低浓度凝血酶预处理对星形胶质细胞氧糖剥夺损伤的影响

目的:研究低浓度凝血酶(TB)预处理对培养的鼠脑星形胶质细胞(As)在氧糖剥夺(OGD)诱导损伤后的影响.方法:原代培养的大鼠大脑皮层AS,预先用不同低浓度(0.005～5.000 kU/L)的TB处理(TB预处理,TPC),观察在缺糖和缺氧(氧糖剥夺)培养状态下细胞的功能状态和损伤情况.以四甲基偶氮唑盐(MTT)还原试验检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率作为细胞损伤指标,流式细胞术检测细胞凋亡发生率,[3H]-谷氨酸摄取法测定As对谷氨酸(Glu)摄取能力的变化.结果:OGD引起细胞活力下降,LDH漏出率增高,OGD诱发细胞凋亡,降低As对Glu的摄取,上述指标与正常对照组相比均具有统计学意义(P＜0.01);而经低浓度TB预处理后,OGD损伤造成的LDH漏出率较低,细胞凋亡发生率降低,同时MTT值提高,As对Glu的摄取也增高,与OGD组比较有统计学意义(P＜0.05),其中最佳TB效应剂量为0.10 kU/L.结论:低浓度TB预处理的As,可增强在OGD环境下的损伤耐受能力,具有细胞保护作用.     

肝细胞生长因子对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对缺氧、缺糖诱导的星形胶质细胞（As）损伤及凋亡的影响。方法：以缺氧、缺糖来诱导原代培养的大鼠大脑皮层星形胶质细胞损伤。用不同终浓度（20～100ng/mL）的HGF处理星形胶质细胞,以乳酸脱氢酶（LDH）漏出率作为细胞损伤指标,四甲基偶氮唑盐（MTT）还原试验检测细胞活力,流式细胞术检测凋亡细胞,透射电镜观察细胞超微结构。结果：缺氧缺糖引起LDH漏出率增高,细胞活力下降,细胞凋亡率增高。HGF处理后,LDH漏出率降低,细胞活力增高,同时细胞凋亡率降低（P＜0.05）,最大效应剂量为60ng/mL。结论： HGF对星形胶质细胞缺氧缺糖损伤具有保护作用,能减少星形胶质细胞凋亡,并呈一定的剂量依赖关系。     

氯胺酮对谷氨酸诱导大鼠大脑皮层星形胶质细胞自噬的影响

目的观察氯胺酮对谷氨酸诱导的大鼠大脑皮层星形胶质细胞自噬的影响。方法取新生大鼠大脑皮层,原代混合培养、分离、纯化获得星形胶质细胞。实验分3个组：对照组（C组,加入D-Hank＇s液）;谷氨酸组（G组,加入谷氨酸至终浓度125μmol/L）;谷氨酸和氯胺酮组（GK组,先加入谷氨酸至终浓度125μmol/L,30 min后加入氯胺酮至终浓度1 mmol/L）。用相差显微镜观察细胞形态变化,免疫荧光染色鉴定细胞种类及LC3蛋白在细胞内的表达,通过Western blot法检测beclin-1、bcl-2、LC3蛋白的表达变化。结果 G组细胞内beclin-1、beclin-1/bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达较C组上升,bcl-2蛋白表达较C组下降（均P〈0.05）。GK组细胞内beclin-1、beclin-l/bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ蛋白表达较G组下降,bcl-2蛋白表达较G组上升（均P〈0.05）。结论 125μmol/L谷氨酸能促进星形胶质细胞发生自噬和凋亡,1 mmol/L氯胺酮可抑制谷氨酸诱导星形胶质细胞发生的自噬和凋亡。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响

【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元,用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况;用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化的程度;并同时检测了细胞内抗氧化酶的活性。【结果】银杏内酯B(10～100μmol/L)能剂量依赖性地抑制谷氨酸(0.8 mmol/L)引起的细胞存活率下降和细胞损伤,同时提高细胞内抗氧化酶活性和减轻细胞脂质过氧化。【结论】银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用,这可能与其能提高神经细胞内抗氧化酶活性和清除氧自由基有关。     

