揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Fas表达的影响

背景:现代研究证实细胞的过度凋亡加速软骨组织的退变,而手法的力学刺激对关节软骨影响的分子层面研究至今少有报道.目的:观察揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas 表达的作用.方法:50 只新西兰兔随机等分为正常组、假手术组、模型组、手法组和针剂组,后3 组建立右下肢骨内高压型膝关节骨性关节炎模型.造模1 周后,手法组使用揉髌手法隔天治疗1 次,每次10 min,共治疗5 周共17 次;针剂组关节内注射玻璃酸钠液0.6 mL,每周1 次,共5 次.结果与结论:造模后8 周末取兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,苏木精-伊红染色提示模型组软骨组织退变明显,软骨细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),胫骨平台软骨组织中Bcl-2、Bax、Fas 表达率明显升高(P < 0.01),而手法组和针剂组软骨组织退变轻微,软骨细胞凋亡率及Bax、Fas 表达率较模型组降低(P < 0.01),但胫骨平台软骨组织中Bcl-2 表达升高(P < 0.01).说明揉髌手法与关节内注射玻璃酸钠一样可以明显降低兔膝关节软骨细胞的凋亡率,其作用机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Fas 表达有关.     

揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及增殖细胞核抗原表达的影响

背景:有研究表明手法的力学刺激作用和关节被动活动可促进促进关节周围组织的自我修复,但手法治疗对膝关节软骨细胞凋亡和增殖的影响目前未见报道.目的:用揉髌手法施术于骨内高压型动物的右下肢,探讨对兔膝关节软骨细胞凋亡和增殖细胞核抗原表达的影响.方法:将新西兰兔随机分为5组:揉髌手法组、玻璃酸钠组和模型组采用手术结扎股静脉,臀下静脉、大隐静脉方法建立右下肢骨内高压型模型;假手术组予以手术暴露但不结扎相应血管;正常对照组不作任何处理.造模1周后,揉髌手法组采用揉髌手法连续治疗5周共17次;玻璃酸钠组每周右膝关节内注射1次,连续5周.于造模后12周末分别取所有动物右膝胫骨平台软骨组织,采用原位末端标记法观察软骨细胞凋亡,免疫组化法观察增殖细胞核抗原的表达.结果与结论:揉髌手法组软骨细胞凋亡率低于模型组(P＜0.01).揉髌手法组增殖细胞核抗原表达率高于模型组(P＜0.01).结果表明揉髌手法治疗可以降低实验兔膝关节软骨细胞凋亡率及提高增殖细胞核抗原表达率.     

兔膝关节软骨细胞的分离培养及形态学特征

背景:软骨细胞是软骨破坏过程中的靶细胞,也是分泌炎性细胞因子的主要细胞之一,体外分离培养骨关节炎软骨细胞存在难度.目的:对兔膝关节软骨细胞进行分离和培养,观察兔软骨细胞的形态学特性.方法:4周龄新西兰白兔采用机械-酶消化法,通过调整胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶的浓度及消化时间来获得较纯的关节软骨细胞,传代培养.通过倒置相差显微镜下观察细胞形态、绘制生长曲线、苏木精-伊红染色、阿利新蓝染色及Ⅱ型胶原免疫荧光染色对细胞进行鉴定.结果与结论:原代培养的软骨细胞以多角形或三角形为主,传代3次后出现反分化.形态学、免疫荧光染色显示细胞培养3代以内可以保持表型的稳定,90%以上的软骨细胞维持多角形或三角形,核为圆形或椭圆形.苏木精-伊红阳性染色为细胞核呈紫蓝色,软骨细胞基质红染,胞浆及细胞周围有紫红色、阿利新蓝染色可见细胞浆和胞膜呈深蓝色、Ⅱ型胶原免疫荧光染色可见胞浆和胞膜清晰绿色荧光,细胞核区域未见明显绿色荧光.结果提示,实验成功建立了软骨细胞分离、培养体系,且3代以内90%以上的软骨细胞生长良好.     

