

目的 :研究一氧化氮合酶抑制剂 (L- NAME)对深低温停循环 (DHCA)后脑再灌注损伤的保护作用。　　方法 :8只幼猪随机分为实验组 (n=4)和对照组 (n=4) ,建立体外循环 (CPB) ,行 DHCA90分后恢复灌流 12 0分 ,实验组动物静脉注射 L- NAME1.5 mg/ kg,随后在 6 0分内再给予相同的剂量。　　结果 :实验组 Na - K 三磷酸腺苷酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于对照组 ,丙二醛含量低于对照组。病理检查及电子显微镜超微结构显示实验组与对照组细胞损伤存在显著性差异 (P<0 .0 5 )。　　结论 :L- NAME对 DHCA后脑再灌注损伤有保护作用。     

犬肺缺血预处理对体外循环心肌的影响

目的探讨肺缺血预处理对体外循环心肌的保护作用及机制。方法12只健康杂种犬,体重12～15kg,随机分为实验组和对照组,每组6只。对照组为单纯体外循环组;实验组为缺血预处理组,在主动脉阻断前行左肺门阻断5min,再灌注5min,重复一次,然后同对照组行体外循环,两组体外循环均持续1h。于体外循环前、再灌注120min后采集心肌标本,测定心肌含水量、MDA、SOD活性及病理改变。结果体外循环后心肌含水量和MDA实验组低于对照组;心肌SOD活性实验组高于对照组;实验组心肌标本炎症水肿程度明显较对照组轻。结论犬肺缺血预处理对体外循环心肌缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是减轻了心肌缺血再灌注损伤。     

通气状态下离体肺保存的实验研究

目的应用兔离体肺再灌注模型研究通气在离体肺保护中的作用。方法10只实验用兔20个单肺，分成A、B两组。A组为通气状态下低温再灌注组；B组为单纯低温再灌注组。分别在保存0、3、6．9、12、15、18h时取保存组织送组织学检查及引流灌注液测血气分析。结果在保存9h时A、B两组组织学结构发现差别，A组优于B组。血气分析示：A、B两组二氧化碳分压及PH无明显差别，氧分压有显著差别。结论在通气状态下低温灌注保存离体肺的效果明显优于单纯低温灌注保存方法。在通气状态下低温灌注保存离体肺的有效时限可达18h。     

一种新的幼猪小肠自体移植模型的建立

以 1 0头健康白色杂种猪为实验对象 ,术中隔离远段回肠 50cm ,阻断该肠段系膜动静脉 ,向动脉远心端灌注 4℃乳酸林格液 ,灌注液经开窗的静脉流出。灌注至流出液清亮后将该段肠管置入 4℃乳酸林格液的无菌引流袋中保存 60min。其间应用显微外科技术修复动静脉裂口。保存结束时 ,解除阻断的静脉和动脉 ,恢复肠道灌流。实验肠段近端封闭 ,远端外置造口。结果示 1 0头猪均完成冷灌注和保存、血管裂口缝合及恢复灌流等手术操作 ,除 2头猪因输液反应或寒冷导致死亡外 ,8头猪完成 72h观察 ,证实实验肠段均存活。认为本实验动物模型制作简便、成功率较高 ,是研究小肠移植物保存和冷缺血再灌注损伤的理想模型。     

人参皂甙Rb1对离体肺保护的实验研究

目的　探讨人参皂甙Rb1 对离体兔肺缺血再灌注损伤的保护作用。方法　将 2 0只健康家兔随机分为两组 ,对照组肺以含PGE1 的低钾右旋糖酐 (LPD)液灌注及保存 ,实验组则将人参皂甙Rb1 (0 .0 8mg/ml)加入含PGE1 的LPD液灌注及保存 ,4℃保存 1 2h后复灌 1h ,测定肺血管阻力 (PVR)、肺静脉血氧分压 (PvO2 )及肺组织含水量 (LW) ;肺组织一氧化氮 (NO)、超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛 (MDA)含量 ;用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法 (TUNEL)对肺组织凋亡细胞进行检测并观察肺组织超微结构变化。结果　实验组PVR、LW较对照组明显降低 (P <0 .0 5 ,PvO2 明显升高 (P <0 .0 1 。肺组织NO、SOD含量明显高于对照组 (P <0 .0 5) ,MDA含量则较对照组低 (P <0 .0 5) ,实验组肺组织细胞凋亡指数亦较对照组显著减少 (P <0 .0 5) ,其超微结构变化明显较对照组轻。结论　肺保存液中加入人参皂甙Rb1 能减轻肺缺血再灌注损伤 ,增加肺保护效果     

