表阿霉素中有关物质的LC／ESI／MS分析

目的:检查并推证表阿霉素中的有关物质。方法:采用 LC/ESI/MS联用技术测定,在Agilent　1100 LC/MSD系统上完成,其中液相色谱条件为:柱ZorbaxSB4.6mm×75mm,3μm,柱温:35℃,流动相:A）0.5％乙酸;B）甲醇-乙腈（1:1）,含0.1％乙酸,线性梯度:0～25min,25％B～45％B。流速:1mL·min-1,柱后分流:1:1,检测:UV234nm。质谱条件:离子化方式ESI（ ）,扫描范围200～1200m/z,干燥气流速10L·min-1,温度350℃,雾化气压2.07×105Pa,毛细管电压 4 000 V,碎裂器电压 70 V、150 V。结果:从表阿霉素中分离出多个有关物质,其中 4个有关物质经质谱解析推导分别为表阿霉素二聚体、柔红霉素以及2个表阿霉素的同系物。结论:表阿霉素在生产过程中可生成多种结构类似物或聚合物,LC/ESI/MS作为一种高效分离与灵敏检测相结合的现代分析方法,为快速有效地检查和鉴定药品生产过程中可能产生的有关物质提供了有力的技术保证。     

LC／MS／MS法测定人血中硫普罗宁的浓度及药物动力学研究

目的建立LC／MS／MS法测定人血中硫普罗宁浓度的方法,并研究其在健康男性受试者体内的药物动力学。方法采用LC／MS／MS（ESI源）测定硫普罗宁的血浆浓度,计算药物动力学参数。结果硫普罗宁线性范围为25．0-5000ng·mL^-1,定量下限为25．0ng·mL^-1日内、日间精密度（RSD）均〈15％,准确度（RE）在15％以内。应用本法测得20名健康男性受试者口服200mg硫普罗宁胶囊后主要药代动力学参数为：tmax,为（4．20±1．01）h,t1／2为（5．61±4．42）h,Cmax为（4456±2447）ng·mL^-1,AU C0-24h为（20566±9902）ng·mL^-1,Ke为（0．173±0．094）h^-1。结论该法操作简便、快速、灵敏,可用于测定血浆中硫普罗宁浓度。     

LC-MS~n应用于生物样品检测中基质效应的评价

液质联用技术具有灵敏度高,特异性强的特点,已被广泛运用于生物样品的分析和检测中。然而基质效应问题往往被忽略,事实上基质效应的存在可能极大影响液质联用技术的准确度和精确度,降低实验数据的可靠性。文中通过查阅和比较美国FDA和欧洲EMEA相关指导原则,探讨基质效应存在的原因和消除基质效应的方法,提出基质效应的评价方法和评价指标,供生物样品分析工作者参考。     

HPLC／MS／MS法测定参麦注射液及人血浆中的人参皂苷Rg1

目的:为初步了解参麦注射液的药代动力学规律,建立高效液相色谱-串联质谱联用的分析方法,测定参麦注射液及人血浆中人参皂苷 Rg_1浓度。方法:色谱条件为 RESTEK PinnacleⅡ C_(18)柱(150mm×2.1mm,5μm),Phenomenex ODS Octade-cyl C_(18)保护柱(4mm×2.0mm);流动相:甲醇-水-乙腈(60∶20∶20);流速:250μL·min~(-1);柱温:20℃;质谱条件为气动辅助电喷雾离子源(ESI),检测方式为正离子多离子反应监测(MRM),用于定量分析的离子为 m/z 823.6→643.5;生物样品采用固相萃取处理。结果:参麦注射剂含量测定中人参皂苷 Rg_1的线性范围为5.25～525ng·mL~(-1),生物样品测定中人参皂苷 Rg_1的线性范围为1.02～1023ng·mL~(-1),精密度和准确度等均符合生物样品分析的要求。结论:该法专属、灵敏、准确,适用于参麦注射液和血浆中人参皂苷 Rg_1浓度的测定。     

