深低温冷冻骨的形态学及免疫组织化学检测

背景:深低温冷冻技术能够降低同种异体骨的免疫原性,对修复骨缺损具有重要意义。目的:观察深低温冷冻对骨材料中骨形态发生蛋白2表达的影响。方法:18只新西兰兔随机分为3组,深低温冷冻3个月组,深低温冷冻6个月组,新鲜骨对照组,取右侧胫骨中上1/3,分别于-80℃保存保存3个月,6个月及不保存,进行苏木精-伊红染色和骨形态发生蛋白2免疫组织化学染色。结果与结论:深低温冷冻后骨材料形态学,与新鲜骨差异不大;深低温冷冻3个月及6个月骨组织中骨形态发生蛋白2均有表达,但较新鲜骨降低。     

自制人骨形态发生蛋白2复合骨修复材料诱导骨再生

背景:骨形态发生蛋白是目前发现的一类惟一可独立诱导骨再生的细胞因子,临床应用前景广阔.但它们价格昂贵,限制了在中国的应用.目的:探讨自主生产的重组人骨形态发生蛋白2的骨诱导活性及对骨缺损的修复作用.方法:通过电泳及质谱的方法检测其复性后重组人骨形态发生蛋白2的纯度,通过C2C12细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化检测其骨诱导活性.将重组人骨形态发生蛋白2与以动物骨为原料加工制成的新型骨修复材料复合,植入新西兰兔桡骨缺损实验模型观察其对骨缺损的修复作用.结果与结论:自主生产的重组人骨形态发生蛋白2纯度≥95%,能明显诱导C2C12细胞向成骨细胞分化,分化早期大量表达碱性磷酸酶,分化末期形成大量的矿化小节,诱骨活性良好.在兔桡骨修复试验中,X射线影像学及苏木精-伊红染色组织学检查结果表明,重组人骨形态发生蛋白2复合材料组在2个月时形成大量骨痂,4-6个月时载体与自体骨融合,材料大量降解,修复效果良好;单纯骨填充材料组4-6个月时只有少量新生骨桥与自体骨连接,降解量极少;空白对照组损伤部位为纤维化组织所填充.结果提示自主生产的重组人骨形态发生蛋白2促进骨修复作用明显,适合应用于临床.     

玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉活性的差异

背景：异体血管保存常用的低温冷冻法会不可避免地形成大量冰晶,因此所保存的血管活性有限。玻璃化法可避免冰晶所造成的挤压损伤和冻融效应,尤其适合于活性组织的保存。目的：比较玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉组织结构和收缩舒张能力的差异。设计、时间及地点：组织形态学及力学水平的随机对照实验,于2002-09/2006-08在解放军总医院骨科研究所完成。材料：纳入新西兰兔18只,按随机数字法分为3组,玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组各6只,每组取12条股动脉。方法：切取股动脉标本,置于平衡液中备用。玻璃化法保存组血管在4℃条件下经25%,50%和100%梯度玻璃化溶液浸泡后,直接投入液氮中。低温冷冻法保存组血管由常温状态下,经过0,-20,-70℃梯度降温,平衡60min,直接投入液氮中。将新鲜动脉作为对照,样本在液氮中保存14d以上。主要观察指标：对动脉组织进行细胞培养和鉴定,测定动脉环张力随去甲肾上腺素和硝普钠剂量的变化。结果：3组动脉培养均为平滑肌细胞,玻璃化法保存组生长速度与新鲜血管组相近,而优于低温冷冻法保存组。玻璃化法保存组与新鲜血管组动脉环最大收缩力差异无显著性意义（P〉0.05）,玻璃化法保存组、新鲜血管组动脉环最大收缩力显著大于低温冷冻法保存组（P〈0.01）。当去甲肾上腺素剂量为10-6mol/L时,动脉开始明显收缩;当去甲肾上腺素剂量为10-4mol/L时,动脉收缩力达到最大。玻璃化法保存组、低温冷冻法保存组及新鲜血管组动脉环最大舒张程度差异无显著性意义（P〉0.05）。当硝普钠剂量为10-7mol/L时,动脉开始产生明显的舒张反应;当硝普钠剂量为10-4mol/L时,动脉基本达到最大舒张程度。结论：玻璃化法保存的动脉较低温冷冻法具有更多的活性平滑肌细胞,尽管玻璃化法保存的动脉在对去甲肾上腺素的收缩能力方面优于低温冷冻法保存的动脉,但是对硝普钠的舒张能力上二者之间没有差别。     

