烧伤变性真皮基质组织工程化改造和临床再利用

背景:大面积烧伤患者切痂术后丢弃的变性皮肤是否可再利用称为目前研究的热点.目的:通过(保留)变性真皮(基质)基础研究和临床应用进展,探讨烧伤变性真皮基质组织工程化改造和临床再利用的可行性.方法:应用计算机检索PubMed 数据库、Medline database 和中国期刊全文数据库(1970/2011-01),选择文章所述内容需与烧伤变性真皮基质的获取、性质、重塑、应用、评价等方面密切相关的25 篇文献,排除重复性研究文献.结果与结论:保留变性真皮治疗大面积烧伤在临床上取得较为满意的疗效;相关基础研究显示真皮细胞外基质含有功能性基质隐匿性肽,烧伤变性真皮基质及其降解物是细胞蛋白(激)酶作用的良好底物,具有细胞趋化活性.这些结果表明,烧伤变性真皮基质及其降解产物不是临床再生利用的障碍,通过体外合理改造若能成功应用于临床必将明显缓解烧伤治疗中自体皮源不足,提高复合皮移植效果和降低医疗费用.     

无细胞真皮基质的研究进展

皮肤是身体最大的器官，具有许多复杂的功能（包括免疫反应）。皮肤作为人体的天然屏障，抵抗了环境中不良因素的影响，而这种屏障急性或慢性的损伤将需要基本的组织修复过程。大面积烧伤的病人需要屏障保护防止感染和细胞脱水，由于自体皮的移植已变得非常有限，从而导致了各种暂时或永久的皮肤替代物的发展。临床皮肤替代物的培养相对于传统的皮肤移植已减少了供皮需要的10倍，同时减少了手术次数（多次取自体皮）及严重烧伤患者的创面愈合时间。人们于20世纪70年代发明了自体皮细胞培养技术，并逐步加以改进使之能应用于临床，但是，由于自体表皮细胞缺乏真皮结构，移植后很脆弱，抗感染能力差，导致其移植存活产生严重的瘢痕收缩，因此，单纯角质细胞培养与移植的方法目前已趋于淘汰。现多主张采用中厚皮或刃厚皮移植来治疗大面积烧伤，这种方法虽有不少优点，但也存在问题：（1）供皮区成为新创面，创面的扩大增加了全身性炎症反映的程度；（2）供皮区可遗留瘢痕和色素沉着；（3）远期治疗效果不甚理想；（4）对老年及婴儿烧伤患者以及伤前有其它疾病或伴有吸人性损伤患者，他们的承受能力弱，抵抗力差，采用适宜的伤口覆盖方式尽量减少供皮区的面积就显得尤为重要。无细胞真皮基质（ADM）即异体或异种皮经一系列处理后保留原有胶原纤维基本组织结构的一种永久性真皮替代物。无细胞真皮基质（ADM）以它的低抗原性、快速血管化等优点得到了广大学者及临床医师的认可，应用于临床并取得了满意的效果。现将无细胞真皮基质的制备、应用及前景综述如下。     

功能部位深度烧伤削痂时保留变性真皮并移植大张自体皮58例

背景:深度或混合度烧伤后,真皮虽然受到损害,但没有完全坏死,可能只是发生了变性而已,当变性真皮被自体皮片覆盖后,变性真皮能够逐渐复苏,其形态、结构逐渐恢复到正常或接近正常状态.目的:对比分析功能部位深度烧伤切削痂植皮时保留变性真皮与不保留变性真皮的远期疗效.设计、时间及地点:病例分析,于2006-0312008-06在东莞市清溪医院烧伤外科完成.对象:选用58例有功能部位深度烧伤的患者,按照不同的治疗方法分成3组.方法:切除真皮组:进行切削痂时切除全层真皮并移植大张自体中厚皮片.保留真皮组:用削痂或刮痂的方法清除已经坏死的痂皮,保留变性真皮.对照组:临床治疗过程中不同意手术植皮治疗的部分患者,用通常烧伤换药的方法直至创面愈合.主要观察指标:比较3组患者出血情况、术后瘢痕增生情况,并对其功能进行评级.结果:切除真皮组、保留真皮组手术时,保留真皮组出血少,保留真皮组移植皮片相对切除真皮组不容易成活,切除真皮组皮片收缩较保留真皮组明显,且远期功能不如保留真皮组.3组中对照组瘢痕增生最明显,功能恢复最差.结论:对功能部位深度烧伤切削痂植皮时保留变性真皮并移植大张自体皮片的手术方法能够获得较好的外观及功能.     

