冰片和熊去氧胆酸对黄芩苷角膜透过性的影响

目的 研究冰片、熊去氧胆酸对黄芩苷离体角膜透过率的影响,探讨其在眼用制剂中的应用.方法 采用离体角膜渗透技术考察不同质量浓度的冰片、熊去氧胆酸对黄芩苷角膜透过率的影响.结果 0.2 mg/mL的冰片使黄芩苷表观渗透系数(Papp)增加了1.36倍,与对照组相比具有显著性差异(P＜0.05);0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的冰片使黄芩苷Papp分别增加了1.35、1.43、1.51、3.47倍,0.2、0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的熊去氧胆酸使黄芩苷Papp分别增加了1.19、2.25、1.24、0.35、0.68倍,与对照组相比均具有非常显著性差异(P＜0.01).结论 0.2、0.3、0.4、0.5、0.7 mg/mL的冰片、熊去氧胆酸能够显著增大黄芩苷的Papp,且对角膜无刺激性.     

HPLC法测定四倍体黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量

目的测定四倍体黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量并与二倍体进行比较,以扩大黄芩种质资源。方法采用高效液相色谱法。色谱柱:INERTSIL ODS-SP(4.6mm×150mm,5μm)柱;流动相:甲醇-水-磷酸(49:51:0.2);流速:1.0 mL/min,检测波长为280 nm。结果四倍体黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量由二倍体的12.83%、3.35%增为20.69%、6.23%,分别提高了61.26%和85.97%。结论本实验建立的方法简便、准确,可用于黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量测定;四倍体黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷的含量显著高于二倍体黄芩,可以做为开发四倍体黄芩的理论依据。     

HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量

目的考察4种不同规格并头黄芩的药用价值和黄芩苷提取条件。方法采用HPLC法测定不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量。结果4种不同规格并头黄芩中黄芩苷含量依次为12.89%、13.82%、11.75%和10.85%,汉黄芩苷含量依次为0.28%、0.22%、0.24%和0.27%;随提取溶剂中醇浓度的增加,黄芩苷提取率先增高后降低,碱性条件降低黄芩苷提取率。结论4种不同规格并头黄芩的黄芩苷和汉黄芩苷含量差异不大,且黄芩苷含量均高于《中华人民共和国药典》要求;提取条件为50%中性乙醇提取最佳。     

黄芩苷抗生物膜作用研究进展

随着抗生素耐药率的不断上升,加速了后抗生素时代的到来,生物膜的形成是细菌/真菌产生多药耐药的主要原因之一.黄芩苷是黄芩的主要活性成分,具有抗病毒、抗菌、抗过敏、抗肿瘤、保肝、利胆、免疫调节等多种药理作用,尤以抗真菌/细菌作用最为显著.大量研究表明黄芩苷可抑制生物膜的形成和发育,本文将近年来对黄芩苷抗生物膜作用及其作用机...     

黄芩苷的研究近况

根据国内有关文献，从黄芩苷的提取、化学成分、鉴别、含量测定及药理作用等方面的研究进行综述，为黄芩苷的进一步研究提供参考。     

黄芩茎叶中野黄芩苷与黄芩苷含量的反相高效液相色谱梯度洗脱法同时测定

目的 建立同时测定黄芩茎叶中野黄芩苷和黄芩苷含量的反相高效液相色谱( RP - HPLC)梯度洗脱法.方法 建立同时测定黄芩茎叶中野黄芩苷和黄芩苷含量的RP - HPLC梯度洗脱法.采用RP- HPLC法,Phenomenex Prodigy ODS3- C18色谱柱(4.60 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水-磷酸为流动相,梯度洗脱,检测波长为276 nm,柱温为30℃.结果 野黄芩苷和黄芩苷分别在下列范围内呈良好的线性关系:0.470 0～1.880 0 μg(r =0.9994),0.056 0～0.224 0 μg(r =0.999 6),平均回收率(n=5)分别为98.58％(RSD=1.89％),97.35％(RSD=1.66％).结论 初步建立的黄芩茎叶中野黄芩苷和黄芩苷含量测定方法能较全面地评价黄芩茎叶的质量,为科学评价和全面控制黄芩茎叶的质量提供了新方法.     