玻璃化法和低温冷冻法保存兔股动脉的形态结构及力学性能比较

背景:一种有效的保存方法必须能够保存组织的完整结构.目的:比较玻璃化法和低温冷冻法保存对动脉形态结构和力学性能的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2001-0912004-08在解放军总医院骨科研究所完成.材料:新两兰兔18只,按随机数字法分为3组:玻璃化法保存组,低温冷冻法保存组,新鲜血管组,每组6只.方法:切取股动脉标本,置于平衡液中备用.玻璃化法保存组血管在4℃条件下经25%,50%和100%梯度玻璃化溶液浸泡后,直接投入液氮中.低温冷冻法保存组血管由常温状态下,经过0,-20,-70℃梯度降温,平衡60 min,直接投入液氮中.样本在液氮中保存14d以上.主要观察指标:进行大体形态和显微形态观察,以了解保存后动脉形态结构的改变;观察动脉的滞后环和应力松弛,测定其断裂强度.结果:两种方法均较好地保存了动脉的结构,玻璃化法保存组完整率为91.67%,低温冷冻法保存组完整率为54.17%(P<0.01):3组动脉均具有滞后环和应力松弛现象,玻璃化法保存组的断裂张力为(2.286 3±0.417 6)N,低温冷冻法保存组的断裂张力为(1.951 0±0.413 0)N,新鲜血管组的断裂张力为(2.543 5±0.5454)N,3组之间的差别无显著性意义(P>0.05).结论:玻璃化法和低温冷冻法对动脉的形态结构和力学性能无显著影响;玻璃化法保存造成的组织断裂较少,适合大段血管的保存.     

构建壳聚糖-磷酸钙/重组人骨形态发生蛋白2复合材料及在体内的异位成骨

背景：研究表明,重组人骨形态发生蛋白2/壳聚糖-磷酸钙支架复合体具有良好的细胞相容性,且材料内部的多孔结构和孔径也能满足于细胞长入和骨的再生,但要应用于临床还需证明能否体内成骨。目的：构建壳聚糖-磷酸钙与重组人骨形态发生蛋白2的复合材料,并观察其植入兔肌袋模型后的异位成骨能力。设计、时间及地点：观察性实验,于2007-06/08在暨南大学附属第一医院中心实验室、外科实验室及暨南大学理工学院材料科学与工程系实验室完成。材料：将固相的磷酸三钙粉末及液相的壳聚糖溶液在室温下混合,制备壳聚糖-磷酸钙支架。再将壳聚糖-磷酸钙支架放入重组人骨形态发生蛋白2溶液中浸泡,真空抽吸后冷冻干燥,制备壳聚糖-磷酸钙材料/重组人骨形态发生蛋白2复合材料。方法：测量改良后支架的孔隙率及抗压强度,扫描电镜观察其超微结构;20只新西兰大白兔局部麻醉后在左后肢大腿外侧切口,暴露大腿肌肉,分离形成肌袋。随机分为3组,空白对照组5只不植入材料,单纯壳聚糖-磷酸钙材料组5只、壳聚糖-磷酸钙/重组人骨形态发生蛋白2复合材料组10只分别植入壳聚糖-磷酸钙材料、壳聚糖-磷酸钙/重组人骨形态发生蛋白2复合材料。主要观察指标：在植入后4周,通过大体观察、X射线摄片、组织学检测其体内异位成骨能力及生物反应性。结果：制备的复合重组人骨形态发生蛋白2后的壳聚糖-磷酸钙支架的孔隙率为87%,压缩弹性模量为20MPa。扫描电镜结果显示支架材料内部为多孔结构,孔径超过100μm。空白对照组苏木精-伊红染色可见肌肉纤维间少量淋巴细胞浸润。单纯壳聚糖-磷酸钙材料组大体观察可见材料周围有薄层的结缔样组织包裹,材料与周围肌肉连接松散,苏木精-伊红染色可见材料植入区为圆形空腔。壳聚糖-磷酸钙/重组人骨形态发生蛋白2复合材料组大体观察可见材料周围有薄层的结缔样组织包裹,材料中间可见空洞,有降解现象及少量淡红色纤维样结构长入,X射线示左大腿内材料高密度影无明显改变,苏木精-伊红染色可见少量血管样组织长入,Masson三色染色可见编制骨岛中有胶原纤维形成。结论：壳聚糖-磷酸钙/重组人骨形态发生蛋白2复合材料具有良好的孔隙率、抗压强度及超微三维结构,复合材料在兔体内具有异位成骨能力。     