活化的人淋巴细胞与不同猪真皮共同培养的免疫反应特征

目的 探讨临床应用异种无细胞真皮基质（Xeno-ADM)的免疫反应。方法 用网状Xeno-ADM与超薄自体皮片复合移植于3例大面积Ⅲ度烧伤患，成活后4－8周分离外周血单个核细胞（PBMC），以同期单纯自体皮移植的大面积烧伤患PBMC为对照，用新癣小猪整张真皮片（whole wenodermis)和Minced Xeno-ADM作抗原刺激物，通过不同的猪真皮→人淋巴细胞共同培养（DLCC）、^3H-TdR掺入、免疫组织化学技术，检测反应细胞增殖水平和细胞类型。结果 DLCC后，新鲜小猪微粒真皮组对活化和未被活化人淋巴细胞增殖刺激作用均明显强于猪整张真皮组和Xeno-ADM组（P＜0．05－0．01），增殖和浸润到真皮内的细胞以CD3^ CD4^ /CD45RO^ T淋巴细胞为主、单核细胞和B细胞次之。结论 以CD3^ -CD4^ /CD45RO^ 为主的T淋巴细胞参与可能是异种真皮移植后的免疫反应特征；真皮微血管内皮细胞ICAM－1的表达可能与诱导淋巴细胞浸润和增殖有关，与未活化的淋巴细胞相比，采用活化的淋巴细胞进行DLCC，可更真实地反映宿主对Xeno-ADM的免疫反应状况。     

异种脱细胞真皮在颜面部Ⅱ度烧伤创面应用52例分析

颜面部为人体特殊暴露部位之一,极易受到各种原因烧伤,其中以煤气火焰、热液、蒸汽、电弧、化学物质烧伤常见,创面为Ⅱ度常见。笔者2005-01／2008—07使用异种（猪）脱细胞真皮基质治疗颜面部Ⅱ度烧伤创面,取得了较好的临床效果,现报告如下。     

脱细胞真皮基质补片修复滇南小耳猪胆管损伤

背景：目前胆管缺损的修复效果不佳,脱细胞真皮基质已广泛用于烧伤、疝修复、口腔黏膜及软组织修复等。目的：观察脱细胞真皮基质修复滇南小耳猪胆管损伤的效果。方法：将滇南小耳猪建立胆管损伤动物模型,建模成功后按修复方式分为胆肠吻合组、膨体聚四氟乙烯组及脱细胞真皮基质组,胆肠吻合组进行胆肠吻合修补,膨体聚四氟乙烯组及脱细胞真皮基质组分别用膨体聚四氟乙烯补片和脱细胞真皮基质补片制成直径稍宽管状进行修补。结果与结论：治疗后2～4个月,脱细胞真皮基质组的总胆红素低于其他2组（P〈0.05）;免疫组织化学染色显示,治疗后1～4个月,其转化生长因子β1表达均高于其他2组（P〈0.05）,表达随时间增加而降低（P〈0.05）。脱细胞真皮基质组胆总管吻合口及周围组织出现胆道上皮、腺体、血管及平滑肌等再生。脱细胞真皮基质组治疗后未出现胆道狭窄、感染及排斥反应发生。结果证实,脱细胞真皮基质可生理性修复胆道并重建其功能,并发症少,生物相容性较好。     