低温保存供体兔肺离体再灌注模型的建立

目的：用离体兔肺连续温血再灌注模型评价低温保存后供体肺功能。方法：将未经灌洗和保存的对照组（ｎ＝６）供体左肺，与低温１０℃下保存１８小时后的实验组（ｎ＝６）供体左肺，分别在离体状态下，连续通气和温静脉血灌注３０分钟，将离体左肺引流出的动脉血，泵入另一兔体内，通过交叉循环使之静脉化后连续再灌注。结果：对照组氧分压显著优于实验组，两组间的肺动脉平均压、呼吸道峰压及再灌注后离体肺的湿／干重量比率结果无显著性差异。结论：该方法的建立为供体肺保存的研究提供了较理想的动物模型。     

慢性缺氧促心肌耐受急性缺血再灌注损伤的研究

目的:探讨慢性缺氧对心肌耐受急性缺血再灌注损伤的影响。方法:将SD大鼠随机分为在体实验组、在体对照组、离体实验组、离体对照组。在体及离体实验组大鼠在模拟海拔5000 m的动物低压低氧舱中生活,舱内条件:大气压54 kPa、氧分压11.33 kPa、温度25℃;在体及离体对照组大鼠在正常氧环境中喂养。分别通过结扎左冠状动脉前降支或Langendorff离体心脏灌流系统建立在体及离体心肌缺血再灌注模型,检测4组大鼠再灌注损伤前后心功能指标、心肌梗死面积和心肌酶变化。结果:在体实验可见,在体实验组缺血再灌注前心率(HR)、左室收缩末期容积(LVESV)均明显大于在体对照组,舒张期室间隔厚度(IVSd)、收缩期室间隔厚度(IVSs)、舒张期左室后壁厚度(LVPWd)、收缩期左室后壁厚度(LVPWs)、左室射血分数(LVEF)、左室缩短分数(LVFS)、左室舒张末期容积(LVEDV)、每搏输出量(SV)均明显小于在体对照组(P均<0.05);缺血再灌注后,在体实验组HR、IVSs、LVPWd、LVPWs、LVEF、LVFS均明显大于在体对照组,IVSd、LVEDV、LVESV、SV均明显小于在体对照组(P均<0.05);缺血再灌注可使在体实验组、在体对照组的心功能出现不同程度的损伤,而对在体对照组的损伤更明显;再灌注损伤后,在体实验组心肌梗死面积明显小于在体对照组,肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性明显低于在体对照组(P均<0.05),两组乳酸脱氢酶(LDH)活性的差异无统计学意义。离体实验可见,缺血再灌注损伤前离体实验组左室发展压(LVDP)、max(dp/dt)、min(dp/dt)均明显低于离体对照组(P均<0.05),两组左室舒张末期压力(LVEDP)的差异无统计学意义;缺血再灌注损伤后离体实验组LVDP、max(dp/dt)、min(dp/dt)均明显高于离体对照组,LVEDP明显低于离体对照组(P均<0.05);再灌注损伤后离体实验组心肌梗死面积明显小于离体对照组,LDH活性明显高于离体实验组(P均<0.05)。结论:慢性缺氧可提升心肌耐受急性缺血再灌注损伤的能力。     

