抗人层粘连蛋白Fab＇的制备

用ＤＥＡＥ纤维素ＤＥ－５２反相吸附纯化抗人层粘连蛋白（ＬＮ）ＩｇＧ，ＩｇＧ回收率达１１．６ｍｇ／ｍｌ血清。胃蛋白酶消化ＩｇＧ成Ｆ（ａｂ＇）２，再用１０ｍｍｏｌ／Ｌ２－巯基乙醇３７℃反应９０ｍｉｎ还原成Ｆａｂ＇，回收率约８１％，放免效价为１：３５００．测得纯化的ＩｇＧ、Ｆ（ａｂ＇）２及Ｆａｂ＇分子量分别为１５００００、９００００、４５０００，与理论值相近。放免检测中用Ｆａｂ＇取代抗血清可纠正对血清ＬＮ测定的误差，从而建立检测ＬＮ的准确、灵敏方法。     

人源抗NH-LBP Fab抗体的制备和初步鉴定

目的：构建人源抗脂多糖结合蛋白氨基端片段（NH-LBP）Fab抗体的原核表达载体, 并制备高稳定性Fab抗体.方法：用PCR方法, 从可溶性表达抗NH-LBP抗体的重组质粒pComb3H-Fab中扩增出VH链和VL链基因序列, 分别构建表达质粒pET-28a（＋）-VH和pET-28a（＋）-VL, 并于工程菌BL21（DE3）star中分别表达及TALON柱芯亲和纯化, 将抗体片段VH和VL共同复性, 通过二硫键形成Fab抗体, 再采用ELISA法初步鉴定其与NH-LBP的结合力.结果：扩增出VL链和VH基因片段长约为650 bp和700 bp, 经BL21star表达出相对分子质量（Mr）约为28　000和30　000的目的蛋白, 共同折叠后所获得Fab抗体与NH-LBP具有较高的结合力.结论：成功地制备抗NH-LBP Fab抗体, 为临床抗炎研究提供了条件.     

病毒性肝炎患者血清层粘连蛋白检测及其诊断价值的探讨

应用放射免疫方法测定了１６６例病毒性肝炎患者血清层粘连蛋白（ＬＮ）水平。结果从急性肝炎→慢性肝炎→肝硬化，血清ＬＮ逐步升高，慢性活动性肝炎及肝硬化患者分别为１４４．８４±３８．９０及１７１．１３±４０．４１μｇ／Ｌ，均较正常对照组１１６．６４±１９．８５μｇ／Ｌ显著升高。根据ＲＯＣ曲线分析，以１６０μｇ／Ｌ为临界值诊断肝硬化，灵敏度６９．９％，特异性８４．３％，准确性８１．１％。且血清ＬＮ水平与透     

血清层粘连蛋白放免检测法的建立及初步应用

层粘连蛋白(Laminin,LN)是细胞外间质中一种非胶原性糖蛋白,它具有许多生物活性与某些疾病的发生、发展有一定的关系.本室建立了血清 LN 水平检测的放免方法,经鉴定本法的准确性、精密度及健全性良好;对部分正常对照者及慢性肝病患者的检测结果表明,血清 LN 水平能反映肝纤维化的程度,更重要的是血清 IN 水平能反映门静脉高压的程度,是一般生化检查不能及的.     

一株人源性抗HBsAg抗体Fab片段的筛选及序列分析

一株人源性抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段的筛选及序列分析高辉高磊纪宗玲路凡陈南春陈苏民余宙耀张宜俊尤玉琴粟宽源（第四军医大学生物化学教研室，西安７１００３１空军广州医院全军肝病中心）乙型肝炎是我国常见的传染性疾病，目前尚无特效的治疗手段。研究发...     

抗人胎盘层粘连蛋白P1单克隆抗体的制备与初步应用

在纯化人胎盘层粘连蛋白Ｐ１段（简称Ｐ１）的基础上，应用杂交瘤技术获得两株抗Ｐ１的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ１５和１Ｂ５。两株ＭｃＡｂ均属ＩｇＧ１，同人纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原无交叉反应。纯化的腹水ＭｃＡｂ效价分别为６．４×１０－７（３Ａ１５）和２×１０－８（１Ｂ５），分别识别Ｐ１分子上的不同表位。利用ＭｃＡｈ３Ａ１５和１Ｂ５建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ，用于检测Ｐ１的下限为１０ｎｇ／ｍｌ，标准曲线在１０～５００ｎｇ／ｍｌ之间呈直线关系。对１００例健康献血员、１８例慢性肝炎患者和１２例肝硬化患者血清Ｐ１的检查结果分别为３３．８±１１．６、６７．３±３１．７和１０７．５±５８．４ｎｇ／ｍｌ。     

