12个省市自治区水产品霍乱弧菌污染情况调查

目的了解霍乱弧菌在不同水产品及其流通环节中的污染情况,为制定霍乱预防控制措施提供依据。方法2005年7-9月在全国12个省、自治区、直辖市对不同种类水产品样本进行调查和霍乱弧菌的检测。结果共调查检测海、水产品样本12104份,霍乱弧菌总阳性检出率为0．52％。各类样本以甲鱼阳性率（1．72％）最高,其次为养殖水（1．14％）、蛙类（0．50％）,贝类最低（0．08％）。检测61株霍乱弧菌菌株47．54％为产毒株,且79．31％分离自甲鱼和养殖水。甲鱼在多环节的阳性率均较高,以养殖环节阳性率最高（2．38％）。结论我国12省（自治区、直辖市）水产品及其流通环节霍乱弧菌污染总体处于较低水平,甲鱼卫生管理问题应受到高度重视。     

水产品中霍乱弧菌污染状况的调查

目的：了解鞍山市水产品中霍乱弧菌的污染状况，为霍乱疫情预测提供实验依据。方法：依据GBl5984—1995《霍乱诊断标准及处理原则》和外环境标本分离霍乱弧菌程序操作。结果：共采集样品300份，其中涂抹类样品100份，水产品200份，自二份牛蛙涂抹样品中检出二株霍乱弧菌，经鉴定该二株菌为01群Eltor霍乱弧菌稻叶27L型。结论：本次检出的霍乱弧菌均为01群，由于01群霍乱弧菌的散发性及非爆发性，一直以来未受到人们的重视，近年来有报道称01群霍乱弧菌与非01群霍乱弧菌、0139霍乱弧菌的某些毒性基因有可能发生重组，成为另一种新的更强毒力的霍乱弧菌，因此其重要性被重新认识。     

肇庆市水产品中首次检出霍乱弧菌

目的：了解肇庆市零售水产品中霍乱弧菌的污染状况，为改善当前霍乱防治工作提供实验依据。方法：依据国标方法，对2004年7—8月采自肇庆市水产品批发市场、零售市场和酒店的水产品进行霍乱弧菌的分离、生化及血清学鉴定。结果：共采集水产品样品65件，水体样品22件。从样品中检出霍乱弧菌9株，其中分离自蛙8株，养殖水1株；8株为01群Ehor霍乱弧菌稻叶型91，1株为O1群Eltor霍乱弧菌小川型91。结论：该次肇庆市水产品检出的霍乱弧菌均为非流行株，但仍需加强对水产品的主动监测，预防霍乱流行株的出现而导致霍乱的散发和暴发流行。     

海、水产品霍乱弧菌检测结果分析

目的：为了解海、水产品的霍乱弧菌污染状况、菌型特征、耐药情况及毒力水平等。方法：采用中国CDC统一规定的检测方法及霍乱防治手册中的有关要求进行检测。结果：从300份海、水产品中共检出6株霍乱弧菌（小川、稻叶、0139群各2株）。结论：本次调查所检测到菌株的菌型复杂，01群和0139群对药物敏感试验有所差异，同种菌型之间具有高度同源性，经毒力基因检测均为产毒株，具有流行及致病的可能性。     

广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的分子特征研究

目的　了解广州市水产品监测中霍乱弧菌分离株的毒力特征,对其菌株进行同源性分析,研究其分子特征及流行病学意义。方法　2 0 0 4年6月采集广州市3家较大的水产品交易市场的海、水产品以及广州以往水型霍乱流行沿海地区的河水和珠江入海口海水,采用聚合酶链反应(PCR)方法对样本检出的霍乱弧菌分离株进行霍乱肠毒素基因(ctx)、小带联结毒素基因(zot)、辅助霍乱肠毒素基因(ace)和毒力协同菌毛蛋白亚单位基因(tcpA)这4种毒力基因的检测,用随机扩增多态性分析(RAPD)结合SPSS软件对以上菌株进行多态性分析,对霍乱弧菌毒力进行快速测定并进行分子分型。结果　共采集海、水产品样本16 0份、水体样本90份,从样本中检出34株霍乱弧菌,其中分离自青蛙12株、虎纹蛙6株、牛蛙5株、养殖水5株、罗氏虾3株,其他3株,根据流行病学调查证实均为海南输入株。毒力基因检测表明,34株霍乱弧菌均未检出ctx和tcpA基因;14株菌(41% )可同时检出ace和zot基因,另有2株菌(6 % )只检出ace基因。所有34株霍乱弧菌的RAPD结果经聚类分析可分为2个聚类群,其中31株属于同一来源,只有3株菌与其他菌株的同源性有差异,但亲缘关系较近。结论　该次水产品监测的霍乱菌株均为非流行株,但仍需加强监测,预防霍乱流行株的出现而导致的霍乱散发和暴发流     

