大鼠急性心肌缺血再灌注的心肌细胞凋亡研究

目的　为证实急性心肌缺血再灌注过程中存在着不同程度的心肌细胞凋亡现象 ,初步研究心肌细胞凋亡与Bcl 2 /Bax蛋白表达的关系。　方法　透射电镜观察心肌细胞的超微结构变化 ,抽提心肌组织DNA琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL法原位标记凋亡的心肌细胞 ,免疫组织化学技术和图像分析技术检测心肌细胞内Bcl 2 /Bax蛋白表达。　结果　缺血及再灌注组电镜观察心肌细胞出现典型凋亡超微结构特征 ,TUNEL染色可见不同程度的心肌细胞凋亡阳性反应 ,DNA电泳显示在缺血再灌注 2h出现明显的DNA条纹图像 ,再灌注组较缺血组心肌细胞中Bcl 2表达明显降低 (P <0 0 5 ) ,而Bax表达显著增高 (P <0 0 1)。　结论　急性心肌缺血及再灌注能诱导不同程度的心肌细胞凋亡 ,Bcl 2 /Bax基因对心肌细胞凋亡的发生有着重要的调控作用     

颈动脉狭窄影响大鼠认知功能及海马神经元凋亡

目的:研究改善颈动脉狭窄对大鼠认知功能、海马神经元凋亡及bcl-2、Bax蛋白表达的影响.方法:采用SD大鼠制作颈动脉狭窄模型,2周后将颈动脉狭窄解除,4周后各组采用Morris水迷宫检测记忆能力、HE染色观察神经元形态学变化、TUNEL法观察海马神经元凋亡、免疫组织化学检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:对照组与假手术组比较,大鼠记忆能力明显下降(P<0.01),神经细胞凋亡率明显增高(P<0.01),Bcl-2和Bax免疫阳性细胞数增多(P<0.01),改善狭窄组较对照组记忆能力明显改善(P<0.01),神经细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05),Bcl-2免疫阳性细胞数明显增多(P<0.05),Bax免疫阳性细胞数明显减少(P<0.05).结论:改善颈动脉狭窄可提高大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制海马神经细胞凋亡,改善认知功能障碍.     

脱氧皮质酮诱导大鼠心肌细胞凋亡及阿利吉仑干预的影响

目的:探讨阿利吉仑对脱氧皮质酮诱导的大鼠心肌凋亡的影响及其相关机制.方法:将45只SD大鼠行右肾切除,术后予1%氯化钠饮水4周并随机分为3组:对照(A)组、脱氧皮质酮(B)组、脱氧皮质酮+阿利吉仑(C)组.大鼠心脏组织经TUNLE染色法测定心肌细胞的凋亡表达,免疫组化法观察Bax、Bcl-2及单核巨噬细胞抗原(ED-1)的表达.酶联免疫(enzyme-linkecl immunoabsorbent assay, ELISA)法检测大鼠血浆中脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)的水平.结果:与A比较,B组的凋亡指数(apoptosis index,AI)、心肌Bax的表达、血管周围的巨噬细胞浸润及血浆BNP水平明显增加(P<0.01),而Bcl-2的表达则明显减少(P<0.01);较B组相比,C组AI、心肌Bax的表达、血管周围的巨噬细胞浸润及血浆BNP水平明显降低(P<0.01),而Bcl-2的表达则明显升高(P<0.01).结论:阿利吉仑能减少心肌细胞的炎性细胞浸润、调节Bcl-2/Bax的表达,显著减少心肌凋亡、改善心功能.     

纳秒级陡脉冲可用于治疗裸鼠人恶性黑色素瘤

 摘要 目的:观察纳秒级陡脉冲(Nanosecond Pulsed Electric Fields, nsPEF)治疗裸鼠皮下人恶性黑色素瘤的效果及其机制。方法：建立裸鼠皮下人黑色素瘤模型,随机分为长期治疗组及对照组各10只,观察肿瘤生长、裸鼠存活率时间,和短期治疗组(=10;分2h、4d组及对照组(分别为4、6和6只),以HE染色检查细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳、TUNEL法分析细胞凋亡,Western blot法、免疫组织化学方法分析组织肿瘤Bax、Bcl-2的表达。两组均用电场峰值40kV/cm、脉冲宽度200ns、频率1Hz、脉冲次数1000个的nsPEF进行治疗。结果：长期治疗后即刻看到肿瘤区均变为灰白色,表面皮肤均没有出血现象,肿瘤质地变硬;随生存时间延长,肿瘤体积较对照组明显缩小(P<0.01);平均生存时间（天）较对照组（天）明显延长(P<0.01);短期治疗组,4d时坏死区域增多;4d时琼脂糖凝胶电泳显示较对照组有明显“ladder”状分布,凋亡率明显高于对照组(P<0.01),较对照组相比Bax表达明显增高(P<0.01)、而Bcl-2表达明显降低(P<0.01)。结论：nsPEF对裸鼠皮下人黑色素瘤有明显的治疗效果,可能是通过调控Bax、Bcl-2 基因表达诱导细胞凋亡。     