大鼠出血性休克时肌肉组织中葡萄糖和乳酸浓度变化的探讨

应用微透析法测定了出血性休克不同时相时大鼠四肢肌肉组织中葡萄糖浓度和乳酸浓度，探讨了两种物质的相关性变化．结果表明，休克初期肌组织中葡萄糖含量逐步上升，９０ｍｉｎ时达最高值７．６６±１．１７ｍｍｏｌ／Ｌ，其后逐而下降；肌组织中乳酸含量在休克６０ｍｉｎ时达最高值４．１０±０．６２ｍｍｏｌ／Ｌ，其后仍保持较高水平．这些结果提示，休克时肌组织中糖酵解的加强，肌组织中乳酸浓度增高也是乳酸血症的主要来源之一     

过氧化氢诱导支气管上皮细胞高迁移率族蛋白1主动释放

目的研究过氧化氢(H2O2)对正常人支气管上皮细胞(HBE)HMGB1表达、移位和释放的影响。方法四唑盐(MTT)法检测不同浓度H2O2对支气管上皮细胞活力的影响;蛋白免疫印迹方法分别检测H2O2刺激HBE胞核,胞浆以及细胞培养上清中HMGB1浓度。免疫荧光观察HBE的HMGB1的定位和H2O2刺激后对HBE HMGB1的移位的影响。结果 125μmmol/L刺激对HBE活力无影响,而250μmmol/L会导致细胞活力下降(与对照组组比较,P<0.05),但是不引起细胞死亡,400μmmol/L(与对照组比较,P=0.000)导致HBE死亡。在浓度依赖性实验,与对照组比较12.5、125、250μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后培养上清HMGB1水平显著增加;在时间依赖性实验中与对照组比较,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12、24 h后细胞上清中的HMGB1显著升高(P<0.05);12.5μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后,HBE胞浆蛋白明显增加,胞核蛋白减少。而免疫荧光检测示HMGB1高丰度分布正常HBE的细胞核内,少量分布于细胞浆,125μmmol/L H2O2刺激HBE 12 h,HMGB1明显从HBE胞核向胞浆转位;125μmmol/L H2O2刺激HBE 24 h后观察到HMGB1移位分布到胞膜上。结论 H2O2可以显著诱导支气管上皮细胞HMGB1的表达、转位和释放,提示HMGB1可能参与了哮喘,COPD等慢性炎症疾病气道的氧化应激过程。     

天麻素对氯化钾诱导的培养神经细胞释放谷氨酸的影响

目的　考察天麻素对由氯化钾诱导的神经细胞释放谷氨酸的影响。方法　通过高效液相 (HPLC)测定人神经母细胞瘤SH SY5Y细胞系培养液中谷氨酸的含量。结果　当细胞外液中有钙离子时 ,随着氯化钾浓度的增加 (10～ 30mmol/L) ,释放到培养液中的谷氨酸的含量也相应增加 ;当培养液中去除钙离子时 ,细胞外液中谷氨酸的浓度不随氯化钾浓度的变化而改变。在含钙培养液中加入 4mg/ml的天麻素 ,再加入 10～ 5 0mmol/L氯化钾 ,未见细胞外液中的谷氨酸含量增高。结论　氯化钾诱导的SH SY5Y细胞谷氨酸的释放增多与细胞外液钙离子内流有关 ;天麻素可以颉颃由氯化钾诱导的神经细胞谷氨酸释放增加的作用。     

比较谷氨酸引起两品种大鼠培养星形胶质细胞肿胀的差异

目的 比较Wistar大鼠及SD大鼠培养星形胶质细胞(AST)对谷氨酸所致细胞肿胀的差异。方法 利用新生1 d的Wistar大鼠和SD大鼠进行AST原代及传代培养,传代培养10 d分别给予1、10 mM谷氨酸孵育48 h,通过乳酸脱氢酶释放率检测细胞活性,通过胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色,Image Pro Plus软件测量细胞周长表示细胞体积变化,通过逆转录实时荧光定量PCR法检测水通道蛋白4(AQP4) mRNA表达变化。结果 谷氨酸对不同品系大鼠AST活性影响没有差异(P>0.05)。在正常情况下,Wistar大鼠AST周长小于SD大鼠,在给予谷氨酸处理后,均明显大于SD大鼠(P<0.05)。在给予1 mM谷氨酸后,Wistar大鼠AST的AQP4 mRNA表达明显高于SD大鼠(P<0.05)。结论Wistar大鼠AST对谷氨酸所致细胞肿胀较SD大鼠明显,且谷氨酸对两品系大鼠AST上AQP4表达变化的影响存在差异。     

