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相似文献
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1.
背景:自发性狼疮鼠模型不能对基因以外其他的致病因素进行研究。目的:以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫小鼠后诱导狼疮鼠模型。方法:选取4~6周SPF级Balb/c小鼠30只,等分为3组。V1组肌肉注射提取的同系Balb/c小鼠核蛋白,间隔3周免疫1次,共免疫4次;V2组注射等体积PBS;V3组为正常对照。检测小鼠末次免疫后3周的24h尿蛋白、血清抗核抗体、抗双链DNA抗体、小鼠肾脏直接免疫荧光。结果与结论:V1组小鼠24h尿蛋白、血清抗双链DNA抗体、抗核抗体均明显高于V2组、V3组,且V1组小鼠肾小球有免疫球蛋白G免疫复合物沉积,可见肾小球轮廓,V2组、V3组未见肾小球轮廓,只见非特异性的微弱荧光。说明以同基因背景Balb/c小鼠核蛋白免疫Balb/c小鼠能够成功诱导狼疮鼠模型。  相似文献   

2.
背景:目前有关脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮的免疫抑制作用及对各个脏器的影响报道较少。目的:探讨脐带间充质干细胞治疗MRL/lpr狼疮鼠的疗效及对免疫系统和各个脏器的影响。方法:MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组、环磷酰胺组、环磷酰胺+脐带间充质干细胞组、脐带间充质干细胞组。对照组给以生理盐水,其他各组分别给予相应的治疗。采用考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白定量;酶联免疫吸附法检测白细胞介素10、白细胞介素17、干扰素γ、PDGF、抗ds-DNA抗体;间接免疫荧光法检测抗核抗体水平;常规病理苏木精-伊红染色观察小鼠的肾脏病理改变肾脏病理改变;免疫组织化学法检测间充质干细胞表面标志CD44、CD105在肾脏、肺脏、脾脏中的表达。结果与结论:①环磷酰胺+脐带间充质干细胞组干扰素γ、白细胞介素17、白细胞介素10水平与对照组相比明显降低(P〈0.05)。②32周时环磷酰胺+脐带间充质干细胞组和脐带间充质干细胞组尿蛋白定量低于环磷酰胺组和对照组(P〈0.01)。③32周时环磷酰胺+脐带间充质干细胞组抗ds-DNA抗体水平与对照组相比明显降低。④脐带间充质干细胞组肾小球硬化及炎性细胞浸润程度均较对照组为轻。⑤32周时肾脏、肺脏、脾脏中间充质干细胞表面标志CD44、CD105表达为阴性。提示,应用脐带间充质干细胞移植治疗MRL/lpr狼疮鼠可以显著降低狼疮活动指标,对狼疮肾炎具有治疗作用,同时可以通过降低促炎因子的水平发挥免疫抑制作用。  相似文献   

3.
背景:目前有关脐带间充质干细胞对系统性红斑狼疮的免疫抑制作用及对各个脏器的影响报道较少。目的:探讨脐带间充质干细胞治疗MRL/lpr狼疮鼠的疗效及对免疫系统和各个脏器的影响。方法:MRL/lpr狼疮小鼠随机分为对照组、环磷酰胺组、环磷酰胺+脐带间充质干细胞组、脐带间充质干细胞组。对照组给以生理盐水,其他各组分别给予相应的治疗。采用考马斯亮蓝法检测24h尿蛋白定量;酶联免疫吸附法检测白细胞介素10、白细胞介素17、干扰素γ、PDGF、抗ds-DNA抗体;间接免疫荧光法检测抗核抗体水平;常规病理苏木精-伊红染色观察小鼠的肾脏病理改变肾脏病理改变;免疫组织化学法检测间充质干细胞表面标志CD44、CD105在肾脏、肺脏、脾脏中的表达。结果与结论:①环磷酰胺+脐带间充质干细胞组干扰素γ、白细胞介素17、白细胞介素10水平与对照组相比明显降低(P<0.05)。②32周时环磷酰胺+脐带间充质干细胞组和脐带间充质干细胞组尿蛋白定量低于环磷酰胺组和对照组(P<0.01)。③32周时环磷酰胺+脐带间充质干细胞组抗ds-DNA抗体水平与对照组相比明显降低。④脐带间充质干细胞组肾小球硬化及炎性细胞浸润程度均较对照组为轻。⑤32周时肾脏、肺脏、脾脏中间充质干细胞表面标志CD44、CD105表达为阴性。提示,应用脐带间充质干细胞移植治疗MRL/lpr狼疮鼠可以显著降低狼疮活动指标,对狼疮肾炎具有治疗作用,同时可以通过降低促炎因子的水平发挥免疫抑制作用。  相似文献   