黄芩中黄芩苷浸取工艺优化

目的:优选黄芩中黄芩苷的浸取工艺。方法:采用正交设计试验,以黄芩苷浸取率为指标,对影响黄芩中黄芩苷浸取工艺的因素进行了考察,比较了乙醇回流法与水煎煮法、超声波法、半仿生法的黄芩苷浸取率。结果:在浸取温度为80℃,浸取时间为1 h,乙醇浓度为60%,搅拌速度为400 r/min时,黄芩苷的浸取率最高,达83.09%。同时,结果表明,乙醇回流法在黄芩苷的浸取中优于其它的方法。结论:醇提法浸取效率高,经济,浸取剂利于回收,适合工业化生产。     

HPLC法测定清肝散结颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素

目的对清肝散结颗粒(猫人参、石见穿、白花蛇舌草、半枝莲及黄芩等)中所含的黄酮类化学成分黄芩苷、汉黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素同时进行测定,建立制剂质量控制方法。方法采用高效液相色谱法,Waters Xterra Rp-C18色谱柱(3.0 mm×100 mm,3.5μm),流动相为乙腈(A)与0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱,体积流量0.4 mL/min,柱温20℃,紫外检测波长为275 nm,进样量5μL,运行时间60 min。结果 5个待测化合物与周围干扰峰达到基线分离,线性范围分别为黄芩苷4.604⁴60.4μg/mL(r=0.999 9);汉黄芩苷0.770 4460.4μg/mL(r=0.999 9);汉黄芩苷0.770 4⁷7.04μg/mL(r=0.999 6);野黄芩苷0.415 777.04μg/mL(r=0.999 6);野黄芩苷0.415 7⁴1.57μg/mL(r=0.999 8);黄芩素0.845 641.57μg/mL(r=0.999 8);黄芩素0.845 6⁸4.56μg/mL(r=0.999 9);汉黄芩素0.799 284.56μg/mL(r=0.999 9);汉黄芩素0.799 2⁷9.92μg/mL(r=0.999 7),日内/日间精密度均小于3%(n=3),平均回收率在97%79.92μg/mL(r=0.999 7),日内/日间精密度均小于3%(n=3),平均回收率在97%¹02%之间(n=6)。清肝散结颗粒中黄芩苷、汉黄芩苷、野黄芩苷、黄芩素及汉黄芩素的含有量分别为3.798、0.829 9、0.180 5、0.158 9、0.0726 mg/g。结论该法简便、快捷、结果准确、重复性好、实用性强,可用于清肝散结颗粒中的质量控制。     

超微粉碎对黄芩中黄芩苷溶出的影响

目的:研究超微粉碎对黄芩中黄芩苷溶出的影响。方法:用不同时间回流提取超微粉与普通粉,用HPLC法测定黄芩苷含量。结果:与普通粉相比,黄芩超微粉碎后黄芩苷的溶出量和溶出速率显著提高。结论:超微粉碎后植物细胞破壁率明显提高,黄芩苷溶出量及溶出速率明显提高。     

黄芩有效化学成分及抑菌作用的研究分析

目的观察水煮法及乙醇回流法提取黄芩有效成分的抑菌效果。方法采用水煮法及乙醇回流法提取黄芩有效成分然后分别制得两法提取黄芩有效成分结晶物,并对4种提取物对肠炎沙门氏菌体外抑菌活性进行比较。结果黄芩水煮法提取液的最低抑菌浓度范围在125～500mg/ml,乙醇回流法提取液的最低抑菌浓度范围在62.5～250mg/ml。水煮法提取黄芩结晶物对肠炎沙门氏菌的最低抑菌浓度为1.25～5.00mg/ml,乙醇回流法提取的黄芩结晶物对肠炎沙门氏菌的最低抑菌浓度为0.625～1.25mg/ml。结论乙醇回流法提取黄芩有效成分的抑菌效果较水煮法好。     