人源抗-HBs Fab优化表达条件的初步探讨

目的：利用含重组质粒pBAD/HBs Fab的Top10大肠杆菌，优化表达人源抗－HBs Fab。方法：选取含pBAD/HBs Fab载体的Top10大肠杆菌单个克隆分级培养，将制备的二级种子液接种于摇瓶和KLF2000发酵罐中，摇瓶培养表达采用不同的菌体诱导起始密度、诱导剂浓度、诱导表达温度和诱导表达时间。发酵罐培养表达采用不同的培养基和菌体诱导起始密度。诱导表达完毕后，纯化蛋白，比较表达量，并鉴定所获蛋白的抗原性和生物学活性。结果：用摇瓶优化表达后，Fab蛋白占菌体总蛋白的6％，为0.8%mg/g菌体，利用发酵培养可进一步增加菌量，使蛋白表达量达80mg/L。所获蛋白经鉴定显示有较好的生物学活性。结论：用重组质粒pBAD/HBsFab,Top10表达系统，可得到80mg/L的具有较好生物学活性的人源抗－HBs Fab蛋白，为批量生产作了准备。     

生物工程技术制备人源抗-HBs Fab 片段

目的：用生物工程技术制备人源性抗-HBsFab。方法：将从抗体文库中筛选出的人源抗-HBsFab基因克隆入pBAD/gⅢA载体，进而转化Tpo10大肠杆菌，对重组质粒菌发酵表达后，利用Ni-NTA-Agarose螯合层析柱纯化周质腔可溶性Fab蛋白。对所得包涵体依次变性，溶解，纯化后，利用透析进行复性，用Western blot检测Fab蛋白的特异性，Dot blot测定其生物学活性。结果：经Ni-NTA-Agarose柱纯化的周质腔可溶性Fab蛋白，有较好的生物学活性，并且总量达到80mg/L。对所获包涵体进行透析复性后，也可得到少量有活性的蛋白，但比例很小。结论；用pBAD/gⅢA-Top10表达系统表达人源抗-HBsFab片段，发酵培养后，经有效纯化可得到生物学活性较好的可溶性蛋白。为人源抗-HBsFab片段的大量制备提供了有效手段。     

层粘连蛋白受体研究进展

层粘连蛋白受体（ＬＮＲ）是细胞与基质、细胞与细胞间相互作用与调节的重要组成部分。目前已分离纯化的ＬＮＲ多达２０余种。不同组织细胞上表达的ＬＮＲ各不相同，而同一种细胞上可表达多种不同的ＬＮＲ。     

人胎盘层粘连蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的获得能特异性识别人层粘连蛋白（hLN）的单克隆抗体（McAb）。方法用纯化的人层粘连蛋白（hLN）作抗原免疫Balb/C小鼠,以细胞融合、酶联免疫吸附实验（ELISA）筛选和克隆化技术获得抗hLN的杂交瘤细胞株;用生物学方法鉴定杂交瘤细胞,用免疫学方法鉴定McAb的特异性。结果获得4株稳定分泌抗人LN的杂交瘤细胞株（2A1、3B5、2C4、4D1）,培养上清的ELISA效价分别为：1∶512、1∶1024、1∶512、1∶256;腹水效价分别为：1×10^6、1×10^7、1×10^6、1×10^5;采用ELISA相加法表明2A1、4D1与3B5、2C4识别的hLN上的抗原决定簇和识别的不同,4株单抗均属实IgG。结论成功建立了4株稳定分泌抗人LNMcAb的杂交瘤细胞株,它们分别识别hLN上2个不同的抗原位点,有望作为hLN定量检测的特异性抗体。     

层粘连蛋白的结构及功能

层粘连蛋白是基底膜基质的重要组成部分、粘附分子的配体，且有多种生理功能，本文着重阐述了层粘连蛋白的化学结构及其在炎症、肿瘤、免疫效应等过程中的作用，展望了（ＹＩＧＳＲ）多聚体临床的应用前景。     

