β-榄香烯抗肝癌的促凋亡机制研究

目的：研究中药莪术提取物β-榄香烯对人肝癌HepG2 细胞增殖抑制及诱导凋亡,以及小鼠肝癌H22 荷瘤小鼠凋亡相关蛋白表达的作用。方法:体外培养人肝癌HepG2 细胞,MTT 法检测β-榄香烯对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI 双染检测细胞凋亡。通过建立H22 小鼠肝癌荷瘤模型,观察β-榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用及凋亡相关蛋白的表达。结果：β-榄香烯对HepG2 细胞具有抑制增殖的作用,呈剂量和时间的依赖性;Annexin V-FITC/PI 法检测到早期凋亡细胞。不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,各药物浓度组Caspase-3 蛋白均上调（P<0.05）,P65 蛋白均下调。结论：β-榄香烯可有效抑制人肝癌HepG2 细胞的增殖,其抑制癌细胞增殖的途径是通过诱导细胞发生凋亡,并且与上调凋亡相关蛋白Caspase-3、下调NF-κB P65 相关。     

姜黄素通过调控微管系统干扰HepG2细胞周期研究

目的 研究姜黄素对人肝癌HcpG2细胞周期的影响及微管系统在其中的作用.方法 MTT法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析姜黄素对HepG2细胞周期分布的影响;激光共聚焦显微镜观察姜黄素对HepG2细胞微管结构变化的影响;Westem blotting检测姜黄素对微管蛋白α-tubulin表达的影响;在离体条件下,观察姜黄素对微管蛋白聚合和解聚活性的影响.结果 姜黄素对HepG2细胞增殖具有抑制作用且与时间和剂量相关;随着姜黄素浓度的升高,HepG2细胞阻滞于G2/M期的比例也逐渐增加;激光共聚焦显微镜观察可见姜黄素明显破坏细胞微管结构,改变细胞微管蛋白聚合状态的发生;Western blotting检测发现细胞内α-tubulin蛋白表达的减弱与试药浓度相关.姜黄素还可影响微管蛋白聚合和解聚活性.结论 姜黄素通过破坏HepG2细胞的微管结构及下调微管蛋白α-tubulin的表达,将HepG2细胞阻滞于G2/M期,从而抑制肝癌HepG2细胞的生长.     

β-榄香烯对肝癌细胞BNL 增殖及凋亡的影响

目的：研究β-榄香烯对小鼠肝癌细胞增殖及凋亡的影响。方法：用CCK-8 法检测β-榄香烯对肝癌BNL 1ME A.7R.1（BNL）细胞增殖的影响;用Annexin V FITC/PI 双染分别进行荧光显微镜观察和流式细胞检测β-榄香烯处理后肝癌BNL 细胞凋亡情况。结果：β-榄香烯对肝癌BNL 细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性,药物作用早期可诱导细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增,随着作用时间延长细胞坏死明显增多。结论：β-榄香烯可有效抑制肝癌细胞增殖;其抑制作用与促进细胞凋亡有关。     

3种中药制剂对Hep G2细胞增殖的抑制作用的实验研究

目的:探讨3种中药制剂肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯对Hep G2细胞增殖的抑制作用。方法:长满单层的对数生长期HepG2细胞,分别加入用DMEM完全培养基进行连续二倍稀释的中药复方肝复乐,以及黄芪注射液、β-榄香烯注射液,并设环磷酰胺药物对照与细胞空白对照,于37℃5%CO2分别培养48 h,采用MTT法测药物对Hep G2细胞的增殖、生长的抑制作用。结果:肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯对Hep G2细胞有明显的抑制作用,与空白对照组及环磷酰胺比较,差异均有统计学意义(P0.05);3种中药对Hep G2细胞增殖的半数抑制率(IC50)分别为27.0 mg/mL、1.30 mg/mL、4.03 mg/mL。结论:肝复乐、黄芪注射液、β-榄香烯具有抑制Hep G2细胞增殖的作用,可为临床应用继续进行机理探讨。     