脱细胞猪真皮基质敷料和其他生物敷料的透水特性

目的：比较不同生物敷料的透水特性及各种创面所需敷料的透水特性.方法：实验于2003-01/04在佛山市第一人民医院烧伤科实验室完成.采用透湿杯法测试启东脱细胞猪真皮基质敷料、启东脱细胞猪真皮基质敷料＋PVC薄膜、人体全层异体皮、人体刃厚皮、去表皮真皮深层断层猪皮、人体三度烧伤焦痂、人体深二度烧伤痂皮、水合纤维素敷料、戊二醛全层猪皮、Intergra、新鲜去表皮猪皮（含全部真皮层）、Alloderm、新鲜全层腹部猪皮、新鲜全层背部猪皮、启东脱细胞猪真皮基质敷料＋8层纱布、启东脱细胞猪真皮基质敷料＋16层纱布及PVC薄膜的透水量.结果：①在透湿杯内15 mL生理盐水干水时间：启东脱细胞猪真皮基质敷料2 d,人体刃厚皮40 d,去表皮真皮深层断层猪皮、戊二醛全层猪皮、启东脱细胞猪真皮基质敷料＋8层纱布和启东脱细胞猪真皮基质敷料＋16层纱布为2.5 d或3 d,启东脱细胞猪真皮基质敷料＋PVC薄膜、人体异体皮、新鲜全层腹部猪皮、PVC薄膜40 d均未干.②透水性（24 h,37℃下）：启东脱细胞猪真皮基质敷料为5 856.56 g/m^2,启东脱细胞猪真皮基质敷料＋PVC薄膜413.21 g/m,人体异体皮1 194.25 g/m^2,人体刃厚皮249.12g/m^2,去表皮真皮深层断层猪皮611.47 g/m^2,戊二醛全层猪皮6 100.36g/m^2,新鲜全层腹部猪皮780.52g/m^2,启东脱细胞猪真皮基质敷料＋8层纱布3 584.53 g/m^2,启东脱细胞猪真皮基质敷料＋16层纱布4 644.95 g/m^2,PVC薄膜1 777.86g/m^2.结论：不同生物敷料的透水性数据对临床不同创面的生物敷料的选择具有指导意义,表皮、异体皮保湿性良好,可用于切削痂创面的保护;启东脱细胞猪真皮基质敷料透水透气性良好,可用于浅Ⅱ度和深Ⅱ度创面保护.     

NaOH消蚀法制备脱细胞真皮基质修补腹壁疝

背景：与其他疝修补材料相比,脱细胞真皮基质具有易血管化、抗感染、从而可用替代传统补片用于感染腹壁缺损重建等特点。目的：观察NaOH消蚀法制备的脱细胞真皮基质作为修补材料应用于腹疝的应用价值。方法：以全厚猪皮制成脱细胞真皮基质,45只SD雄性大鼠制备腹壁疝模型,随机数字表法分为腹壁疝组：直接缝合皮肤,Marlex网组和脱细胞真皮基质组：分别应用大小为3.5cm×4.0cm的Marlex网和脱细胞真皮基质缝合皮肤;观察修复后1周时有无腹壁疝发生,脱细胞真皮基质组修复后1,2,3,5,10周分别取材,其中每周各组取4只用于苏木精-伊红染色,光镜观察。修复后第5周Marlex网组和脱细胞真皮基质组各取6只用于抗张力试验。结果与结论：术后1周脱细胞真皮基质组与Marlex网组腹壁疝发生率均显著低于腹壁疝组（P〈0.001）。脱细胞真皮基质的胶原纤维无明显变化,即有少量成纤维细胞植入,术后2周可见新生血管,术后5周脱细胞真皮基质内部血管密度基本稳定。将单独脱细胞真皮基质片与Marlex网行抗张力试验,Marlex网的抗张力显著高于脱细胞真皮基质（P〈0.001）。但植入体内5周后,脱细胞真皮基质筋膜组织的抗张力高于Marlex-筋膜组织（P〈0.05）。提示复合消蚀制备的脱细胞真皮基质可以作为良好的疝修补材料。     

