巨噬细胞ABCA1对Ox—LDL诱导的炎症因子的调节及其意义

【目的】研究在氧化低密度脂蛋白（Ox—LDL）诱导作用下，ATP结合盒转运子A1（ABCA1）对巨噬细胞中细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、单核细胞化学趋向蛋白-1（MCP-1）mRNA和蛋白质及白介素-1β（IL-1β）蛋白质表达的影响，在细胞水平证实ABCA1对动脉粥样硬化的影响。【方法】用氟波酯（PMA）刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞，Ox—LDL（30μg／mL）刺激3、6、12、24h后，以荧光定量RT—PCR和Western蛋白印迹法及酶联免疫吸附法（ELISA）检测ABCA1、ICAM-1、MCP-1及IL-1β mRNA和蛋白质表达量；用反义寡核苷酸（100nmol／L）抑制ABCAl的表达，观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变。【结果】给予0x—LDL刺激后，巨噬细胞ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白及IL-1β蛋白质表达均增高；给予反义寡核苷酸转染后Ox-LDL刺激3、6h，上述指标的mRNA表达降低（P〈0．01），12、24h蛋白质表达降低（P〈0．01）。【结论】在巨噬细胞，ABCA1可增加Ox—LDL诱导的炎症因子表达，参与动脉粥样硬化的发生。     

巨噬细胞中ABCA1对炎症因子的调节及其意义

目的研究在8-溴-环磷酸腺苷（8-Br-cAMP）刺激下，巨噬细胞中三磷酸腺苷结合盒转运子（ABCA1）对细胞间黏附分子-l（ICAM-1）、单核细胞化学趋向蛋白-1（MCP-1）及白介素-1β（IL-1β）的调节作用，在细胞水平证实ABCAl在动脉粥样硬化发生巾的作用机制？方法用氟波酯（PMA）刺激THP-1细胞使之转变为巨噬细胞，8-Br-cAMP（0．5mmol／L）刺激3、6、12、24h后，以荧光定量RT-PCR和Western蛋白印迹法及ELISA法检测ABCAl、ICAM-1、MCP-1及IL-1BmRNA和蛋白质表达量；用反义寡核苷酸（100nmol／L）抑制ABCAl的表达，观察Ox-LDL刺激下上述指标的改变。结果予8-Br-cAMP刺激6、12h后，巨噬细胞ABCAl、ICAM-1、MCP-1mRNA和蛋白质水平及IL-1B蛋白质水平均增高：反义寡核甘酸转染巨噬细胞，8．Br—cAMP刺激后3、6h，ABCA1、ICAM-1、MCP．1mRNA的表达降低，刺激后12，24h，ABCA1、ICAM．1、MCP-1及IL-1B蛋白质的表达水平降低。结论在8-Br-cAMP刺激下，巨噬细胞ABCA1可增加炎症因子表达，参与动脉粥样硬化的发生。     

血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

目的 以人的血管内皮细胞ECV304为靶点,研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子A1(ABCA1)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响,阐明ABCA1基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法 复苏培养血管内皮细胞,无血清培养基培养静止12 h后,分别加入Ox-LDL (30 ng/ml)、8-Br-cAMP (0.5 mmol/L)刺激3、6、12、24 h,设未加刺激同时孵育24 h的细胞为阴性对照组,以RT-PCR和Western蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量。结果 血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高,ICAM-1的高峰时间在12 h,其余高峰时间在6 h;在8-Br-cAMP的刺激下,ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高,高峰时间均在6 h。结论 公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加,参与AS的形成,同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加,具有AS保护作用。cAMP不仅可增加ABCA1的表达,而且可增加ICAM-1、MCP-1表达。     