苦参总碱抗表皮葡萄球菌的作用机制研究

目的 考察苦参总碱对表皮葡萄球菌体外培养生物膜的抑制作用,观察苦参总碱是否会影响表皮葡萄球菌对乳酸和过氧化氢的耐受性,并探索其可能的作用机制。方法 体外培养表皮葡萄球菌产膜菌株,使用半定量黏附实验、结晶紫染色法及刚果红实验评估苦参总碱对表皮葡萄球菌生物膜的抑制作用。采用扫描电镜观测表皮金黄色葡萄球菌生物膜形成。苦参总碱处理后,检测表皮葡萄球菌对氧化胁迫的耐受力的变化,利用实时荧光定量PCR法检测氧化应激响应基因serp2195和gpxA-2表达水平变化。结果 结晶紫染色法显示5.0 mg/mL的苦参总碱对表皮葡萄球菌生物膜的形成具有显著的抑制作用（P<0.001）,且与刚果红实验结果保持一致。苦参总碱作用后表皮葡萄球菌对氧化胁迫耐受性明显减弱,对乳酸的敏感性增强;实时荧光定量PCR显示氧化应激响应基因serp2195和gpxA-2转录水平明显下降。结论 苦参总碱对表皮葡萄球菌生物膜形成具有显著抑制作用,减弱细菌对氧化胁迫耐受性,其作用机制可能与下调表皮葡萄球菌氧化应激响应基因serp2195和gpxA-2表达相关;同时苦参总碱可以减弱表皮葡萄球菌对乳酸耐受性。     

黄绵马酸BB联合红霉素抑制表皮葡萄球菌及其生物被膜的形成研究

目的 探讨黄绵马酸BB与红霉素联用对表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)抑菌活性和生物被膜形成的作用,为黄绵马酸BB开发成为一种新型的生物被膜抑制剂提供理论基础。方法 采用微量稀释法分别测定黄绵马酸BB与红霉素联用对11株SE的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),并采用微量棋盘稀释法测定联合用药的部分抑菌浓度指数(fractional inhibitory concentration index,FICI)与最低抑膜浓度(minimum biofilm inhibitory concentration,MBIC);采用时间-杀菌曲线法,评价联合用药对SE的动态杀菌作用;通过二甲氧唑黄[2.3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[carbonyl(phenylamino)]-2H-tetrazolium hydroxide,XTT]比色法、半定量黏附实验和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察,评价联合用药...     

穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜作用初探

目的:通过穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜抑制作用的研究,为表皮葡萄球菌生物被膜菌引起的相关感染提供新的治疗途径。方法:体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,以红霉素作为阳性对照药,利用XTT减低法评价穿心莲内酯对表皮葡萄球菌初始黏附及生物被膜内细菌代谢的影响,显微镜下观察该药对表皮葡萄球菌生物被膜的形态学影响,刚果红培养基法检测穿心莲内酯对PIA(polysacchatide interc-ellular adhesion,胞间多糖黏附素)形成的影响。结果:穿心莲内酯1 000,100,10 mg.L-1对表皮葡萄球菌的黏附均有抑制作用,质量浓度大于31.25 mg.L-1对生物被膜内细菌代谢有明显抑制作用,质量浓度为250 mg.L-1时对表皮葡萄球菌生物被膜的形态有显著影响,质量浓度为10 mg.L-1时对PIA的形成无影响。结论:穿心莲内酯对表皮葡萄球菌生物被膜的形成有显著抑制作用,但效果不及红霉素。     

连花清瘟胶囊抗金黄色葡萄球菌生物膜研究

目的: 观察连花清瘟胶囊对成熟金黄色葡萄球菌生物膜(Staphylococcus aureau biofilm,S.a BF)的抑制作用。 方法: 采用96孔板微量稀释法检测连花清瘟胶囊和青霉素最小杀菌浓度(MBC);用结晶紫(CV)和微生物活性(WST)检测法观察连花清瘟胶囊和青霉素抗S.a BF的作用;用扫描电子显微镜(SEM)和激光共聚焦显微镜(CLSM)观察药物作用后的S.a BF形态并测量厚度。 结果: 连花清瘟胶囊和青霉素对S.a的MBC分别为20 g·L^-1和2 mg·L^-1。与对照组比较,连花清瘟胶囊显著抑制S.a BF(P<0.05,P<0.01),青霉素差异不显著。SEM观察到空白对照组S.a BF较厚,细菌形态正常,密集叠加,大小一致;连花清瘟胶囊组S.a BF由散在菌落组成,大小不一致;青霉素组S.a BF较厚,细菌形态基本正常,密集叠加,大小一致,个别细菌塌陷萎缩;CLSM观察到空白对照组S.a BF以活菌为主体,其间散落死菌;连花清瘟胶囊组S.a BF有大量死菌,和活菌相互参杂;青霉素组S.a BF以活菌为主,部分死菌分布在S.a BF表层。与空白对照组比较,连花清瘟胶囊组S.a BF厚度显著降低(P<0.01),青霉素组差异不显著,连花清瘟胶囊组S.a BF厚度显著低于青霉素组(P<0.01)。 结论: 连花清瘟胶囊具有显著的抗S.a BF作用,抗S.a BF评估体系可应用于传统中药抗菌作用研究。     