脱细胞异体真皮基质与自体刃厚皮复合移植在大面积深度烧伤治疗中的应用

目的探索一种治疗大面积深度烧伤的方法。方法2006年3月至2007年10月,本科收治大面积深度烧伤病人15例,实行早期切削焦痂后采用J-1型脱细胞异体真皮基质覆盖手术创面,并在术后分期自体植皮。结果皮片成活良好,经随访6～18个月,无排斥反应,植皮区光滑平整,色泽及弹性良好,瘢痕增生反应轻。结论脱细胞异体真皮与自体皮复合移植是治疗深度烧伤的一种比较理想的方法。     

脱细胞异体真皮的临床应用

J—1型脱细胞异体真皮（ReDerm）是新近研制开发的无细胞异体真皮，以高科技方法将真皮中引起宿主排异反应的细胞清除，但完整地保留与原组织结构相同的细胞外基质。将它移植到病人身上，代替Ⅲ度烧伤因切痂而缺失的真皮，不会引起受体的排异反应。1997年以来，我们在9例24个部位使用ReDerm，收到了良好的近期效果。报道如下。1资料与方法1．1一般资料：本组9例，男7例，女2例，年龄最小7岁，最大65岁。烧伤总面积5％～55％，其中Ⅲ度面积2％～40％。Ⅲ度烧伤创面切痂后使用ReDerm的部位：手背11例，髌骨部6例，窝部7例，见表1。1．2方法…     

微孔异种无细胞真皮复合移植用于烧伤创面烧伤创面F功能评估

目的 观察微孔异种无细胞真皮 (acellular xeno- drmal matrix,ADM)与自体皮片复合移植的临床效果. 方法 将打孔的无细胞真皮与自体的大张刃厚皮、网状皮、邮票皮微粒皮等复合移植 ,用于深度烧伤创面的修复 ,观察自体皮片存活率及创面愈合的色素沉着、弹性与柔韧性等 ,并与单纯自体皮片移植部位进行比较. 结果 微孔无细胞真皮与自体刃厚皮、网状皮及邮票皮移植 ,存活率达 100% ,而与微粒皮移植存活率较低.与单纯自体皮片移植相比 ,复合移植后 3个月 ,色素沉着浅 ,富有弹性与柔韧性 ,明显改善创面愈合质量. 结论 微孔无细胞真皮具有完整的基底膜结构 ,胶原排列规则有序 ,可重建高质量真皮层 ,提高柔韧性、耐磨与耐压性.     

异体表皮干细胞与猪脱细胞真皮构建复合皮移植6例

2005-01/2006-10在南昌大学第一附属医院烧伤科就诊的深度烧伤患者6例,均为四肢Ⅲ度烧伤创面.异种(猪)脱细胞真皮与异体表皮干细胞构建的复合皮由南昌大学第一附属医院烧伤中心提供.清创消毒后,6例患者均进行复合皮移植、自体刃厚皮移植,共移植复合皮12块,自体刃厚皮96块.复合皮移植是将复合皮剪成1.5 cm×1.5 cm,粗糙面向下、光滑面向上植于创面上;自体刃厚皮移植是将大片自体刃厚皮铺于矾土林纱布上,剪成1.5cm×1.5 cm,植于复合皮的四周.移植后3 d揭去创面外层纱布,见复合皮及自体刃厚皮与创面粘连好、湿润,呈淡红色:7 d复合皮及自体刃厚皮大部分成活,随后成活的皮片向四周扩展,至14 d大部分皮片接近融合,21 d时创面已基本愈合.移植的复合皮、自体刃厚皮成活数量比较,差异无显著性意义(P＞0.05).因复合皮扩展情况不如自体刃厚皮,所以复合皮移植后的创面愈合面积小于自体刃厚皮移植(P＜0.01).在临床观察中6例患者暂末发生不良事件和副反应.提示表皮干细胞和(猪)脱细胞真皮构建的人工复合皮移植到受区,可建立血液循环,并保持一定的活力,达到覆盖创面、防止感染、防止体液流失的目的.     

