PCR检测在真菌性角膜溃疡中的诊断价值

目的探讨聚合酶链反应(PCR)快速检测在真菌性角膜溃疡诊断中的价值。方法以源于医学条件致病性真菌18srRNA基因保守区的一对寡核苷酸序列为通用引物,对临床拟诊为真菌性角膜溃疡的36例标本进行PCR检测,并与培养方法进行对比。结果在400bp处出现DNA扩增带者为阳性。36份临床标本的真菌培养阳性率为58.3%,而经PCR扩增阳性率为86.1%,PCR扩增准确性为72.2%,敏感性为100.0%,特异性为33.3%。结论真菌通用引物进行PCR反应检测真菌性角膜溃疡速度快、阳性率高,有助于真菌性角膜溃疡的快速诊断。     

真菌性角膜溃疡的PCR检测

目的 探讨临床拟诊为真菌性角膜溃疡聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)快速检测的方法.方法 以源于医学条件致病性真菌18s rRNA基因保守区的一对寡核苷酸序列为通用引物,对临床拟诊为真菌性角膜溃疡的38例标本进行PCR检测,并与培养方法进行对比.结果 在687 bp处出现DNA扩增带者为阳性.38例临床标本的真菌培养阳性率为60.53%,而经PCR扩增阳性率为81.58%,明显高于真菌培养法(P＜0.05).结论 真菌通用引物进行PCR反应检测真菌性角膜溃疡速度快、阳性率高,有助于真菌性角膜溃疡的快速诊断.     

应用PCR技术快速诊断感染性角膜溃疡

目的探讨PCR技术快速诊断感染性角膜溃疡的临床应用。方法以源于医学条件致病性真菌18srRNA和细菌16srRNA基因保守区各自的一对寡核苷酸序列为通用引物，对临床拟诊为感染性角膜溃疡的标本进行PCR检测，并与培养方法进行对比。结果在310bp处出现DNA扩增带者为真菌感染；520bp处出现DNA扩增带者为细菌感染；310bp和520bp处同时出现DNA扩增带者为真菌和细菌混合感染。32例临床标本培养阳性率为59．38％，而经PCR扩增阳性率为78．13％。结论应用PCR技术检测感染性角膜溃疡速度快、阳性率高，有助于角膜溃疡的病原学快速诊断。     

通用引物PCR-SSCP技术分析16SrRNA基因特征快速鉴定细菌

目的探讨通用引物聚合酶链反应一单链构象多态性(PCR-SSCP)技术在细菌检测中的应用。方法选取9种常见的细菌，采用通用引物对细菌的16SrRNA基因进行PCR扩增，产物进行单链构象多态性分析，并以标准菌株为对照。结果一对引物扩增产物SSCF，图谱各细菌之间难以区别；两对引物扩增产物SSCP图谱条带数日、相对迁移率及条带之间的间距存在明显，可相互区别；3种细菌的标准菌株和临床菌株的SSCP图谱完全一致。结论采用针对16SrRNA的通用引物PCR-SSCP技术以标准菌株为对照可方便快捷地检测细菌。     

通用引物PCR-SSCP技术分析16Sr RNA基因特征快速鉴定细菌

目的探讨通用引物聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术在细菌检测中的应用.方法选取9种常见的细菌,采用通用引物对细菌的16SrRNA基因进行PCR扩增,产物进行单链构象多态性分析,并以标准菌株为对照.结果一对引物扩增产物SSCP图谱各细菌之间难以区别;两对引物扩增产物SSCP图谱条带数目、相对迁移率及条带之间的间距存在明显,可相互区别;3种细菌的标准菌株和临床菌株的SSCP图谱完全一致.结论采用针对16SrRNA的通用引物PCR-SSCP技术以标准菌株为对照可方便快捷地检测细菌.     