从鸭绿江水产品中检出非流行株埃尔托型霍乱弧菌

〔目的〕对丹东口岸中朝界河鸭绿江中的水产品进行霍乱监测,从而了解鸭绿江中水产品被霍乱弧菌污染的情况。〔方法〕对可疑菌落做霍乱弧菌O1群、O139群血清玻片凝集试验,对凝集菌落作进一步的生化试验和噬菌体-生物分型。〔结果〕从水产品中检出非流行株O1群稻叶型霍乱弧菌。〔结论〕鸭绿江中水产品对健康人群存在感染风险,应注意水产品的饮食卫生和安全。     

应用胶体金免疫层析法检测水产品中霍乱弧菌的研究

〔目的〕应用胶体金免疫层析法,研究水产品中霍乱弧菌的快速检测方法。〔方法〕通过模拟水产品棉拭子标本比对试验及现场应用比对试验,比较不同检验方法的差异。〔结果〕70份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×10CFU/ml的模拟水产品棉拭子标本分别按检验方法1、检验方法2检验,同时检出阳性51份,检验方法2的检出率(87%)显著高于检验方法1的检出率(74%);30份增菌液中霍乱弧菌理论浓度为1.5×101CFU/ml的“模拟水产品棉拭子标本”按检验方法2进行检验的检测结果均为阳性。对2000份水产品进行检测的现场应用对照实验结果显示:检验方法3的检出率(0.4%)与检验方法1的检出率(0.3%)差异无显著性;胶体金试纸条实验的假阳性率为8%。〔结论〕在胶体金免疫层析法实验中,增菌液增菌前霍乱弧菌含量为1CFU/ml,通过增菌后可被检出;增菌液霍乱弧菌含量为10CFU/ml,增菌12h后均可被检出;水产品棉拭子标本增菌12h检测阴性者可报告阴性,阳性者则参照《霍乱防治手册》[1]进一步分离鉴定。鱼贝类霍乱弧菌污染菌数较少(103CFU/100g以下)[2],无法满足使用胶体金免疫层析法所要求的含菌量(106CFU/ml)[3],可以通过改良增菌培养液成分,以提高待检菌繁殖能力,在短时间内提高增菌液待检菌浓度,使胶体金免疫层析法的灵敏性高于或接近常规的分离鉴定法。     

1998至2001年四川省霍乱流行中6b型菌株的分子特征

目的 分析1998-2001年四川省霍乱流行中噬菌体-生物分型为6b的特殊菌型霍乱弧菌的分子特征.方法 选择1998-2001年四川省01群霍乱弧菌流行菌株以及同时期其他省份的流行菌株共45株,进行噬菌体-生物分型、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析以及突变基因的序列测定比较.结果 四川在1998-2001年期间流行的菌株存在1b型和6b型菌株,这些菌株均为产毒株;PFGE分析结果显示菌株呈现24种带型,其中13株菌表现为相同带型;来自四川的部分1b和6b型菌株以及部分其他省份的1b型菌株具有相同的PFGE带型;与1b型菌株相比,6b型菌株(共22株)的ompW基因ORF内存在11 bp缺失,而其余23株菌非6b型菌株的ompW基因ORF是完整的.结论 1998-2001年四川流行的O1群霍乱弧菌6b菌株是一类具有特殊遗传背景的菌型,可能与同期流行的1b型菌株有进化上的关联.     

实时荧光RT-PCR方法检测水及水产品中霍乱弧菌

〔目的〕探索实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌检验方面是否比传统方法有优势。〔方法〕用深圳太太基因工程有限公司提供的霍乱弧菌实时荧光RT-PCR试剂盒方法进行检验。〔结果〕用实时荧光RT-PCR方法从样品的2次增菌液中检出2个样品为霍乱弧菌通用型阳性。用传统的微生物生理、生化培养法,从上述2个样品中分离出3株菌株。根据血清分型、API鉴定和荧光RT-PCR,确认所分离的菌株有2株是国际检疫传染病的病原—O1群霍乱弧菌;1株是非O1/非O139群霍乱弧菌。〔结论〕实时荧光RT-PCR方法在霍乱弧菌的检验方面具有快速、灵敏、特异性强等优势,有利于提高霍乱弧菌的检出率。     

