石棉对P53蛋白表达的影响

目的　进一步探讨石棉理化特性在致突变 /致癌中的作用。方法　用免疫组织化学方法检测石棉悬液和浸泡过滤液对 V79细胞的 P5 3蛋白表达的影响。结果　石棉悬液和石棉浸泡过滤液处理组与阴性对照组比较 ,p5 3基因编码的 P5 3蛋白平均灰度下降 ,具有显著性差异 ( P<0 .0 5 ) ,表明 P5 3蛋白异常表达。出现双核或多核细胞的胞核有明显的 P5 3蛋白异常表达。结论　 P5 3蛋白异常累积与石棉暴露有关 ,且对分裂期细胞 P5 3表达的影响更大     

甲醛对V79细胞DNA、RNA合成影响的体外实验研究

目的　研究甲醛对V79细胞DNA和RNA的损伤作用 ,探讨甲醛遗传毒性的分子机制。方法　中国仓鼠肺细胞 (V79)分别暴露于浓度为 75 ,15 0 ,30 0 ,6 0 0 μmol/L的甲醛中 ,1h、2h、4h ,采用3 H -胸腺嘧啶核苷 ( 3 H -TdR)、14 C -尿嘧啶核苷 ( 14 C UR)掺入技术检测甲醛致V79细胞DNA和RNA损伤情况。结果　所有 4个浓度组甲醛均明显影响细胞DNA和RNA的合成 ,3 H TdR和14 C UR掺入计数每分衰变数 (dpm值 )显著低于对照组 (P <0 .0 1) ,并有明显的剂量 -效应关系 (P <0 .0 1)。细胞暴露在甲醛中 4h ,各浓度组3 H TdR和14 C UR掺入dpm值显著低于暴露于 1h和 2h各浓度组的dpm值 (P <0 .0 1)。 结论　甲醛可以影响V79细胞DNA和RNA合成 ,这对进一步研究甲醛遗传毒性的分子机制有重要意义     

体外染烟对V79细胞增殖和凋亡的影响

目的研究体外香烟烟雾对V79细胞增殖和凋亡的影响。方法将V79细胞分为对照组、5%浓度组和20%浓度组进行染烟实验。染烟后检测细胞内ROS水平、细胞增殖活性、细胞周期及凋亡情况。结果5%浓度和20%浓度染烟组与对照组相比,V79细胞ROS水平均明显升高,且20%浓度组与5%浓度组相比ROS也明显升高,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。5%浓度和20%浓度染烟组与对照组相比,细胞增殖率、克隆率明显降低;G1期细胞百分比明显升高,G2期和S期细胞明显减少,差异均有统计学意义（均P〈0.05）。20%浓度染烟组分别与对照组和5%浓度染烟组相比,细胞凋亡率均明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论香烟烟雾可能刺激了V79细胞内ROS的增多,影响细胞增殖和凋亡率。     

一氟二氯乙烷对中国仓鼠V79细胞的细胞毒性作用

目的通过体外实验,观察不同体积分数一氟二氯乙烷（F-141b）对中国仓鼠肺成纤维细胞（V79细胞）的毒性作用。方法用不同体积分数（10、20、30、40、50和60 ml/L）且经抽滤的一氟二氯乙烷对V79细胞进行染毒,分别培养不同时间（3、6、12、24和48 h）后,于显微镜下计数存活细胞数,计算存活率和IC50。同时设阴性对照组。结果在任一培养时间段,细胞存活率均随染毒剂量增加而降低,短时间组（3 h、6 h）和长时间组（24 h、48 h）组间比较差别具统计学意义（P〈0.05）;染毒剂量相同,细胞存活率随时间增加而降低,各染毒剂量组间差别显著（P〈0.05）,其中3 h组、12 h组和48 h组相关具有显著的统计学意义（P〈0.05）。存在明显的剂量―效应和时间―效应关系。24 h染毒IC50体积分数为32.37 ml/l。结论在本实验条件下,一氟二氯乙烷具有显著的细胞毒性作用,并存在剂量和时间效应。     

人胃癌细胞肿瘤相关基因的表达与甲基化调控

目的　阐明胃癌的发生中多种抑癌基因和癌基因的甲基化情况。方法　提取去甲基化制剂5-氮脱氧胞苷(5 aza 2’ deoxycytidine,5 aza dC)干预后的胃癌细胞RNA,RT-PCR方法检测p16INK4A等多种基因的表达情况。结果　5 aza dC干预后两种胃癌细胞系中p16INK4A的表达增强,且不同的胃癌细胞株表达增强最明显时的时间与浓度不同。结论　研究的胃癌细胞系中p16INK4A启动子区的甲基化是它在胃癌细胞系表达减弱的主要原因之一。     