异种脱细胞真皮替代睑板材料重建眼睑的可行性

背景：眼睑后层重建是眼睑重建的重点和难点,其中睑板替代物更是研究的焦点。异种脱细胞真皮作为一种新型的组织工程材料,在国内外烧伤整形领域,正得到广泛的研究和应用。目的：观察异种（猪）脱细胞真皮植入兔眼睑后的组织相容性极其组织病理学变化。方法：剥取健康小白猪全层皮肤20cm×20cm,制备异种（猪）脱细胞真皮基质。同时制备兔睑板全层缺损模型并植入脱细胞真皮基质,观察大体情况,并分别于第1,2,3周取移植交界处眼睑组织光镜下观察组织学的改变。结果与结论：大体观察未见明显排斥反应及眼睑的变形;光镜下1周时可见局部炎症细胞浸润,2周时炎症细胞减少,3周时正常纤维组织长入,逐渐分割代替植入的胶原纤维,炎症反应消失。提示异种脱细胞真皮免疫原性低,并可引导新生胶原的生长,是一种良好的睑板替代物。     

综合康复治疗手背深度烧伤中厚皮移植术后的疗效

目的:观察早期综合康复治疗对手背深度烧伤行手部切痂中厚皮移植术后患者的疗效。方法:手背深度烧伤(深2度、3度)并行手背切痂中厚皮移植术后患者78例(109只患手),对患手实施早期良肢位摆放、压力疗法、超声药物透入、蜡疗及手部功能训练的综合康复治疗。治疗前后采用总主动活动度评分(TAM)、简易上肢功能评分、Barthel指数进行评定。结果:治疗28d后,患者TAM评分较治疗前明显好转(P<0.01),Barthel指数评分及各年龄阶段简易上肢功能评分较治疗前均明显提高(均P<0.01)。结论:对手背深深2度、3度烧伤后行切削痂中厚皮移植术的患者早期进行综合康复治疗,是保证手功能恢复良好的关键。     

自体微粒皮及脂肪混合移植治疗大关节深度烧伤的近远期疗效观察

目的观察自体微粒皮及脂肪混合移植治疗大关节深度烧伤的近远期疗效。方法大关节深度烧伤感染患者80例根据入院顺序随机分为两组,治疗组与对照组各40例,对照组采用传统植皮手术方法治疗,治疗组采用自体微粒皮及脂肪混合移植治疗。结果经过观察,术后30d、60d创面愈合率,治疗组较对照组明显增加（P〈0．01）。经过治疗后,两组的CD3＋、CD8＋含量水平都有明显增加,CD4＋含量水平有明显降低,但是治疗组的改善程度好于对照组（P〈0．05）。结论自体微粒皮及脂肪混合移植治疗大关节深度烧伤在近期能提高治疗创面愈合率,在远期能改善患者免疫状况,值得推广应用。     

自体嗅鞘细胞联合β-七叶皂甙钠修复大鼠脊髓全横断损伤

背景：神经损伤时移植嗅鞘细胞能促进轴突再生,减少星形胶质细胞增生。目的：探讨自体嗅鞘细胞移植联合中药β-七叶皂甙钠对脊髓继发性损伤的保护作用。方法：制作SD大鼠脊髓损伤模型,随机分为对照组（注射生理盐水）、自体嗅鞘细胞移植组、自体嗅鞘细胞移植联合β-七叶皂甙钠治疗组。结果与结论：脊髓损伤后脊髓血管源性水肿、基质金属蛋白酶9表达上调,大鼠运动功能缺失,经自体嗅鞘细胞移植及自体嗅鞘细胞联合β-七叶皂甙钠治疗后脊髓水肿明显减轻、基质金属蛋白酶9表达下调,大鼠运动功能恢复,以自体嗅鞘细胞移植联合β-七叶皂甙钠治疗效果更明显。说明自体嗅鞘细胞移植联合β-七叶皂甙钠可更有效修复损伤脊髓,发挥保护作用。     

