apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖

背景:结合课题组以往研究成果,提出caveolae可能参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖的假设。目的:实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与G蛋白偶联受体APJ的内源性配体apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用。方法:采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成。结果与结论:①caveolae结构破坏剂β-环糊精(5mmol/L,25h)可明显增强apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖。②apelin-13(0,1,2,4,8μmol/L)刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1的表达下调,在1μmol/L时下调明显。③β-环糊精(5mmol/L)破坏caveolae后,可使apelin-13下调caveolin-1表达的作用增强。④对照组(体积分数为0.1%胎牛血清孵育)及处理组(apelin-13刺激)caveolin-1与PI3K及ERK1/2均有复合物形成,在apelin-13刺激的情况caveolin-1-PI3K复合物减少、caveolin-1-ERK1/2复合物减少,即apelin-13可能促进caveolin-1与PI3K及ERK1/2解离。结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae参与apelin-13促血管平滑肌细胞增殖作用。     

PI3K/AKT/FKHRL1信号通路对CXLCl6诱导的平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨PI3K/AKT/FKHRL1信号转导通路在CXCL16诱导的血管平滑肌增殖中的作用。方法 运用细胞计数法及MTT法检测CXCL16对于平滑肌细胞增殖的影响;免疫组化法观察CXCL16对PI3K/AKT/FKHRL1信号转导通路的作用,同时观察PI3K/AKT抑制剂LY294002对CXCL16诱导的上述变化的影响。结果 CXCL16可明显诱导平滑肌细胞增殖,作用高峰时间在第4天,并且可增加磷酸化AKT及磷酸化FKHRL1的表达。PI3K/AKT阻断剂LY294002可明显抑制CXCL16诱导的平滑肌增殖,同时下调磷酸化AKT及磷酸化FKHRL1的表达。结论 CXCL16可能是通过激活平滑肌细胞的AKT通路,诱导AKT及FKHRL1的磷酸化,从而影响平滑肌细胞的增殖。LY294002可以阻断PI3K/AKT/FKHRL1通路而抑制CXCL16诱导的平滑肌细胞增殖。     

p27和p57蛋白在血小板源生长因子BB刺激下血管平滑肌细胞增殖过程中的表达

目的：观察不同剂量的血小板源生长因子BB刺激对血管平滑肌细胞生长率的影响及血管平滑肌细胞不同增殖程度下p27和p57蛋白表达量的变化。方法：实验于1998-09／2000-05在南方医科大学附属南方医院心内科实验室完成。①选用七八周雄性SD大鼠80只，体外分离SD大鼠主动脉中层平滑肌，贴壁法培养平滑肌细胞，选用2～4代培养的细胞。②胰酶消化的血管平滑肌细胞，浓度为1&;#215;10^8L^-1，分别接种于6孔板上，无血清的培养基静止48h，分别加入血小板源生长因子BB10和20μg／L，无血清的培养基为对照组，分别在刺激1，3，5d后，计算不同剂量的血小板源生长因子BB刺激下的血管平滑肌细胞数量。每组重复4次，取平均值。③在用血小板源生长因子BB10和20μg/L刺激6，12，24h后收集细胞，用免疫印迹分析法检测细胞中p27和p57蛋宴表达量。结果：①血管平滑肌细胞数量：血小板源生长因子BB刺激1和3及5d后血小板源生长因子BB10和20μg／L组明显高于对照组（t=4．06-21．76，P〈0．05-0．01）。②血管平滑肌细胞中p27蛋白表达量（A值）：血小板源生长因子BB刺激12和24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L．几组明显低于对照组（P〈0．05，0．01），血小板源生长因子BB20μg/L组明显低于血小板源生长因子BB10μg/L组（P〈0．01）。p57蛋白表达量（A值）：血小板源生长因子BB刺激24h后血小板源生长因子BB10和20μg/L组明显高于对照组（P〈0．01），血小板源生长因子BB20μg/L．几组明显高于血小板源生长因子BB10μg/L组（P〈0．01）。结论：①在血小板源生长因子BB刺激的血管平滑肌细胞增殖过程中，p27和p57蛋白表达量变化不同。②在增殖的血管平滑肌细胞中随刺激因子作用时间的延长，表达量逐渐下降，而p57蛋白表达水平随血管平滑肌细胞的增殖而增加，p27蛋白表达量的变化可能是决定血管平滑肌细胞增殖的关键因素。     