去甲肾上腺素和缺血预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:研究去甲肾上腺素预处理(NE-P)和缺血预处理(IP)对大鼠缺血再灌注(I/R)心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:复制缺血再灌注损伤(IRI),采用末端标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡;应用免疫组化SABC法检测Bcl-2和Bax蛋白表达。结果:I/R组凋亡细胞较多,NE-P组及IP组凋亡细胞明显少于I/R组(P＜0.01)。在I/R组Bcl-2的表达少而Bax的表达较多,NE-P组及IP组Bcl-2的表达明显高于I/R组(P＜0.01),而Bax的表达明显低于I/R组(P＜0.01)。NE-P组与IP组各指标均无显著差异(P＞0.05)。结论:NE-P可抑制I/R诱发的心肌细胞凋亡,Bcl-2和Bax的蛋白表达在心肌凋亡的发生中起重要作用。NE-P与IP两者对心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响的作用相近。     

葛根素预处理对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响

目的观察葛根素(Pur)预处理对缺血再灌注(I／R)心肌细胞凋亡的干预作用，并探讨其作用的可能机理。方法将原代培养的新生大鼠心肌细胞随机分为(1)正常对照组及正常 Pur组；(2)模拟缺血组及缺血 Pur组；(3)模拟再灌注组及再灌注 Pur组。末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡，流式细胞仪检测细胞凋亡百分率，透射电镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征、免疫组织化学法检测Bcl-2／Bax蛋白表达，并检测胞内Ca^2 浓度。结果(1)心肌细胞I／R后电镜观察到典型的凋亡超微结构特征；TUNEL染色可见心肌细胞凋亡阳性反应；免疫组化检测发现Bcl-2蛋白表达下调，Bax蛋白表达上调；胞内明显Ca^2 超载。(2)葛根素可显著降低I／R心肌细胞内Ca^2 浓度、降低凋亡指数和凋亡百分率、上调Bcl-2蛋白表达、下调Bax蛋白表达。结论葛根素具有抗心肌细胞凋亡的作用，其机理可能与抑制胞内Ca^2 超载，干预Bcl-2／Bax蛋白表达有关。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对缺血再灌注心肌细胞凋亡的作用

目的：观察表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对缺血再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡的影响。 方法： 采用结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min，然后松开再灌注60 min的方法，复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。实验分假手术组、缺血再灌注组（IR）、EGCG不同剂量治疗组和丹参（SM）组。用原位缺口末端标记法（TUNEL）检测心肌凋亡细胞，用链酶亲和素-生物素-酶复合物（SABC）免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达。 结果： 在假手术组未发现凋亡细胞，IR组细胞凋亡明显，Bcl-2和Bax蛋白表达增加，但以Bax更明显，Bcl-2/Bax值显著低于假手术组（P<0.01）；EGCG组凋亡细胞明显少于IR组，Bcl-2表达显著大于而Bax表达显著少于IR组，Bcl-2/Bax值显著高于IR组（P<0.01）。 结论： EGCG能明显抑制IR引起的心肌细胞凋亡，其作用机制可能与下调Bax和上调Bcl-2蛋白表达，提高Bcl-2/Bax值有一定关系。     