鹿脱蛋白松质骨的生物相容性

背景：经过脱蛋白去抗原处理的异种松质骨作为骨移植材料,具有天然的多孔结构、可塑性及一定的机械强度。目的：观察鹿脱蛋白松质骨的生物相容性。方法：①热源实验与急性毒性实验：将鹿新鲜骨、脱蛋白松质骨及深低温冻干脱蛋白松质骨浸提液分别注入家兔耳缘静脉与小鼠腹腔。②溶血实验：将兔血混悬液分别加入鹿新鲜骨、脱蛋白松质骨、深低温冻干脱蛋白松质骨、碳酸钠（阳性对照）、生理盐水（阴性对照）中。③凝血实验：将鹿新鲜骨、脱蛋白松质骨及深低温冻干脱蛋白松质骨分别加入兔正常混合血浆中。④肌袋实验：在小鼠大腿肌袋处分别植入新鲜鹿骨、鹿脱蛋白松质骨及深低温冻干脱蛋白松质骨。结果与结论：鹿脱蛋白松质骨及深低温冻干鹿脱蛋白松质骨无热源反应,未引起毒性、溶血及凝血反应,植入小鼠肌肉内后未发生排斥反应。新鲜鹿骨6种实验有轻度异常,但无动物死亡。表明鹿脱蛋白松质骨及深低温冻干鹿脱蛋白松质骨具有良好的生物相容性。     

磷酸钙人工骨联合雷洛昔芬修复兔下颌骨缺损

背景：雷洛昔芬是第3代选择性雌激素受体调节剂,可减少骨量的丢失,增加骨组织中的矿物质含量,降低骨折风险。目的：观察雷洛昔芬结合自固化磷酸钙人工骨修复兔下颌骨缺损的效果。方法：在36只新西兰大白兔左侧下颌骨制作8 mm×4 mm×3 mm的缺损模型,随机分组,实验组12只植入自固化磷酸钙人工骨,并给予雷洛昔芬7.5 mg/（kg·d）;药物组12只给予雷洛昔芬7.5 mg/（kg·d）;人工骨组12只植入自固化磷酸钙人工骨。分别于治疗4,8,12周取下颌骨标本,免疫组织化学法观察骨形态发生蛋白2的表达,激光共聚焦显微镜观察转化生长因子β的表达。结果与结论：实验组治疗后4,8周时的骨形态发生蛋白2免疫组织化学染色阳性细胞数明显高于药物组与人工骨组,治疗后12周时实验组骨改建基本完成,骨形态发生蛋白2免疫组织化学染色阳性细胞数目低于其他两组。实验组转化生长因子β免疫荧光染色表达为逐步升高,到第8周时达到峰值,而药物组和人工骨组的转化生长因子β免疫荧光表达从4-12周一直呈上升状态,趋近于最高峰。说明雷洛昔芬能够促进自固化磷酸钙人工骨在骨缺损过程中骨形态发生蛋白的早期表达及早期骨痂的形成,加快骨缺损修复。     

重组人血管内皮生长因子165/重组人骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨与深低温冷冻骨成骨能力的比较

