猪脱细胞角膜基质组织结构特点与生物相容性研究

背景构建组织工程化角膜时,载体的选择十分重要。目前有多种载体可供选用,但脱细胞角膜基质是公认的较好载体。目的观察猪脱细胞角膜基质的组织结构特点,评价其与异种角膜基质和上皮细胞的生物相容性。方法取猪角膜组织进行组织块培养,经胰蛋白酶-EDTA酶消化角膜上皮、基质、内皮细胞,支架组织于-20℃冷冻干燥后灭菌保存。猪脱细胞角膜基质石蜡切片行常规苏木精一伊红染色,光学显微镜下观察组织的形态学特征;扫描电镜下观察其组织结构特点;并对其物理特性,如抗拉性、膨胀性、含水量和透明度进行评价。将猪脱细胞角膜基质移植到兔角膜基质层内,同时与体外培养的兔角膜上皮细胞共培养4周,分析其组织和细胞生物相容性。结果经酶消化处理后猪角膜组织中未见上皮、基质和内皮细胞,其胶原纤维直径大小、排列与正常角膜组织相同,抗拉性、膨胀性、含水量和透明度等物理特性与正常猪角膜相似。猪脱细胞角膜基质行异种兔角膜基质层间移植1周时可见轻度水肿,2周后水肿基本消退,4周时透明度较好。猪脱细胞角膜基质与兔角膜基质之间贴附良好,未见炎症反应及新生血管。兔角膜上皮细胞接种于猪脱细胞角膜基质上共培养4周后CK3表达阳性。猪脱细胞角膜基质脱水前与脱水2h、4h后及正常猪角膜基质间的抗拉性、膨胀性、含水量的差异均无统计学意义（P〉0．05）,但脱水2h、4h后及正常猪角膜基质的透明度明显好于脱水前,差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论猪脱细胞角膜基质组织结构与正常猪角膜相似,与兔角膜基质和上皮细胞具有良好的生物相容性。     

脱细胞猪角膜基质的生物相容性与组织工程化兔角膜上皮移植的研究

目的 探讨脱细胞猪角膜基质的生物相容性,评价组织工程化角膜上皮组织作供体的可行性,观察支架材料的细胞化情况和种子细胞的存活情况.方法 实验研究.采用完全随机化设计的方法,用Dispase-Triton-X-100处理猪角膜基质,脱去角膜细胞;以角膜基质囊袋内植入的方法,观察异种角膜基质植入后的生物相容性,A组:脱细胞猪角膜基质,B组:新鲜猪角膜基质,C组:空白对照组.以组织工程化雄性角膜上皮组织为供体,同种雌性为受体,作板层角膜移植,观察角膜的混浊、水肿、新生血管等情况;组织病理学和免疫组化方法检测支架材料的细胞化情况,Y染色体性别决定基因(SRY)-聚合酶链反应(PCR)方法追踪种子细胞的存活情况.结果 猪角膜基质植入兔角膜囊袋后,角膜逐渐恢复透明,排斥反应指数＜6,组织病理学观察角膜结构完整,胶原纤维平行排列,少许细胞长入脱细胞猪角膜基质边缘,各组免疫组化检测未见CIM+、CD8+T淋巴细胞浸润.组织工程化角膜上皮作异体板层角膜移植后,3～4 d上皮光滑,10～20 d变为透明;15 d时角膜上皮、基质、内皮完整,上皮细胞约4或5层结构,少许基质细胞长入支架,1个月时可见角膜上皮细胞约7或8层细胞,基质纤维排列规则,多量细胞长入脱细胞角膜基质.上皮细胞表达CK3,支架内新生细胞表达波形蛋白.SRY-PCR结果显示种子细胞可以在受体内长期存活.结论 脱细胞猪角膜基质生物相容性良好,组织工程化角膜上皮可作为板层角膜移植的供体,脱细胞猪角膜基质细胞化良好,种子细胞可以在受体内长期存活.     