山绿茶中Ilexgenin A对HepG2肿瘤细胞抑制作用的研究

目的:探讨3β,19α-二羟基乌苏-12-烯-24,28-二羧酸(IA)对肝癌细胞株HepG2细胞周期、凋亡的影响及其作用机制。方法:人肝癌细胞株HepG2以IA 20,40,60,80 g·L-1作用不同的时间后,分别使用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT),吖啶橙(AO)荧光染色法,免疫细胞化学SP法,流式细胞术检测HepG2细胞的增殖抑制情况,细胞周期和凋亡的形态学变化,以及细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax表达的变化。结果:IA对HepG2细胞增殖有抑制作用,其作用随着药物浓度和作用时间的增加而增强。IA作用24 h后HepG2细胞周期的主要特点是大量细胞累积于G1期,进入S期的细胞减少,IA能够诱导HepG2细胞凋亡,IA(40,60,80 g·L-1)经过24 h作用后,细胞凋亡率分别为7.89%,8.37%,9.93%,AO染色观察到大量凋亡细胞,凋亡细胞染色减弱、荧光较暗、呈均匀一致的圆状或固缩状,细胞内Bcl-2的表达随着药物浓度增加逐渐减少;Bax蛋白的表达随着药物浓度增加逐渐增加。结论:IA能够抑制HepG2细胞的增殖,并使细胞大量累积于G1期,进入S期的细胞减少,通过影响凋亡蛋白表达诱导细胞凋亡。     

薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及IL-8，CXCL-12，VEGF表达的影响

目的:体外实验观察不同剂量薄荷醇对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及白细胞介素-8(IL-8),趋化因子-12(CXCL-12)和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,阐释薄荷醇抗肝癌的作用及其相关机制。方法:设立薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)组以及空白组作用于肝癌HepG2细胞,利用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法和5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷(EDU)检测方法检测薄荷醇对HepG2细胞增殖的影响,利用迁移实验(Transwell)检测薄荷醇对HepG2细胞迁移能力的影响,利用实时荧光定量聚合酶链式反应检测薄荷醇处理HepG2细胞炎症和趋化因子IL-8,CXCL-12 mRNA表达水平,通过蛋白免疫印迹法(Western blot)检测薄荷醇处理对HepG2细胞中VEGF蛋白的表达水平。结果:与空白组比较,薄荷醇(25,50,100,200μmol·L-1)在体外对HepG2细胞增殖和迁移均有抑制作用。薄荷醇100μmol·L-1时抑制作用明显(P 0. 05);薄荷醇(50,100,200μmol·L-1)对HepG2细胞迁移能力有明显抑制作用(P 0. 05),呈剂量依赖性。与空白组比较,薄荷醇(100,200μmol·L-1)均能显著抑制HepG2细胞中的IL-8,CXCL-12 mRNA和VEGF蛋白的表达水平(P 0. 05),进一步证实薄荷醇通过抑制炎症趋化因子起到抗癌作用。结论:薄荷醇在体外对肝癌HepG2细胞增殖、迁移具有明显抑制作用,潜在机制可能与其抑制细胞IL-8,CXCL-12,VEGF的表达有关。此结论为薄荷醇抗肝癌作用的阐释提供了实验依据。     

β-榄香烯抑制人骨髓瘤细胞增殖

目的:研究从温郁金中提取的β-榄香烯对人骨髓瘤RPMI-8226细胞增殖、周期和凋亡的影响。方法:采用MTT法检测细胞增殖;AnnexinV/PI双标流式术检测细胞周期、细胞凋亡;Hoechst33342/PI双染荧光显微镜观察β-榄香烯处理后骨髓瘤RPMI-8226细胞形态学变化。结果:β-榄香烯对RPMI-8226骨髓瘤细胞生长具有显著抑制作用,呈浓度和时间依赖性。与对照组相比G0/G1细胞比例显著升高,而S、G2/M细胞比例降低。β-榄香烯作用48h可诱导骨髓瘤细胞凋亡,凋亡率随药物浓度而递增。结论:β-榄香烯可有效抑制人骨髓瘤细胞增殖;其抑制作用与细胞周期阻滞和细胞凋亡激活有关。     

甲状旁腺素对成骨样细胞增殖及β-微管蛋白的影响

为研究甲状旁腺素(PTH)对大鼠成骨肉瘤细胞UMRl06细胞增殖及β-微管蛋白表达的影响。采用流式细胞技术测定DNA合成的变化并进行细胞周期分析，用Northern blotting方法观察β-微管蛋白的表达量。运用间接免疫荧光技术及Western blotting方法观察微管聚合状态及微管蛋白的表达。结果显示，用PTH处理UMR106细胞12小时后，S期细胞比例明显增大，提示PTH具有促该细胞株增殖作用。同时β-微管蛋白的mRNA及蛋白质表达量增加，β-微管聚合加强。表明β-微管蛋白的合成及聚合与细胞增殖间可能存在着一定关系。     