4.
目的:建立钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因过表达Balb/C小鼠的培育方法,并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法:将雄性C57BL/6-CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交,将雄性CAST+/-杂合子代小鼠与雌性Balb/C野生型子代小鼠杂交,连续杂交至消除C57BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织,采用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR法扩增CAST基因片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒(CVB3)感染Balb/C-CAST-/-小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果:C57BL/6 CAST+/-转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要,且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST-/-基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论:成功建立Balb/C-CAST基因过表达小鼠,为后续研究奠定了基础;碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效,值得推广。  相似文献   

5.
李荣达  林玲  崔然然 《检验医学与临床》2011,8(11):1290-1291,1293
目的 用两种不同狼疮造模方法研究载脂蛋白E基因缺乏(apoE-/-)对C57BL/6(B6)小鼠系统性红斑狼疮发病早期抗体产生的影响.方法 将36只apoE-/- C57BL/6雌性小鼠分为降植烷对照组,降植烷模型组,脂多糖对照组,脂多糖模型组;同时将34只普通B6雌性小鼠亦分为降植烷对照组,降植烷模型组,脂多糖对照组,脂多糖模型组;降植烷对照组一次性腹腔注射生理盐水0.5 mL,降植烷模型组一次性腹腔注射降植烷0.5 mL,脂多糖对照组1周2次注射生理盐水,每次0.2 mL,脂多糖模型组1周2次注射脂多糖溶液0.2 mL,浓度为250 mg/L;3周后采血测定血清中抗核抗体(ANA)、抗dsDNA抗体、抗可溶性抗原(ENA)抗体水平,并比较各组间的差异.结果 ANA各模型组均较对照组升高,且apoE-/-的降植烷模型组较普通B6降植烷模型组升高;抗dsDNA抗体仅apoE-/-的降植烷模型组较对照组升高;抗ENA抗体apoE-/-的脂多糖模型组较对照组及普通B6脂多糖模型组升高.结论 在降植烷诱导的模型早期,apoE-/-可促进雌性B6小鼠ANA及抗dsDNA抗体的产生;在脂多糖诱导的模型早期,apoE-/-可促进雌性B6小鼠抗ENA抗体的产生.  相似文献   

6.
目的探讨白细胞介素(IL)-6对ALD-DNA诱导的系统性红斑狼疮(SLE)模型小鼠SLE中的作用机制。方法在健康的雌性C57BL/6小鼠体内用活化淋巴细胞来源的DNA(ALD-DNA)免疫,从而诱导小鼠的SLE,未免疫的小鼠被用作对照。检测了疾病相关的一些发病指标,包括抗双链DNA抗体,尿蛋白和肾脏的病理学改变。结果 IL-6KO基因敲除的小鼠能抵抗ALD-DNA诱导的小鼠SLE模型。在IL-6KO免疫的小鼠中,CD4~+T细胞的活化状态低于野生型的免疫小鼠。胞内细胞因子染色结果表明,IL-6KO免疫的小鼠体内Foxp3的表达高于野生型免疫的小鼠。结论在ALD-DNA诱导的SLE模型中,IL-6可以抑制Treg细胞的分化,从而促进疾病的发展。  相似文献   