γ-射线诱导Jurkat细胞凋亡过程中催乳素对Bcl-2及Bax表达的调节

背景：国内外文献表明．催乳素可通过调节细胞内凋亡相关蛋白的表达促进免疫细胞增殖并抑制细胞凋亡。目的：拟验证催乳素是否能通过调节T细胞Bax和Bcl-2的表达来影响Jurkat细胞凋亡。设计、时间及地点：以细胞为对象的对比观察实验，于2006—07／2007—05在新乡医学院免疫学实验室完成。材料：人白血病T细胞株Jurkat细胞为上海生工产品，人催乳素为sigma公司产品。方法：以10Gyγ-射线照射Jurkat细胞建立细胞凋亡模型。在射线照射前30min内，于模型中分别加入20μg/L．300μg/L和1000μg／L的人催乳素进行干预，同时设不含人催乳素的对照组，以及不进行辐射处理且不加催乳素的正常组。于辐射后的0，24，48h收集细胞。主要观察指标：以四甲基偶氮唑盐法检测Jurkat细胞的增殖情况；以流式技术检测细胞凋亡情况；以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞凋亡DNA：以Western Blot法检测Jurkat细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达水平。结果：①在γ射线处理后24和48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg/L催乳素组和正常组的细胞数量明显增多（P〈0．01）。②在细胞经Y-射线处理后48h，与对照组比较，300μg／L和1000μg／L催乳素组和正常组细胞凋亡率显著降低（P〈0．05）。③在γ-射线处理后的24和48h，与对照组比较，各质量浓度催乳素组Bcl-2／β-actin灰度比值均明显升高（P〈0．01）；300μg/L和1000μg/L催乳素组Bax／β-actin灰度比值明显降低（P〈0．01）。结论：在γ-射线诱导的Jurkat细胞凋亡过程中，催乳素可通过提高Bcl-2的表达并下凋Bax的表达，来抑制Jurkat细胞凋亡。     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞系HepG2的凋亡诱导作用及其发生机制。方法体外培养HepG2细胞,用不同浓度的As2O3对HepG2细胞进行干预;采用MTT、Annexin V/PI双染及TUNEL法,观察其对HepG2细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;采用流式细胞术定量检测凋亡相关蛋白Bcl-2与Bax表达的变化。结果 As2O3在体外能明显抑制HepG2细胞生长,具有时间剂量依赖关系。Annexin V/PI双染及TUNEL法结果显示:5～20μmol/L的As2O3作用24h均可诱导HepG2细胞凋亡,且呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=-2.96、-4.15、-7.33,P均<0.05);As2O3作用HepG2细胞24h时Bcl-2表达下降,Bax表达上升,Bcl-2/Bax比值降低,呈剂量依赖性,差异均有统计学意义(t分别=3.59、5.65、6.94、7.62、7.92,P均<0.05)。结论一定浓度的As2O3能抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

体外冲击波对兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:探讨体外冲击波(extracorporeal shock wave,ESW)对兔膝骨性关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞凋亡的影响.方法:18只新西兰兔,根据是否给予前交叉韧带(ACL)离断和ESW干预分为3组(n=6):空白对照组;ACL组;ESW+ACL组.ESW干预8周后,观察膝关节大体情况,并应用DAPI、TUNEL、Annexin V-FITC/PI双标流式细胞术三种方法检测对软骨细胞凋亡的影响.结果:DAPI和TUNEL法观察到凋亡软骨细胞主要集中在浅表层、中间层,而Annexin Ⅴ-FITC/PI双标法显示ACL+ ESW组有(10.240±0.760)％的软骨细胞凋亡,而ACL组有(17.465±0.621)％的软骨细胞凋亡,两组差异具有统计学意义.结论:ESW可抑制兔膝OA软骨细胞凋亡,减轻对关节软骨破坏,可作为治疗OA的新途径,为临床应用ESW治疗OA提供参考.     