华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶表达的影响

目的:探讨华蟾素注射液对人肝癌HepG-2细胞增殖及拓扑异构酶Ⅰ(Topo Ⅰ)和Ⅱ的影响.方法:实验分为对照组(不加药)与实验组(华蟾素注射液0.105,0.21,0.42 mg·L-1);采用四甲基偶氮唑蓝还原法(MTT)观察对HepG-2细胞增殖的影响;采用流式细胞术(AnnexinV/PI)双染色法检测对HepG-2细胞凋亡的影响;采用流式细胞术法检测对HepG-2细胞周期的影响;采用逆转录-多聚酶联反应(RT-PCR)法检测对肝癌HepG-2细胞Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA水平表达的影响;采用蛋白免疫印迹法(Western-blot法)观察对HepG-2细胞中Topo Ⅰ,TopoⅡ蛋白表达的影响.结果:华蟾素注射液抑制HepG-2细胞增殖(P＜0.05),诱导细胞凋亡(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性;阻滞HepG-2细胞于S期(P＜0.05),呈剂量依赖性;下调Topo Ⅰ,TopoⅡmRNA(P ＜0.05)及蛋白的表达(P＜0.05),呈剂量依赖性.结论:华蟾素注射液能够抑制人肝癌HepG-2细胞增殖,诱导癌细胞凋亡,下调Topo Ⅰ,TopoⅡ表达可能是其机制之一.     

β-榄香烯对结肠癌细胞耐长春新碱的影响

目的:观察β-榄香烯对结肠癌细胞(SW-480)耐长春新碱(vincristine,VCR)的影响。方法:体外传代培养SW-480细胞,采用CCK8法检测β-榄香烯和VCR对SW-480细胞增殖活力的影响;流式细胞仪检测β-榄香烯和VCR对SW-480细胞凋亡的影响;Western Blot方法分析β-榄香烯对细胞中WEE1蛋白表达的影响,并采用pc DFNA-WEE1质粒过表达技术对SW-480细胞中WEE1蛋白进行过表达。结果:β-榄香烯可以诱导VCR对结肠癌SW-480细胞增殖活力的抑制作用;β-榄香烯+VCR联合组SW-480细胞凋亡率为(35.12±6.39)%,高于VCR干预组的(22.66±5.37)%(P0.05);β-榄香烯呈剂量、时间依赖性地抑制SW-480细胞中WEE1激酶的表达(P0.05);pcDFNA-WEE1质粒转染能明显上调SW-480细胞中WEE1激酶表达,并且降低了β-榄香烯+VCR对结肠癌SW-480细胞增殖活力的抑制作用(P0.05)。结论:β-榄香烯通过抑制WEE1表达,增强VCR对结肠癌细胞化疗敏感性的能力,并促使结肠癌细胞凋亡。     

β-榄香烯衍生物(ET)诱导NB4细胞凋亡的机制研究

目的:于NB4细胞株中,对β-榄香烯衍生物ET(β-榄香烯13-色氨酸)进行抗肿瘤作用研究。方法:体外细胞培养,凋亡检测、流式细胞术和蛋白免疫印迹等技术进行机制研究。结果:ET在低于40μmol.L-1时可以抑制白血病细胞NB4生长并诱导凋亡;ET可以引起细胞内H2O2的蓄积并活化caspase-3;过氧化氢酶可以阻断ET引起的H2O2蓄积和凋亡。结论:ET主要通过HO的蓄积引起细胞凋亡。     

β-榄香烯体内外对人肺癌细胞株的作用及其机制

目的:系统研究β-榄香烯体内外抗肺癌药理学作用及其作用机制。方法:体外抗肿瘤实验采用MTT法,检测浓度12.5~200μmol·L-1的β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1,A549及人正常胚胎肺成纤维细胞MRC-5的细胞增殖抑制率;抗肿瘤机制研究采用Hoechst 33258染色,观察细胞凋亡时细胞核的形态学变化,流式细胞术FITC-Annexin V/碘化丙啶(PI)双标记染色法检测细胞凋亡率。体内以裸鼠移植瘤为模型,肿瘤生长抑制率为指标,检测β-榄香烯对荷瘤裸鼠肿瘤生长的抑制作用。结果:β-榄香烯作用48 h时SPC-A-1,A549的50%抑制浓度(IC50)分别为126.0,134.1μmol·L-1,但对人胚胎肺成纤维细胞MRC-5有促进增殖作用,表明β-榄香烯对肺癌细胞具有选择性抑制作用。β-榄香烯对人肺癌细胞株SPC-A-1增殖的抑制作用呈时间和浓度依赖性,干预24,48,72 h的IC50值分别为549.7,126.0,21.2μmol·L-1;Hoechst 33258染色后倒置荧光显微镜下观察可见β-榄香烯孵育后出现凋亡细胞核固缩,浓染,着色深而呈亮蓝色;流式细胞术检测结果显示,β-榄香烯可诱导SPC-A-1细胞出现不同程度的凋亡。给药剂量为45,135 mg·kg-1的β-榄香烯在体内对裸鼠移植性人肺癌SPC-A-1细胞的增殖抑制率分别为34.01%,49.57%。结论:β-榄香烯具有选择性抗肺癌作用,提示其在发挥抗肿瘤作用的同时其毒副作用小,而且该作用可能机制是通过诱导肺癌细胞凋亡实现的。     