血管内皮细胞中ABCA1的表达及其在动脉粥样硬化发生中的意义

目的 以人的血管内皮细胞ECV304为靶点，研究Ox-LDL和8-Br-cAMP对ATP-结合盒转运子Al(ABCAl)、细胞间粘附因子-1(ICAM-1)及单核细胞趋化因子-1(MCP-1)基因mRNA和蛋白质表达的影响，阐明ABCAI基因在动脉粥样硬化(AS)形成中的可能机制。方法 复苏培养血管内皮细胞，无血清培养基培养静止12h后．分别加入Ox-LDL(30ng／m1)、8-Br-cAMP(0．5mmol／L)刺激3、6、12、24h，设未加刺激同时孵育24h的细胞为阴性对照组，以RT-PCR和Westem蛋白印迹法检测ABCA1、ICAM-1及MCP-1 mRNA和蛋白质表达量。结果 血管内皮细胞ECV304在给予Ox-LDL刺激后，ABCA1、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平均增高，ICAM-1的高峰时间在12h，其余高峰时间在6h；在8-Br-cAMP的刺激下，ABCAl、ICAM-1、MCP-1的mRNA和蛋白质水平也增高。高峰时间均在6h。结论 公认的致AS因素Ox-LDL可通过引起血管内皮细胞ECV304中炎性细胞因子ICAM-1、MCP-1 mRNA及蛋白质水平增加，参与AS的形成，同时抗AS基因ABCA1在Ox-LDL刺激下代偿增加，具有AS保护作用。cAMP不仅可增加ABCA1的表达，而且可增加ICAM-1、MCP-1表达。     

NADPH氧化酶在TGF-β1诱导大鼠小管上皮细胞 表达炎症因子中的作用

 【目的】 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对大鼠肾小管上皮细胞单核细胞趋化因子-1(MCP-1)及白细胞介素-6 (IL-6) 表达的影响,并探讨NADPH氧化酶在其中的作用?【方法】 以大鼠肾小管上皮细胞株(NRK-52E)为研究对象,采用TGF-β1(10 ng/mL)刺激0 h, 2 h, 4 h, 8 h, 12 h, 24 h分别收取RNA;刺激0 h, 12 h, 24 h,48 h, 72 h分别收取细胞上清液;部分实验中培养的细胞在刺激前用NADPH氧化酶抑制剂DPI (0.1, 1, 5, 10 μmol/L)预处理1 h, 然后含10 ng的TGF-β1无血清DMEM/F12培养液分别培养12 h (收集RNA)和24 h (收集细胞上清液)?所有实验重复3次?细胞内活性氧(ROS)的产生采用激光共聚焦显微镜观察?NADPH氧化酶p22phox?gp91phox?p47phox和 p67phox亚单位以及MCP-1和IL-6 mRNA的表达采用RT-PCR检测?细胞上清液中MCP-1的含量采用ELISA检测?【结果】 TGF-β1可显著上调NADPH氧化酶p67phox亚单位mRNA的表达, 8 h为对照的2.43倍 (P < 0.01),24 h达3.59倍(P < 0.01)?但对p22phox?gp91phox和p47phox亚单位mRNA表达无显著影响?TGF-β1可显著增加细胞内ROS产生, DPI预处理后ROS产生较TGF-β1刺激组降低了43.69% (P < 0.05)? TGF-β1可显著上调MCP-1和IL-6 mRNA及蛋白的表达?DPI预处理可明显逆转TGF-β1诱导的MCP-1和IL-6的上调表达?【结论】 TGF-β1可促使细胞ROS产生增加?TGF-β1可能通过NADPH氧化酶依赖的ROS介导了大鼠肾小管上皮细胞MCP-1及IL-6的上调表达?     