Influence of CaNa2 EDTA on topical 5-aminolaevulinic acid photodynamic therapy

Background We asssessed whether the CaNa2 EDTA could improve the accumulation of protoporphyrin Ⅸ (PpⅨ) and photosensitisation in HEp-2 cells as well as the depth of treatment of skin cancers on the topical 5-Aminolaevulinic acid (5-ALA) PDT.Methods HEp-2 cells were incubated with 5-ALA (0-1mmol/L) and CaNa2EDTA (0-1mmol/L) for 4 hours, intracellular protoporphyrin Ⅸ content was quantified by extraction, and cell viability was assessed by use of the methyl-tetrazolium (MTT) assay four hours after exposure to light. In comparison with the pictures before and after treatment, depth of treatment could be determined using a Acuson Sequioa 512 phase-array system in paired experiments.Results PpⅨ accumulation increased with increasing extracellular concentrations of ALA (0-1mmol/L). Adding 1mmol/L of CaNa2EDTA increased 30% PpⅨ accumulation over the same period of incubation in the concentration of 1mmol/L ALA. Significant difference was observed between the 5-ALA alone group and 5-ALA combined CaNa2 EDTA group in the PpⅨ accumulation (P&lt;0.01). Cell viability after exposure to light decreased with adding CaNa2 EDTA, a statistical difference in a same fluence above 1.2 J/cm2 between two groups was demonstrated (P&lt;0.05, P&lt;0.01 respectively). Depth of treatment of skin cancers were increased in CaNa2 EDTA-treated group.Conclusion CaNa2 EDTA could improve the PpⅨ accumulation and photosensitisation in HEp-2 cells. Clinically, CaNa2 EDTA could increase the depth of treatment in the cutaneous cancers.     

一氧化氮信号通路对小鼠鼻腔纤毛运动的调控

目的观察一氧化氮(nitric oxide,NO)信号系统对小鼠鼻腔纤毛运动的调控。方法 酶消化法培养小鼠鼻腔上皮细胞,采用高速数字化显微成像技术对纤毛摆动进行定量分析,观察10mmol/LL-精氨酸(L-arginine,L-arg)对上皮细胞纤毛摆动的影响;采用免疫组化方法检测NO信号系统分子内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)、鸟苷酸环化酶(guanylate cyclase,GC)、蛋白激酶G(protein kinase G,PKG)的表达。结果 ①Hanks平衡盐溶液(Hank’s balanced salt solution,HBSS)对照组小鼠鼻纤毛摆动在10min内无明显变化;②10mmol/L L-arg处理组纤毛摆动频率(ciliary beat frequency,CBF)加药后2min即出现明显增加,在检测的各个时间点,CBF与加药前相比差异有统计学意义;③免疫组化结果显示NO信号通路中主要信号分子eNOS、GC、PKG在小鼠鼻腔纤毛中均有明显表达。结论 NO-环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)-PKG信号通路参与了小鼠鼻纤毛运动的调控。     

人源促红细胞生成素在Müller细胞中拮抗谷氨酸毒性作用的研究

目的观察高浓度谷氨酸刺激条件下Mtiller细胞的变化以及促红细胞生成素（erythropoietin,EPO）的保护作用是否与维持Mtiller细胞的谷氨酸转运功能相关。方法用M1Tr法检测不同浓度谷氨酸处理大鼠原代视网膜Mtiller细胞和大鼠视网膜Miiller细胞系rMC一1所引起的细胞活力变化。选择能显著降低细胞活力的最低谷氨酸剂量建立细胞损伤模型,并研究不同浓度EPO干预后细胞活力的变化。TUNEL（terminal deoxynucleotidyl transferase—mediated dUTP nick—end labeling）法检测各组细胞凋亡情况,Western印迹法检测谷氨酸转运体GLSAT在蛋白水平的变化。结果无论是在原代大鼠Mtiller细胞还是rMC-1细胞系中,谷氨酸的细胞毒性作用均呈剂量依赖趋势。原代Miiller细胞中,12mmol／L谷氨酸使细胞活力降低15．5％,10mmol／L谷氨酸使rMC-1细胞活力降低15．6％;此时细胞凋亡明显增加,GLAST表达降低。0．2U／ml和0．5U／mlEPO分别对原代Mfiller细胞和rMC-1细胞的保护作用最佳,细胞凋亡数量显著减少,并防止了GLAST蛋白水平的降低。结论体外高浓度谷氨酸可损伤Mtiller细胞,EPO可以通过维持谷氨酸转运体GLAST水平等机制维持Mfiller对谷氨酸的正常摄取、抑制凋亡发生。     