脑源性神经营养因子通过AKT和ERK1/2信号通路诱导内皮细胞血管生成

本研究探讨脑源性神经营养因子（BDNF）促进血管新生的作用及其参与的信号通路,为抗肿瘤血管生成的研究提供新的实验依据。以人脐静脉内皮细胞为对象,采用Western blot方法检测细胞内磷酸化Akt、ERK1/2蛋白质的表达;采用Transwell小室迁移实验和管腔形成实验评价体外内皮细胞血管新生的能力,MTT法检测内皮细胞增殖活性,FITC-Annexin-Ⅴ/PI双染流式细胞术分析细胞调亡。结果表明：BDNF以时间依赖性的方式激活PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路。应用PI3K激酶抑制剂Ly294002、MEK1激酶抑制剂PD98059可以明显阻断BDNF对PI3K/Akt、MEK1/ERK信号通路的激活。100ng/ml的BDNF体外促内皮细胞血管新生能力与25ng/ml血管内皮生长因子（VEGF）相当,其中BDNF诱导的细胞迁移分别被Ly294002和PD98059阻断,其抑制率分别约为74%和36%;同样,Ly294002、PD98059可部分阻断BDNF诱导的小管形成效应,其阻断率分别约57%和37%;而BDNF的促增殖效应仅被PD98059拮抗,抑制凋亡效应仅受Ly294002影响。结论：BDNF在体外有促血管新生的作用。PI3K/Akt和MEK1/ERK信号通路以不同机制共同调节这一过程,其中PI3K/Akt信号通路起着更为重要的调节作用。     

高糖对HSkMCs细胞株AT1R、mfn2mRNA表达的影响

目的探讨骨骼肌局部肾素血管紧张素系统（RAS）在高糖状态的变化及对线粒体融合蛋白2（mfn2）基因表达的影响。方法体外培养人骨骼肌细胞（HSkMC）,分为不同浓度葡萄糖组进行培养：5.55mmol/L组,11.1mmol/L组,22.2mmol/L组,分别培养48h,应用RT-PCR检测各组的血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）、mfn2基因表达。结果以5.55mmol/L组作为基础对照组,11.1mmol/L组、22.2mmol/L组AT1R mRNA表达均较对照组增加（P〈0.05）,而mfn2基因表达则下降（P〈0.05）。结论高糖能诱导骨骼肌细胞AT1RmRNA表达上调,mfn2mRNA表达下调,且呈剂量依耐性。     

姜黄素介导的光动力疗法通过PI3K/AKT信号通路对PDGF-BB诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察姜黄素（CUR）介导的光动力疗法（PDT）通过磷酸酰肌醇3-激酶（PI3k）/丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）信号通路对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)诱导的血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响及其可能的作用机制。 方法 分别选取大鼠胸主动脉平滑肌细胞系（A7R5）和小鼠主动脉平滑肌细胞系（MOVAS）进行平行实验,选择20 μg/L的PDGF-BB诱导VSMCs增殖。将培养好的VSMCs分为对照组、PDGF-BB组、姜黄素组、光动力组,其中光动力组再根据照射剂量的不同,又分为低剂量光动力组（照射60 s）、中剂量光动力组（照射120 s）、高剂量光动力组（照射180 s）,共3个亚组。对照组不予任何刺激,PDGF-BB组饥饿过夜后加入含20 μg/L的PDGF-BB的新鲜培养基刺激24 h,姜黄素组先给予与PDGF-BB组相同的干预,然后换液加入含20 μmol/L CUR的新鲜培养基刺激6 h,光动力组先给予与姜黄素组相同的干预,再换液后采用425 nm激光对光动力组各亚组进行对应时长的激光照射。采用细胞活力检测法（CCK8）检测光动力组中不同激光剂量照射后,VSMCs的存活率;然后采用5-乙炔基-2′-脱氧尿苷（EDU）阳性标记率法检测4组细胞的增殖活性,采用流式细胞术对4组细胞进行细胞周期检测,采用Western blot法检测PI3K/AKT通路相关磷酸化蛋白和细胞增殖核蛋白（PCNA）的表达水平。 结果 经CCK8法检测,本研究选择120 s作为激光照射的最佳剂量。干预后,中、高剂量光动力组的细胞存活率与PDGF-BB组比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。光动力组增殖的阳性细胞比例显著低于PDGF-BB组,差异有统计学意义（P＜0.05）。光动力组细胞在G0/G1期的比例明显低于对照组（P＜0.01）,而在G2/M期的比例则明显高于对照组和PDGF-BB组（P＜0.01）。光动力组增殖细胞核抗原（PCNA）、PI3K/AKT通路磷酸化蛋白的表达较PDGF-BB组显著下降,差异均有统计学意义（P＜0.01）。 结论 CUR介导的PDT可抑制PDGF-BB诱导下的血管平滑肌细胞的增殖,其机制可能与CUR介导的PDT可下调PI3K/AKT通路相关磷酸化蛋白表达水平有关。     