背景:载体+骨诱导因子+生长因子模式人工骨已被证实是理想的人工骨材料。目的:验证血管内皮生长因子+骨形态发生蛋白与脱蛋白骨复合成重组合人工骨的再血管化及成骨作用,并与深低温冷冻骨比较。方法:新西兰大白兔左前臂制成桡骨15mm骨缺损模型,随机分成2组,实验组植入重组血管内皮生长因子165/重组骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨;对照组植入深低温冷冻骨。结果与结论:16周,实验组骨缺损区骨性愈合,移植物密度接近周围正常骨组织;对照组:断端间可见较多骨痂生成,移植物密度稍高于周围正常骨组织。实验组移植物-受体介面无明显分界,达到骨愈合;对照组移植物-受体分界线模糊,部分骨愈合。第3天及第1,2,4,8周,墨汁灌注微血管分析结果显示,实验组血管生成明显多于对照组(P<0.01);生物力学测试结果显示,实验组三点抗弯曲应力负荷明显强于对照组(P<0.01)。结果表明,重组血管内皮生长因子165/重组骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨重组合人工骨能诱导断端间骨痂形成,加快移植物的血管化速度,且具有良好的生物学功能及生物力学功能。     

纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白复合物修复兔桡骨大段缺损及局部血管内皮细胞生长因子的表达

背景：研究发现,在小段骨缺损中植入骨或仿生骨组织,坏死组织逐渐被替换,移植骨中会长入有活性的血管肉芽组织,移植骨被吸收,新骨主动形成。但在大段骨缺损,这一过程发生较慢且不完全。目的：观察纳米级羟基磷灰石材料复合骨形态发生蛋白后大段骨缺损修复能力及诱导生成血管能力。方法：制作兔桡骨大段骨缺损模型,抽签随机分2组,选择一侧分别植入纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白、纳米级羟基磷灰石修复,均以另一侧为空白对照。植入后6个月行大体观察、X射线、组织形态学检查、组织切片碱性磷酸酶染色、成骨量分析、血管内皮细胞生长因子阳性细胞率及阳性血管数检测。结果与结论：空白对照组基本无骨组织生成。纳米级羟基磷灰石植入后被新生骨组织分割成小块,材料原有结构破坏。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组较纳米级羟基磷灰石组残存材料更少,材料降解更为彻底。纳米级羟基磷灰石/骨形态发生蛋白组成骨量、血管内皮细胞生长因子表达及血管内皮细胞生长因子阳性血管数目均明显高于纳米级羟基磷灰石组（P〈0.001）,且血管内皮细胞生长因子表达与血管内皮细胞生长因子阳性血管数目成正比关系。说明纳米级羟基磷灰石与骨形态发生蛋白复合后,骨修复能力进一步增强,诱导血管生成能力明显提高。     

骨形态发生蛋白4mRNA在大鼠后纵韧带减压后的表达

背景：有学者认为手术增加了颈椎不稳定的风险,后纵韧带的张力有可能改变体内生长因子表达。然而两者是否存在关系还没有定论。骨形态发生蛋白（bone morphogenetic protein,BMP）4是具有独立异位成骨作用的细胞因子之一。目的：观察颈椎后路减压对颈椎后纵韧带中骨形态发生蛋白4mRNA表达的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2005—01／2006—12在泰山医学院完成。材料：清洁级成年SD大鼠48只,雌雄不拘,体质量270-350g。方法：将大鼠随机分为3组。手术组：行C3-6全椎板切除减压加椎旁肌切断手术;假手术组：仅作皮肤切口;空白组：不作任何处理为。于处理后1,2,4,8周分批处死动物,取其后纵韧带。主要观察指标：采用半定量反转录-聚合酶链反应方法检测组织骨形态发生蛋白4mRNA表达水平。结果：空白组及假手术组未见明显骨形态发生蛋白4mRNA的表达;手术组于手术后1周表达明显,持续到8周。结论：颈椎后路减压手术可以导致后纵韧带早期细胞骨形态发生蛋白4mRNA表达上升,内源性的骨形态发生蛋白4可能导致手术后韧带骨化发展。     

Impact of freezing on bone graft incorporation biomechanical evaluations in rats

Background

With an increasing clinical application of grafting for bone reconstruction, it is important to understand the physiological and biological events of graft incorporation. In this study, we have investigated the impact of deep freezing on the biopotency for incorporation of bone grafts.

Methods

Fresh and deep-frozen autogenous bone grafts were implanted in an 8-mm segmental defect in the tibia. The construct was stabilized with intramedullary nailing. Incorporation of the graft was assessed with use of conventional radiography, biomechanical testing and measurements of bone mineral content and density after 2 and 4 months, respectively.