LC—MS／MS法测定人血清中比卡鲁胺含量

目的：建立测定人血清中比卡鲁胺浓度的LC—MS／MS法。方法：血清样品采用乙腈沉淀蛋白处理，取上清液进样。以甲醇-水（70：30，v／v，含5mmol·L-1的甲酸铵，并用氨水调pH7．96）为流动相；在ZORBAXSB—C18（300mm×150mm，3．5μm）色谱柱分离；以戊巴比妥钠为内标。流速0．4mL·min-1柱温20℃；进样量5μL。采用电喷雾电离源（ESI），MRM负离子检测模式，选择性监测比卡鲁胺（m／z429／255），内标戊巴比妥钠（m／z225／182）。结果：比卡鲁胺的保留时间约为3．2min；线性范围为10～2000ng·mL-1批内和批间的RSD均小于7．0％；回收率均在90％以上。结论：该方法预处理快速简单，灵敏度高，专一性强，可用于比卡鲁胺的药动学研究及临床血药浓度监测工作。     

LC—MS／MS法测定人血清中茴三硫代谢产物的浓度

目的：建立测定体内茴三硫代谢产物对羟基苯基三硫酮的液相色谱-串连质谱（LC—MS／MS）方法。方法：血清样品中加入内标消炎痛，直接沉淀法处理样品。色谱柱为Gemini C18（50mm×2．0mm，5μm），流动相为甲醇-0．02％氨水（43：57，pH=8），流速为0．3mL·min^-1。采用HPLC—ESI—MS法，MRM扫描方式，用于定量分析的离子反应分别为m／z225．0→159．8（对羟基苯基三硫酮）和356．3→312（内标，消炎痛）。结果：对羟基苯基三硫酮的线性范围为2．5～500ng·mL^-1，最低定量浓度为2．5ng ·mL^-1,提取回收率大于95％，日内、日间RSD分别为3．6％～7．2％及6．5％～8．9％，准确度为92．2％～103％。结论：本方法样品预处理快速简便，检测灵敏、准确、专一，适用于进行茴三硫体内药动学的研究。     

LC—MS／MS法测定大鼠血浆中利巴韦林及其毒代动力学参数

目的：建立LC—MS／MS法,测定大鼠血浆中利巴韦林及其毒代动力学参数。方法：Lc条件：WatersAtlan—tis T3色谱柱（4．6mm×150mm,3μm）,柱温为40℃,流动相为0．1％甲酸水溶液-0．1％甲酸乙腈溶液（95：5）,流速为1000μL·min-1,进样量为2μL;Ms条件：电喷雾离子源,正离子电离模式,多反应离子监测的MS扫描方式。以10、40、160mg·kg-1·d-1剂量每日1次、连续28d给大鼠灌胃使用利巴韦林药液,测定其血药浓度和毒代动力学参数。结果：利巴韦林血药浓度线性范围为5～5000μg·L-1,最低定量限为5μg·L-1;日内和日间精密度良好,RSD均小于15％,准确度均在±15％以内。所测利巴韦林毒代动力学参数基本上与给药剂量成正相关,未见有明显药物蓄积现象,与毒性表现基本一致。结论：该法专属性强、灵敏度高、操作简便,适用于生物样本中利巴韦林的测定及毒代动力学研究。     

生物样品分析中两台仪器之间的交叉验证

目的：明确交叉验证在生物样品分析测试中的必要性,建立生物样品分析中两台分析测试仪器之间交叉验证的操作规程.方法：参阅国际上有关方法学确证的指导原则及文献,通过一定数量的外标样品和给药后样品在两台分析测试仪器上的分析结果,经过统计,判定是否符合交叉验证的可接受标准.结果：本实验中通过对28个样本量的样品分析,双机测试的结果符合标准,双机测试的数据可以合并使用.结论：生物样品分析中,需要双机测试结果数据合并的时候,需要进行交叉确证.     

生物样品定量分析方法指导原则（草案）

根据目前国际上对生物样品定量分析的相关指导原则,建议《中国药典》修订和扩充现有的的指导原则,以适应新药开发和仿制药开发的需求。内容包括：指导原则适用范围,生物分析方法确证,试验样品分析,配体结合分析,试验报告,以及生物分析相关定义。其中,对基质效应、已测样品再分析、稳定性考察等列出了详细的要求。     