脱细胞猪角膜基质作为植片的深板层角膜移植治疗感染性角膜溃疡的临床观察

目的 比较脱细胞猪角膜基质与新鲜角膜组织作为植片的深板层角膜移植手术治疗感染性角膜溃疡的临床疗效。设计 回顾性病例系列。研究对象 2015年11月~2016年9月在北京佑安医院就诊的10例病变深度未累及后弹力层的感染性角膜溃疡患者。方法 回顾性分析气泡辅助下的深板层角膜移植手术资料,其中使用脱细胞猪角膜基质材料和新鲜角膜组织材料治疗的患者各5例。比较两组患者术后1年最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。主要指标 术后1年患者的最佳矫正视力（LogMAR）、眼压、球镜度、角膜平均曲率、散光度、角膜内皮细胞数、角膜厚度、眼轴长度、角膜共聚焦显微镜表现、角膜透明度以及植片的生存情况。结果 在随访期间,两组所有植片均保持透明,植片生存率为100%。术后1年,脱细胞角膜基质组和新鲜角膜组的视力分别为0.53±0.21和0.33±0.06（P=0.184）,眼压分别为（8.00±2.00）mmHg和（10.33±0.58）mmHg（P=0.124）,球镜度分别为（-4.50±4.21）D和（-1.25±0.75）D（P=0.258）,角膜平均曲率分别为（47.59±5.40）D和（44.51±1.87）D（P=0.403）,散光度分别为（-5.52±1.97）D和（-5.14±1.66）D（P=0.812）,内皮细胞数分别为（1272.67±387.63）个/mm2和（1550.33±232.69）个/mm2（P=0.347）,角膜厚度分别为（439.33±67.86）μm和（534.00±14.42）μm（P=0.077）,眼轴长度分别为（23.53±0.91）mm和（23.55±1.56）mm（P=0.981）。角膜共聚焦显微镜显示,脱细胞猪角膜基质组的角膜上皮细胞可以完全覆盖植片,基底细胞和翼状细胞形态和密度与新鲜角膜组织接近,但在基底细胞下方可见高反光的沉着物,基质层细胞的密度明显低于新鲜角膜组织,并且在内皮细胞与深基质层之间仍可见脱细胞纤维排列。结论 脱细胞猪角膜基质具有良好的生物相容性,当缺乏新鲜角膜材料时,用于替代治疗感染性角膜溃疡可以取得满意的效果。     

板层角膜移植术手术方式及植片材料研究进展

板层角膜移植术常用于治疗角膜病变,可分为前板层角膜移植术、中间板层移植术和后板层角膜移植术。其中后板层角膜移植术是近年来发展较快的手术方式。板层角膜移植的供体也有多种类型,各有其特点,人工角膜和异种角膜的应用仍需要进一步的研究。     

角膜体外重建异种生物载体材料生物相容性研究

目的　研究异种 (猪 )角膜基质的生物相容性 ,评价其作为角膜体外重建载体的可行性。方法　将新鲜、脱水两种猪角膜基质分别植入新西兰白兔角膜层间 ,定期临床观察植片愈合情况 ,并于术后 2周、1、2、4、8个月取兔角膜进行组织学观察。结果　临床观察 :全部植片存活 ,12只术眼未见角膜水肿混浊、角膜新生血管、排斥反应发生 ,新鲜植片在 2个月左右已透明 ,脱水植片在 6个月后透明。组织学观察 :新鲜植片 4个月时与兔角膜基质相融愈合 ,脱水植片经角膜细胞再分布、胶原纤维改建重塑 ,于 8个月后与兔角膜基质相融愈合 ,2组植片愈合过程中未见有淋巴细胞浸润及新生血管生成。结论　异种 (猪 )角膜基质具有良好的生物相容性 ,是一种理想的角膜体外重建载体材料。     

自动板层角膜刀行板层角膜移植的超微结构观察

目的：研究自动板层角膜刀行同种异体板层角膜移植后角膜超微结构变化情况。方法：将34只大耳白兔随机分为三组进行实验。A组用自动板层角膜刀,B组用手工角膜刀,C组为正常对照组。结果：自动板层角膜刀行板层角膜移植术后,角膜修复过程较手工角膜刀缩短,角膜透明也得到了提高。结论：自动板层角膜刀可应用于板层角膜移植。     

利用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术治疗感染性角膜炎的临床研究

目的 评价利用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术治疗感染性角膜炎的安全性和有效性.方法 采用前瞻性系列病例观察研究方法,纳入了2018年5月～2019年4月本院收治的感染性角膜炎15例(15眼),使用猪角膜脱细胞基质行板层角膜移植手术.观察指标主要包括感染控制情况、角膜透明度、新生血管形成、最佳矫正视力(BCVA)及并...     