7.
目的:建立钙蛋白酶抑制蛋白(calpastatin,CAST)基因过表达Balb/C小鼠的培育方法,并探讨碱性裂解液提取基因组DNA在子代鼠基因型鉴定中的价值。方法:将雄性C57BL/6-CAST~(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠杂交,将雄性CAST~(+/-)杂合子代小鼠与雌性Balb/C野生型子代小鼠杂交,连续杂交至消除C57BL/6小鼠遗传背景。取子代小鼠鼠尾组织,采用碱性裂解液提取基因组DNA,PCR法扩增CAST基因片段,琼脂糖凝胶电泳鉴定结果。采用柯萨奇B3病毒(CVB3)感染Balb/C-CAST~(-/-)小鼠以建立急性病毒性心肌炎小鼠模型。结果:C57BL/6-CAST~(+/-)转基因小鼠与雌性Balb/C野生型小鼠连续杂交10代可消除C57BL/6小鼠遗传背景。采用碱性裂解液提取的基因组DNA数量、纯度能够满足后续实验需要,且产物大小与目的片段一致。成功建立Balb/C-CAST~(-/-)基因型小鼠急性病毒性心肌炎模型。结论:成功建立Balb/CCAST基因过表达小鼠,为后续研究奠定了基础;碱性裂解液提取基因组DNA简便、高效,值得推广。  相似文献   

8.
目的通过检测淋巴细胞凋亡比例、凋亡相关基因表达的变化情况,探讨三氧化二砷对MRL-lpr狼疮肾炎小鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法14只MRL-lpr小鼠,随机分为两组,实验组用三氧化二砷隔日腹腔注射,对照组用生理盐水,疗程结束后检测两组小鼠抗双链DNA抗体水平、用流式细胞仪检测两组小鼠脾脏淋巴细胞凋亡情况、逆转录-聚合酶链反应检测基因caspase-3的表达水平及蛋白印记法测bcl-2的蛋白表达。结果实验组抗双链DNA抗体水平显著低于对照组,脾脏淋巴细胞凋亡较对照组明显增多,caspase-3水平亦明显增高,而bcl-2表达减少。结论三氧化二砷能够诱导MRL-lpr狼疮肾炎小鼠自身反应性淋巴细胞发生凋亡,其作用机制可能与激活caspase家族成员、抑制bcl-2等自身基因表达有关。  相似文献   

9.
目的 观察T细胞受体(TCR)β不同独特型抗原决定簇DNA疫苗诱导BALB/c小鼠抗人类CEM淋巴瘤细胞免疫反应的情况。方法 RT-PCR扩增CEM细胞特异性重排的TCRβ基因片段,克隆至真核表达载体pcDNA3中,然后以此为模板,扩增编码不同抗原决定簇的基因片段到pcDNA3中作为DNA疫苗。肌肉注射法免疫小鼠,间接免疫荧光法检测小鼠血清中抗体生成情况。结果 CEM细胞TCRβ共包含5个抗原决定簇,其DNA疫苗免疫的6只小鼠全部产生了特异性抗独特型抗体(最高滴度1:480);含4个抗原决定簇的DNA疫苗免疫的6只小鼠中有4只产生了特异性抗独特型抗体,但滴度均较低(最高滴度1:80);仅含2个抗原决定簇的DNA疫苗未能使小鼠产生特异性抗独特型抗体。结论 包含TCRβV区全长,共有5个抗原决定簇的独特型DNA疫苗可以诱导小鼠产生抗淋巴瘤细胞的独特型特异性抗体;含有4个抗原决定簇的DNA疫苗仍可诱导特异性抗体的生成,但这种反应较弱,而仅含有2个抗原决定簇的DNA疫苗则不能诱导小鼠产生抗淋巴瘤的特异性抗体。  相似文献   