钼酸钠对MNU和MNNG诱导V79细胞姐妹染色单体互换频率的作用

实验结果证实、预加10~(-7)～10~(-4)mol/L浓度钼酸钠能明显减少MNU诱导的V79细胞姐妹染色单体互换(SCE)频率。中等剂量(10~(-5)～10~(-6)mol/L)效果最明显,分别由18.32/细胞降至12.64和12.94/细胞(P<0.001);钼酸钠无论同时或预先作用于细胞,对于MNNG引起的V79细胞遗传物质损伤无明显保护作用。     

5-氮杂-2'-脱氧胞苷预处理致敏百草枯对V79细胞的毒性观察

［摘要］目的　观察DNA甲基化调控对预处理致敏百草枯V79细胞的影响．方法　采用DNA甲基化特异性抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-dc）对V79细胞进行预处理12 h,然后加入百草枯作用12 h,采用显微镜观察V79细胞形态结构,应用MTT法、台盼蓝染色法计数检测各实验组中细胞存活状况．结果　显微镜检查观察到5-Aza-2'-dc与百草枯联合作用组比5-Aza-2'-dc组、百草枯组V79细胞贴壁能力减弱、细胞体积变小,噻唑蓝（MTT）比色法检测到联合作用组细胞存活率（54.47±3.04）%显著低于5-Aza-2'-dc组（95.52±0.90）%、百草枯组（89.68±4.26）%（P＜0.05）,台盼蓝染色计数算出联合作用组死细胞率（53.58±1.57） %显著高于5-Aza-2'-dc组（7.44±2.31）%、百草枯组（12.90±1.21）%（P＜0.05）．结论　5-Aza-2'-dc能够促进百草枯对V79细胞的损伤.     

用中国仓鼠V_(79)细胞HGPRT位点正向突变试验检测饮用水的致突变性

用国产H-103树脂吸附的武汉D水厂水源水与出厂水的非挥发性、非极性有机浓集物,在不加代谢活化系统条件下,均能诱发中国仓鼠胚胎肺成纤维细胞(V79)次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT)位点的正向突变。出厂水2、4、6升/瓶三种浓度的致突变率分别为空白对照的4.25、14.68、22.75倍;水源水4升/瓶浓度对细胞也有致突变性。提示武汉D水厂的水源水与出厂水中存在着对哺乳动物细胞的直接致突变物,且出厂水中致突变物的活性更强。     

缺氧时猪肺动脉平滑肌细胞中环氧合酶和血栓素合酶基因表达变化研究

应用培养的猪肺动脉平滑肌细胞经分子杂交和放射免疫检测发现:缺氧可使环氧合酶（COX）基因表达增加，缺氧6、24、48h，环氧合酶-2（COX-2）和环氧合酶-1（COX-1）mRNA水平分别是常氧组的3、1、1倍和1、2、2.7倍。并在不同时间缺氧（6、24、48h），平滑肌细胞条件培养基中6-酮-前列腺素Flα含量也显著高于相应对照组（P＜0.05），但缺氧对血栓素合酶（TXS）基因表达及血栓素入生成无明显影响。结果表明:缺氧可使平滑肌细胞COX基因表达及前列环素（PGI2）自分泌增加，它可能在平滑肌细胞缺氧收缩及增生反应中起调节作用。并且从缺氧时COX和PGI2生成的动态变化说明，缺氧时PGI2生成的迅速增多主要与COX-2mRNA表达增加有关。     

三种诱变剂对V79细胞及其突变株存活率和染色体畸变的影响

作者观察了亚硝基胍(MNNG)、丝裂霉素(MMC)和乙基磺酸甲酯(EMS)对V79细胞及其γ线敏感的突变株irs5和irs11存活率和染色体畸变的影响。存活率测定的药物浓度MNNG为2.5～30.0μmol/L,MMC为1～20μmol/L,EMS为2～16mmol/L;irs5的存活率和细胞克隆形成数均优于V79,而irs11明显低于前两者。染色体畸变测定IC_(50)的结果与存活率相似。irs5和V79由MNNG,MMC和EMS引起的染色体畸变,其类型和数量相似,染色体畸变率均呈剂量-反应关系,且自发畸变率<4％。irs11的畸变率未见明显的剂量反应,自发畸变率>10％。结果提示irs5细胞生物学特性较为稳定,进一步研究可确定其是否可作为新型的突变细胞株用于致突性或致癌性研究。     