多重聚合酶链反应快速诊断感染性眼内炎的研究

目的：探讨多重聚合酶链反应（MPCR）快速诊断细菌性、真菌性眼内炎及混合感染的价值。方法：MPCR法检测常见致病性细菌和真菌菌株，并检测38例患者41只眼（双眼3例，单眼35例）眼内液标本，与细菌和真菌培养结果比较。结果：MPCR法5h即可检测出标本中微量细菌和真菌，41份标本MPCR检测阳性34份（82．9％），其中细菌阳性26份，真菌阳性6份，细菌和真菌均为阳性2份，MPCR阳性率明显高于细菌或真菌培养（X^2=9．60，P〈0．05）。结论：MPCR速度快、敏感性和特异性高，有助于细菌性和真菌性眼内炎的快速明确诊断。     

PCR方法检测实验动物皮肤病原真菌

目的对用于实验动物皮肤病原真菌检测的分子生物学方法即皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR（任意引物聚合酶链式反应）相结合技术的特异性及敏感性进行评价,并通过建立动物模型及实际的皮肤真菌检测来验证此方法的可行性。方法特异性测定：用皮肤病原真菌通用引物进行PCR,扩增大肠杆菌DNA、犬肝炎病毒DNA及小鼠肝癌H22细胞DNA。敏感性测定：以紫外分光光度法测定DNA质量浓度,根据测定值将DNA进行10倍系列质量浓度稀释,得到100 ng~10 fg的8个质量浓度,然后对其进行PCR扩增。建立实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。用皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR相结合技术检测从动物模型及河北省各地的实验动物单位采集的动物皮肤标本。结果用皮肤病原真菌通用引物扩增实验动物三种皮肤病原真菌标准菌株,均扩增出大小为440 bp的条带,而大肠杆菌、犬肝炎病毒、小鼠肝癌H22细胞均未扩增出条带。皮肤病原真菌通用引物PCR敏感性测定,模板DNA 100 ng~100 fg的7个系列浓度均扩增出了阳性条带,10 fg为阴性。建立了实验动物皮肤病原真菌感染的动物模型。对河北省各地的实验动物皮肤真菌检测过程中出现一例通用引物阳性标本。结论皮肤病原真菌通用引物（CHS1 1S,CHS1 1R）具有较强的特异性,敏感度为100 fg;将皮肤病原真菌通用引物PCR与AP-PCR技术相结合可用于检测实验动物皮肤病原真菌。     

PCR快速检测细菌16S rRNA基因的初步研究

目的：建立检测细菌16SrRNA基因的PCR方法。方法:以细菌16S rRNA基因为靶序列。利用计算机软件primer5．0，Bioedit设计2条引物-pml.,pm2并建立相应的PCR方法。采用该PCR方法扩增实验室保留菌株的16srRNA基因,以人类外周血白细胞基因组DNA、HBV—DNA阳性血清以及白色念珠菌为对照。检测该实验方法的特异性;采用倍比稀释的方法进行该实验方法的敏感性实验。结果：用引物pml，pm2对17个不同菌株进行PCR扩增。均得到371bp左右长度的DNA片段。特异性实验表明,此通用引物与人类基因组DNA、真菌及病毒无交叉反应。敏感性实验表明。用pml，pm2引物进行的PCR扩增可检测出20CFU／ml,结论：16S rRNA基因PCR检测方法具有特异、敏感、快速的特点。     

半巢式聚合酶链反应在浆膜腔细菌感染诊断中的初步应用

目的观察革兰分型半巢式聚合酶链反应(PCR)在浆膜腔细菌感染诊断中的应用价值。方法对30例浆膜腔积液标本,以细菌16SrRNA基因为靶序列,采用一对通用引物和一条革兰阴性菌特异性引物,以半巢式PCR方法进行检测,并同时作细菌培养。结果以通用引物对30例标本作第1次PCR,11例扩增出371bp长度的DNA片段,阳性率为36.7%;对阳性PCR产物再以革兰阴性菌特异性引物作第2次PCR,9例扩增出353bp的DNA片段即为革兰阴性菌。对此30例标本作细菌培养,阳性率为16.7%,低于PCR扩增法。5例标本细菌分离结果与半巢式PCR革兰分型结果相同。结论革兰分型半巢式PCR方法能够灵敏地检测细菌并作出革兰阴性、阳性分型,对于浆膜腔感染的早期诊断具有较好的应用价值。     