10.
目的:用重线真核表达质粒pcDNA3-SAG1直接免疫BALB/c小鼠,观察其DNA免疫所诱导的小鼠体液免疫反应和保护性作用。方法:大量制备重组质粒pcDNA3-SAG1,然后1半其导入BALB/c小鼠体内,抗体滴度用ELISA法进行测定:采用PCR方法对小鼠的血液组织外源基因进行检测;对试验组及对照组进行RH株攻击感染,并对其进行分析。结果:用ELISA法检测的抗体IgG滴度为1:2560;免疫后三周、六个月从免疫鼠的血液组织中用PCR仍可检测到特异的SAG1基因的存在:体外弓形虫攻击感染实验组和对照组,可见实验组的存活时间较对照组时间延长(P<0.05)。结论:重组质粒pcDNA3-SAG1免疫BALB/c小鼠可诱导一定的体液免疫应答和一定的保护性作用。  相似文献   

11.
DNA免疫吸附治疗狼疮性肾炎的临床观察   总被引:4,自引:0,他引:4  
目的观察DNA免疫吸附柱对狼疮肾炎患者的临床疗效。方法选择32例活动性狼疮肾炎患者,随机分为常规治疗组和免疫吸附组各16例。常规治疗组应用糖皮质激素(甲泼尼龙、泼尼松龙)及免疫抑制剂(环磷酰胺)治疗,免疫吸附组在常规治疗组的基础上,予以DNA免疫吸附柱进行血液吸附,每半月1次,连续6次。治疗前及免疫吸附末次治疗后,分别收集患者血标本,测定抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体(ds-DNA)的清除效果及对患者血常规、血沉、免疫球蛋白、补体、肾功能等影响程度,并观察记录临床表现情况。结果DNA免疫吸附治疗后患者的症状和体征均明显改善;ANA抗体滴度吸附后明显下降[1:2000及1:300,P〈0.001];抗ds-DNA抗体吸附后明显下降[(36.5±10.4)IU/ml及(19.4±10.3)IU/ml];免疫球蛋白显著下降(P〈0.05);血常规、血沉、补体等无明显影响。结论DNA免疫吸附治疗狼疮性肾炎特异性强,毒副反应较少,能明显改善临床症状,可能成为狼疮性肾炎多靶点疗法新的联合治疗手段。  相似文献   

12.
目的探讨抗中性粒细胞胞浆抗体(ANcA)在系统性红斑狼疮(SLE)患者中检测的临床意义。方法通过间接免疫荧光法和免疫印迹法分别检测了25例健康对照组和106例SLE患者血清中的ANCA、抗核抗体(ANA)、抗双链DNA抗体、抗-SmDI抗体。结果对照组测定均为阴性。SLE患者中ANCA阳性率为47.2%(50/106),且均为环细胞核着色的核周型(pANCA);在ANCA阳性组及ANCA阴性组中:ANA及抗-SmDl抗体阳性率分别为100%(50/50)、91.1%(51/56):829/0(41/50)、67.9%(38/56),P均〉0.05;抗ds—DNA抗体阳性率分别为94%(47/50)、50%(Z8/56),P〈0.01。在活动性sLE(52例)和非活动性sLE(54例)中ANCA阳性率分别为84.6%(44/52);11.1%(6/54),P〈O.01。结论ANCA在sLE患者中检测与ANA及抗-SmD1抗体没有相关性,与抗ds—DNA抗体正相关,活动期SLE患者中ANCA阳性率明显高于非活动期的患者。  相似文献   

13.
链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型的建立   总被引:8,自引:3,他引:8  
陈澍  刘雪芳 《实用医学杂志》2006,22(11):1239-1240
目的:建立大鼠糖尿病模型,探讨其肾脏损害规律。方法:用链脲佐菌素(STZ)56mg/kg一次性腹腔内注射方式制作糖尿病大鼠模型,设正常对照组,饲养10周,期间观察大鼠血糖及一般情况变化,实验结束时测定血浆葡萄糖、血胰岛素、糖化血红蛋白、血尿素氮、24h尿量、24h尿蛋白、尿白蛋白,取肾作病理检查。结果:模型组大鼠葡萄糖、糖化血红蛋白、血尿素氮、24h尿量、24h尿蛋白、尿白蛋白明显升高,血胰岛素显著下降;病理显示出现肾脏肥大,明显肾小球、肾小管病变。结论:STZ诱导糖尿病大鼠出现肾脏功能受损,表现为肾小球及肾小管间质损害,可作为糖尿病肾病动物模型用于糖尿病肾病防治研究。  相似文献   