过氧化氢诱导人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的建立

 目的 通过研究不同浓度过氧化氢(H2O2)作用不同时间对人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激水平的影响,确定建立滋养细胞氧化应激模型的条件。 方法 将HTR-8/SVneo用不同浓度(125、250、500 μmol/L) H2O2分别处理不同时间(1、2、4、24 h)后,采用CCK-8法检测细胞存活率;流式细胞术分析检测细胞内超氧化物阴离子水平以及细胞凋亡情况;紫外分光光度法检测细胞培养上清液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性以及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)含量。结果 随H2O2浓度增加及作用时间延长,HTR-8/SVneo细胞存活率逐渐下降,细胞内超氧化物阴离子含量及细胞凋亡率不断增加,细胞培养上清液中SOD活性逐渐降低、LDH含量不断升高。其中在250 μmol/L H2O2作用4 h条件下,SOD活性明显低于对照组(P<0.05),细胞内超氧化物阴离子水平及细胞凋亡率较对照组均显著增加(P<0.05),但LDH漏出量无明显增多(P>0.05),且该条件下细胞有较高的存活率(85.13%)。结论 建立人胎盘滋养细胞HTR-8/SVneo氧化应激模型的最适条件为250 μmol/L H2O2作用4 h。     

氯胺酮、异丙酚对谷氨酸诱导大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响

目的:观察氯胺酮和异丙酚对谷氨酸诱导体外培养大鼠海马星形胶质细胞损伤的影响。方法:取出生1~3 d Wistar大鼠海马星形胶质细胞,原代纯化培养3周。将细胞随机分为5组(n=9):C组为对照组,加入Hanks液;G组加入谷氨酸;GK组先加入谷氨酸,10 min后加入氯胺酮;GP组先加入谷氨酸,10 min后加入异丙酚;GPK组先加入谷氨酸,10 min后同时加入异丙酚和氯胺酮。培养24 h后分别检测各组上清液IL-1β、TNF-α和IL-10浓度、细胞凋亡率及胞内SOD活性和MDA含量,并观察细胞形态学改变。结果:与C组比较,G组星形胶质细胞凋亡增加(P<0.01),未凋亡的细胞被激活增生肥大,IL-1β和TNF-α浓度升高(P<0.01),IL-10浓度无明显变化(P>0.05),SOD活性显著降低(P<0.01),MDA含量明显增加(P<0.01)。与G组比较,GK、GP和GPK组凋亡细胞减少(P<0.05,P<0.01),IL-1β和TNF-α降低(P<0.05,P<0.01),IL-10升高(P<0.01),SOD活性增加而MDA含量低(P<0.05,P<0.01),细胞无明显增生肥大。GK组和GP组间比较差异无统计学意义(P>0.05),GP组和GK组分别与GPK组比较差异有统计学意义(均P<0.01)。结论:氯胺酮和异丙酚均可抑制谷氨酸引起的大鼠海马星形胶质细胞的凋亡和激活,通过抑制脂质过氧化反应,清除自由基,同时抑制炎性细胞因子分泌而发挥神经保护作用,且两者有协同作用。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

MCT1表达位置改变对胶质瘤细胞能量合成、细胞内pH值及凋亡的影响

目的研究体外培养U251细胞单羧酸转运蛋白-1(MCT1)被CD147/HAb18G基因工程单克隆抗体改变表达位置后其乳酸外流障碍对细胞能量合成、细胞内pH值(pHi)和凋亡的影响。方法分别以低、高剂量的CD147/HAb18G单抗封闭体外培养U251细胞表面CD147分子,并设立对照组。免疫荧光法检测各组细胞膜上MCT1表达分布改变,分光光度计检测各组细胞内乳酸含量,生物发光法检测细胞内腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)含量,连续比色法检测细胞内磷酸果糖激酶(PFK)活性,2′,7′-二(羧乙基)-5(6)-羧基荧光黄(BCECF-AM)荧光探针法检测各组pHi,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率。结果CD147/HAb18G单抗作用下,MCT1表达位置由胞膜有效表达转为胞质无效表达且细胞内乳酸浓度增高;细胞内ATP含量下降[对照组(0.831±0.036)×10-8 mmol/L,低剂量组(0.592±0.047)×10-8 mmol/L,高剂量组(0.332±0.042)×10-8 mmol/L,P<0.01];细胞PFK活性下降[对照组(0.855±0.076)mmol.min-1.L-1,低剂量组(0.602±0.057)mmol.min-1.L-1,高剂量组(0.382±0.049)mmol.min-1.L-1,P<0.01];pHi下降(对照组7.27±0.03,低剂量组6.77±0.04,高剂量组6.31±0.02,P<0.01);细胞凋亡率增加[对照组(8.45±1.26)%,低剂量组(16.87±3.26)%,高剂量组(28.92±3.01)%,P<0.01]。结论通过改变MCT1的表达位置,可有效抑制细胞糖酵解乳酸清除、降低糖酵解能量合成,酸化细胞内环境,促进肿瘤凋亡。     