基因工程技术制备人源抗HBsAg抗体Fab片段

将从抗体文库中筛选出的抗HBsAg Fab阳性克隆转化大肠肝杆菌 ,IPTG诱导表达 ,经Western blot鉴定 ,证实上清中含有可溶性抗HBsAg Fab片段 ,应用自制的羊抗人免疫球蛋白片段抗体 (anti Fab )与Gama bind交联制备的亲和层析柱纯化表达产物 ,所得纯化产物在SDS PAGE中形成单一条带 ,经Western blot证实具备良好抗原特异性 ,Dot blot证实具备良好抗原结合活性。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在正常绒毛膜组织中的表达

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白是细胞外基质的重要成分 ,在正常组织中有广泛分布。目前认为层粘连蛋白有 10条不同源的多肽链 ,构成 11种不同的蛋白分子。纤维粘连蛋白的结构具有多形性 ,主要由 ED-A、ED- B、 CS三个结构区不同的拼接方式所决定。层粘连蛋白和纤维粘连蛋白不仅在支持、连接和维持组织形态 ,调节细胞的粘附、生长、分化、增殖等方面起重要作用 ,而且与胚泡着床及胎盘的形成也有密切关系     

层粘连蛋白研究进展

层粘连蛋白是重要的细胞外基质成分之一，近年来研究发现至少有７种不同的蛋白分子，它们分别由三种不同源的８条多肽链所构成。其在体内通过与受体（如整合素类受体）结合发挥生物学功能。层粘连蛋白不仅在维持细胞、器官的形态和调节体内细胞的分化、迁移、增殖中发挥重要的作用，而且在胚胎发育中起着关键作用。其分子或结构链的异常增加或减少可能是某些疾病的发病基础。     

纤维粘连蛋白和层粘连蛋白与子宫内膜异位症发病关系的研究

目的探讨纤维粘连蛋白（Fibronectin,FN）和层粘连蛋白（Laminin,LN）与子宫内膜异位症的关系。方法采用免疫组化方法分析了子宫内膜异位症患者异位内膜35例、在位内膜20例及对照组子宫内膜24例的FN和LN的表达变化。结果1.与对照组相比子宫内膜异位症异位内膜组FN、LN的表达均明显下降,差异有显著性（均为P〈0.05）;2.在位内膜组FN、LN的表达同样也呈明显下降,有显著性差异（FN,P〈0.01;LN,P〈0.05）。提示细胞外基质中FN、LN的表达减少与子宫内膜异位症的发生、发展有关。     

层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在着床期小鼠子宫内膜中的表达

目的：为探讨层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在胚泡着床过程中的生物学作用。方法：本实验使用昆明雌性小鼠30只,分为未孕和早期妊娠共6组。通过免疫组织化学方法,检测了层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在着床期小鼠子宫内膜中的分布状况。结果：胚泡着床开始时（即受精后4－5天）,层粘连蛋白和纤维粘连蛋白均出现一个表达高峰,尔后纤维粘连蛋白迅速减少。受精后6－8天,细胞外基质中的层粘连蛋白逐渐增加。结论：层粘连蛋白和纤维粘连蛋白在胚泡着床微环境和植入调节中发挥重要作用。     

人源化抗 Siglec-9 抗体 Fab 片段的制备及鉴定

目的:构建人源化抗Siglec-9 抗体Fab 段原核表达质粒,表达、纯化此抗体以及特性分析,并初步探讨此抗体 的生物学功能。方法:利用聚合酶链式反应(PCR)分别获得抗体轻链和重链的可变区及恒定区,经重叠延伸PCR 连接,酶切 后与原核表达载体pETDUET-1 重组,转入表达感受态Escherichia coli BL21 中,通过蛋白纯化系统AKTA 和His-trap Lambda Fab 纯化。使用SDS-PAGE、ELISA 以及Western blot 鉴定和分析。采用实时荧光定量PCR 初步检测抗Siglec-9 抗体Fab 段对 炎性细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8 的mRNA 表达量的影响。结果:成功获得抗体轻链和重链,构建人源化抗Siglec-9 抗体 Fab 段原核表达系统,经SDS-PAGE、Western blot、ELISA 检测证实抗Siglec-9 抗体Fab 段与Siglec-9 抗原特异性结合。抗 Siglec-9 抗体Fab 段可抑制炎性细胞因子TNF鄄琢、IL-1、IL-6、IL-8 的mRNA 表达量。结论:人源化抗Siglec-9 抗体Fab 段进行了 原核系统表达、纯化和鉴定,并初步验证可抑制炎性细胞因子的mRNA 表达量,为进一步研究该抗体的生物学特性及应用奠 定基础。