LC-MS/MS法测定人血浆中拉莫三嗪浓度的不确定度评定

摘 要 目的：评定液质联用法(LC MS/MS)测定人血浆中拉莫三嗪(LTG)浓度的不确定度。方法: 分析LC-MS/MS法测定人血浆中LTG浓度过程中的不确定度来源,计算其大小并进行合成。结果: 人血浆中LTG低浓度(0.050 4 μg· mL^-1)和高浓度(1.27 μg· mL^-1)的扩展不确定度分别为0.005 18 μg· mL^-1和0.066 4 μg· mL^-1 (P = 95%,k = 2)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中LTG浓度的不确定度在低浓度时主要由蛋白沉淀回收率、基质效应和生物样品配制引入,在高浓度时主要由基质效应、生物样品配制和重复性引入。     

液-质联用法测定人血浆中卡马西平浓度的不确定度评定

目的:评定液-质联用法(LC-MS/MS)测定人血浆中卡马西平(CBZ)浓度的不确定度。方法:分析LC-MS/MS法测定人血浆中CBZ浓度的整个过程,确定不确定度的来源和大小,最后进行合成并扩展。结果:人血浆中低浓度(14.8 ng·mL^-1)和高浓度(717 ng·mL^-1)CBZ的扩展不确定度分别为0.92 ng·mL^-1和38.8 ng· mL^-1(P=95%,k=2)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中CBZ浓度的不确定度在低浓度时主要由重复性、生物样品配制、基质效应和回收率引入,在高浓度时主要由生物样品配制、基质效应和回收率引入。     

蛋白多肽类药物的药代动力学研究概况

目的：介绍国内外蛋白多肽类药物的药代动力学研究概况。方法：主要查阅了近年来CBM、Medline和Pubmed收录的蛋白多肽类药物药代动力学研究有关文献。结果：蛋白多肽类药物的药代动力学具有生物半衰期短、表观分布容积小、首关效应、生物利用度低等特性；其药代动力学研究的分析方法主要为免疫学分析法（RIA、IRMA、ELISA、FPIA）、同位素标记示踪法、理化分析技术（HPLC、HPCE、LC／MS、LC／MS／MS）和生物检定法。结论：蛋白多肽类药物的药代动力学研究具有特殊性，寻求灵敏度高、专属性强的分析方法是解决问题的关键，免疫学分析法是目前较为实用的蛋白多肽类药物药代动力学的分析方法。     

气相色谱-质谱联用法分析肠炎小鼠短链脂肪酸代谢

目的 建立气相色谱-质谱联用（GC/MS）的短链脂肪酸（SCFAs）分析方法，分析肠炎小鼠SCFAs代谢情况。方法 盐酸饱和氯化钠溶液酸化生物样本，醋酸乙酯提取SCFAs后衍生化，建立GC/MS方法进行生物样本中SCFAs测定；考察盐酸溶液提取和盐酸饱和氯化钠溶液提取SCFAs总离子流图谱；考察SCFAs混合物衍生化前后的稳定性，粪便、血清、小肠、结肠、肝脏组织中SCFAs测定方法的线性、精密度及准确度、提取回收率和基质效应。运用建立的方法对正常及硫酸葡聚糖（DSS）慢性肠炎小鼠血、肝、小肠、结肠、结肠内容物以及盲肠内容物中发挥重要作用的SCFAs进行测定。结果 用盐酸饱和氯化钠溶液进行SCFAs提取后，建立的GC/MS法可同时测定甲酸、乙酸、丙酸、异丁酸、丁酸、异戊酸、戊酸、异己酸、己酸、乳酸、琥珀酸共11种SCFAs；方法学考证显示，该方法具有较好的准确度、精密度以及提取回收率；除乙酸外，其余SCFAs基质效应均较好，不能完全除去乙酸的基质效应，但其RSD均小于3.8%，说明基质的影响效应相对稳定，对结果准确性影响较小。与对照组比较，慢性肠炎小鼠结肠内容物SCFAs蓄积；盲肠内容物SCFAs整体下调，乳酸蓄积，提示肠炎小鼠SCFAs代谢紊乱。结论 建立了生物样品中SCFAs提取和检测方法，并应用于慢性肠炎小鼠SCFAs代谢分析，肠炎小鼠SCFAs代谢紊乱。     