β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响

目的探讨β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞A549肿瘤干性的影响。方法采用MTS法检测β-榄香烯联合吉非替尼对肺癌细胞活性的作用;Transwell检测细胞侵袭能力;细胞划痕检测细胞迁移能力;流式细胞检测细胞凋亡、细胞周期;Western blot检测上皮-间质转化相关标记分子(E-Cadherin、N-Cadherin、ZEB1、Vimentin)。结果榄香烯浓度在0～50μmol/L内对肺癌细胞(A549、H522、H1299、PC-9)活性无显著影响。与对照组比较,β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼(5μmol/L)能显著抑制A549细胞活性(P0.01);降低S期细胞比例(P0.05),但不影响A548细胞凋亡,抑制A549细胞的侵袭与转移(P0.05,P0.01),上调E-Cadherin蛋白表达,下调N-Cadherin、ZEB1、Vimentin蛋白表达(P0.01)。结论榄香烯(≥50μmol/L)能抑制肺癌细胞增殖,呈剂量依赖;β-榄香烯(40μg/mL)联合吉非替尼抑制肺癌细胞的侵袭、转移及上皮-间质转化(EMT)。     

β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡机制研究

目的:探讨β-谷甾醇诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其作用机制.方法:以MTT法检测细胞增殖活力,高内涵活细胞成像系统检测细胞周期变化、凋亡率、线粒体膜电位的变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9,Bcl-2,Bax,tBid,cytochrome c的表达.结果:β-谷甾醇剂量依赖性地抑制肝癌细胞HepG2的生长、降低线粒体膜电位并诱导其凋亡;上调细胞Bax及tBid表达,下调细胞Bcl-2表达;诱导Caspase-3,Caspase-8,Caspase-9等蛋白酶原表达逐渐降低而激活的大片段表达逐渐增加;胞浆中cytochrome c表达逐渐增加而线粒体中的cytochrome c表达逐渐减少.β-谷甾醇对正常肝细胞QSG7701的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影响.结论:β-谷甾醇对人肝癌HepG2细胞生长具有较强的抑制作用,并通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋亡.     

β-榄香烯阻断JAK2-STAT3信号通路促进紫杉醇对肺癌细胞增殖和凋亡作用研究

目的:研究分析讨论β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用,并探讨其可能的机制。方法:建立耐药细胞株A549/Taxol,MTT法测定β-榄香烯对A549/Taxol细胞株的抑制率及IC_(50);使用Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率;并通过Western Blot法检测JAK2、STAT3、p-STAT3、Bcl-2、Bax、Caspase3蛋白的表达水平,借以分析β-榄香烯对紫杉醇抑制肺癌细胞增殖、诱导凋亡的作用和机制。结果:药物干预48 h后,可见β-榄香烯对A549/Taxol肺癌细胞活性均显示出抑制作用,并且抑制作用表现出明显的剂量依赖性,对肺癌细胞抑制的IC_(50)水平为108.5μg/mL。研究中采用IC_(50)浓度108.5μg/mL榄香烯干预A549/Taxol肺癌细胞, 24 h后可见A549/Taxol肺癌细胞的凋亡水平显著增加(P0.05);与此同时,肺癌细胞JAK2、STAT3、p-STAT3和Bcl-2可见降低(P0.05),而Bax和Caspase3则见升高(P0.05)。结论:β-榄香烯可能通过抑制JAK2/STAT3信号通路,发挥拮抗肺癌细胞对紫杉醇的耐药性作用,抑制肿瘤细胞增殖,诱导凋亡。     