玉米须和花青素联合抑制泌尿系感染的常见菌群生长

目的:大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和克雷伯菌是引起慢性泌尿系感染的主要菌群,本研究观察玉米须提取物和花青素溶液对其生长的协同抑菌作用。方法:以大肠埃希菌(1.6×106cfu/mL)、金黄色葡萄球菌(5.6×106cfu/mL)和克雷伯菌(1.8×106cfu/mL)为观察对象,向细菌培养液中分别加入玉米须提取物(0,35,70,140 g·L-1)、花青素(0.312,0.625,1.25 g·L-1)、玉米须提取物(70 g·L-1)和花青素(0.625 g·L-1)混合液,采用比浊法(600 nm)测定细菌6 h的生长情况,并计算其抑制率。结果:在6 h时玉米须提取物和花青素对3种细菌的生长抑制呈现出时间剂量依赖性曲线。在玉米须提取物(70 g·L-1)和花青素(0.625 g·L-1)培养细菌6 h时,单独成分对大肠埃希菌的抑菌率为(31.3±2.42)%和(21.6±1.89)%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为(25.3±2.85)%和(37.2±1.74)%,对克雷伯菌的抑菌率分别是(39.7±1.34)%和(15.3±3.67)%,而联合使用时对3种细菌的的抑菌率分别提高到(76.8±2.53)%,(80.1±1.74)%和(67.3±1.53)%。结论:玉米须提取物对克雷伯菌和大肠埃希菌抑制作用显著,花青素对金黄色葡萄球菌的抑制作用明显。联合使用既扩大了抗菌谱,又有协同抑制作用,能显著提高对3种致病菌的生长抑制。该组合可以用于慢性泌尿道的感染防治。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌天然药物研究进展

以抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)天然药物为对象,检索了近年来对其天然药物研究的相关文献,并进行归纳整理。来源于植物、动物、微生物的能有效抗MRSA的化合物,包括植物中的黄酮类、萜类、蒽醌类等,动物中的抗菌肽及毒素,以及部分微生物的代谢产物等。部分化合物可作为未来抗MRSA的候选药物。目前抗MRSA的天然药物研究已经成为该领域的研究热点之一,但是多数研究仅停留在对活性药物的筛选上,缺少对候选药物的毒理、药理等深入研究。     

亚抑菌浓度鱼腥草素钠及与红霉素联合对表皮葡萄球菌生物被膜的作用

目的:观察亚抑菌浓度(亚-MIC)的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌生物被膜的影响.方法:连续稀释法测定鱼腥草素钠和红霉素对表皮葡萄球菌的MIC;棋盘格法测定鱼腥草素钠和红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用;体外构建表皮葡萄球菌生物被膜,XTT递减法评价亚抑菌浓度的鱼腥草素钠及与红霉素联用对表皮葡萄球菌黏附及对生物被膜内细菌代谢的影响;扫描电镜观察亚抑菌浓度下2药单独及联合用药后对表皮葡萄球菌生物被膜形态的影响情况.结果:鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌的MIC分别为62.5,7.812 5 mg·L-1;1/8MIC鱼腥草素钠、1/2MIC红霉素联用对表皮葡萄球菌悬浮菌的作用为协同,亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素以及二者联用对表皮葡萄球菌生物被膜菌黏附和代谢均有抑制作用,对表皮葡萄球菌牛物被膜的形态有影响.结论:亚抑菌浓度的鱼腥草素钠、红霉素对表皮葡萄球菌牛物被膜有抑制作用;鱼腥草素钠和红霉素联合用药对表皮葡萄球菌悬浮菌和生物被膜的抑制具有协同作用,在对生物被膜菌代谢的抑制和对牛物被膜形态的影响方面效果尤为显著.     

