077 TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用，TCR CDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点，一种CDR3序列代表一个T细胞克隆，通过对，TCR BV CDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆，指导疾病的免疫治疗。     

TCR BV CDR3谱型与自身免疫性疾病

自身抗原特异性T细胞克隆性增生在自身免疫病的发生发展中起重要作用 ,TCRCDR3区是T细胞直接与抗原接触的位点 ,一种CDR3序列代表一个T细胞克隆 ,通过对TCRBVCDR3谱型分析及序列测定可迅速发现自身免疫性T细胞克隆 ,指导疾病的免疫治疗     

APL相关TCRVα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周m TCR Vα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点.方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCR Vα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析.结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219).结论:APL患者外周血T细胞出现的TCR Vα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料.     

直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞中T细胞受体基因谱型特征

目的 分析直肠癌肿瘤浸润性淋巴细胞(tumor—infiltrating lymphocytes，TIL)克隆的TCRβ基因谱型及CDR3区氨基酸序列，了解直肠癌TIL抗肿瘤细胞克隆的基因特征。方法 采用RT—PCR方法扩增直肠癌肿瘤组织、术前外周血和术后外周血T淋巴细胞TCTβ基因的24个不同V基因片段，经过特殊的测序凝胶分离和银染色后，确定它们的TCRβ基因表达谱型。通过对PCR产物直接测序的方法，分析克隆性增殖的特征和CDR3区氨基酸序列。结果 直肠癌肿瘤组织TIL的TCRβ基因谱型中具有克隆性表达，表明直肠癌TIL是呈寡克隆性增生的淋巴细胞；来自2例不同患者的肿瘤组织TIL中单克隆性表达的TCRβV11基因具有安全相同的DNA和氨基酸序列；其余四个寡克隆的CDR3区存在共同保守的氨基酸序列G／xGGN／xY（D）EQ，这些序列可能直接接触直肠癌肿瘤组织相关抗原。结论 直肠癌肿瘤组织TIL细胞中存在特异性识别肿瘤相关抗原肽的T淋巴细胞克隆。     

T-ALL及T细胞株相关TCR Vβ基因谱系和克隆性分析

目的了解T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)患者外周血中的T细胞及T细胞株的TCR Vβ基因谱系及其克隆性增殖情况。方法利用RT-PCR方法扩增6个不同的T细胞株和6例初发未治T-ALL病人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的互补决定区3(CDR3)，PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而确定T细胞的克隆性，部分T细胞株的单克隆PCR产物进一步进行序列分析。结果与正常人外周血表达全部24个Vβ亚家族不同，6例T-ALL病人分别表达5～12个Vβ亚家族。6例病人均存在1个或多个Vβ亚家族的寡克隆或双克隆增殖T细胞，另外，还有一些Vβ亚家族多克隆模式发生改变，呈现寡克隆性增殖的趋势。T细胞株多显示为表达一个Vβ亚家族的单克隆T细胞，不同T细胞株的CDR3长度和序列不尽相同。结论T-ALL患者外周血T细胞的TCR Vβ谱系出现限制性改变，均可检测到克隆性增殖T细胞，尚需进一步鉴定其性质(肿瘤性或抗原特异性增殖)，对于检测微小残留病变和设计抗白血病独特型疫苗均有一定的意义。     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体（TCR）Vβ24个亚家族基因CDR3长度，可确定T细胞的克隆性。对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR VβT细胞出现倾斜性分布和克隆生长的情况。肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR VβT细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖，这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的，对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用，探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗，清除肿瘤患者微小残留病变，具有重要的意义。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的：了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点。方法：利用T淋巴细胞液体培养法，在不同刺激源（rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽）条件下诱导脐血T细胞扩增，并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3片段，了解各Vβ亚家族的表达情况，阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度，了解T细胞克隆性。结果：脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族，但经体外培养后，可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞，而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后，TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖。结论：脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能，在白血病相关抗原诱导下，具有限制性和克隆性增殖的能力。     