NF-κB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的探讨NF-κB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响.方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养,实验共分六组.阳离子脂质体转染法将NF-κB寡核苷酸导入血管平滑肌细胞,检测细胞凋亡、细胞内NF-κBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况.结果血管平滑肌细胞转染NF-κB反义或诱骗寡核苷酸后,细胞凋亡增强,凋亡时间延长.反义组NF-κBp65蛋白质表达较正义组降低(P<0.05);反义+诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗,但与诱骗组相比NF-κBp65的蛋白质表达降低(P<0.05).反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低(P<0.05).结论 NF-κB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达,抑制血管平滑肌细胞增殖,使细胞凋亡增强;NF-κB反义寡核苷酸及反义+诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-κB生成.     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0~10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0~48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化。结果TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应。2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰。MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰。2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰。结论TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0～10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0～48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化.结果 TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应.2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰.MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰.2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰.结论 TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌.因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一.     

氧化型低密度脂蛋白对单核巨噬细胞株U937表达Siglec-1蛋白及分泌细胞因子的影响

目的探讨氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)的致动脉粥样硬化(AS)作用是否通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1的表达发挥作用。方法制备ox-LDL并用不同浓度刺激人巨噬细胞株U937,48h后收集细胞和培养上清液,分别用流式细胞仪和RT-PCR检测不同浓度ox-LDL刺激后Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA的表达水平,并用ELISA试剂盒测定培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的浓度。结果与对照组相比,ox-LDL能刺激U937细胞表面Siglec-1蛋白和Siglec-1mRNA表达升高(P<0.01),培养上清液中MIP-1α、MCP-1和IL-8的表达升高(P<0.01),并呈浓度依赖性。结论ox-LDL的致AS作用可能部分是通过上调单核巨噬细胞表面Siglec-1蛋白表达而活化巨噬细胞,分泌细胞因子和趋化因子诱导更多巨噬细胞和淋巴细胞的活化参与粥样斑块中的炎症反应。     

NF-kB核酸对大鼠血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响

目的 探讨NF-kB核酸对增殖的血管平滑肌细胞炎症反应和凋亡的影响。方法大鼠胸主动脉平滑肌细胞传代培养，实验共分六组。阳离子脂质体转染法将NF-kB寡核苷酸导人血管平滑肌细胞，检测细胞凋亡、细胞内NF-kBp65基因表达以及ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白合成情况。结果血管平滑肌细胞转染NF-kB反义或诱骗寡核苷酸后．细胞凋亡增强，凋亡时间延长。反义组NF-kBp65蛋白质表达较正义组降低（P〈0．05）；反义＋诱骗联合干预并未优于反义组单独治疗，但与诱骗组相比NF-kBp65的蛋白质表达降低（P〈0．05）。反义组、诱骗组的ICAM-1、VCAM-1、MCP-1蛋白质表达较相应的对照正义组、诱骗对照组均降低（P〈0．05）。结论 NF-kB的反义和诱骗寡核苷酸均能抑制血管平滑肌细胞ICAM-1、VCAM-1、MCP-1的蛋白质表达，抑制血管平滑肌细胞增殖，使细胞凋亡增强；NF-kB反义寡核苷酸及反义＋诱骗寡核苷酸联合干预可减少NF-kB生成。     

抗流1号对发热患者预防甲型H1N1流感的临床分析

目的：研究抗流1号对197例发热患者甲型H1N1流感的预防。方法：体温T≥37.5℃的患者197例,根据患者有无接触甲型H1N1病例,分为密切接触组25例,一般接触组48例,非接触组124例。进行体格检查、查血常规和胸片,服用抗流1号中药制剂（红景天、大青叶、虎仗和贯众）,根据症状和病情给予中医辨证治疗或抗生素及抗病毒治疗,观察患者一般情况,比较治疗情况。结果：密切接触组中性粒细胞和淋巴细胞降低的患者明显多于非接触组（P〈0.01）;用抗病毒治疗的患者密切接触组与非接触组比较有显著差异（P〈0.01）,中医辨证治疗的患者密切接触组与非接触组比较有差异（P〈0.05）。结论：以扶正和清热解毒为主的抗流1号能有效的预防甲型H1N1的传播可以起到降低发病率、减轻病情,值得推广应用。     