鼠尾胶原在心肌细胞氧化损伤中的保护作用

背景:胶原蛋白具有抗氧化作用,但既往在实验室主要将鼠尾胶原用于促进细胞贴壁和支架构建,对于其抗氧化作用目前尚无相关研究。目的:探讨鼠尾胶原对过氧化氢导致离体心肌细胞氧化损伤的保护作用。方法:将原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机接种到铺有鼠尾胶原的培养皿(实验组)和普通培养皿(对照组)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2诱导。24 h后,以电子显微镜观察各组乳鼠心肌细胞的形态,应用MTT比色法检测心肌细胞存活率,TUNEL法检测心肌细胞凋亡形态,流式细胞技术检测心肌细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法检测丙二醛水平,Western-Blot检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果与结论:两组培养皿中,随着过氧化氢浓度的增高,均可见细胞凋亡状态明显加重,细胞存活率及细胞内过氧化氢活力明显下降,细胞凋亡率及细胞内丙二醛水平明显增高,Bcl-2/Bax比值显著降低,呈剂量依赖性。而在相同浓度过氧化氢诱导下,与对照组相比,实验组细胞凋亡状态明显减弱,细胞存活率、超氧化物歧化酶活力及Bcl-2/Bax比值增高,细胞凋亡率和丙二醛水平明显减低。表明鼠尾胶原对过氧化氢所致的心肌细胞氧化损伤具有保护作用,其机制可能与提高超氧化物歧化酶活力,减少丙二醛产生及提高Bcl-2的表达有关。     

凋亡相关蛋白在曲美他嗪干预的心力衰竭大鼠心肌细胞中的表达

目的:探讨曲美他嗪对心力衰竭心肌细胞凋亡情况及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:随机将雄性Wistar大鼠分为假手术组、心衰组和曲美他嗪组,除假手术组其他组大鼠均采用腹主动脉缩窄术建立心衰模型.观察各组大鼠的血流动力学参数,H-E染色观察大鼠心肌细胞病理形态结构,透射电镜观察心肌细胞超微结构,原位缺口末端标记(TUNEL)法检测心肌细胞凋亡指数(AI);免疫组织化学检测各组大鼠心肌细胞Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,曲美他嗪组大鼠心功能明显改善,AI明显降低,Bcl-2阳性表达显著增高,Bax阳性表达明显降低.结论:曲美他嗪可促进抑凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制促凋亡蛋白Bax的表达,该机制可能参与了曲美他嗪的心保护作用.     

粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

目的探讨粉防己碱对缺血-再灌注损伤大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。方法结扎大鼠左冠状动脉前降支（LAD）30min后松开,再灌注24h建立心肌缺血-再灌注损伤模型。将48只雄性SD大鼠随机分为：假手术组（Sham组）,缺血-再灌注损伤组（IRI组）,粉防己碱预处理组（Tet组）。再灌注结束后检测血清肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）和心肌梗死范围（IS/AAR,%）。应用原位末端标记法（TUNEL法）检测各组凋亡细胞,计算凋亡指数（AI）,应用免疫组化法检测心肌Bcl-2、Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,进行组间比较。结果与IRI组相比,Tet可明显降低CK-MB值（976.57±160.69）vs（1910.38±221.10）U/L,P〈0.01,减小心肌IS/AAR%,（23.28±4.38）%vs（43.76±6.30）%,P〈0.01。与IRI组比较,粉防己碱预处理可显著减少心肌细胞凋亡,AI显著降低（8.62±2.45%vs19.36±5.28%,P〈0.01）。粉防己碱预处理使Bcl-2表达增加,Bax表达下降,Bcl-2/Bax值显著升高（P〈0.01）。结论粉防己碱能明显抑制缺血-再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡,其作用机制可能与促进Bcl-2蛋白表达,减少Bax蛋白表达、升高Bcl-2/Bax比值有关。     

Cataractogenesis in neonatal Sprague-Dawley rats by N-methyl-N-nitrosourea

Cataract was induced by a single intraperitoneal injection of 100 mg/kg N-methyl-N-nitrosourea (MNU) to 0-, 5-, 10-, 15-, or 20-day-old male and female Sprague-Dawley rats. In day 0, 5, 10, and 15 MNU-treated rats, mature cataracts were constantly seen 7, 14, 14, and 30 days after dosing, respectively. In the day 20 MNU-treated rats, only subcapsular cataract was seen 30 days after dosing. Therefore, the rats exposed to MNU at an earlier age caused cataract more rapidly and severely. In the day 0 MNU-treated rats, 7-methyldeoxyguanosine DNA adduct was detected in the lens epithelial nuclei 12 hours after MNU dosing, followed by apoptosis, which was confirmed by morphology, by TUNEL signals, and by DNA ladder and peaked 3 days after MNU dosing. In the apoptosis cascade, upregulation of Bax, downregulation of Bcl-2, and increased CPP32 protease (caspase-3) activity were seen 12 hours after MNU dosing. Therefore, the pathogenesis of MNU-induced cataract was associated with DNA adduct formation in the lens epithelial cell nuclei leading to apoptosis by upregulation of Bax protein, downmodulation of Bcl-2 protein, and activation of caspase-3.     