隆回县首次从甲鱼中检出O139霍乱弧菌分析

目的了解隆回县城区市售外来水生动物霍乱弧菌污染情况及菌型特征。方法用直接肠内容物采样法采样,样本按《霍乱防治手册》方法,对城区销售的外来甲鱼进行霍乱弧菌分离培养、生化及血清学鉴定。结果从188份甲鱼样本中检出O139群霍乱弧菌1株,菌落特点、血清学试验、制动试验、生化反应和肠毒素基因(CTX)PCR检测均与O139群霍乱弧菌相符。结论霍乱弧菌可通过外来甲鱼等水生动物的运输而传播,直接肠内容物采样可提高霍乱弧菌的检出率。     

基于随机扩增多态性DNA分析的霍乱弧菌分子分型方法的建立

目的建立基于随机扩增多态性DNA分析（Randomly amplified polymorphic DNA,RAPD）的霍乱弧菌简便快速分子分型方法。方法选择16株霍乱弧菌代表性菌株,包括O₁群、O₁₃₉群和非O₁/非O₁₃₉群等血清群,通过40条随机引物的RAPD-PCR实验,筛选出理想的随机引物,要求其产生的DNA指纹图谱多态性高,并有足够的分辨力进行分子分型。结果通过一系列RAPD-PCR实验和统计学聚类分析,从40条随机引物中筛选出2条最符合要求的引物。16株霍乱弧菌的分析结果显示,2条引物对于O₁群和O₁₃₉群产毒株、O₁群非产毒株和非O₁/非O₁₃₉群均有很好的聚类分辨率。结论本研究筛选获得了2条随机引物并建立了基于RAPD的分子分型方法,该方法简便、省时、省力,适用于地方疾控部门和口岸检疫部门的基层实验室开展霍乱监测和流行病学溯源工作。     

浙江省海、水产品霍乱弧菌污染状况调查及分子生物学研究

目的：了解浙江省海、水产品霍乱弧菌污染情况及海、水产品中霍乱弧菌的毒力特征，并对其进行耐药性和同源性分析，研究其分子特征及流行病学意义。方法：2005年7～9月采集浙江省温州、宁波、舟山的海、水产品及杭州某批发市场的甲鱼，对检出的霍乱弧菌菌株进行耐药性分析，采用聚合酶链反应（PCR）方法进行霍乱弧菌肠毒素基因（Ctx）、小带联结毒素基因（Zot）、辅助霍乱肠毒素（Ace）的检测，并参照美国CDC PulseNet的统一方法进行脉冲场凝胶电泳（PF—GE）分型并作同源性分析。结果：从采集的990份海、水产品标本中检出14株霍乱弧菌，其中分离自青蛙1株、甲鱼9株、贝类1株、甲壳类1株、鱼类1株、其它1株。经耐药性分析，菌株对诺氟沙星、头孢噻肟100％敏感；对复方新诺明、萘啶酸耐药率最高，达64．3％，其次为庆大霉素、利福平，耐药率为35．7％。毒力基因检测表明，14株霍乱弧菌中3种毒力基因均阳性的有5株，占35．7％；携带Ctx的有7株，占50．0％；只携带Zot的有4株，占28．6％；另有3株毒力基因均阴性，占21．4％。脉冲场凝胶电泳分型显示，2株稻叶1f同源；2株小川1k同源；1株小川19k降解；9株0139群霍乱弧菌除1株死亡未作分析外，其余8株分为3个型。结论：此次海、水产品检测的霍乱弧菌血清型较多，但以0139群霍乱弧菌为主，其脉冲场凝胶电泳分型较多，这与浙江省近几年霍乱时有散发和多菌型并存的特点一致。耐药率及毒力基因携带情况与广州省有较大的差别。     

霍乱弧菌分子生物学检测技术介绍

随着医学分子生物学的迅速发展,大量的分子生物学技术被用于霍乱弧菌的研究,为霍乱弧菌快速检测及分型提供了重要依据,也进一步从分子水平阐明了霍乱弧菌的变异和不同菌株之间的遗传关系,以及霍乱疫情的溯源、菌株类型和流行性质.     