阿司匹林诱导内皮细胞铁蛋白表达与抗氧化损伤作用的研究

目的探讨阿司匹林(aspirin,As)在抗H2O2损伤内皮细胞过程中对铁蛋白(ferritin,Fn)表达的作用.方法体外培养人血管内皮细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)测定As在不同浓度(0.1～3mmol/L)、不同处理时间(4～24h)对细胞Fn表达的影响,以及消炎痛和水杨酸钠对Fn表达的作用;并观察经As预处理后的细胞加入H2O2(0.5mmol/L)后乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)释放率、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和细胞存活率的改变.用单因素方差分析对上述指标进行统计学处理.结果小剂量As(0.1mmol/L)即可明显诱导内皮细胞Fn表达(5.8ng/106细胞数±0.3ng/106细胞数),与正常对照组比较P<0.05;且As与Fn之间表现出剂量和时间依赖关系,0.5mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L组Fn浓度分别为(6.4±0.4)ng/106细胞数、(7.0±0.7)ng/106细胞数、(7.4±0.4)ng/106细胞数和(7.7±0.5)ng/106细胞数;4h组Fn尚未明显增加(5.8ng/106细胞数±1.0ng/106细胞数,P>0.05),但8h组Fn浓度(6.5±1.0)ng/106细胞数与正常对照组比较P<0.05,24h组Fn浓度达最大值(7.8±0.8)ng/106细胞数.As诱导Fn表达后能明显增强细胞抗氧化的能力,0.1mmol/L的As可减少细胞50%的LDH释放率,保护74.4%的细胞避免H2O2的损伤,同时使氧自由基指标MDA明显下降.并随As剂量的增大保护作用逐渐增强,其结果与未饱和铁蛋白组相似.而水杨酸钠及消炎痛则无诱导Fn表达的作用.结论As在较小剂量(0.1mmol/L)时即可明显诱导内皮细胞Fn的表达,增强其抗氧化损伤的能力;但其他非甾体类抗炎药不具有这个作用.     

二甲双胍联合MCT1抑制剂α-氰基-4-羟基苯乙烯治疗小鼠Lewis肺癌的研究

目的 探讨二甲双胍联合单羧酸转运蛋白1(monocarboxylate transporter 1,MCT1)抑制剂α氰基-4-羟基苯乙烯(CHC)干扰乳酸代谢是否有抗肿瘤作用。 方法 体外检测对照组、二甲双胍组(1 mmol/L、5 mmol/L)、CHC组(5 mmol/L)及联合用药组(二甲双胍5 mmol/L和CHC 5 mmol/L)24、48 h LL/2细胞的增殖、乳酸代谢的改变及24 h细胞凋亡变化。C57BL/6小鼠于右背侧皮下接种LL/2肿瘤细胞(5×105/只),建立小鼠Lewis肺癌模型,将28只荷瘤小鼠随机平均分为4组:对照组(0.1 mL生理盐水灌胃,同时给予0.1 mL生理盐水腹腔注射)、二甲双胍治疗组(二甲双胍灌胃,200 mg/kg,0.1 mL/只,同时给予0.1 mL生理盐水腹腔注射)、CHC治疗组(CHC腹腔注射,100 mg/kg,0.1 mL/只,同时给予0.1 mL生理盐水灌胃)和联合治疗组(同时给予上述剂量二甲双胍灌胃和CHC腹腔注射)。观察各组小鼠肿瘤生长、测量体积大小并进行肿瘤组织原位凋亡检测。 结果 在体外,联合使用二甲双胍和CHC可以显著增加肿瘤细胞的乳酸生成,同时抑制肿瘤细胞的增殖,与对照组、二甲双胍组和CHC组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。体内动物模型证实联合使用二甲双胍和CHC可以早期减缓肿瘤的生长,与对照组、二甲双胍组和CHC组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);同时促进肿瘤细胞的凋亡。 结论 二甲双胍联合CHC可以改变肿瘤细胞乳酸代谢,诱导细胞凋亡,具有一定的抗肿瘤作用。     