固相萃取技术在核苷类逆转录酶抑制剂定量分析研究中的应用概况

固相萃取(Solid-phase extraction,SPE)是近20年来迅速发展起来的一种生物样本预处理技术,是以液相色谱分离机制为基础建立的分离纯化方法。由于生物样品干扰成分较多且其中药物浓度多数较低,应用高效液相色谱(HPLC)和液相色谱/质谱联用(LC/MS)法往往无法实现样品的直接测定分析。SPE与HPLC或LC/MS法联用实现了样品预处理和分离分析的优化组合,在生物样本分析方面具有广泛的适应性和优越性。核苷类逆转录酶抑制剂(NRTIs)属核苷类似物,极性较强,故此联用技术在其生物样本分析测定方面应用普遍。为此,本文介绍了近年SPE与HPLC或…     

UPLC-MS/MS法测定小鼠血浆尼古丁浓度的不确定度评定

目的评定液质联用法(UPLC-MS/MS)测定小鼠血浆中尼古丁浓度的不确定度。方法分析UPLC-MS/MS法在测定小鼠血浆中尼古丁浓度时的不确定度来源,根据实验数据计算各不确定度分量并进行合成和扩展。结果小鼠血浆中尼古丁低浓度6 ng·m L~(-1)和高浓度300 ng·mL~(-1)的扩展不确定度分别为0.65 ng·mL~(-1)和20.26 ng·mL~(-1)(P=95%,k=2)。结论 UPLC-MS/MS法测定小鼠血浆中尼古丁浓度的不确定度在低浓度时主要由回收率、基质效应、重复性、生物样品配制和标准液配制引入;在高浓度时主要由生物样品配制、标准液配制、回收率和重复性引入。     

体内药物分析中的液-固提取样品制备技术

目前,体内药物分析在医药科学研究中的作用日益突出.微量体内药物或其它体液成分大都采用现代分析仪器,如GC/MS,HPLC或LC/MS等进行分析,从而使分析灵敏度、专属性大为提高,分析速度越来越快,自动化程度也越来越高.与此同时,对生物体液样品的预处理过程的要求也越来越高.采用毛细管GC或HPLC分析生物体液样品时,样品中蛋白质等生物大分子及其它内源性物质对待测药物分子可产生明显的干扰,前者还可使色谱系统严重污染、损坏或堵塞GC或HPLC的柱子,大大缩短柱寿命,同时也影响分析结果的准确性.因此,供体内药物分析的生物体液样品     

LC-MS/MS法测定6-甲基巯嘌呤含量的不确定度评定

摘 要 目的：评定LC-MS/MS测定6 甲基巯嘌呤(6-MMP)含量的不确定度。方法: 分析LC-MS/MS法测定6-MMP含量的不确定度来源,计算并进行合成和扩展。结果: 6-MMP在低含量(2 995 pmol)和高含量(140 900 pmol)的扩展不确定度分别为275.6 pmol和11 396 pmol (P=95%,k=2)。结论:LC-MS/MS法测定人血浆中6-MMP含量的不确定度在低浓度时主要由回收率、基质效应和生物样品配制引入,在高浓度时主要由回收率和生物样品配制引入。     

生物分析中溶血对检测的影响及其对策

液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术灵敏度高,选择性强,是目前体内药物分析的首选方法 ,但LC-MS/MS生物分析中仍面临着溶血样品测定失败的难题。溶血导致的样品测定数据不准确,将直接影响药物的药动学研究,如何进行溶血样品的测定已成为各国监管机构和全球生物分析行业探讨的重点。本文从溶血样品产生的原因进行分析,将溶血对检测的影响和作用方式以及溶血效应的考察方法进行了概述,最后对溶血样品的测定方法和策略进行探讨。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定人尿液中甲氨蝶呤浓度的不确定度评定