佛山市外环境水体非O1群霍乱弧菌生物学特性和流行病学研究

目的　了解佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的菌型分布及毒素携带情况。方法收集外环境水样 ,用常规的细菌培养方法分离非O1群霍乱弧菌。采用分子生物学PCR技术检测霍乱肠毒素 (CT)基因 ,用ELISA检测耐热肠毒素 (ST)和不耐热肠毒素 (LT)。结果　共检测水样 16 4 4份 ,分离到非O1群霍乱弧菌 4 78株 ,分离率为 2 9 0 7% ;血清学分型显示近年佛山市外环境水体中非O1群霍乱弧菌的主要菌型为VBO7。霍乱肠毒素基因检测阳性率为 1 91% ;耐热肠毒素、不耐热肠毒素的检出率分别为 13 14 %和 12 17%。结论　个别非O1群霍乱弧菌可同时带有多种毒力因子 ,提示佛山市外环境水体中存在的非O1群霍乱弧菌具有潜在的致病性 ,加强监测对做好感染性腹泻的防治工作实属必要。     

水产品中霍乱弧菌的监测方法研究

目的:研究水产品中霍乱弧菌的监测方法,及时发现被霍乱弧菌污染的水产品,采取有效防控措施,防范霍乱疫情的发生。方法:用实时荧光PCR法、胶体金法、分离培养法三种方法分别对180份水产品进行霍乱弧菌检测,阳性样品再进行霍乱肠毒素检测。结果:三种方法检出了44份核酸阳性标本,18份霍乱肠毒素阳性标本,分离出8株霍乱弧菌。结论:在进行水产品霍乱监测时,可以先用实时荧光PCR进行初筛,筛出核酸阳性标本,进行霍乱肠毒素检测,及时发现被霍乱产毒株污染的水产品,再对筛出的核酸阳性标本结合胶体金法进行分离培养和分型鉴定,进一步完成霍乱疫情的确证和分析。     

消毒剂对不同水体中E1 Tor霍乱弧菌杀灭作用的实验观察

目的 研究消毒剂不同水体中El Tor霍乱弧菌的杀灭作用,为霍乱疫源地的消毒提供指导。方法 用细菌悬液定量杀灭实验测定消洁粉 、固体碘伏、二氧化氯和戊二醛4种消毒剂分别对生活污水、医院污水、沟水、河水和海水5种不同水体中El Tor霍乱弧菌的杀灭效果。结果 对5种水体中的埃尔托生物型霍乱弧菌定量杀菌5min,其杀功菌率结达到100％,消洁粉,碘伏,ClO2及戊二醛的浓度分别为25．0－250．0mg/L,100.0-250.0mg/L,10.0-25.0mg/L及100-500mg/L。结论 不同消毒剂杀灭水体中埃尔托生物型霍乱弧菌的能力有差别。同种消毒剂对5种水体中的霍乱弧菌的杀灭作用亦有差别,污水比天然水体所需消毒剂浓度相应提高。     

嘉兴市霍乱弧菌分离株检测分析

目的比较分析嘉兴市霍乱弧菌菌株的血清型、毒力基因和分子分型特征。方法采用血清学和分子生物学方法对近年来分离到13株霍乱弧菌菌株进行血清型分布、毒力基因(ctxA、ace、zot、tcpA、cri和rtxA)携带和ERIC-PCR分型研究。结果 13株霍乱弧菌菌株,2株为O139群霍乱弧菌,11株为O1群霍乱弧菌,其中小川型9株,稻叶型2株。2株O139群霍乱弧菌菌株携带3种毒力基因;11株O1群霍乱弧菌菌株,除1株携带4种毒力基因外,其余10株携带全部6种毒力基因。ERIC-PCR分型分析显示,不同的霍乱弧菌菌株之间ERIC-PCR型别表现出一定的遗传多样性。结论嘉兴市霍乱弧菌菌株大多携带多种毒力基因,而且来源多样,防控工作任重而道远。     

O139群霍乱弧菌耐药谱和相关耐药基因研究

目的:通过检测分析2004年-2007年31株O139群霍乱弧菌临床分离株对13种抗菌药物耐药情况和相关耐药基因携带情况,为O139群霍乱弧菌预防和治疗提供理论依据。方法:K-B纸片扩散法药物敏感实验检测细菌13种抗菌药物耐药情况,用常规PCR方法扩增TEM、aadA2、strA、strB、tetA、floR和sul1等7种耐药基因和1型耐药整合子。结果:药物敏感实验表明31株O139群霍乱弧菌临床分离株只存在一种耐药谱型,对头孢噻肟、头孢吡肟、环丙沙星和氟哌酸敏感,对氨苄西林、羧苄西林、氯霉素、复方新诺明、四环素、强力霉素、庆大霉素、卡那霉素和链霉素耐药,均扩增出TEM、aadA2、strA、strB、floR和sul1耐药基因和1型耐药整合子结构。结论:O139群霍乱弧菌已对多种抗生素耐药并存在相关耐药基因,应引起临床重视。