蟾蜍灵诱导K562细胞分化和凋亡过程中WT1表达的下调

目的：研究蟾蜍灵在诱导K562细胞分化和凋亡中对WT1基因的凋节作用。方法：采用锥虫蓝拒染法测定细胞增殖活力；采用形态学观察、流式细胞术分析和NBT还原试验检测细胞分化和细胞凋亡；采用Western blot和RT－PCR检测WT1蛋白和mRNA的表达。结果：（1）蟾蜍灵抑制K562细胞的增殖，24，48和72h的IC50分别为0．026，0．032和0．006μmol/L。（2）蟾蜍灵浓度在0．01－0．05μmol/L可明显诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化，大于0．260μmol/L 时可明显诱导细胞凋亡。（3）细胞分化早期和细胞凋亡发生前，蟾蜍灵明显下调K562细胞WT1 mRNA和蛋白的表达。结论：蟾蜍灵诱导K562细胞向单核／巨噬细胞分化和细胞凋亡可能与其对WT1的下调有关。     

血管平滑肌细胞增殖与p21基因启动子甲基化的影响

背景：血管平滑肌细胞增殖、迁移及表型改变是动脉粥样硬化发生的中心环节,一系列相关基因的甲基化参与该过程。目的：观察血管平滑肌细胞p21基因启动子甲基化对其增殖活性的影响。方法：采用组织贴块法培养人脐血管平滑肌细胞,给予不同质量浓度氧化低密度脂蛋白（0,10,20,40 mg/L）孵育24 h,甲基化特异PCR检测p21基因启动子区CpG岛甲基化程度,反转录PCR检测p21 mRNA表达,MTT比色法测定血管平滑肌细胞增殖活性。结果与结论：氧化低密度脂蛋白呈浓度依赖性促进p21启动子甲基化和降低p21 mRNA表达,同时平滑细胞增殖活性增高。提示氧化低密度脂蛋白可以通过p21基因甲基化促进血管平滑肌细胞增殖,p21基因甲基化可能在动脉粥样硬化发生中起到一定作用。     

15脱氧前列腺素J2对同型半胱氨酸诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的：探讨15脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）对同型半胱氨酸（Hcy）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的抑制作用和对细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）的作用。方法：用不同浓度的Hcy和15d-PGh对大鼠VSMCs进行刺激，以^3H-TdR掺入方法观察15d．PGJ2对Hcy诱导大鼠VSMCs增殖的抑制作用，以Western印迹方法分析ERK1/2蛋白表达和ERK1/2磷酸化水平。结果：15d-PGh可明显抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖，但对Hcy诱导的ERK1/2磷酸化无明显作用。结论：15d-PGJ2可能通过MAPK／ERK1/2信号途径的下游步骤抑制Hcy诱导的大鼠VSMCs增殖。     

辛伐他汀对人急性单核细胞白血病SHI-1细胞PI3K/AKT通路的影响

本研究探讨羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶抑制剂辛伐他汀对人急性单核细胞白血病株(SHI-1)细胞增殖和凋亡的影响及PI3K/AKT通路变化。取对数生长期细胞,实验分为阴性对照组和辛伐他汀处理组(终浓度分别为5、10、15μmol/L),培养24、48、72 h。采用MTT法观察SHI-1细胞增殖能力;流式细胞术测定SHI-1细胞凋亡指标变化;PCR芯片研究SHI-1细胞PI3K/AKT通路84个特异性基因mRNA的差异表达。结果表明,辛伐他汀对SHI-1细胞有明显抑制增殖和促凋亡作用,呈时间与剂量依赖性。15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞24、48、72h,细胞增殖抑制率分别为26.82%、47.09%、63.92%,细胞早期凋亡率分别为5.73%、13.25%、15.59%。与对照组相比,15μmol/L辛伐他汀处理SHI-1细胞48 h组中有39个基因表达发生改变,其中26个基因表达下调、13个基因表达上调。结论:辛伐他汀能抑制SHI-1细胞增殖并诱导其凋亡,其诱导凋亡机制可能与辛伐他汀调节PI3K/AKT通路相关基因的表达有关。     

腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡

背景：外源性受体活性修饰蛋白1基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用。目的：探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响。方法：分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1组、空病毒组和对照组。结果与结论：腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72h表达最强,感染率达80%,96h时仍有绿色荧光蛋白表达。人受体活性修饰蛋白1组的受体活性修饰蛋白1蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义（P〈0.05）。提示人受体活性修饰蛋白1基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡。     

洛伐他汀对血管内皮细胞与平滑肌细胞增殖调节作用的对比实验研究

目的探讨洛伐他汀对人血管内皮细胞与平滑肌细胞的调节作用及其调节差异性。方法配制含不同浓度洛伐他汀的培养基f0、0．001、O．01、0,1、1、10μmol／L）,分别于96孔板中进行人脐静脉内皮细胞（HUVECs）与血管平滑肌细胞（VSMCs）培养,在培养24、72、120h后以MTT法对两种细胞进行细胞活性及增殖情况评估。结果培养24h,0．1μmol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养72h,1斗mol／L的洛伐他汀对HUVECs存在明显的促进增殖作用;培养120h后,O．001、0．01、0．1、1μmol／L的洛伐他汀与对照组相比HUVECs增殖活性无明显差异,10μmol／L的洛伐他汀表现出明显的增殖抑制作用。培养24h和120h,各浓度组洛伐他汀对VSMCs的增殖无显著调节作用;培养72h,0．001、0．01、1、10μmol／L的洛伐他汀对VSMCs的增殖存在部分抑制作用,未发现剂量相关规律性。结论洛伐他汀对人血管内皮细胞增殖存在双向调节作用,与浓度相关。体外浓度0.1、1μmol／L时可以表现出明显的促进增殖作用,浓度达10μmol／L时则表现出抑制作用。相同浓度下,洛伐他汀无促进VSMCs增殖的作用,并且存在部分抑制VSMCs增殖的作用。     

两种砷化物诱导胰岛细胞的凋亡

背景：近年有流行病学调查显示砷暴露与糖尿病发病相关。目的：实验从砷导致胰岛β细胞凋亡的机制入手,阐明砷化物相关糖尿病的致病机制。方法：将砷酸氢二钠（Na2HAsO 4·7H2O,iAs5＋,50,100,200μmol/L）和二甲基胂酸钠（C2H6AsNaO2·3H2O,DMA5＋,100,200,400μmol/L）分别作用于大鼠胰岛细胞株（INS-1细胞）24 h或48 h。通过MTT法检测砷化物对胰岛细胞的毒性作用。用Annexin V-FITC/PI和Hoechst 33258染色法检测两种砷化物致细胞凋亡情况。用2’,7’-二氢二氯荧光素染色检测细胞内活性氧的含量,用Western blot检测细胞内P53的蛋白含量变化。结果与结论：砷酸氢二钠（〉50μmol/L）、二甲基胂酸钠（〉100μmol/L）均降低大鼠胰岛β细胞的细胞存活率（P〈0.05,P〈0.01）;砷酸氢二钠（50-200μmol/L）和二甲基胂酸钠（100-400μmol/L）作用于大鼠胰岛β细胞48 h后,细胞发生凋亡。砷酸氢二钠、二甲基胂酸钠暴露24 h引起大鼠胰岛β细胞内活性氧水平呈剂量依赖性升高（P〈0.05,P〈0.01）。经砷酸氢二钠染毒的胰岛β细胞的细胞核内P53蛋白表达增多（P〈0.05,P〈0.01）,而经二甲基胂酸钠染毒的大鼠胰岛β细胞的细胞核内P53蛋白表达差异无显著性意义。结果说明,两种砷化物砷酸氢二钠、二甲基胂酸钠均可引起胰岛β细胞凋亡,可能与砷所致活性氧水平增高有关。     

PI3K与ERK1/2信号传导通路在吡格列酮保护大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制

目的研究PI3K与ERK1/2信号传导通路在吡格列酮介导大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用机制。方法取一日龄Wistar大鼠乳鼠心室肌细胞进行体外培养,建立缺血再灌注损伤模型。分正常对照组(Co组)、缺血再灌注组(Ⅰ组)、Ⅰ组+吡格列酮预处理组(Pi组)、Pi组+PI3K特异性抑制剂LY294002组(Pi+LY组)。采用免疫细胞化学法检测细胞内ERK1/2、p-ERK1/2的分布与变化,Western-bloting检测细胞内p-ERK1/2蛋白表达水平变化。结果免疫细胞化学法结果显示各组ERK变化不大(P>0.05);免疫细胞化学法和Western-bloting结果显示Pi组p-ERK1/2的表达水平高于Ⅰ组(P<0.05),此变化被LY294002抑制(P<0.05);Ⅰ组p-ERK1/2的表达比Co组多,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论吡格列酮通过PI3K/ERK1/2信号通路对大鼠心肌缺血再灌注损伤起保护性作用。     