缺血再灌流股骨头骺影响关节软骨细胞的凋亡☆

背景：缺血再灌注后可以引起关节软骨的退行性变化,但其中具体机制尚无公识。目的：观察发育期髋关节股骨头骺关节软骨及缺血再灌注后关节软骨的退行性变化及其细胞凋亡现象。方法：80只 SD 大鼠随机分为2组,缺血再灌注组建立髋关节缺血再灌注实验动物模型,假手术组开腹暴露腹主动脉5 min 常规关腹。于模型建立后6 h,12 h,24 h,48 h,5 d,2周,4周不同时点对股骨头骺关节软骨进行光镜病理形态学观察,同时对标本进行 TUNEL 法检测股骨头骺关节软骨细胞凋亡现象。结果与结论：缺血再灌注组术后光镜观察到软骨细胞变性、减少、基质可见局限性纤维化等关节软骨退行变化,两组 TUNEL 法检测均观察到关节软骨细胞的凋亡现象,假手术组偶见有散在分布5个以下的软骨细胞凋亡,缺血再灌注组观察到48 h 可见10-30个软骨细胞发生凋亡。结果提示,缺血再灌注对髋关节股骨头骺关节软骨可引起退行性改变,发育期髋关节缺血再灌注后关节软骨的细胞凋亡可能参与关节软骨的损害,抑制关节软骨的细胞凋亡可能有助于防治早发的骨关节炎。     

葛根素对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的:探讨葛根素(puerarin)对心力衰竭(心衰)大鼠心肌细胞的凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法:20只健康雄性SD大鼠,随机分为对照组和实验组,每组10只。采用缩窄腹主动脉构建大鼠心衰模型,8周后,实验组大鼠每日腹腔内注射葛根素0.02g/kg,对照组大鼠每日腹腔内注射生理盐水5mL/kg,连续30d后断头法处死大鼠,取心肌组织,分别采用末端标记法(TUNEL法)检测心肌细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡百分率,透射电镜观察心肌细胞凋亡的形态学特征,对凋亡相关Bcl-2与Bax蛋白表达的变化进行定性与定量检测。结果:实验组较对照组凋亡指数和凋亡百分率显著降低,实验组Bcl-2表达明显上升,Bax表达则明显下降,差异有显著意义(P<0.05)。结论:葛根素具有抗心肌细胞凋亡的作用,其机制可能与调控Bcl-2、Bax表达有关。     

软骨细胞凋亡与骨性关节炎

骨关节炎（Osteoarthritis,OA）是人类最常见的一种关节疾病,是以关节软骨退行性变和关节周围继发性骨质增生为病理特征的慢性进行性骨关节病。多见于中老年人,女性多于男性。患者主要表现疼痛、僵硬等,给患者带来较大的痛苦,严重影响患者的生活质量。随着人口老龄化进程的加速,这一问题日益突出。但是,由于OA的病因和发病机制尚未完全阐明,目前还缺乏特异性的治疗手段。     

Bcl-2、Bax与气道上皮细胞凋亡的研究进展

细胞凋亡抑制基因(Bcl-2)、Bax是Bcl-2基因家族分别抑制和促进气道上皮细胞凋亡的结构相似、作用相反的一对胞内蛋白质,其比值决定细胞凋亡抑制作用强弱及气道上皮细胞凋亡的发生、发展方向.本文综述了Bcl-2、Bax基因及相关蛋白的特点,Bcl-2蛋白可能通过稳定线粒体膜发挥基质金属蛋白酶(MMP)的抑制效应抗气道上皮细胞凋亡,Bax作用于线粒体增加其外膜通透性促进气道上皮细胞凋亡及二者相互作用调节气道上皮细胞凋亡的机制.     