Findings

Frozen grafts were significantly less integrated after 2 months as compared to fresh grafts. After 4 months, however, the frozen grafts showed an overall reconstruction that was not significantly different from the fresh grafts. Both frozen and fresh grafted segments had only reached 70% strength of intact bone at 4 months.

Interpretation

This study indicates that in the long run there are no significant consequences, radiologically or biomechanically, of deep freezing as compared to fresh bone grafts.     

骨髓基质干细胞成骨分化过程中Wnt、骨形态发生蛋白2信号通路相关因子与辛伐他汀的作用

背景：辛伐他汀可促进体外培养的人或鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,但作用机制尚不清楚。目的：观察辛伐他汀对大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞分化过程中Wnt与骨形态发生蛋白2信号途径中相关因子表达的影响。方法：取6周龄雌性SD大鼠双侧股骨、胫骨全骨髓进行体外成骨细胞诱导培养。实验分为对照组及SIM组。SIM组加入浓度为10-7mol/L辛伐他汀,对照组加入等量无水乙醇和PBS。培养14d,行碱性磷酸酶染色,28d时,行vonKossa染色观察细胞外基质矿化情况;培养14,21d,免疫荧光细胞化学染色观察成骨细胞中β-catenin,Smad1/5,Cbfa1的表达及分布。结果与结论：大鼠骨髓基质干细胞经体外诱导后可分化为具有碱性磷酸酶活性和矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞。辛伐他汀可显著上调骨髓基质干细胞成骨分化过程中碱性磷酸酶的表达。同时,与对照组比较,SIM组β-catenin,Smad1/5,Cbfa1表达明显增多（P〈0.05）,且呈现明显的核内聚集趋势。说明辛伐他汀促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化的作用可能与调控Wnt与骨形态发生蛋白2信号通路中相关因子的表达及细胞内分布有关。     

腭中缝牵张成骨中骨形成蛋白2的表达

背景：正畸医生常常通过扩大腭中缝矫正上颌骨横向发育不足。骨形成蛋白2可以诱导骨和软骨的形成,促进牵张成骨过程中的骨重建。然而关于骨形成蛋白2在腭中缝牵张成骨中的时间空间表达规律尚不清楚。目的：观察骨形成蛋白2在大鼠腭中缝牵张成骨过程中的表达规律。方法：实验选用80只5周龄雄性Wistar大鼠,分为实验组和对照组（包括阴性对照和空白对照）。将初始力值为50g的腭中缝扩大簧黏接到大鼠两侧上颌牙列上建立大鼠腭中缝牵张模型,牵张1,4,7,14d后,采用免疫组织化学和实时定量荧光PCR方法分析骨形成蛋白2蛋白和mRNA在各加力时间点的表达。结果与结论：腭中缝扩张后骨形成蛋白2蛋白表达水平显著增加,且存在时空表达差异,主要定位于腭中缝纤维组织、软骨细胞层、骨细胞和成骨细胞胞浆及其细胞外基质。同时,骨形成蛋白2 mRNA表达也明显上调。提示腭中缝牵张力可刺激骨缝中骨形成蛋白2蛋白和mRNA的合成,在骨缝塑建过程中发挥重要作用。     

骨形态发生蛋白-2在糖尿病大鼠种植体周围的表达

目的：应用大鼠糖尿病模型,观察实验性2型糖尿病（T 2DM）大鼠种植体周围骨形态发生蛋白-2（BM P-2）的表达水平,探讨影响糖尿病种植体骨整合的分子生物学机制,试图为发现新的治疗糖尿病骨整合方法打下理论基础。方法：将48只大鼠均分为正常组和糖尿病组。糖尿病组按40 m g/kg腹腔内一次性注射枸橼酸钠链脲佐菌素溶液建立T 2DM模型。在胫骨近骺端种植纯钛种植体。种植后2,4,8周分批分次处死动物。采用不带种植体脱钙标本硬组织切片、脱钙标本切片常规苏木精-伊红染色（HE染色）和免疫组织化学法检测种植体周围骨组织中骨形态BM P-2的表达并做图像分析。结果：HE染色镜下观察糖尿病组骨形成滞后。正常组和糖尿病组的种植体周围骨组织BM P-2免疫组织化学灰度值两组间差异有显著性（P〈0.05）。结论：糖尿病者的骨质疏松化倾向可能与糖尿病种植修复较正常者失败率高有关,糖尿病者BM P-2的减少可能是影响种植体骨整合的原因之一。     