CYP1A1、GSTM1和GSTT1基因多态性与甘肃省武威市食管癌易感性的关系

目的探讨甘肃省武威市食管癌组织中生物代谢酶Ⅰ相酶细胞色素（CYPIA1）和Ⅱ相酶谷胱甘肽转硫酶MI（GSTM1）、谷胱甘肽硫转移酶TI（GSTT1）基因多态性与食管癌的关系。方法采用PCR-RFLP、multiplex—PCR方法检测216例正常对照f血液）和189例食管癌组织中代谢酶基因CYPIA1和GSTM1、GSTT1的多态性。结果食管癌病例组与正常对照组中：CYP1A1基因MspⅠ酶切位点多态性的频率分别为74．1％和67．6％,差异无统计学意义;GSTM1纯合缺失基因型分别占58．7％和41．2％,差异有统计学意义（P〈0．05）,该基因型可能与食管癌易感性的增高有关（OR1．956）;GSTT1纯合缺失基因型分别占51．9％和43．5％,差异无统计学意义,该基因未明显增加对食管癌的易感性（OR1．169）;GSTM1、GSTT1联合缺失基因型在病例组和对照组中的频率分别为38．6％和19．6％,差异有统计学意义（P〈0．05）;同时携带CYPIA1MspⅠ多态突变基因型与GSTM1、GSTT1缺失基因型的个体患食管癌的风险增加（OR2．385,95％CI1．094-3．495）。结论单独的CYP1A1MspI多态突变基因型或者GSTT1缺失基因型与食管癌的易感性不相关;GSTM1纯合缺失基因型及其与GSTT1缺失基因型、CYP1A1MspⅠ多态突变基因型同时存在可增加个体患食管癌的风险,提示GSTM1纯合缺失基因型可能为食管癌发病的易感因素之一,且与其他缺陷基因型存在协同作用。     

结直肠癌组织中Tiam1、Fascin-1及HSPB1的表达及意义

目的探讨结直肠癌组织中Tiam1,Fascin-1及HSPB1的表达及意义。方法制作含100例结直肠癌组织的组织芯片,应用免疫组化SP法检测结直肠癌组织中Tiam1,Fascin-1及HSPB1的表达。结果组织芯片免疫组化染色后,形态可观测率为96%,并且背景清晰,对比鲜明。Tiam1表达阳性率为74%,Fascin-1表达阳性率为51%,HSPB1表达阳性率为68%,显著高于非肿瘤组织。Tiam1,Fascin-1及HSPB1表达与结直肠癌转移显著相关,伴发转移的结直肠癌组织Tiam1,Fascin-1及HSPB1阳性表达明显高于无转移者。通过相关性统计学分析,发现Tiam1与Fascin-1表达呈正相关(r=0.678,P<0.01),Tiam1与HSPB1表达呈正相关(r=0.650,P<0.01)。结论Tiam1,Fascin-1及HSPB1均与结直肠癌转移有关,Fascin-1和HSPB1的高表达可能与Tiam1的调控有关。     

RGS5和ATP1B1基因与原发性高血压的相关性研究

目的 探讨中国汉族人群中G蛋白信号调节因子5(RGS5)和ATP1B1基因功能区标签单核苷酸多态性(SNP)与原发性高血压的相关性及变异位点间的交互作用.方法 选择启动子、外显子和3'UTR区符合最小等位基因频率在中国北京汉族人群中>5%、R2 ≥0.80的SNP.对906例原发性高血压患者(EH组)进行SNP位点的基因分型,以性别和年龄与EH组匹配的894名血压正常者作为正常对照组.观察不同基因型和等位基因频率在EH组和对照组中的分布,并采用MDR软件分析各位点之间的交互作用.结果 最终3个标签SNP入选.EH组与对照组SNP位点基因型分布和等位基因频率比较差异无统计学意义(P>0.05);由2个基因SNP位点组成的单倍型,在EH组和对照组的分布比较差异也无统计学意义(P>0.05).交互作用分析显示,2个或3个位点模型比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 3个标签SNP与EH无明显相关性,并且可能不存在交互作用.     