严重颅脑损伤后细胞凋亡状态及相关基因Bcl-2、Bax的表达

目的 探讨严重颅脑损伤后Bel-2、Bax基因表达与细胞凋亡的关系。方法 采用改进的Feeney自由落体损伤模型，应用分子生物学方法——脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal-deoxynucleofidyl transferase mediated nick end labeling，TUNEL)以及免疫组织化学方法，对50只严重颅脑大鼠脑组织中的凋亡细胞和Bel-2、Bax免疫反应阳性的细胞进行观察、统计。结果 损伤组大鼠脑组织中凋亡细胞数明显高于未损伤组，Bel-2、Bax表达也有所增加，同时，损伤组Bax／Bel-2阳性细胞数的比值明显大于未损伤组。结论 Bel-2和Bax表达的比例对严重颅脑损伤后细胞凋亡可能起重要的调控作用。     

苯那普利对糖尿病大鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响

目的 探讨血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）对糖尿病肾病发生、发展的影响及其作用机制。方法 在单侧肾切除的大鼠腹腔注射链尿佐菌素（STZ）、诱发糖尿病模型,每日灌胃给予ACEI苯那普利（10mg/kg),共12周。采用原位末端标记法检测肾细胞凋亡情况,流式细胞术检测肾皮质Bax和Bcl-2表达,并观察血糖及尿蛋白、BUN、Ccr等反映肾功能的有关指标。结果 糖尿病组较对照组肾小球、肾小管凋亡细胞数明显增多,Bax和Bcl-2蛋白表达增强,Bax/Bcl-2增高;苯那普利治疗组较糖尿病组凋亡细胞数减少,Bax表达减弱,Bcl-2表达增强,Bax/Bcl-2降低。结论 苯那普利可能通过影响凋亡相关基因Bax和Bcl-2表达而抑制肾脏细胞凋亡,从而发挥肾脏保护作用。     

苯纳普利对大鼠残肾模型肾脏细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的　探讨血管紧张素转换酶抑制剂 (ACEI)对肾脏病变渐进性发展过程中细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　SD大鼠 5 /6肾切除后 ,每日灌胃苯纳普利 ( 10mg/kg) 12周 ,采用流式细胞术 ,TUNEL和免疫组织化学技术检测肾脏细胞凋亡及Bcl 2、Bax表达情况。结果　肾切除组细胞凋亡及Bcl 2、Bax表达均高于假手术组 ;苯那普利治疗组细胞凋亡减少 ,Bax表达减弱 ,Bcl 2表达增强。结论　苯纳普利能抑制肾脏病变进展过程中的细胞凋亡 ,影响凋亡相关基因可能是其作用途径之一。     

ARDS患者肺组织Bax和Bcl-2表达的变化及意义

目的　探讨Bax和Bcl- 2表达的变化在ARDS发病中的作用 ,试图为进一步阐明ARDS的发病机制和在细胞凋亡水平防治本病提供理论依据。方法　ARDS组 9例 ,对照组 5例 ,采用TUNEL法以及免疫组化技术观察ARDS患者肺组织细胞凋亡及Bax和Bcl- 2表达的变化。结果　ARDS急性期患者肺组织细胞凋亡率较对照组明显增加 ,且主要表现为肺泡上皮和肺血管内皮细胞凋亡增加 ;Bcl- 2表达ARDS组和对照组无显著差异 ,Bax在ARDS急性期患者肺组织表达明显上调 ,并且Bax表达的增加与肺组织细胞凋亡增加呈平行关系。结论　肺泡上皮和肺血管内皮细胞凋亡改变和Bax/Bcl- 2表达的变化可能参与临床ARDS急性期的发病。     