体外循环期间灌注肺保护液对老年二尖瓣人工机械瓣置换病人的肺保护作用

目的 研究体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液对老年二尖瓣人工机械瓣置换病人的肺保护作用.方法 将20例老年单纯二尖瓣人工机械瓣置换病人随机分为对照组和实验组.实验组在主动脉阻断后、主动脉根部灌注心脏停搏液的同时,经肺动脉灌注低温保护液,对照组则不灌注肺保护液.分别于术前、开放升主动脉后20 min、体外循环结束时采集外周动脉血,进行中性粒细胞计数;分别于术前、体外循环结束后0、3、6、12 h测得动脉血氧分压(PaO_2)、吸入氧浓度(FiO_2),计算氧指数(PaO_2/FiO_2).结果 对照组在升主动脉开放20 min中性粒细胞计数较术前明显降低(P＜0.01),实验组的中性粒细胞计数在体外循环结束时明显高于术前(P＜0.05).实验组与对照组的PaO_2/FiO_2在体外循环结束后6 h达到最低点,实验组在体外循环结束后12 h回升接近术前正常水平,而对照组则未回升至术前正常水平,在体外循环结束后0、3、6、12 h,实验组的PaO_2/FiO_2均明显高于对照组(均P＜0.01).实验组P[A-a]O2与对照组在体外循环前无明显差别(P＞0.05),实验组再灌注60 min后P[_(A-a)]O_2与体外循环前无明显差别(P＞0.05),明显低于对照组(P＜0.01),对照组再灌注60 min后明显高于体外循环前(P＜0.01).结论 体外循环后存在肺损伤,体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液可明显减轻老年二尖瓣人工机械瓣置换病人的这种肺损伤.     

蛇床子素在家兔心肺联合移植中对供肺的保护作用

目的研究蛇床子素在家兔心肺联合移植中对供肺的保护作用及其作用机制。方法将16只健康家兔随机分为两组,对照组肺以改良低钾右旋糖酐（LPD）液灌注并保存，实验组则将蛇床子素加入改良LPD液灌注并保存，在4℃条件下保存12h后再灌注1h，测定肺组织的湿干重比（W／D）；测定肺组织中髓过氧化物酶（MPO）的活性、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的含量、核转录因子-kB（NF-kB）的表达以及细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达；并观察肺组织病理结构的变化。结果再灌注后，实验组的W／D、MPO的活性、MDA含量及NF-kB和ICAM-1的表达低于对照组（P〈0．01），而实验组肺组织中的SOD含量较对照组增高（P〈0．05），肺组织损伤的病理变化程度较对照组轻。结论蛇床子素能减轻肺缺血再灌注损伤，对供肺具有一定的保护作用。     

SMO保存液对犬肾低温保存期间氧自由基变化的研究

建立犬离体肾脏单纯低温保存模型，对照组供肾灌注和保存用HTK保存液和UW保存液，实验组用自制SMO保存液，分别在犬肾保存24、48、72h切取肾皮质标本，测定皮质丙二醛（MDA）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果显示，实验组SOD活性48h明显高于对照组，MDA含量各时点均显著低于对照组（P均〈0．05）。实验组各时点SOD活性和MDA含量与UW液组比较均无统计学差异。提示SMO液在减轻氧自由基损伤方面优于HTK液，与UW液相当。     

左旋精氨酸对离体兔肺脏保存质量的影响

观察左旋精氨酸对离体兔肺脏保存的保护作用 ,健康家兔随机分成对照组 (EC组 )和实验组 (Arg组 ) ,每组 15只 ,EC组兔肺脏予Euro collins液进行灌洗 ,Arg组予含左旋精氨酸的EC液进行灌洗肺脏 ,灌洗总量 6 0ml/kg ,灌注压力 2 0cm水柱 ,灌毕完整取下心肺组织浸入保存液 4℃环境冷藏 ,7h后取肺进行离体复灌 ,测定肺血管阻力 ,血气分析 ,肺血管对Ach舒血管反应性 ,肺组织湿干重比例及肺组织电镜检查等指标。EC组肺血管阻力 ,肺组织湿干重比例均高于Arg组 ,肺血管对Ach反应性EC组较Arg组差 ,血气指标EC组下降明显 ,Arg组肺组织形态轻微改变 ,而EC组水肿明显渗出严重。左旋精氨酸具有改善离体兔肺脏的保存效果。     

金属硫蛋白对离体心脏心肌间质的保护作用

目的 探讨金属硫蛋白(MT)对离体心脏心肌间质的影响。方法 Wistar大鼠16只,分为2组:对照组(C,n=8),腹腔注射蒸馏水0.5ml 24h后取离体心脏行离体灌注(Langendorff模型),测定心功能,然后灌注HTK心脏保护液,4C保存3h后再行Langendorff灌注25min;实验组(E,n=8)腹腔注射3.6％硫酸锌(1.5 ml/kg)24 h后取离体心脏,处理方法同C组。以心肌细胞中MT含量、血流动力学指标、心肌组织羟脯氨酸(HP)含量、内皮素(ET)含量和心肌超微结构等作为观察指标。结果MT含量E组与C组比较明显增高;E组心功能恢复方面优于C组(P<0.05),HP含量优于C组(P<0.01),ET含量低于C组(P<0.01),心肌超微结构损伤较C组明显减轻。结论MT对供心心肌间质具有保护作用。     