聚合酶链反应检测无菌性体液中真菌

目的：评价聚合酶链反应（PCR）直接检测无菌性体液中真菌结果可靠性。方法：采用真菌通用引物，通过PCR对96份临床无菌性体液扩增菌DNA，同时对这些标本进行细菌、真菌培养。结果：PCR诊断无菌性体液真菌感染与培养法完全一致，培养出细菌的标本PCR检测真菌PCR检测真菌DNA均阴性。结论：PCR直接检测无菌性体液中真菌敏感、特异、快速、准确，但不能代替培养法。     

深板层角膜移植术治疗角膜溃疡

目的探讨深板层角膜移植术治疗角膜溃疡的临床效果。方法采用甘油冷保存的角膜组织对22例（22眼）药物治疗无效的角膜溃疡行深角膜板层移植术。真菌性角膜溃疡16眼,病毒性角膜溃疡4眼,热烧伤引起的角膜溃疡2眼。其中角膜溃疡穿孔10眼,术中行双板层移植,前房注气。结果随访5～24个月,21眼角膜植片存活,溃疡治愈率95.45%,1眼术后原发病复发,2眼术后移植片血管化,19眼角膜半透明,视力提高。结论对药物治疗无效的角膜溃疡,及时应用甘油冷保存的角膜组织行深板层角膜移植术,可以控制炎症,恢复部分视力。     

碘酊烧灼联合氟康唑治疗真菌性角膜溃疡36例

目的 探讨碘酊烧灼联合氟康唑治疗真菌性角膜溃疡的疗效.方法 对角膜溃疡面进行清创,5%碘酊小病灶早期烧灼,或大病灶的中晚期烧灼,一般不超过三次.氟康唑结膜下注射,加频点眼,加强散瞳,素高捷眼膏涂患眼.重症患者加服消炎痛.结果 36例(36只眼)治疗9～30天,痊愈32例,有效2例,无效2例,总有效率94.44%.结论 碘酊烧灼联合氟康唑治疗真菌性角膜溃疡取得满意效果,值得推广.     

氟康唑联合二性霉素B治疗真菌性角膜溃疡临床分析

目的探讨氟康唑联合二性霉素B治疗真菌性角膜溃疡的临床效果。方法分析48例(48只眼)真菌性角膜溃疡患者采用氟康唑联合二性霉素B进行治疗的临床资料。结果 48例(48只眼)中,治愈40例(40只眼),好转5例(5只眼),无效3例(3只眼),治愈率为83.3%,有效率为93.75%。结论氟康唑联合二性霉素B是治疗真菌性角膜溃疡的有效药物,值得推广。     

角膜基质内注射脂质体性两性霉素B治疗真菌性角膜炎的初步临床观察

目的：观察角膜基质内注射脂质体性两性霉素B治疗真菌性角膜炎的临床效果。方法：选择我院诊断为真菌性角膜炎并常规抗真菌治疗2周无效的患者12例（12眼）。于病灶处角膜基质内注射两性霉素B脂质体10μg（0.05 ml）。术后继续使用局部、全身药物治疗,观察术前、术后角膜情况、前房反应以及晶状体情况。根据病情可于1周后重复注射。结果：6例患者1次注射后1周内病灶明显缩小,均于辅助局部药物治疗后1个月内病灶痊愈;其余6例患者1周后行2次注射,有3例患者病灶缩小,于辅助局部药物治疗后1个月内病灶痊愈,3例患者2次注射后病情仍发展,其中2例行板层角膜移植术,1例行穿透性角膜移植术,均有效控制感染。术后随访3~6个月,未发现角膜内皮损伤、虹膜萎缩及继发青光眼。结论：角膜基质内注射脂质体性两性霉素B可作为辅助手段治疗难治性真菌性角膜炎,有一定的临床效果,治疗安全,短期观察无明显并发症。     