肿瘤相关TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞研究进展

利用RT-PCR和基因扫描分析T细胞受体(TCR)Vβ 24个亚家族基因CDR3长度,可确定T细胞的克隆性.对多种实体瘤和白血病等患者T细胞的分析显示病人的TCR Vβ T细胞出现倾斜性分布和克隆性生长的情况.肿瘤相关抗原诱导正常人T细胞同样可出TCR Vβ T细胞亚家族分布的改变和克隆性增殖.这些克隆性增殖T细胞主要是肿瘤相关抗原诱导增殖的,对肿瘤细胞具有特异性杀伤作用,探讨如何利用这种特异性克隆性T细胞作为过继性细胞免疫治疗,清除肿瘤患者微小残留病变,具有重要的意义.     

TCR β链CDR3谱序与疾病研究概况及进展

近年来,T细胞受体（TCR）互补决定区（CDR）和机体的生理、病理关系研究取得了较大的进展,尤其是在超抗原作用的感染性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤等疾病状态下,TCRB链CDR3谱型能很好地反映T细胞的功能,通过TCRβ链CDR3谱型来研究克隆性和寡克隆性增生T细胞,可了解T细胞免疫与疾病发生发展的关系,指导疾病的诊断及免疫治疗,同时可了解正常情况下T细胞的发生和发展情况。     

特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞的构建及生物学功能鉴定

目的：建立特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台。方法：利用搭桥PCR的方法将已知的γδT细胞克隆DBS4.3特异性CDR3编码序列嵌入到γ9和δ2cDNA序列中,取代原有的CDR3区序列,获得的全长γ9和δ2链分别插入真核表达载体pREP7和pREP9中,共转染J.RT3-T3.5细胞,双压力抗生素筛选获得表达特异性γδTCR的转染细胞,通过ELISA和Re-altime PCR检测该转染细胞在接受抗原刺激后IL-2的分泌情况。结果：ELISA和Realtime PCR结果显示表达DBS4.3特异性γδTCR的转染细胞在DBS4.3特异性抗原仲丁胺和抗γδTCR抗体刺激作用下,活化分泌IL-2。结论：构建了特异性CDR3区取代型γδTCR转染细胞平台,为研究γδTCR识别抗原的机制奠定了基础。     

识别猪SLA的特异性人T细胞系TCR BV基因取用格局和CDR3结构多样性分析

不同T细胞克隆TCR分子的序列不同 ,所识别的抗原特异性也不同。其中第三互补决定区 (CDR3)变异最大 ,是TCR主要的抗原结合部位。本文采用荧光标记半定量PCR技术 ,用DNA测序仪作程序分析 ,了解猪细胞抗原致敏前后的人T细胞群和 5个T细胞系 2 4个TCRBV基因家族取用格局 ,并以TCRα链C区的基因片断作为内参对取用情况作定量估计。发现首次抗原致敏后培养 2周的T细胞除了BV2 4、BV8和BV10未能检测出 ,其它BV基因都有不同程度的取用。然而 ,5个细胞系的TCRBV基因呈现十分有限的取用格局 ,其中两个CD4+ T细胞系都取用BV12和BV14;3个CD8+ T细胞系中都优势取用BV1,有两个还取用BV19。CD4+ T细胞系和CD8+ T细胞系之间TCRBV无交叉取用 ,提示两类细胞识别的抗原表位存在差异。进一步用变性凝胶扫描分析上述T细胞系取用TCRBV中的CDR3的多样性 ,发现未经抗原致敏的T细胞BV的CDR3结构为多峰型且呈正态分布 ,表明涉及多种结构不同的细胞克隆 ;而抗原特异性T细胞系CDR3除了一个CD8+ T细胞系BV1有两个主峰外其它无例外地都显示单峰或者仅一个主峰 ,这从另一个角度证明建系T细胞的单克隆性。     