腺苷预处理对缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响

目的 研究腺苷预处理对大鼠缺血/再灌注心肌细胞凋亡和凋亡蛋白Bcl-2/Bax的影响.方法 制备缺血/再灌注损伤(I/R)和腺苷预处理的大鼠模型,采用流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率和凋亡蛋白Bcl-2和Bax.结果 ①缺血/再灌注组和腺苷组心肌细胞凋亡率均显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组凋亡率显著低于缺血/再灌注组(P<0.01).②缺血/再灌注组抗凋亡蛋白Bcl-2表达与对照组比较无明显差别,而腺苷组Bcl-2显著高于缺血/再灌注组和对照组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组促凋亡蛋白Bax表达显著高于对照组(P<0.01),而腺苷组Bax低于缺血/再灌注组(P<0.01);缺血/再灌注组和腺苷组Bcl-2/Bax比值显著低于对照组(P<0.01),而腺苷组Bcl-2/Bax比值显著高于缺血/再灌注组(P<0.01).结论 腺苷预处理明显抑制大鼠缺血/再灌注后心肌细胞的凋亡,并使Bcl-2/Bax比值增加.     

肾移植急性排斥反应时Bcl-2/Bax及Fas/FasL蛋白表达的变化

背景：在器官移植急性排斥反应过程中，靶细胞的凋亡被认为是移植物功能丧失的主要作用途径之一。细胞凋亡受一系列分子调控，其中Bcl-2家族起着决定性作用；Fas系统介导的细胞凋亡亦在移植免疫中起十分重要的作用。 目的：分析移植肾发生急性排斥反应时Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白表达规律与急性排斥反应预后的关联。 设计、时间及地点：观察对比实验，于2002／2005在解放军总医院第二附属医院器官移植中心完成。 对象：收集肾移植术后发生急性排斥反应的移植肾穿刺活检蜡块标本30例；另选同期20例无明显排斥反应表现肾移植患者的移植肾穿刺活检蜡块标本作为对照组。 方法：应用免疫组织化学方法检测移植肾急性排斥反应穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平，并与对照组进行对比。 主要观察指标：急性排斥组和对照组移植肾穿刺活检标本中Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白的表达水平。结果：①Bcl-2／Bax，Fas／FasL蛋白主要在肾小管上皮细胞中表达。②两组肾小管上皮细胞中Bcl-2表达水平差异无显著性意义（P〉0．05），急性排斥反应组肾小管上皮细胞中Bax，Fas及FasL蛋白表达水平均高于对照组（P〈0．05）。结论：在肾移植急性排斥反应中Bcl-2家族可能参与调控细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤；Fas及FasL可能直接参与移植肾急性排斥反应，造成肾小管上皮细胞凋亡，引起移植肾免疫损伤。     

人参皂甙Rb1对肺缺血-再灌注损伤细胞凋亡及其调控基因表达的影响

目的:探讨人参皂甙Rb1对肺缺血再灌注(I/R)损伤细胞凋亡及其调控基因Bcl2、Bax表达的影响。方法:应用兔单肺原位热I/R模型,将24只健康家兔随机分为假手术组(S组)、I/R组及人参皂甙Rb1治疗组(Rb1组);I/R组行左肺缺血60min、再灌注120min,Rb1组在行左肺I/R前静脉给予人参皂甙Rb120mg/kg。应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测肺凋亡细胞,免疫组化法检测Bcl2、Bax基因表达,并利用图像分析系统进行定量分析。结果:I/R组及Rb1组细胞凋亡指数(AI)均明显高于S组(P均<0.01),Rb1组AI较I/R组明显降低(P<0.01)。I/R组及Rb1组Bcl2、Bax表达均较S组显著增加(P均<0.01),Rb1组Bcl2表达虽高于I/R组,但差异无显著性(P>0.05);Rb1组Bax表达明显低于I/R组(P<0.05)。Rb1组Bcl2/Bax比值显著高于I/R组(P<0.05),与S组较接近。结论:人参皂甙Rb1能抑制肺I/R的促凋亡基因Bax表达,但不影响抑制凋亡基因Bcl2表达的上调,可使Bcl2/Bax比值增加,从而减少细胞凋亡,减轻肺I/R损伤。