人工角膜孔隙性支架材料的研究

人工角膜存留的理想模式是与宿主眼达到一种“生物愈合”状态，这依赖于其周边支架的孔隙性结构。高分子材料具有良好的潜能。宿主角膜组织长入周边支架的速度与程度和孔隙性材料的孔隙率，纤维直径，物理，化学性质等密切相关，目前尚无一种周边材料能集所有优点地一体，使人工角膜能达到完全生物愈合的理想状态。     

兔角膜重度碱烧伤后异种猫前板层角膜移植重建角膜眼表

目的研究猫新鲜前板层角膜移植治疗兔右眼角膜重度碱烧伤的疗效。方法将16只5个月龄的健康雄性新西兰白兔右眼制作重度角膜碱烧伤模型,随机分成A、B两组,每组各8只兔,其中A组为猫(4只)→兔异种前板层角膜移植组,植片直径为11.0mm,植床直径为10.0mm;B组未行手术。A组兔术后及B组造模后用500g.L-1葡萄糖及复方氯霉素滴术眼直至处死,记录两组疗效指数,并分别于术后1个月、2个月、3个月取材进行术眼角膜病理学及扫描电镜检查。结果3个月内A组8只角膜碱烧伤兔经异种猫前板层角膜移植后,7只移植角膜保持透明,1只出现局限性角膜混浊和角膜新生血管;而B组未手术的8只兔中出现角膜白斑、新生血管4只,角膜溃疡、穿孔3只,角膜溶解穿孔1只,并且有4只发生睑球粘连等并发症。A、B两组治疗后1个月、2个月、3个月平均疗效指数差异均有统计学意义(均为P<0.05)。A组透明角膜中组织学及扫描电镜下的结构特征清晰;B组兔角膜中有明显的角膜水肿和炎性细胞浸润,组织学及扫描电镜下的结构特征显示细胞连接混乱、消失。B组扫描电镜还提示随着时间的延长,上皮细胞部分生长、增多,细胞连接差,角膜上皮排列紊乱;角膜内皮细胞数量明显减少或无,...     

全眼球冷冻保存角膜的板层角膜移植

全眼球液氮冷冻保存法是一种长期保存角膜材料的方法,在板层角膜移植中可收到与新鲜角膜相仿的临床效果。取全眼球液氮冷冻保存的角膜为３５例角膜病变患者实施了板层角膜移植术,术后随访１～３年,角膜透明率（包括半透明率）９７％,３４眼术后视力均有不同程度提高。同时介绍了全眼球液氮冷冻保存方法的操作技术     

Infectious keratitis after lamellar keratoplasty

Infectious keratitis after lamellar keratoplasty is a potentially devastating complication that may severely limit the visual and anatomical outcomes. The deep-seated location of the infiltrates, sequestration of the pathogenic microorganisms and limited penetration of the currently available antimicrobial agents often results in delayed diagnosis that may jeopardize the management in these cases. Fungal keratitis is more common as compared with bacterial or viral keratitis and classically presents as white interface infiltrates that may not be associated with significant inflammation. Confocal microscopy may help to establish a rapid diagnosis in such cases, and anterior segment optical coherence tomography may be used to determine the extent of infection and monitor its progression. Conservative measures such as topical antimicrobials and interface irrigation with antimicrobial agents may be done. Surgical intervention in the form of partial excision/removal of the graft in endothelial keratoplasty or a full-thickness keratoplasty is often required for the effective management of deep-seated infections. Timely diagnosis and intervention may result in complete resolution of infection in both anterior lamellar and endothelial keratoplasty. Infections after anterior lamellar keratoplasty have a fair prognosis, and a clear graft with functional visual acuity may be achieved in most cases. By contrast, infections after endothelial keratoplasty have a guarded prognosis, and the presence of concomitant endophthalmitis may further complicate the graft survival and visual outcomes.     

异种角膜脱细胞基质为供体进行角膜前板层移植的初步研究

目的探讨以异种猪角膜脱细胞基质为供体植片,分析兔角膜进行前板层移植后的生物相容性：设计实验研究。研究对象新西兰白兔。方法应用1％TritonX-100及冷冻干燥处理制备猪角膜脱细胞基质载体,切取1／3厚度前板层作为供体角膜植片,对兔眼角膜前板层切除后进行移植,同时以新鲜猪角膜板层为供体对兔进行前板层移植作对照。通过术后角膜透明度、组织结构观察,评价猪角膜脱细胞基质的生物相容性及植片转归的情况。主要指标角膜透明度和组织学HE染色。结果制备的猪角膜脱细胞基质植片作前板层移植到兔眼后,未见明显的新生血管、炎症反应、角膜坏死等排斥现象,观察期内植片较透明;脱细胞基质表面上皮化良好,植片基质板层与植床逐渐融合,植片内有宿主细胞迁入生长,板层结构与正常角膜相似。结论猪角膜脱细胞基质具有良好的生物相容性、安全性和低抗原性,有望成为角膜板层移植的供体材料。     