丁酸钠上调白血病K562细胞CYP1A1和1B1基因的表达

目的 研究丁酸钠(NaB)在诱导白血病K562细胞分化过程中,对细胞色素CYP1A1/1B1基因转录的作用及作用机制.因为与肿瘤发生发展密切相关,细胞色素P450s(CYPs)已经成为最有潜力的抗肿瘤药物的靶标.对于白血病细胞中这些基因表达机制的研究将有助于揭示它们在造血过程以及血液肿瘤发生中的作用.方法 丁酸钠诱导K562细胞分化,RT-PCR检测CYP1A1/1B1转录水平的变化,染色质免疫沉淀(ChIP)分析乙酰化组蛋白H3和组蛋白乙酰转移酶p300与CYP1A1/1B1启动子的结合情况.结果 丁酸钠在诱导白血病K562细胞分化过程中,促进了组蛋白乙酰转移酶p300与启动子区域的结合、升高了CYP1A1/1B1基因启动子组蛋白H3乙酰化修饰水平、上调了CYP1A1/1B1基因的转录.结论 组蛋白乙酰化修饰和组蛋白乙酰转移酶p300参与了丁酸钠诱导的白血病K562细胞CYP1A1/1B1基因的转录.     

肺癌患者CYP1A1和GSTM1基因多态性检测

目的:探讨CYP1A1与GSTM1基因多态与支气管肺癌癌变的关系.方法:采用回顾性"病例-对照"方法和PCR-RFLP技术,对98例肺癌患者和136名体检健康者(对照组)进行CYP1A1与GSTM1基因多态性检测.结果:对照组和肺癌组CYP1A1 m1、GSTM1缺陷型等位基因频率分别为28%和43%、44%和61%,2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CYP1A1(w1/m1、CYP1A1(m1/m1、GSTM1(缺陷型)基因型患肺癌的危险度分别升高3.18倍、2.72倍和2.16倍(P均＜0.05).GSTM1(缺陷型)和CYP1A1(w1/m1或CYP1A1(m1/m1基因型携带者患肺癌的危险度为5.62倍(P＜0.01.吸烟使GSTM1缺陷型携带者和CYP1A1 m1携带者肺癌的患病危险度较单一基因作用危险度显著增加(P＜0.05).结论:CYP1A1 m1和GSTM1缺陷型基因均是肺癌的危险因素,2者存在交互作用,且均与吸烟有协同作用.     

Sp1和Egr-1对LCRG1基因启动子转录活性的调节研究

目的:目前LCRG1基因转录调控机制不清,现拟研究Sp1和Egr-1对人LCRG1基因启动子的转录调节. 方法:利用MatInspector软件分析LCRG1基因启动子区域内潜在的转录因子结合位点,Sp1、wtEgr-1、mtEgr-1真核表达质粒与LCRG1启动子重组质粒的共转染实验,分析其对LCRG1启动子活性的影响. 结果:生物信息学提示LCRG1基因启动子区域存在Sp1和Egr-1等位点,外源性突变型转录因子Egr-1能上调LCRG1基因启动子的活性.结论:突变型转录因子Egr-1可能参与该基因的表达调控.     

甲型H1N1流感合并肺炎患者的护理体会

目的：探讨甲型H1N1流感合并肺炎的护理体会。方法：着重加强消毒隔离、个人防护、心理护理及健康教育等护理措施,避免各种护理并发症及院内感染的发生,确保患者在短期内出院。结果：70例甲型H1N1流感合并肺炎患者症状、体征在短期内消失,胸部X线检查结果提示肺部渗出灶明显吸收,无一例患者发生院内感染及流感等其他并发症。结论：在合理的临床治疗基础上,通过以上护理措施,甲流合并肺炎患者病情可以得到很好的控制。