目的：评价超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）测定人尿液中甲氨蝶呤浓度的不确定度。方法：通过考察测定方法,分析实验过程中的不确定度来源,包括对照品称量、标准溶液配制和样品制备、回收率及基质效应、校正曲线拟合、仪器的精密性、实验温度和对照品纯度等,然后逐一评定并计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：置信概率P为95%时,人尿液中甲氨蝶呤低浓度0.06 μmol·L^-1和高浓度3 μmol·L^-1质控样品的扩展不确定度分别为0.006 5 μmol·L^-1和0.20 μmol·L^-1。结论：根据不确定度的大小及来源,改良测定方法,提高分析准确性。UHPLC-MS/MS法测定人尿液中甲氨蝶呤浓度的不确定度在低浓度时主要由曲线拟合、生物样品配制和标准液配制、回收率及基质效应引入;高浓度的不确定度主要由生物样品配制和标准液配制、回收率引入。     

动物活体自动采样技术的应用和评价

介绍在动物实验中一种先进的生物样品自动采集与处理系统,该系统结合液相色谱/质谱/质谱(LC/MS/MS)分析方法,可以为临床前药动学研究、药效学研究和安全性评价提供可靠的实验数据。利用该系统能够在清醒的、自由活动的实验大鼠、小鼠等啮齿类动物及灵长类动物完成生物样品的定时自动采集,并进行即时处理。不但节约人力,且大大提高了对少量低浓度生物样品的实验数据准确性;与此同时,还能实时监测实验动物的其他生理参数,从而可减少所用动物数量,改善动物的舒适性。若能把自动生物样品采集技术和现代先进的LC/MS/MS分析方法合并使用,则可显著提高临床前研究的速度和质量,以满足高通量药物筛选的要求。自动采样系统被我们用于大鼠口服卡马西平的药动学实验,结果证实它确实是临床前药动学、药效学研究及安全性评价的有效工具。     

液相色谱-串联质谱与化学衍生化及在线氢／氘交换结合药物代谢物的特性策略

介绍了应用高效液相色谱．串联质谱（LC-MS／MS）与化学衍生化、在线氢／氘（H／D）交换技术联合研究粗提样品中药物代谢物结构的策略。讨论了子离子扫描、恒定中性丢失扫描、母离子扫描、多级的MS^n和精确质量测量的质谱扫描技术。尤其重要的是，只需微量的粗提样品就足以满足LC-MS／MS的分析要求，且可以免去从复杂生物样品中纯化低含量代谢产物的困难，从而减少工作强度。     

HPLC-MS/MS法测定大鼠脑微透析液中斑蝥酸浓度的不确定度评定

目的评定HPLC-MS/MS测定大鼠脑微透析液中斑蝥酸（CTR）浓度的不确定度。方法用HPLC-MS/MS法测定大鼠脑微透析液中CTR浓度,分析并评定过程中的不确定度来源,并进行合成。结果大鼠脑微透析液中CTR低、高浓度(0.19,35.90 ng·m L^-1)的扩展不确定度分别为0.02,2.08ng·m L^-1（P=95%,k=2）。结论本方法的不确定度在低浓度时主要由基质效应、曲线拟合、重复性和生物药品配制引入,在高浓度时主要由基质效应、重复性和生物药品配制引入。     

健康人血浆中伪麻黄碱浓度的LC-MS法测定

目的建立人血浆中伪麻黄碱的LC—MS测定法。方法血浆中加入内标格列吡嗪，用甲醇提取后，采用选择性离子检测（SIM）方法测定其血药浓度。10名健康受试者口服受试制剂后，用LC—MS测定血浆中伪麻黄碱浓度。色谱柱：XTerra MS C18（3．5μm×100mm×2．1mm）；流动相：甲醇-5mmol·L^-1的醋酸铵水溶液（90：10，v／v）；流速：0．2ml·min^-1；柱温：25℃。结果标准曲线线性范围为5．01～1002．00μg·L^-1，标准曲线线性关系良好，回归方程为：f=0．00332×C＋0．00088（r=0．9997，n=5），定量下限为（LLOQ）为5．01μg·L^-1。高、中、低三种浓度的日内和日间变异均小于10．0％，回收率在89．6％～95．1％。结论本方法操作简便，灵敏度高，样品稳定性良好，适用于伪麻黄碱的临床血药浓度检测、生物利用度和药代动力学研究。     

避孕药及其生物样品定量测定方法的进展

介绍了避孕药的发展状况及其在生物样品中的定量测定方法.现有放射免疫分析、GC-MS法和LC-MS/MS法的灵敏度均较高,其中LC-MS/MS法成为生物样品测定的主要方法.     