部分板层角膜移植联合层问羊膜移植治疗角膜穿孔

目的 探讨层间羊膜移植联合部分板层角膜移植治疗角膜溃疡穿孔的临床疗效。方法对4例角膜溃疡穿孔患者,行角膜溃疡板层切除、层间羊膜移植联合部分板层角膜移植术。术后利用共焦显微镜和裂隙灯显微镜进行观察,随访1～7个月。结果术后3例裸眼视力得到提高,1例裸眼视力下降,但所有病例的矫正视力都有提高。未见双前房、免疫排斥反应等并发症。结论该手术是一种有效的治疗周边角膜穿孔的方法。     

实验性全厚板层角膜移植术的免疫组织学研究

目的对全厚板层角膜移植术后不同时期免疫状态的改变进行观察,以探讨该术式的可行性。方法将２２只受体兔随机分为实验组和对照组,实验组单眼施行全厚板层角膜移植术,对照组单眼施行穿透性角膜移植术,依据不同的实验阶段采取标本,在光镜和电镜下观察,同时应用ＡＢＣ染色法标记纤维连接蛋白（ＦＮ）。结果采用秩和检验,２组排斥反应积分相比较,实验组小于对照组。ＦＮ测定显示对照组术后ＦＮ较多,颜色较深,实验组症状反应较轻,持续时间较短。结论本实验证明全厚板层角膜移植术是一种更为安全可靠的手术方式     

深板层角膜移植术治疗真菌性角膜溃疡

目的评价深板层角膜移植术治疗药物难以控制的真菌性角膜炎的手术时机及效果。方法临床确诊为真菌性角膜炎（病灶均非全层）86例（86眼）行深板层角膜移植术，观察术后复发率、角膜植片透明率及角膜植片免疫排斥反应等情况。结果86例中治愈80例，成功率为93．02％；随访观察6～24月，植片全部透明，矫正视力为0．2～0．6。6例复发，复发率为6．98％。结论深板层角膜移植术是一种对抗真菌药物治疗无效的真菌性角膜炎有效的术式，具有及时控制感染和复明的作用。     

前房气体介导下的深板层角膜移植术

目的 探讨前房气体介导下可重复切的深板层角膜移植术的临床疗效.方法 对41例(41只眼)行此改良的深板层角膜移植术.其中角膜炎反复发作所致混浊累及深层基质者22只眼、化学伤或热烧伤所致混浊累及深层基质者12只眼、完成期圆锥角膜4只眼、累及深层基质的角膜营养不良2只眼及角膜变性1只眼.术后以裂隙灯显微镜观察患眼角膜植片的转归、原眼表疾病的预后、角膜层间的透明度、新生血管的侵入、后弹力层破口的闭合、视力和眼内炎性反应的情况.结果 在41只患眼中,有31只眼完整的暴露了后弹力层,有6只眼的部分基质瘢痕与后弹力层不能完整分开;另4只眼在分离近中央部深层基质和后弹力层时,发生穿孔.术后有1只眼发生了严重的前房毒性反应.随访期内无其他严重并发症发生.结论 前房气体介导下手法分次切的深板层角膜移植术安全有效.     

大鼠生物活性组织工程角膜等效物穿透性移植后观察

目的观察组织工程角膜等效物（tissue-engineered corneal equivalent,TECE）大鼠穿透性角膜移植后大体及组织病理学特点。方法脱细胞猪角膜基质（corneal acellular matrix,CACM）接种7dSD大鼠原代角膜上皮细胞与基质细胞,气液面培养4～6d至材料透明后作为TECE组植片,单纯CACM作为对照组植片,施行穿透性角膜移植术。术后观察角膜新生血管、植片混浊度、角膜细胞修复情况,2周、4周、8周、16周取材进行HE检查、20周取材进行透射电镜检查。结果TECE组术后10d角膜荧光素钠染色（-）,对照组术后14d角膜荧光素钠染色（-）;TECE组新生血管出现时间（5.00±1.22）d晚于对照组（3.80±0.84）d,差异有显著统计学意义（P〈0.01）,2周时TECE组新生血管面积（15.47±7.01）mm^2少于对照组（62.75±29.22）mm^2,差异有显著统计学意义（P〈0.01）。拆线后2组角膜新生血管均大部分消退,植片逐渐透明;20周透射电镜检查提示2组均有新胶原形成,TECE组有神经纤维长入。结论以CACM为支架构建的组织工程角膜等效物可以抑制角膜新生血管形成,透明度高,支持自体角膜细胞与神经纤维长入。