Effect of Propofol on Glutamate and γ-aminobutyric Acid Release from Rat Hippocampal Synaptosomes

To investigate the effect of propofol on the release of glutamate and γ-aminobutyric acid (GABA) from rat hippocampal synatosomes, synaptosomes was made from hippocampus and incubated with artificial cerebrospinal fluid (aCSF). With the experiment of Ca²⁺-dependent release of glutamate and GABA, dihydrokainic acid (DHK) and nipectic acid were added into aCSF. For the observation of Ca²⁺-independent release of glutamate and GABA, no DHK, nipectic acid and Ca²⁺ were added from aCSF. The release of glutamate and GABA were evoked by 20 μmol/L veratridine or 30 mmol/L KCl. The concentration of glutamate and GABA in aCSF was measured by using high-performance liquid chromatography (HPLC), 30, 100 and 300 μmol/L propofol significantly inhibited veratridine-evoked Ca²⁺-dependent release of glutamate and GABA (P<0.01 orP<0.05). However, propofol showed no effect on elevated KCl-evoked Ca²⁺-dependent release of glutamate and GABA (P>0.05). Veratridine or elevated KCl evoked Ca²⁺-independent release of glutamate and GABA was not affected significantly by propofol (P>0.05). Propofol could inhibit Ca²⁺-dependent release of glutamate and GABA. However, it has no effect on the Ca²⁺-independent release of glutamate and GABA.     

三氧化二砷对红细胞毒性及能量代谢的影响

目的:研究三氧化二砷(arsenic trioxide, As₂O₃)对红细胞(red blood cells, RBCs)毒性及能量代谢的影响。方法:用终浓度为0.2 mmol/L、0.4 mmol/L、0.8 mmol/L、1.6 mmol/L、3.2 mmol/LAs₂O₃分别在37℃培养箱孵育红细胞48 h,利用酶标仪分别检测红细胞存活率及红细胞溶血率;用终浓度为2.5 mmol/L As₂O₃孵育红细胞5 h,利用液相色谱串联质谱法进行红细胞内靶向能量代谢产物相对定量分析。结果:0.2 mmol/L As₂O₃可提高红细胞存活率(P<0.05),0.4 mmol/L和0.8 mmol/L As₂O₃对红细胞存活率无明显影响(P>0.05),但高浓度(1.6 mmol/L和3.2 mmol/L)As₂O₃可...     

重组甲硫氨酸酶调控 PI3K/Akt/Glut-1 通路抑制有氧糖酵解促进胃癌细胞凋亡

目的 探讨重组甲硫氨酸酶（rMETase）对胃癌细胞增殖抑制作用及潜在的分子机制。方法 rMETase（终浓度为0.00、1.25、 2.50 mmol/L）处理胃癌SGC-7901细胞72 h,采用CCK-8法检测SGC-7901细胞活力,倒置显微镜下观察SGC-7901细胞形态变化,平板细胞克隆形成实验检测SGC-7901细胞克隆形成率,流式细胞术分析胃癌细胞凋亡情况及细胞周期变化,比色法和荧光酶标仪检测rMETase对胃癌细胞葡萄糖吸收和乳酸、ATP释放的影响,Western blot分析rMETase对SGC-7901细胞PI3K/Akt通 路、GLUT-1、糖酵解相关蛋白及凋亡蛋白的影响。结果 rMETase能够抑制SGC-7901细胞的增殖和克隆形成、诱导胃癌细胞S期周期阻滞、促进细胞凋亡（P<0.05）;随着rMETase的浓度的增加,细胞吸收的葡萄糖降低,并伴随糖酵解产物乳酸和ATP的下降（P<0.001）;Western blot结果显示,rMETase作用SGC-7901细胞后,PI3K、p-Akt/t-Akt、GLUT-1,糖酵解关键酶HK2、PFKM、LDHA、抑凋亡Bcl-2的蛋白表达下调,促凋亡蛋白Bax、Caspase-3表达上调（P<0.01）。结论 rMETase可以通过抑制PI3K/Akt/GLUT-1通路的活性,抑制胃癌细胞有氧糖酵解,诱导胃癌细胞凋亡,抑制SGC-7901细胞增殖,rMETase可能是一种潜在的胃癌治疗药物。