枸杞多糖通过TLR4/Src通路促进巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌

目的 探究枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide,LBP）对巨噬细胞吞噬金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus的影响及其机制。方法 采用CCK-8法检测不同浓度的LBP对巨噬细胞活力的影响;利用Western blotting法检测LBP对巨噬细胞丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）和核因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）及Src激酶家族成员（Src family kinases,SFKs）中的Src蛋白表达水平的影响;运用庆大霉素保护实验和流式细胞术检测LBP对巨噬细胞吞噬S.aureus的影响,同时使用Toll样受体4（Toll-like receptor 4,TLR4）、MAPK、NF-κB和Src的抑制剂初步判断LBP的作用机制。结果 100～600 μg/mL的LBP对巨噬细胞无毒性,但能有效提高巨噬细胞的活力（P<0.01、0.001）,并且显著促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬作用。虽然LBP可促进巨噬细胞中MAPK信号通路相关蛋白、NF-κB以及Src的磷酸化水平（P<0.01、0.001）,但LBP诱导巨噬细胞吞噬S.aureus能力仅被TLR4抑制剂TAK242和Src激酶家族抑制剂AZD0530显著抑制（P<0.001）,而不受NF-κB、MAPK抑制剂的影响。结论 LBP能够活化巨噬细胞,并通过TLR4/Src信号通路促进巨噬细胞对S.aureus的吞噬。     

内生真菌链格孢菌醋酸乙酯提取物对金黄色葡萄球菌抑菌机制的研究

目的研究分离自药用植物白毛蛇Humata tyermanni的内生真菌链格孢菌发酵产物醋酸乙酯提取物(B06e)对金黄色葡萄球菌细胞膜完整性和通透性的影响。方法采用二倍稀释法测定B06e对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度(MIC);测定B06e作用前后金黄色葡萄球菌培养液电导率,206、280 nm处吸光度(A)值的变化并结合流式细胞术研究B06e作用前后细胞膜通透性的变化。利用扫描电子显微镜(SEM)及傅里叶红外变换光谱(FT-IR)研究B06e对细胞膜结构的影响。结果 B06e对金黄色葡萄球菌的MIC为50μg/m L。3×MIC处理组的电导率是对照组的1.06倍;经B06e处理后,反应液的A260和A280值均显著高于对照组;3×MIC处理组的β-半乳糖苷酶活性是对照组的9.43倍;流式细胞仪分析表明3×MIC处理组被碘化丙啶(PI)着染的阳性细胞比例是对照组的47.63倍;SEM和FT-IR分析结果显示,B06e处理后,菌体细胞结构发生了损伤。结论 B06e能增强金黄色葡萄球菌细胞膜的通透性,破坏细胞膜的完整性,造成外源物质的大量流入和细胞质的大量外泄,从而使得菌体细胞内渗透压和代谢调控紊乱,最终导致细菌丧失生长繁殖的能力。     

丁香挥发油联合喹诺酮类抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用研究

目的 探究丁香挥发油的耐药性和丁香挥发油联合喹诺酮类抗生素抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外活性,为后续丁香挥发油联合抗生素治疗MRSA感染提供科学依据。方法 采用微量稀释法分别测定丁香挥发油、4种喹诺酮类抗生素（莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC）;棋盘稀释法测定丁香挥发油与4种喹诺酮类抗生素联用的部分抑菌浓度（FIC）指数;生长曲线法分析丁香挥发油联合4种喹诺酮类抗生素对MRSA的抑制作用;通过耐药性诱导实验,分析丁香挥发油对MRSA标准株ATCC33591耐药诱导30代后的MIC变化,分析丁香挥发油的耐药性。结果 耐药性分析发现,MRSA临床分离株对莫西沙星的耐药率（88.57%）最高,其次为环丙沙星和左氧氟沙星（77.14%）,耐药率相对最低的为诺氟沙星（74.29%）。FIC指数分析显示,丁香挥发油分别与莫西沙星、左氧氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星联用呈现不同程度的相互作用,其中协同作用分别为42.86%、37.15%、34.28%、34.28%,相加作用分别为28.57%、25.71%、22.86%、42.86%,无关作用分别为28.57%、20.00%、42.86%、22.86%,与左氧氟沙星联合使用时17.14%实验菌株呈拮抗作用。生长曲线结果显示,丁香挥发油与喹诺酮类抗生素联用对MRSA有明显的协同抑制作用。诱导耐药实验结果显示,亚抑菌浓度的丁香挥发油连续诱导MRSA菌株30代后,MIC无变化;而相同条件下环丙沙星的MIC升高至原来的16倍,说明丁香挥发油不易产生耐药。结论 丁香挥发油不易产生耐药性;与喹诺酮类抗生素联用时呈现不同的作用,多数MRSA菌株呈协同和相加作用,可降低临床喹诺酮类抗生素抗MRSA感染的用量。