那他霉素滴眼液联合伊曲康唑治疗真菌性角膜炎的疗效观察

目的：观察5％那他霉素滴眼液联合伊曲康唑治疗真菌性角膜炎的疗效。方法：对31例31眼真菌性角膜炎行5％那他霉素滴眼液点眼,并依据病情进行调整用药频次,联合伊曲康唑200mg每天1次口服,观察患者疗效。结果：治疗25—45d,26例治愈;2例好转;3例症状无明显改善,其中2例行结膜瓣遮盖,1例行角膜移植术。结论：那他霉素滴眼液联合伊曲康唑治疗真菌性角膜炎效果良好。     

清创术联合大扶康治疗真菌性角膜溃疡的护理探讨及疗效观察

目的：探讨清创术联合大扶康治疗真菌性角膜溃疡的护理要点,并对其疗效进行观察。方法：89例真菌性角膜溃疡的患者,行清创术联合0．5％大扶康结膜下注谢以及系统的护理措施取的良好的疗效。结果：84例(84眼)治愈,4例(4眼)无效,治愈率达到95．44％。结论：真菌性角膜溃疡通过清创术联合大扶康治疗及系统的护理,可缩短病情,取得较好的疗效。     

角膜移植治疗角膜穿孔45例

目的：评价穿透性角膜移植术对角膜穿孔的治疗价值。方法用穿透性角膜移植术治疗单疱病毒性角膜溃疡穿孔、细菌性和真菌性角膜溃疡穿孔及热或化学伤继发角膜穿孔等４５只眼,观察手术后的眼球保留;移植片生;术后视力等指标,结果４４只术眼（９７．８％）得到保留,手术后１年,单疱病毒性角膜溃疡穿孔的移植片透明为６５．５％,细菌性和真菌性角膜溃疡穿孔的移植片透明为３８．５％,热或化学伤角膜穿孔的移植片透明为３３．３％     

羊膜移植对兔前房药物浓度的影响

目的探讨羊膜移植兔真菌性角膜溃疡面后,用抗真菌药物滴眼在不同的时间段测定前房药物浓度的变化。方法制作家兔真菌性角膜溃疡的动物模型,实验组在模型成功后右眼溃疡面行羊膜移植,左眼为对照组未行羊膜移植,羊膜移植后24、72、120h以0.5%氟康唑滴眼液滴眼,分别取不同时间段的房水用反相高效液相色谱法（HPLC）进行定量测定药物浓度。结果房水中氟康唑液药物浓度在实验组羊膜移植120h后10min含量最高达（3.290±0.612）mg/L,与对照组（1.955±0.338）mg/L比较差异明显（P〈0.05）。结论真菌性角膜溃疡在羊膜移植后局部用药,前房药物浓度提高,而且药物浓度的峰值提前,羊膜移植可以用于真菌性角膜溃疡的辅助治疗。     

药物联合治疗真菌性角膜炎20例分析

目的: 探讨斯皮仁诺、那他霉素滴眼液、抗生素联合应用治疗真菌性角膜炎的效果,并与单纯使用抗真菌药物比较。方法: 8例轻度角膜炎单服斯皮仁诺。12例中、重度角膜炎使用斯皮仁诺、那他霉素滴眼液、抗生素联合治疗。结果: 20例真菌性角膜炎全部治愈,2例并发角膜溃疡穿孔行结膜瓣移植,均保住眼球。结论: 斯皮仁诺、那他霉素滴眼液、抗生素联合用药对真菌性角膜炎治疗效果好。