5-Aza-2'-dc预处理致敏百草枯对V79细胞活性氧及Bcl-2/Bax表达的影响

［摘要］目的　研究DNA甲基化酶抑制剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-dc）与百草枯联合对V79细胞作用后的活性氧含量及抗凋亡Bcl-2蛋白和促凋亡Bax蛋白表达的影响．方法　V79细胞经传代培养后分为5-Aza-2'-dc作用组（A组）、百草枯作用组（B组）、5-Aza-2'-dc加百草枯作用组（C组,即先应用5-Aza-2'-dc对V79细胞进行预处理12h,然后给予百草枯作用12h）、对照组（D组）．采用2,7二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）荧光探针装载,流式细胞仪测定各实验组V79细胞内活性氧含量,Western blot检测各实验组V79细胞内抗凋亡Bcl-2蛋白和促凋亡Bax蛋白的表达情况．结果　5-Aza-2'-dc与百草枯联合作用组（C组）V79细胞内活性氧含量、抗凋亡Bcl-2蛋白、促凋亡Bax蛋白表达与5-Aza-2'-dc组（A组）、百草枯组（B组）和对照组（D组）比较有统计学差异（P＜0.05）;C组V79细胞内抗凋亡Bcl-2蛋白表达、抗凋亡Bcl-2蛋白/促凋亡Bax蛋白比值降低,活性氧含量和促凋亡Bax蛋白表达升高．结论　5-Aza-2'-dc调控DNA甲基化可能通过活性氧代谢失衡、细胞调亡来促进百草枯对V79细胞的毒性损伤．     

人PRX 3原核表达质粒的构建及表达

目的 构建人Peroxiredoxin 3（PRx3）原核表达质粒,并在大肠杆菌中进行表达。方法 采用基因工程技术将PRX3编码序列插入原核表达质粒载体pET-30（a）,再将重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达,并对表达产物进行SDS—PAGE分析。结果 酶切鉴定和DNA测序证实人PRX3编码序列全长正确地插入表达质粒中,序列与GenBank报道的一致;重组PRX3在大肠杆菌获得高效表达,且易形成包涵体。结论 人PRX3原核表达质粒构建成功,并能在大肠杆菌中高效表达,为后续研究奠定了良好基础。     

热疗作用于肝癌细胞株SMMC-7721后几种凋亡相关基因的表达

目的　探讨热疗前后人肝癌SMMC -772 1细胞几种凋亡相关基因的表达情况 ,解释热疗促进肿瘤细胞凋亡的分子机制。方法　采用免疫组化S- P法检测热疗前后肝癌细胞中P5 3、HSP 70、c Myc蛋白的表达情况。结果　各个热处理组与对照相比 ,HSP-70、P5 3、c Myc蛋白的表达均增高 ,有统计学差异 (P <0 .0 1 ) ;42℃加热 1h和2h与加热 3 0min比较HSP 70蛋白的表达增多 ,有统计学意义 (P <0 .0 5 ) ;而P5 3和c Myc蛋白在各个热处理组间表达没有差异。结论　加热可以诱导HSP70蛋白的大量产生 ,可以激活P5 3基因诱导肝癌细胞凋亡 ,上调c- Myc基因 ,通过调节细胞凋亡来提高细胞的热敏感性。     

问号钩体趋化相关基因特征分析

目的预测问号钩体黄疸出血群赖型赖株的趋化信号传导途径,并深入分析趋化相关基因.方法使用ProtParamtool,NCBI/Blastp进行蛋白参数分析和结构域分析,使用Clustalw软件进行多序列对比,与大肠埃希菌K-12趋化相关基因进行比较.结果问号钩体趋化相关基因共30个,分为MCPs和che两组基因,功能与大肠埃希菌趋化相关基因相似,并预测出问号钩体趋化信号传导途径.结论问号钩体趋化相关基因较大肠埃希菌、苍白密螺旋体和伯氏疏螺旋体多,提示其趋化传导途径更为复杂,适应宿主的能力也更强,可能是钩体的重要毒力因子之一.     