卵清白蛋白特异性T细胞克隆的建立及T细胞受体使用情况分析

目的：体外建立可长期培养的抗原特异性T细胞系及克隆，并分析其T细胞受体的使用情况。方法：用卵清白蛋白（OVA）免疫BALB／c小鼠，取淋巴结细胞在体外用抗原原复刺激建立抗原特异性T细胞系，通过能限稀释法进行克隆，应用锚定PCR方法分析其特异的T细胞受体的应用。结果：建立了H－2^d限制的OVA特异性T细胞系，获得了3株特异性较高的T细胞克隆，T细胞系中TCR AV11S4和BV4S1应用频率最高，3株T细胞克隆的TCR均为AV5S2和BV2S1，这些T细胞所使用的TCRα链和β链在CDR3区有明显的共性，结论：获得了卵清白蛋白特异的T细胞系和克隆，且其T细胞受体的应用有一定的限制性。     

脐血中TCR Vβ亚家族T细胞的增殖特点

目的了解脐血T细胞体外诱导后TCR Vβ亚家族的分布和克隆性增殖特点. 方法利用T淋巴细胞液体培养法,在不同刺激源(rhIL-2、抗CD3单抗、PHA、AML-M5细胞和bcr-abl多肽)条件下诱导脐血T细胞扩增,并利用RT-PCR分别扩增培养前后脐血T细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3片段,了解各Vβ亚家族的表达情况.阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性. 结果脐血T细胞仅表达部分Vβ亚家族,但经体外培养后,可检测到绝大多数TCR Vβ亚家族T细胞,而经AML-M5细胞和bcr-abl多肽诱导后,TCR Vβ亚家族T细胞呈限制性表达和Vβ亚家族克隆性增殖. 结论脐血T细胞具备产生各TCR Vβ亚家族T细胞的潜能,在白血病相关抗原诱导下,具有限制性和克隆性增殖的能力.     

苯中毒工人外周血TCR Vβ克隆性T细胞利用特点

目的:分析苯中毒工人外周血中克隆性增殖T细胞及其CDR3序列的特点.方法:利用RT-PCR方法扩增11例苯中毒工人外周血单个核细胞中24个TCR Vβ基因的CDR3, 阳性产物进一步经荧光标记和基因扫描分析CDR3长度而了解其克隆性.结果:健康者外周血中可检测到24个Vβ亚家族, 11例苯中毒工人仅检测到2～10个Vβ亚家族.11例苯中毒工人均存在1个或多个Vβ亚家族T细胞出现寡克隆及寡克隆趋势.Vβ2、4、5、6和Vβ21的寡克隆T细胞出现频率较高.结论:苯中毒工人外周血TCR Vβ亚家族T细胞出现倾斜性分布和克隆性增殖, 这可能是机体苯中毒后所引起的特异性免疫反应.     

监测TCR CDR3漂移的免疫扫描谱型分析技术的建立与鉴定

外周血95％ T淋巴细胞的TCR由α（胚系基因中AV、AJ、AC重排）、β（胚系基因中的BV、BD、BJ、BC重排）两条多肽链组成，不同V（D）J重排后，由V基因末端、J基因前端和V-J（或V—D和D—J）连接时中间插入的核苷酸序列，分别组成了特异的TCRα和8的CDR3基因谱型的多样性。一种CDR3序列代表一个T细胞克隆，测定特定CDR3序列出现的频率可以反映特定T细胞克隆扩增的程度和功能状态。     

利用T细胞受体变异β基因谱系分析T细胞急性淋巴细胞白血病病人T细胞克隆性

目的:分析T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)病人的T细胞克隆性。方法:利用RT-PCR方法分析6例T-ALL和10例正常人外周血单个核细胞中24个T细胞受体变异β(TCR Vβ)基因的CDR3长度,PCR产物再进一步进行基因扫描和序列分析。结果:3例病人的某些TCR Vβ亚家族T细胞呈单克隆或寡克隆性增殖,主要为Vβ2、3、6、9、21和24。其它3例及正常人均表现为多克隆性增殖T细胞。结论:部分T-ALL来自于TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。该方法有助于临床上检测微小残留病变。     