老年冠状动脉旁路移植体外循环期间肺保护液灌注的肺保护作用

目的 研究体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液对老年冠状动脉旁路移植(CABG)病人的肺保护作用.方法 将20例老年单纯CAPG病人随机分为对照组和实验组.实验组在主动脉阻断后主动脉根部灌注心脏停搏液的同时,经肺动脉灌注低温保护液,对照组则不灌注肺保护液.分别于术前、开放升主动脉后20 min、体外循环结束时采集外周动脉血,进行中性粒细胞计数;并于术前、体外循环结束后0、3、6、12 h测得动脉血氧分压(PaO2)、吸入氧浓度(FiO2),计算氧指数(PaO2/FiO2).结果 对照组在升主动脉开放20 min中性粒细胞计数较术前明显降低(P＜0.05);实验组的中性粒细胞计数在体外循环结束时明显高于术前(P＜0.05).实验组与对照组的PaO2/FiO2在体外循环结束后6 h达到最低点(P＜0.01);实验组的PaO2/FiO2在体外循环结束后12 h回升接近术前正常水平,而对照组则未回升至术前正常水平;在体外循环结束后0、3、6、12 h,实验组的PaO2/FiO2均明显高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).实验组肺泡-动脉氧压力差(P[A-a]O2)与对照组在体外循环前无明显差别(P＞0.05),实验组再灌注60 min后P[A-a]O2与体外循环前无明显差别(P＞0.05)、明显低于对照组(P＜0.01),对照组再灌注60 min后明显高于体外循环前(P＜0.01).结论 体外循环后存在肺损伤,体外循环期间经肺动脉灌注肺保护液可明显减轻CABG患者的肺损伤.     

离体肾脏保存过程中bcl-2蛋白、bcl-2 mRNA表达变化及FK506对其的影响

目的探讨离体肾脏保存过程中bcl-2蛋白、bcl-2mRNA表达及他可莫司（FKS06）对其的影响。方法将40只Wistar雄性大鼠随机分为实验组和对照组各20只，建立离体肾脏模型。对照组将离体肾脏置于常规4℃ UW保存液中；实验组在上液中加入FK506，分别检测肾脏保存2、4、8、16h后bcl-2蛋白、bcl-2m RNA表达。结果实验组4、8、16h后bcl-2蛋白、bcl-2mRNA表达明显高于对照组（P〈0．05）。结论FK506可能通过上调bcl-2蛋白、bcl-2mRNA表达，减轻离体肾脏保存过程中的损伤。     

含匹那地尔的超极化停搏液对大鼠心肌的保护作用

目的 :探讨含匹那地尔的冷超极化停搏液是否能延长心肌缺血的安全时限。方法 :在改良 L angendorff离体大鼠工作心模型上进行低温缺血 /再灌注实验 ,以 4℃除极化停搏液 St.Thomas液为对照组 ,4℃含匹那地尔的超极化停搏液为实验组 ,根据停搏液种类和停搏时间不同 ,把 40只大鼠随机分为 4组 ,每组 10只 :S1,S2为对照组 ,停搏时间分别为 1h,2 h;P1,P2为实验组 ,停搏时间分别为 1h,2 h。观察缺血前及再灌注转为工作心后心功能指标 ,缺血前及再灌注后心肌酶值变化 ,心肌 ATP含量 ,心肌超微结构改变及心肌含水率。结果 :低温缺血 /再灌注后实验组 P1,P2在心排出量恢复率 ,冠脉流量恢复率 ,左室最大收缩压力变化速度及左室峰压恢复率均优于对照组S1,S2 （ P<0 .0 5 ） ;灌注停搏液后心肌机械活动和电活动的消失时间 ,实验组明显长于对照组 （ P<0 .0 1） ;在保存心肌 ATP含量及乳酸脱氢酶 （ L DH）方面 ,P1优于 S1（ P<0 .0 5 ） ,而 P2与 S2相当。再灌注后磷酸肌酸激酶同工酶（ CK-MB）漏出量及心肌含水率 ,实验组 P1,P2与对照组 S1,S2相比无显著差异 ;在心肌超微结构改变方面 ,P1与S1,P2与 S2相似 ;再灌注时 P2室颤发生率为 2 0 %。结论 :匹那地尔可作为心肌保护成分。含 Pinacidil的冷超极化停搏液可使心肌停搏的安     