14.
李桂英  燕霞  佘红艳  李玲  王春来  李英 《临床荟萃》2012,27(11):933-936
目的 观察长春新碱序贯环磷酰胺治疗对狼疮肾炎患者外周血单个核细胞(PBMC)B淋巴细胞活化因子(BAFF)的影响,为序贯治疗提供理论依据.方法 狼疮肾炎患者20例,随机分入激素十环磷酰胺组(传统组,n=10,环磷酰胺600~800mg,静脉滴注,每3周1次)和激素十长春新碱十环磷酰胺组(序贯组,n =10,长春新碱1 mg静脉滴注后24小时再滴注环磷酰胺400 mg,每3周1次),两组患者均同时口服泼尼松1 mg/kg.共治疗24周.另选10例健康志愿者作为正常对照组.各组治疗前后常规行狼疮疾病活动性计分(SLEDAI)评估,检测尿蛋白定量、补体C3、丙氨酸转氨酶(ALT)、抗双链DNA抗体浓度(抗ds-DNA)、血常规等指标,并留静脉血提取单个核细胞(PBMC)应用蛋白质印迹(western blot)和反转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测BAFF蛋白及mRNA的表达.结果 传统组和序贯组患者治疗前SLEDAI、尿蛋白、抗ds-DNA、BAFF蛋白及mRNA表达均较正常对照组升高;SLEDAI( 17.2±5.2)分、(18.4±5.4)分vs (0.1±0.1)分;尿蛋白(4.01±1.870)g/d、(3.94±1.73)g/d vs(0.11±0.01) g/d;抗ds-DNA (2.27±0.61) OD、(2.55±0.48)OD vs(0.25±0.09)OD; BAFF蛋白0.28±0.04,0.27±0.04 vs 0.08±0.01 ;BAFF-mRNA 0.23±0.04、0.22±0.02 vs 0.07±0.01(均P<0.01),而补体C3较正常对照下降(0.65±0.22)g/L、(0.61±0.26)g/L vs(1.45±0.21)g/L( P<0.05).与传统组比较,治疗后序贯组SLEDAI、BAFF蛋白及mRNA、抗ds-DNA、24小时尿蛋白定量下降更明显(P<0.01),C3上升更明显(P<0.05).ALT及外周血白细胞计数差异无统计学意义(P>0.05),两治疗组间不良反应差异无统计学意义.结论 长春新碱序贯环磷酰胺治疗狼疮肾炎能使BAFF在PBMC的表达明显下降,抗免疫紊乱效果优于单用环磷酰胺,且两者联用不良反应无明显增加.  相似文献   

15.
目的评价自主研发的荧光标记抗狂犬病病毒核蛋白单克隆抗体用于快速荧光灶抑制试验(RFFIT)的效果。方法将狂犬病病毒核蛋白的一段线性表位肽与KLH耦联后免疫Balb/c小鼠制备的高效价单克隆抗体抗-RVNP-Mcl,经浓缩、纯化、异硫氰酸荧光素(FITC)标记用于RFFIT检测,以Millipore公司DFA5100为对照试剂,对200例人血清进行平行RFFIT检测,将结果进行统计学分析。结果两种抗体检测结果的线性相关分析显示相关系数(r)=0.980;两种抗体检测定性结果一致率为96.83%,卡方检验显示两种抗体检测定性结果差异无统计学意义(χ2=0.098,P>0.05),发生定性结果不一致的6例(3.00%)血清两种抗体检测结果均小于1 IU/mL;68例两种抗体检测结果均小于或等于1 IU/mL的血清样品中有6例(8.82%)发生结果定性不一致,其余样品均未发生不一致的情况。结论使用荧光标记抗-RVNP-Mcl与DFA5100进行RFFIT检测时结果高度一致,荧光标记抗-RVNP-Mc1可供RFFIT检测使用。  相似文献   