重组人诱导型一氧化氮合酶在V79成纤维细胞株中的表达及意义探讨

目的观察人诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因转染至V79成纤维细胞株后,iNOS的表达和分泌一氧化氮的情况,以探讨血管壁成纤维细胞分泌一氧化氮的可行性.方法构建真核表达载体pcDNA3-iNOS,将人iNOS基因转入V79细胞中,经G418筛选,克隆扩增,通过RT-PCR、免疫荧光法进行鉴定.结果 pcDNA3-iNOS基因转染的V79成纤维细胞中有iNOS mRNA的转录,在细胞胞质中可见分泌的iNOS蛋白,iNOS转染组一氧化氮的含量(237.67±27.28)与正常细胞组(78.26±11.77)和空质粒组(84.22±12.67)相比有显著性意义(P<0.001),但正常细胞组和空质粒组相比无显著性差异(P>0.05).结论 iNOS基因可以成功地转入成纤维细胞中并能使转染的成纤维细胞具有分泌NO的功能,从而可能替代血管内皮细胞的部分功能.     

乙肝基因疫苗系列质粒的构建及其在真核细胞中的表达

目的　构建一系列乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白的真核细胞表达质粒 ,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法　采用常规 PCR法扩增 S、前 S2 - S、前 S1 -前 S2 - S片断 ,利用重叠 PCR法扩增出前 S1 - S片断后 ,分别插入 Rc/ CMV及 p SG5 U TPL/ Flag载体质粒中 ,并在其 ATG起始密码前加入 KOZAK序列后转染 SP2 / 0细胞 ,Western- Blot杂交检测所表达蛋白 ,并用核酸自动分析仪分析所插入片断的核酸序列。结果　插入片断的核苷酸序列与相应的大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的编码基因一致 ,Western- Blot杂交检测出了相应的目的蛋白。结论　获得了 8个能高效表达乙肝病毒表面抗原大、中、小蛋白和前 S1 - S蛋白的真核细胞表达质粒。     

问号钩体趋化相关基因特征分析

目的 预测问号钩体黄疸出血群赖型赖株的趋化信号传导途径，并深入分析趋化相关基因。方法 使用ProtParam tool，NCBI／Blastp进行蛋白参数分析和结构域分析，使用Clustalw软件进行多序列对比，与大肠埃希菌K-12趋化相关基因进行比较。结果 问号钩体趋化相关基因共30个，分为MCPs和che两组基因，功能与大肠埃希菌趋化相关基因相似，并预测出问号钩体趋化信号传导途径。结论 问号钩体趋化相关基因较大肠埃希菌、苍白密螺旋体和伯氏疏螺旋体多，提示其趋化传导途径更为复杂，适应宿主的能力也更强，可能是钩体的重要毒力因子之一。     

CD44V6在非小细胞肺癌中表达的临床研究

目的：探讨变异型白细胞分化抗原（VD44V6）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达情况以及其与肺癌浸润和转移的关系。方法：采用免疫组化SP法，对37例NSCLC组织进行CD44V6的检测。结果：CD44V6表达与NSCLC组织学分型无明显相关性（P＞0．05）；同NSCLC分级无关（P＞0．05）；按UTCC－TNM分期，Ⅱ期和Ⅲ期中CD44V6表达显著高于I期（P＜0．05）；与未转移者相比，发生淋巴结转移的肺癌组织中CD44V6表达明显提高（P＜0．01）。结论：CD44V6阳性表达可能对临床评估非小细胞肺癌进展及淋巴结转移具有一定意义。     

绿色荧光蛋白和酪氨酸羟化酶在骨髓基质细胞中的表达

目的研究反转录病毒介导的绿色荧光蛋白(EGFP)基因和酪氨酸羟化酶(TH)基因在原代培养的骨髓基质细胞(bMSCs)中的表达情况。方法体外分离培养大鼠四肢骨的bMSCs,原代培养8~10 d后,同时利用含EGFP和TH基因的反转录病毒上清依次转染bMSCs并进行抗性筛选,7~10 d可得到稳定表达EGFP的bMSCs,在稳定转染EGFP后10 d进行TH病毒上清的转染,7~10 d可得到稳定表达TH和EGFP的bMSCs。结果原代培养bMSCs 3~4 d后生长至70%~80%汇合,病毒转染EGFP后第2天,细胞呈现弱荧光,经G418筛选2~3 d后出现阳性细胞,约8~10 d生长融合,阳性率60%~70%,第2~5代阳性细胞比率无明显变化。TH阳性率也达60%以上。结论利用反转录病毒载体可有效地将EGFP和TH基因转至bMSCs中,并能在体外稳定表达传代。这种表达EGFP和TH的bMSCs对于研究bMSCs的体内迁移分化及帕金森病(PD)的基因治疗具有重要意义。