叶酸拮抗同型半胱氨酸诱导的内皮细胞凋亡的作用机制

目的： 明确同型半胱氨酸（Hcy）对内皮细胞凋亡的影响以及叶酸的拮抗作用，阐明Bax和Bcl-2在同型半胱氨酸诱导内皮细胞凋亡及叶酸拮抗中的作用。方法: 用不同浓度的Hcy处理内皮细胞后，应用末端转移标记技术（TUNEL）以及Annexin V/PI染色加流式细胞术了解细胞凋亡状态，免疫组化方法检测Bax、Bcl-2的表达。结果: Hcy能促进细胞凋亡，叶酸具有拮抗作用。Hcy能促进细胞Bax、Bcl-2的表达，上调Bax/Bcl-2比值，叶酸能减少细胞表达Bax及Bcl-2，下调Bax/Bcl-2比值。结论: Bax、Bcl-2参与了Hcy诱导内皮细胞凋亡以及叶酸拮抗作用的过程。     

粒细胞集落刺激因子与血管性痴呆大鼠海马凋亡相关蛋白

背景：研究表明粒细胞集落刺激因子在保护神经元免受各种因素所致的神经元变性和死亡中发挥重要作用。 目的：观察粒细胞集落刺激因子对血管性痴呆大鼠海马组织神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。 方法：采用永久性双侧颈总动脉结扎法建立SD大鼠血管性痴呆模型,以未进行血管结扎的大鼠作为假手术组。造模成功后,治疗组大鼠每日皮下注射粒细胞集落刺激因子50 μg/kg,假手术组和模型组注射等量的生理盐水。分别于造模后7,14,28 d取大鼠海马组织用于检测。 结果与结论：Morris水迷宫结果显示,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P < 0.01),而治疗组各时间点大鼠逃避潜伏期较模型组缩短(P < 0.01);TUNEL及免疫组织化学结果显示,与模型组比较,治疗组各时间点大鼠海马TUNEL及Bax阳性细胞吸光度值明显减小(P < 0.01),Bcl-2阳性细胞吸光度值明显增加(P < 0.01)。说明粒细胞集落刺激因子可提高血管性痴呆大鼠海马Bcl-2蛋白的表达,抑制Bax蛋白的表达,减少神经细胞凋亡,改善大鼠的学习记忆功能。     

血糖波动对糖尿病大鼠肾小球内皮细胞和肾小管上皮细胞凋亡的影响

目的:观察血糖波动和持续高血糖对糖尿病大鼠肾小球血管内皮细胞和肾小管上皮细胞凋亡和Bax、Bcl-2表达的影响。方法:SD大鼠24只,均分为正常对照组、糖尿病持续高血糖组、糖尿病血糖波动组。采用链脲佐菌素（STZ）60 mg/kg腹腔注射诱发糖尿病，血糖波动组每天定时腹腔注射超短效胰岛素类似物诺和锐，并错时给予葡萄糖，造成1 d中血糖浓度大幅度波动模型。制模4周后，免疫组化法检测肾组织Bcl-2和Bax蛋白表达，原位缺口末端标记法（TUNEL）检测肾小球血管内皮细胞和肾小管上皮细胞凋亡。结果:糖尿病血糖波动组的肾脏凋亡细胞明显多于、肾小球Bcl-2蛋白表达少于、肾小管Bax表达明显多于糖尿病持续高血糖组。结论:糖尿病大鼠血糖明显波动可加速肾小管上皮细胞凋亡。     

低氧增强骨髓间充质干细胞对缺氧诱导心肌细胞凋亡的可能性

背景：骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后存活率低,而低氧有可能增强骨髓间充质干细胞的增殖,促进其存活。 目的：体外模拟心肌细胞缺血微环境,探索低氧预处理后,骨髓间充质干细胞对持续缺氧诱导的心肌细胞凋亡的保护作用。 方法：取第4代SD大鼠骨髓间充质干细胞用于制备条件培养液。取胚胎大鼠心肌细胞株,随机分成4组：对照组：心肌细胞正常培养组;模型组：心肌细胞单纯缺氧;骨髓间充质干细胞组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞条件培养液共缺氧;低氧组：心肌细胞与骨髓间充质干细胞低氧条件培养液共缺氧。MTT检测各组细胞活力变化,Annexin V-FITC双染标记心肌细胞凋亡,免疫组化检测各组Bax和Bcl-2蛋白的表达。 结果与结论：免疫组化显示,低氧组的Bcl-2表达较其他各组增强,而Bax的表达比模型组和骨髓间充质干细胞组减弱,Bcl-2/Bax比值最大。与对照组和骨髓间充质干细胞组相比,低氧组的细胞活力高(P < 0.05),凋亡率降低(P < 0.05)。提示低氧可能是通过增强旁分泌机制,从而对Bax和Bcl-2进行调节,对心肌细胞凋亡有保护效应。     