16.
狼疮带试验对诊断系统性红斑狼疮的意义   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 探讨狼疮带试验 (LBT)在系统性红斑狼疮 (SLE)诊断中的意义。方法 :对 15 0例SLE患者和 5 0例非SLE患者分别检测血清ANA、ds-DNA、补体、免疫球蛋白、尿素氮、肌酐、尿蛋白定性及定量、肾脏组织病理、LBT免疫成分。结果 LBT在SLE诊断中的敏感性为 71%、特异性为 84 %、阳性预测值为 93%、阴性预测值为 4 8% ,LBT阳性与肾损害及狼疮活动关系密切。结论 LBT是SLE的诊断的一项重要辅助指标  相似文献   

17.
Antibodies were eluted from the isolated glomeruli prepared from the kidneys of 10 patients with the nephritis of systemic lupus erythematosus. Antibodies reacting primarily with buffer extracts of nuclei were eluted by acid treatment, and antibodies reacting mainly with DNA and nucleoprotein were eluted with deoxyribonuclease. Quantitative immunochemical studies revealed a high concentration of antinuclear antibody per milligram of γ-globulin in glomerular eluates compared with that in the corresponding serums. The γ-globulin of two eluates was found to consist predominantly of antinucleoprotein antibody. The selective elution of antinuclear antibodies was also indicated by the absence of other serum antibodies in the eluates. DNA antigen was demonstrated in the glomeruli of two kidneys with nephritis by means of isolated anti-DNA antibody labeled with fluorescein. In one of these cases, anti-DNA antibodies were also found concentrated in the glomeruli and, in the second, circulating anti-DNA antibodies were demonstrated in the patient's serum. The immunochemical evidence for the high specific activity of antinuclear antibodies and the association of DNA antigen with DNA antibody in glomeruli add further support for the antigen-antibody complex hypothesis for renal injury in systemic lupus erythematosus.  相似文献   

18.
目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗核小体抗体的发生与补体含量及SLE疾病活动的关系。方法用ELISA法检测抗核小体抗体及抗双链DNA(ds鄄DNA)抗体,用全自动特种蛋白仪检测免疫球蛋白及补体。根据抗核小体抗体的含量将46例患者分成抗核小体抗体阳性组(A组)和抗核小体抗体阴性组(B组),同时分别对这两组进行各实验指标分析。结果两组结果显示,A组中抗ds鄄DNA抗体、C3、C4、IgG、SLE积分与B组相比较差异均有显著性(P<0.05),而红细胞沉降率(ESR)、Hb、IgA、IgM两组相比较差异无显著性(P>0.05)。抗核小体抗体含量与补体C3呈显著负相关(P<0.001),与补体C4呈显著负相关(P<0.05),与SLE积分呈显著正相关(P<0.05)。结论抗核小体抗体在SLE的发生、发展及诊断中起着重要作用,有望成为标志SLE活动的新指标。  相似文献   

19.
目的:研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)抗磷脂抗体等血清免疫学标志物与患视网膜血管病的关系。方法:从2002年6月至2003年1月,对164例SLE患作最佳矫正视力检查、眼压测量、裂隙灯检查和眼底检查,血清免疫学检查指标包括抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACL、狼疮抗凝物(lupus anticoagulant,LA)、抗核抗体(antinuclear antibody,ANA)和抗ds—DNA抗体等。结果:164例SLE患中26例(16则检查到有视网膜血管病,其中19例(73%)检测到抗磷脂抗体(17例ACL和2例LA)。结论:SLE患易发生视网膜血管病变,抗磷脂抗体的存在可能与其有较高的相关性。  相似文献   

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