姜黄素抑制HepG2细胞HDAC1活性及促进P21WAF1/CIP1表达的研究

目的:研究姜黄素(curcumin,Cur)对HepG2细胞组蛋白去乙酰化酶HDAC1的作用及细胞周期依赖激酶抑制剂P21WAF1/CIP1表达的影响,探讨Cur抗肿瘤的作用机制.方法:培养人肝癌细胞株HepG2,用Cur在不同浓度(6.25,12.5,25,50,100 μmol·L-1)和不同时间(4,8,16,24,48 h)点处理细胞,提取细胞总蛋白和mRNA,Western blot蛋白质印迹技术检测HDAC1和P21WAF1/CIP1蛋白表达,RT-PCR技术检测P21WAF1/CIP1 mRNA的表达水平.结果:Cur对HepG2细胞的半数抑制率(IC50)为25 μmol·L-1.IC50浓度作用4 h,HDAC1表达开始降低,降低作用呈时间依赖性;12.5 μmol·L-1,24 h可引起HDAC1水平降低,但在50～100 μmol·L-1时HDAC1的降低未见明显差别.Cur作用8 h时可见到P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA均增加;作用效应呈明显时间和剂量依赖性.结论:Cur明显抑制HDAC1活性和表达,促进P21WAF1/CIP1蛋白和mRNA水平升高.抑制HDAC1活性和促进P21WAF1/CIP1增加可能是Cur抗肿瘤的机制之一.     

基于SIRT1/HO-1途径研究绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用机制

目的:探讨绿原酸诱导人肝癌细胞HepG2凋亡作用及机制。方法:采用噻唑蓝(MTT)法测定绿原酸对HepG2的生长抑制作用,倒置显微镜观察绿原酸对HepG2细胞作用后的形态改变,TUNEL实验和流式细胞术检测细胞凋亡情况,罗丹明123荧光染色实验观察线粒体膜电位的改变,免疫印迹实验探讨绿原酸的作用机制。结果:与空白组相比较,不同浓度绿原酸(1~10mmol/L)能够抑制HepG2肝癌细胞增殖并呈时间-浓度依赖性,绿原酸(1~10 mmol/L)作用24 h后能够显著降低SIRT1、HO-1、Bcl-2和NF-κB蛋白表达,同时上调p53和Bax蛋白表达。结论:绿原酸能够显著抑制HepG2肝癌细胞增殖并通过调控SIRT1/HO-1依赖的凋亡途径发挥作用。     

榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响

目的:探讨榄香烯注射液对鼻咽癌细胞株CNE1增殖和凋亡的影响.方法:分别用20,10,5,2.5,0g·L-1榄香烯注射液处理CNE1细胞12,24,48 h后,Prestoblue法检测细胞的增殖抑制率,光镜观察细胞形态变化,Hoeehst-PI双染、流式细胞仪检测细胞的凋亡.结果:榄香烯注射液对CNE1细胞的增殖有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,处理12,24,48 h的IC50值分别为(10.70±0.26),(7.06±0.11),(5.52±0.10) g·L-1;光镜下显示,给药后细胞大量凋亡,折光性下降;榄香烯注射液可诱导CNE1细胞凋亡.结论:榄香烯注射液能抑制CNE1细胞增殖并诱导其凋亡.     

黄芪甲苷、β-榄香烯对SGC7901胃癌细胞COX-2及PGE_2表达的影响

目的观察黄芪甲苷、β-榄香烯对人胃癌细胞中COX-2、VEGF和PGE2表达的影响。方法采用MTT试验观察黄芪甲苷、β-榄香烯对胃癌细胞的抑制作用,用RT-PCR以及Western blot方法研究加药后人胃癌细胞C0X-2基因及其蛋白表达的变化,用ELISA方法检测培养基中VEGF、PGE2的表达情况。结果黄芪甲苷、β-榄香烯能抑制人胃癌细胞生长,呈一定的量效特征;并能抑制人胃癌细胞COX-2、VEGF和PGE2的表达。结论黄芪甲苷、β-榄香烯抗肿瘤的机制可能是通过抑制COX-2,进而抑制其下游产物PGE2的表达及使VEGF表达下调,从而抑制肿瘤的生长。     

β-榄香烯对肝星状细胞GEF、GDIβ表达的影响

目的研究β-榄香烯对人肝星状细胞(LX-2)Rho信号通路因子GEF、GDIβ表达的影响。方法将对数生长的LX-2细胞培养24h,分别以质量浓度2.5 mg/L,5 mg/L,10 mg/L的β-榄香烯作用LX-2细胞48h后,采用荧光定量PCR和Western blot法分别检测Rho信号通路因子GEF、GDIβmRNA及其蛋白表达水平。结果与空白对照组相比,不同浓度的β-榄香烯作用于肝星状细胞,其GEF mRNA和蛋白水平明显降低,GDIβmRNA和蛋白水平明显升高,差异有统计学意义。结论β-榄香烯可以降低肝星状细胞GEF的表达,上调GDIβ的表达,从而干扰GEF/GDIβ-ROCK通路,发挥抗纤维化的作用。