应用LC-MS／MS 检测中药材中黄曲霉毒素残留量方法研究-

目的：建立LC—MS／MS对中药材中黄曲霉毒素残留量的检测方法。方法：中药材粗粉甲醇提取,经免疫亲和柱净化吸附,甲醇洗脱,以甲醇／乙腈-1．0mmol乙酸铵为流动相,黄曲霉毒素含量用液相色谱。串联三重四极杆质谱测定,用电喷雾正离子模式ESI,多反应（MRM）监测。结果：黄曲霉毒素G2、B2在0．03—3．2ng·ml^-1。范围内线性关系良好、黄曲霉毒素B1,G1在0．1～10ng·ml^-1“范围内线性关系良好。检测限0．1ng·ml^-1。定量限0．2ng·ml^-1。黄曲霉毒素回收率：86．6％～93．2％,RSD为7．1％-11．8％。结论：本法专属性强,灵敏、简便,准确,通过色谱（保留时间）及质谱特征碎片离子定性,能有效排除假阳性干扰。可作为中药中昔曲霪喜素藏留号测定的方法．     

LC／MS／MS测定头孢克肟在大鼠口腔组织的分布与药代动力学研究

目的测定头孢克肟大鼠尾静脉给药后在其口腔组织的分布并分析其药代动力学特征,为口腔临床用药提供参考依据。方法采用LC／MS／MS法测定头孢克肟给药后在设定时间点采集血液和牙龈、牙髓、咬肌和下颌骨4种口腔组织中的药物浓度。结果血液中的头孢克肟在4．0h左右即达到峰浓度;牙龈、牙髓中药物的分布与同时期血药浓度接近,牙龈内平均浓度约为血液中的1／3;牙髓略低于牙龈组织;咬肌和下颌骨峰浓度出现的时间比血液和牙龈组织的时间晚2h;咬肌中药物的含量均较低,仅为血药浓度的1／5;下颌骨中药物的含量最低,仅为血药浓度的1／6。结论头孢克肟均可分布在牙龈、牙髓、咬肌、下颌骨等口腔组织,浓度大小依次是牙龈、牙髓、咬肌和下颌骨为血浓度的1／6～1／3（0．42～0．84μg/mL）,基本可以抑制绝大多数口腔临床引起感染性疾病的菌群,适合联合用药应用于口腔感染性疾病。     

LC-MS／MS法测定全血中他克莫司浓度的方法学研究

目的：建立测定人全血中他克莫司液相色谱-串联质谱联用（LC-MS／MS）方法,并与微粒子免疫分析（MEIA）方法测定的结果进行了比较。方法：运用LC-MS／MS方法,血样经乙腈沉淀蛋白,上清液氮气吹干流动相复溶进样。色谱柱：Zorbax Extend—C18柱（150mm×4．6mm,5μm）;流动相：甲醇-乙腈-20mmol·L^-1醋酸胺溶液（80：15：5）;流速：0．4ml·min^-1。采用电喷雾离子化四极杆串联质谱,多反应检测方式测定样品的浓度。检测离子对分别为m／z821．7→m／z 768．4和m／z 821．7→m／z 786．5。结果：他克莫司在0．5～128ng·ml^-1浓度范围内,峰面积与浓度线性关系良好（r=0．9991,／2=5）,最低定量限为0．5ng·ml^-1,平均回收率为99．0％,日内精密度、日间精密度的RSD分别为3．38％和4．16％。MEIA分析采用标准IMX测定方法。两种方法比较,其标准差小于3．0,表明相关性好。结论：本方法具有良好的灵敏度、准确度、精确度及专属性,可用于他克莫司血药浓度监测和人体药药动力学研究。     

生物样品中尼莫地平的测定

尼莫地平(nimodpine,NMD)是第二代双氢吡啶类钙通道拮抗剂,能选择作用于脑血管,起扩张脑动脉增加脑部血流量的作用,主要用于治疗缺血性脑血管疾病.NMD是高活性的钙通道拮抗剂,所以在人体血液或其他体液中的治疗浓度较低,为纳克级或低于纳克级;NMD在人体内转化后的多种代谢产物可能干扰NMD的测定,因此,生物样品中NMD的测定对选择性、灵敏度都有较高要求.已经报道的方法有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)和放免法.利用GC、HPLC法测定NMD浓度已有诸多报道,Krol等首先使用GC法,之后较全面地比较了两种方法的优缺点,指出HPLC法选择性好,但灵敏度较低,进样量大,适用于一般的血浓监测;GC法灵敏度高,进样量小,但易受干扰.LC-GC法联用,即LC分离、GC定量的方法可使最低检测量低于纳克级,可用于脑脊液中     