利用T细胞受体变异β基因谱系分析T细胞急性淋巴细胞白血病病人T细胞克隆性

目的:分析T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)病人的T细胞克隆性.方法:利用RT-PCR方法分析6例T-ALL和10例正常人外周血单个核细胞中24个T细胞受体变异β(TCR Vβ)基因的CDR3长度,PCR产物再进一步进行基因扫描和序列分析.结果:3例病人的某些TCR Vβ亚家族T细胞呈单克隆或寡克隆性增殖,主要为Vβ2、3、6、9、21和24.其它3例及正常人均表现为多克隆性增殖T细胞.结论:部分T-ALL来自于TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞.该方法有助于临床上检测微小残留病变.     

T淋巴瘤EL-4细胞双受体表达研究

目的:检测T淋巴瘤EL-4细胞T细胞受体(T cell receptor,TCR)的表达情况,为进一步研究T细胞等位基因排斥机制奠定基础。方法:以小鼠脾细胞作为阳性对照,分别提取脾细胞和EL-4细胞mRNA,逆转录为cDNA,RT-PCR扩增24个TCR BV家族CDR3区,结合基因扫描(GeneScan)和基因测序技术,对有表达的TCR BV家族进行CDR3谱型和序列分析。结果:小鼠脾细胞24 BV家族均有表达,各TCR BV家族CDR3谱型均呈高斯分布(Gaussian distribution),表明24 BV家族均为多克隆性。EL-4细胞被同时检测到TCR BV10和BV12家族表达,CDR3谱型均呈单峰,两个家族的RT-PCR产物经测序鉴定证实确属TCR序列,且均为框内编码。结论:EL-4细胞存在两套框内重排的TCRβ链,表明其TCRβ链可能存在等位基因排斥"缺陷"现象。本研究为探索T细胞等位基因排斥机制奠定了基础。     

AML-M1相关TCR Vβ克隆性增殖T细胞的研究

目的：了解急性髓细胞白血病M1亚型（AML－M1）患者外周血TCR Vβ亚家族T细胞的克隆性分布特点。方法：采用RT－PCR扩增9例M1患者外 周血的单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因，分析其TCR Vβ亚家族的利用情况。PCR产物进一步经基因扫描分析，了解其CDR3长度以判断T细胞的克隆性。结果：不同标本中可检测到2－5个Vβ亚家族T细胞，以Vβ2、Vβ3、Vβ17和Vβ19为常见，并在Vβ2、Vβ3、Vβ5、Vβ8、Vβ9和Vβ19中发现克隆性生长T细胞。结论：M1病人外周血TCR Vβ亚家族T细胞表达呈现明显的选择性和克隆性增殖情况，这可能与M1细胞相关抗原有关，且克隆性增殖Vβ亚家族分布以个体特异性为主。     

急性单核细胞白血病病人外周血TCR Vβ T细胞克隆性增殖特点

目的:了解急性单核细胞白血病(ANLL-M5亚型)病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法:利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ 24个亚家族基因的CDR3,了解病人各Vβ亚家族的利用情况。阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析产物的CDR3长度,了解T细胞克隆性。结果:9例病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞。基因扫描分析显示,8例病人外周血中的某些Vβ亚家族出现寡克隆性T细胞,Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中,2例分别存在Vβ7或Vβ9克隆性T细胞,2例除Vβ2外,还分别出现Vβ7或Vβ21的寡克隆T细胞。结论:结果提示M5病人外周血Vβ亚家族T细胞的倾斜性分布特点,并存在克隆性增殖的T细胞,这可能是机体T细胞受白血病细胞相关抗原的刺激作用而引起机体产生相应的特异性免疫反应,并以Vβ2的克隆性增殖T细胞为主,提供了明显的趋向性,它可能与M5细胞相关抗原有关。