精索静脉曲张大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达和细胞凋亡的研究

目的：研究精索静脉曲张（VC）大鼠睾丸细胞线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达与细胞凋亡及其机制。 方法： 选取35只成年健康雄性 Wistar大鼠，随机分为VC组（VG, n=20）和假手术组（SOG, n=15）。术后10周，取双侧睾丸，采用火焰原子吸收法测定线粒体钙、采用原位缺口末端标记法(TUNEL)检测生殖细胞凋亡,免疫组化SABC法检测Bcl-2/Bax蛋白表达。 结果： VC组大鼠双侧睾丸生殖细胞线粒体钙的含量明显低于SOG组，生殖细胞凋亡显著增多，Bcl-2表达显著降低，Bax表达显著升高,但双侧睾丸生殖细胞凋亡率差异无显著。 结论： VC时，大鼠睾丸生殖细胞凋亡明显增加，提示VC时所致的男性不育可能是在某种凋亡诱发因素（高温、毒素返流、氧自由基等）作用下，线粒体钙、Bcl-2/Bax蛋白表达的变化直接对生殖细胞产生影响,导致男性不育。     

人硫氧还蛋白对肺缺血再灌注损伤时细胞凋亡及Bcl-2/Bax的影响

目的:探讨细胞凋亡与肺缺血再灌注损伤的关系以及人硫氧还蛋白对凋亡及其相关基因的影响。方法:健康清洁级Wistar大鼠84只,随机分为对照组、肺缺血再灌注1h、3h、5h组和人硫氧还蛋白干预1h、3h和5h组。复制肺缺血再灌注损伤模型。采用电子显微镜和原位缺口末端标记法观测肺组织细胞凋亡的变化和凋亡指数,免疫组化技术检测肺组织细胞Bcl-2、Bax及凋亡信号调节激酶1(ASK1)蛋白表达的变化。结果:肺缺血再灌注组肺组织细胞凋亡指数、ASK1、Bcl-2和Bax蛋白表达均显著高于对照组(均P0.01),超微结构呈严重损伤性改变。人硫氧还蛋白干预组ASK1、Bax的表达显著下降(均P0.01),Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax比值显著上调(P0.05或P0.01),肺组织细胞凋亡指数也显著低于缺血再灌注组(P0.01)。肺组织细胞凋亡指数分别与ASK1、Bax蛋白之间均呈显著正相关(分别r=0.775、r=0.814;均P0.01);与Bcl-2/Bax蛋白呈显著负相关关系(r=-0.275,P0.05)。结论:Bcl-2/Bax比值下调启动的肺组织细胞凋亡可能参与了肺缺血再灌注损伤的发生。人硫氧还蛋白可能通过下调ASK1的表达,提高Bcl-2/Bax的比值减少肺组织细胞凋亡,从而减轻肺缺血再灌注损伤。     

神经调节素对实验性痴呆大鼠的干预作用和可能机制

目的探讨神经调节素1β(NRG1β)对实验性老年痴呆大鼠神经元凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响。方法成年健康雄性Wistar大鼠30只,随机分为假手术组、模型组、治疗组各10只,经左侧脑室微量注射淀粉样蛋白β1-40(Aβ1-40)建立实验性痴呆模型,经右侧脑室注射NRG1β干预治疗,Y型电迷宫检测大鼠的认知功能,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测神经细胞凋亡,免疫组织化学法检测Bcl-2和Bax表达。结果造模成功后,模型组大鼠较对照组认知能力明显下降,TUNEL阳性细胞数明显增多,神经细胞Bcl-2和Bax蛋白表达增强(P0.05)。经NRG1β治疗后,治疗组大鼠较模型组认知能力显著改善,TUNEL阳性细胞显著减少,Bcl-2表达增强,Bax表达减弱(P0.05)。结论 NRG1β可能通过调节Bcl-2和Bax表达而抑制神经细胞凋亡,从而改善实验性痴呆大鼠学习记忆能力。