克拉霉素片剂的人体药动学及生物等效性LC—MS—MS法研究

目的建立LC-MS-MS法测定人血浆中克拉霉素的浓度,研究克拉霉素片剂的人体药动学和生物等效性。方法 24名健康受试者单剂量交叉口服受试制剂和参比制剂500mg,采用LC-MS-MS法测定血浆中不同时间点克拉霉素的药物浓度,计算主要药代动力学参数及相对生物利用度,评价两种制剂的生物等效性。结果受试制剂和参比制剂的主要药动学参数分别为：T1/2（5.271±1.835）h和（5.032±1.257）h,Tmax为（2.24±1.41）h和（1.81±1.20）h,Cmax为（1831±539）ng/ml和（2085±582）ng/ml,AUC0-24为（14172±3125）ng·h/m l和（15169±3548）ng·h/m l,AUC0-inf为（15339±2989）ng·h/ml和（15730±3586）ng·h/ml,试验制剂克拉霉素相对生物利用度F为93.43%。结论两种克拉霉素片剂具有生物等效性。     

生物样品分析中基质效应和准确度的确定

在生物样品分析中,除了被分析药物本身高活性和高度不稳定性等因素造成的问题之外,生物样品中基质效应的存在也会使生物样品分析的复杂性和难度加大。目前人们通常采用加样回收的方法考察生物样品分析方法的准确度。如果分析方法准确度不合格,所得到的数据也是无意义的,但一些作者并没有充分认识到准确度的重要性。本文主要通过引用国际权威机构的分析方法验证指南以及国内最新版药物分析教科书中有关内容对准确度进行阐述。值得注意的是,在药代动力学研究中,血清中药物测定数据的准确性以及是否可用取决于回收率结果是否合乎要求,但关于药物在生物体内的分布问题上,即使采用加样回收方法也不一定能保证数据是准确的。     

LC／MS／MS方法研究克林霉素对人髓核组织的渗透性

目的建立测定人血清和髓核中克林霉素的液相色谱-串联质谱联用法,并试用于临床受试者静脉滴注克林霉素磷酸酯后克林霉素在髓核的分布情况。方法血清和髓核样品经乙腈沉淀蛋白后,以乙腈-1%甲酸(70∶30,v/v)为流动相,林可霉素为内标,采用Hypersil BDS C18柱分离,通过液相色谱串联质谱仪,以选择反应监测(SRM)方式进行检测。结果血清中克林霉素线性范围为500~20000 ng/ml,定量下限为500 ng/ml;髓核中克林霉素线性范围为20~400 ng/g,定量下限为20ng/g;9例临床受试者血清中克林霉素浓度为2674±1114 ng/ml,髓核中克林霉素浓度为51.2±39.5 ng/g。结论静脉滴注克林霉素磷酸酯后能部分渗透到药理作用靶点髓核。     

LC-MS／MS法测定大鼠脑组织中单胺类神经递质及代谢产物

目的：建立LC—MS／MS法测定大鼠脑组织中5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）、多巴胺（DA）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）、3-甲氧基-4-羟基苯乙二醇（MHPG）、3，4-双羟苯乙酸（DOPAC）、高香草酸（HVA）的含量。方法：采用Thermo C18色谱柱（4．6mm×250mm，5μm），柱温为室温；水（含0．05％的甲酸）-乙腈为流动相，流速为0．8mL·min^-1。ESI^＋多个反应监测（MRM）模式监测反应质荷比（m／z）：177．06→159．92（5-HT），170．00→152．00（NE），154．00→137．00（DA）；ESI^-多个反应监测（MRM）模式监测反应质荷比（m／z）：190．00→145．90（5-HIAA），263．00→165．00和263．00→150．00（MHPG），166．90→122．80（DOPAC），180．70→136．60（HVA）。结果：5-HT、NE和DA分别在4．45～4450ng·mL^-1、4．11～4110ng·mL^-1和4．10～4100ng·mL^-1浓度范围内线性良好（r≥0．999），最低检测浓度分别为4．45，4．11，4．10ng·mL^-1；5-HIAA、MHPG、DOPAC和HVA在12．5—1000ng·mL^-1浓度范围内线性良好（r≥0．998），最低检测浓度为12．5ng·mL^-1。日内和日间RSD均小于8．5％，重复性好。结论：本方法灵敏、快捷、准确、专一性强，可用于神经精神疾病神经递质的研究与分析。