复跳前控制性温血停跳液灌注的心肌保护作用

目的探讨复跳前自体氧合温血停跳液控制性灌注在体外循环手术中对心肌缺血再灌注损伤的保护作用.方法选择256例复杂或重症患者,随机分为对照组128例,实验组128例.常规在体外循环下进行各种手术,均采用4℃ThomasⅡ号液间断顺灌行心肌保护.实验组在主动脉开放前约5min,用4:1自体氧合温血停跳液控制性灌注(压力:50mmHg,量:10ml/kg,流量:100～200ml/min,温度:35℃).分别在阻断主动脉前和开放主动脉后0,1,6,24h测定心肌酶,比较二组自动复跳率、复跳后血流动力学、围术期升压药应用、心律失常发生率、病死率、术后心功能等指标.结果实验组心肌酶含量低于对照组(P＜0.05),其余各指标优于对照组(P＜0.05).结论复跳前控制性温血灌注对心肌缺血有良好保护作用,方法简单、可行,值得临床应用.     

链激酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的:研究链激酶对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:36只Wistar大鼠随机分成3组,每组12只.对照组大鼠肝脏经门脉10 mL乳酸林格液灌洗后,低温4℃UW液中保存24h.实验组大鼠肝脏经含链激酶7500 IU乳酸林格灌洗后,分别低温或低温静脉持续氧气灌注保存24 h后.离体常温再灌注45 min,观察灌洗液谷氨酰胺丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase.ALT)、谷氨酸乳酸脱氢酶(glutamate-lactate dehydrogenase,GLDH)和嘌呤核苷磷酸化酶(purine nucleoside phosphorylase,PNP)活性及肝脏胆汁分泌量、肝组织5'核苷酸酶活性的变化.结果:实验组再灌注过程中灌洗液ALT、GLDH和PNP活性均明显降低于对照组(P＜0.05或P＜0.01);胆汁分泌量增加[3.7±0.7μL/(g·45 min),9.1±0.μL/(g·45 min)vs1.1±0.9μL/(g·45 min),P＜0.05,P＜0.01);5'核苷酸酶活性染色明显增强.结论:链激酶改善低温保存肝脏的微循环,减轻缺血再灌注损伤.     

益生注射液对猪同种异基因肾移植早期干预效果的实验研究

选择组织相容性较好的10对互为供受体的川白猪行同种异基因单肾移植,每两头配对的被随机分配至益生干预实验组和对照组.实验组在供肾灌洗保存液中加500 μg/ml益生注射液,并于术后1周静注益生注射液12 mg/(kg·d).术后监测移植肾功能,并于术后不同时间作移植肾病理检查、组织匀浆超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量测定.发现实验组移植肾慢性病变较对照组轻,功能较好,血清肌酐和尿素氮值始终低于对照组同时间点水平,且SOD含量较对照组高,而MDA含量较对照组低.认为益生注射液于供肾离体即行早期干预,可改善因缺血再灌注损伤所致的移植肾急、慢性病变.     

参附注射液抑制兔再灌注肺组织NF-κB表达的实验研究

目的初步探讨参附注射液改善兔肺保存效果及可能的作用机制。方法16只健康家兔随机分为两组,对照组肺加入棉子糖(30mmol/L)的改良低钾右旋糖酐(LPD)液灌注及保存,实验组则将参附注射液(40mg/L)加入改良LPD液灌注及保存。在4℃保存12h后再灌注1h,测定动脉血氧分压(PaO2)、肺组织的干湿比(W/D)、肺组织中髓过氧化物酶(MPO)活性、NF-κB的表达并观察肺组织病理结构的变化。结果再灌注15min后,两组的PaO2逐渐降低,但实验组PaO2的降低程度明显低于对照组(P0.01);再灌注后,实验组的W/D和MPO也明显低于对照组(P0.01),肺组织NF-κB的表达也明显低于对照组(P0.01),肺组织病理变化较对照组轻。结论参附注射液可抑制再灌注肺组织中NF-κB的表达,减轻肺缺血再灌注损伤,改善肺功能,对兔肺具有保护作用。