参麦注射液对人气道平滑肌细胞增殖的影响

目的：探讨参麦注射液（SMI）对人气道平滑肌细胞（HASMCs）细胞外信号调节激酶（ERK）表达的影响及SMI与ERK、细胞增殖的关系。方法：将体外培养的HASMCs随机分为对照组和参麦干预组,采用Western-blot检测磷酸化的细胞外信号调节激酶（p-ERK）蛋白的表达,采用流式细胞术观察细胞的周期,四甲基偶氮唑盐（MTT）微量比色分析法检测细胞的增殖,免疫细胞化学技术检测增殖细胞核抗原（PCNA）的表达,以观察参麦注射液对培养的HAMSCsERK表达及增殖的影响。结果：参麦干预组p-ERK蛋白的表达下降,参麦可显著降低HASMCs吸光度值及PCNA的表达,并使增殖期（S＋G2M期）细胞数显著减少（均P〈0.05）。结论：SMI通过剂量依赖效应抑制HAMSCs的ERK信号传导途径,从而阻止气道平滑肌细胞增生和气道重塑。     

原发性高血压患者血清apelin-13与脂联素的相关性研究

[目的] 观察原发性高血压（EH）患者和健康人血清脂肪细胞因子apelin-13和脂联素（APN）水平及两者之间的相关性.[方法] 选取EH患者32例和健康人32例,用酶联免疫吸附法测定两组血清apelin-13和APN水平.[结果] ①EH患者血清apelin-13和APN浓度显著低于健康对照组[（17.61±6.52）pg/mL vs （29.58±15.19）pg/mL （197.55±54.48）μg/L vs （248.29±35.32）μg/L,均（P〈0.01）] ②经多元线性回归分析显示,EH患者血清apelin-13与收缩压呈显著负相关（r=-4.616,P〈0.01）,与APN呈正相关（r=2.480,P〈0.05）.[结论] EH患者血清apelin-13水平降低,并与APN呈正相关.     

氯沙坦对血管紧张素Ⅱ促原代急性髓系白血病增殖的拮抗作用及机制研究

目的:探讨血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)拮抗剂氯沙坦抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)介导的原代急性髓系白血病(AML)细胞的增殖作用及机制。方法:MTT法观察AngⅡ对原代AML细胞、正常骨髓单个核细胞增殖的影响以及氯沙坦和AT2R拮抗剂PD123319对AngⅡ促原代AML细胞增殖的拮抗作用:Elisa法检测氯沙坦对血管紧张素II作用下原代AML分泌MMP-9的影响。结果:AngII能剂量和时间依赖性促进原代AML细胞增殖(P0,05),而对正常骨髓无此作用;氯沙坦随浓度和时间依赖性阻断AngII作用下白血病细胞增殖(P《0.05);氯沙坦能明显下调AngII增加原代AML细胞MMP-9的分泌(P0.05)。结论:氯沙坦通过抑制MMP-9分泌阻断AngII/AT1R介导的白血病细胞增殖。     

YC-1对Aβ寡聚体毒性的保护作用及其相关机制

目的:探讨YC-1针对Aβ寡聚体(ADDLs)毒性的保护作用及其相关机制。方法:原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系,应用不同浓度ADDLs(500 nmol/L、1μmol/L、2μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)干预以模拟体外AD模型,应用YC-1对此模型进行干预,以CCK-8法检测细胞活力,Western blot检测NICD及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)水平,采用real-time PCR检测Caspase-3 mRNA水平。结果:浓度≥2μmol/L的ADDLs干预明显降低混合培养体系细胞活力水平,并呈现浓度依赖性(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h显著降低细胞活力(P<0.01),YC-1可明显拮抗这种毒性作用(P<0.01)。10μmol/L ADDLs持续干预4 h明显上调NICD及HIF-1α水平(P<0.01),YC-1可拮抗这种提高(P<0.05或0.01)。10μmol/L ADDLs干预4 h显著提高Caspase-3的mRNA水平(P<0.01),YC-1可显著抑制这种上调(P<0.05)。结论:ADDLs表现出对原代培养小鼠皮质神经元及星形胶质细胞混合培养体系的毒性作用,YC-1可发挥保护作用。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。