异种(猪)无细胞真皮基质与自体微粒皮复合移植修复深度烧伤创面的实验研究

目的　观察异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮加同种异体皮复合移植修复全层皮肤缺损的效果。方法　 4 8只 SD大鼠背部全层皮肤缺损创面 ,分别行异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮移植(复合皮组 )和单纯微粒皮移植 (对照组 ) ,术后定期观察创面愈合情况并行创面愈合率和收缩率的计算 ,同时取创面组织进行组织学观察。结果　复合皮组的创面愈合情况良好 ,未见明显挛缩 ,皮肤弹性较好 ,两组异体皮成活情况及创面愈合情况相近 ,但是复合皮组创面收缩率显著低于对照组。组织学观察复合皮组上皮化良好 ,胶原纤维排列有序 ,基底膜结构完整。结论　异种 (猪 )无细胞真皮支架与自体微粒皮复合移植能修复全层皮肤缺损 ,改善创面愈合质量。     

脱细胞异体真皮结合玻璃酸钠在腱鞘重建中的应用

背景：脱细胞异体真皮被自体组织取代后即不被机体视为异物,可减少局部炎症细胞浸润,减轻炎症反应,能够达到重建腱鞘后在体内永久存留的可能性。 目的：探寻脱细胞异体真皮重建腱鞘结合玻璃酸钠预防肌腱粘连松解后再粘连的效果。 方法：将腕部肌腱损伤修复后粘连需要再次手术行肌腱松解的56例患者随机分为试验组（n=26）与对照组（n=30）。试验组肌腱粘连行肌腱松解后,以脱细胞异体真皮缝合成直径大于肌腱的套管状套于肌腱粘连处,使套管达到远近端未粘连部分各1 cm,缝合固定重建腱鞘两端于周围组织,套管内注射玻璃酸钠,缝合伤口;对照组肌腱松解后直接缝合伤口。术后随访半年,对比两组肌腱松解情况及再次粘连发生情况。 结果与结论：试验组26例患者51根肌腱,有效49根,无效2根,有效率为96%;对照组30例患者58根肌腱,有效46根,无效12根,有效率为79%,两组有效率比较差异有显著性意义（P ＜0.05）。表明以脱细胞异体真皮重建腱鞘结合玻璃酸钠预防肌腱粘连松解后再粘连效果明显。     

表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的实验研究

目的探讨表皮干细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤促进创面愈合的可行性。方法（1）用胰蛋白酶和EDTA联合消化法分离表皮,用Ⅳ型胶原快速黏附法分离、纯化人表皮干细胞,以含表皮生长因子、角质细胞无血清培养液等组成人表皮干细胞培养基进行体外培养,测定克隆形成率。（2）将培养人表皮干细胞接种于制备的脱细胞真皮支架中,构建组织工程人工皮肤,移植治疗兔全层皮肤缺损创面,观察创面修复效果。（3）取新西兰白兔常规制作背部全层皮肤缺损创面,随机分为4组：A、B、C组分别用含表皮干细胞的组织工程皮肤、含角质细胞的组织工程皮肤和单纯脱细胞真皮移植于皮肤缺损创面;D组用创面空置为对照。观察创面修复情况、局部炎症反应,并记录创面愈合时间。结果体外培养的人表皮干细胞增殖稳定,克隆形成率明显高于角质细胞对照组（P〈0．05）。移植后A组创面愈合良好,局部炎症反应轻微,无出血、积脓、坏死,创面愈合时间较B、C、D组明显缩短（P〈0．05或P〈0．01）。结论以表皮干细胞作为种子细胞联合脱细胞真皮构建人工皮肤可用于皮肤缺损创面的修复治疗。