LC-MS~n应用于生物样品检测中基质效应的评价

液质联用技术具有灵敏度高,特异性强的特点,已被广泛运用于生物样品的分析和检测中。然而基质效应问题往往被忽略,事实上基质效应的存在可能极大影响液质联用技术的准确度和精确度,降低实验数据的可靠性。文中通过查阅和比较美国FDA和欧洲EMEA相关指导原则,探讨基质效应存在的原因和消除基质效应的方法,提出基质效应的评价方法和评价指标,供生物样品分析工作者参考。     

重组人甲状旁腺素1—34肽谱及一级结构的液相色谱／电喷雾离子化质谱法分析

目的：采用液相色谱／电喷雾质谱联用法(LC—ESI—MS／MS)对重组人甲状旁腺素1—34(rh—PTH—34)进行肽谱及一级结构分析。方法：用LC—ESI—MS法测定相对分子质量，并在线分析其胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解质量肽谱；结合质谱源内碰撞诱导电离技术解析酶解肽段的氨基酸序列。结果：相对分子质量测定值与理论值一致；胰蛋白酶和V8蛋白酶酶解肽段氨基酸序列与理论值基本一致，序列覆盖率分别为97％和88％。结论：LC—ESI—MS／MS联用法为基因重组多肽类药物的一级结构分析和质量控制提供了新途径。     

LC—MS／MS法研究氨酚烷胺胶囊的人体药动学及相对生物利用度

目的：建立准确、灵敏的液相色谱-串联质谱法（LC—MS／MS）同时测定人血浆中的对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、咖啡因和马来酸氯苯那敏浓度，并研究健康受试者单剂量口服氨酚烷胺胶囊参比制剂和试验制剂后的药动学和相对生物利用度。方法：24名健康男性受试者进行随机双交叉试验，随机单剂量口服1粒氨酚烷胺胶囊（每粒含对乙酰氨基酚250mg、盐酸金刚烷胺100mg、咖啡因15mg和马来酸氯苯那敏2mg）参比制剂和试验制剂后采集血样，以盐酸克仑特罗为内标，采用ESI正离子选择性反应监测同时测定对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、咖啡因和马来酸氯苯那敏血浆浓度，计算药动学参数及进行生物等效性评价。结果：由AUC0-τ估算，试验制剂中对乙酰氨基酚、盐酸金刚烷胺、咖啡因和马来酸氯苯那敏的相对生物利用度（F）分别为（99．2±21．4）％，（102．8±38．5）％，（112．0±53．1）％，（102．4±43．1）％。结论：建立的LC—MS／MS测定法准确、灵敏．结果可靠；统计分析表明氨酚烷胺胶囊试验制剂和参比制剂生物等效。     

Beagle犬血浆中丙酸倍氯米松和单丙酸倍氯米松的LC-MS/MS测定

建立了LC—MS／MS法测定丙酸倍氯米松及其代谢产物单丙酸倍氯米松在Beagle犬血浆中的浓度。血浆样品用乙醚萃取，采用Inersil—ODS 3色谱柱，甲醇-水（85：15，含2mmol／L甲酸铵，甲酸调至pH3．6）为流动相，流速0．2ml／min。使用电喷雾离子源接口，可同时检测丙酸倍氯米松和单丙酸倍氯米松。血浆中丙酸倍氯米松的线性范围为0．1～10ng／ml，相对回收率96．0％～104．3％，日内、日间RSD小于11．0％和9．1％。     

LC-MS/MS法测定人血浆中布康唑浓度的不确定度评定

目的：评定LC-MS/MS法测定人血浆中布康唑浓度的不确定度。方法：分析测定过程中不确定度的来源，包括对照品的称量、仪器误差、标准溶液的配制、含药血浆样品的配制、血浆样品的处理、标准曲线的拟合、基质效应、重复性等，评定各来源分量的不确定度，计算合成不确定度和扩展不确定度。结果：人血浆中低（60.0 pg·mL^-1）、中（600.0 pg·mL^-1）、高（6 400.0 pg·mL^-1）浓度布康唑的扩展不确定度分别为5.62，63.90，626.26 pg·mL^-1（k=2，P=95%）。结论：LC-MS/MS法测定人血浆中布康唑浓度的不确定度主要由基质效应、血浆样品的处理（提取回收率），仪器误差、重复性（精密度）引入。