环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在异位骨化组织中的表达

背景：研究发现环氧化酶2抑制剂具有预防肘关节周围异位骨化的作用。目的：观察环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在肘关节创伤后异位骨化组织中的表达,并分析其相关性。方法：采用免疫组化SP法检测18例肘关节创伤后异位骨化组织及10例正常骨组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的表达水平,利用HPIAS-1000图像分析系统测定异位骨化组织与正常骨组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的平均吸光度和阳性区域面积百分率,并分析3种蛋白阳性区域面积百分率之间的相关性。结果与结论：异位骨化组织中环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子呈高表达;正常骨组织中呈低表达或不表达。图像分析结果显示异位骨化组织中3种蛋白平均吸光度及阳性区域面积百分率显著高于正常骨组织（P〈0.01）。异位骨化组织中环氧化酶2与骨形态形成蛋白2、血管内皮生长因子的阳性区域面积百分率呈正相关（P〈0.01）。提示环氧化酶2、骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子在异位骨化的形成过程中起重要作用,环氧化酶2可能通过诱导骨形态形成蛋白2和血管内皮生长因子的表达从而促进异位骨化组织中的成骨和血管形成。     

Brg1调控重组人骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化术

背景：Brgl是依赖ATP的染色质改变复合物的核心催化弧基,该亚基在基因的转录调控、复制、重组,骨骼肌的分化、抑制肿瘤的发生等活动中起着重要的作用。目的：探索Brgl基因在骨形态发生蛋白2诱导成骨细胞分化过程中的调控机制。方法：采用胶原酶消化法进行小鼠颅骨成骨细胞的原代培养;分别用0,50,200pg／L的重组人骨形态发生蛋白2诱导原代培养的成骨细胞的分化,摸索骨形态发生蛋白2的最佳作用剂量：实时荧光定量PCR和Westernblot进行骨形态发生蛋白2对Brgl的作用时间的动力学分析：实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测敲除Brgl对骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化的影响;构建DIx5腺病毒重组表达载体,实时荧光定量PCR和钙钴染色法检测Brgl在骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化过程中对Dlx5的调控作用。结果与结论：用自行合成的重组人骨形态发生蛋白2可诱导原代培养小鼠成骨细胞分化,200pg／L剂量有着较好的诱导分化效果;重组人骨形态发生蛋白2可诱导Brgl基因转录水平和翻译水平表达水平上调;敲除Brgl可抑制熏组人骨形态发生蛋白2诱导的成骨分化：Brgl能够调控DIx5的表达水平。说明Brgl通过调控DIx5的表达水平调控重组入骨形态发生蛋白2诱导的小鼠成骨细胞的分化。     

深低温贮存回植自体颅骨瓣的临床研究

目的：进行深低温贮存回植自体颅骨瓣的临床应用效果研究。方法：将74例患者术后骨瓣深低温（零下80℃）贮存，2～12月后予以原位回植，术中取骨标本病检，随诊1～36月。结果：74例中72例伤口Ⅰ期愈合，颅骨复位良好。病检示回植骨有正常骨细胞，与新鲜颅骨对照无骨母细胞。2例患者回植骨吸收明显，失去支撑作用而再次行修补钛网，2例感染，余下70例患者2～4月后骨缝不同程度增宽1～2mm，6月后骨缝不再增宽，12～36月后骨缝部分变窄，达骨性愈合，而颅骨钻孔处及颞下骨缝较宽区未见骨性结构，为纤维疤痕愈合。结论：深低温贮存的自体颅骨部分骨细胞能长时间存活，回植后无免疫排异性。回植手术简便，患者容易接受，临床应用效果较好。     

骨形态发生蛋白-7对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：探讨骨形态发生蛋白-7（bone morphogenetic protein-7,BMP-7）对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法：采用线栓法建立大脑局灶性脑缺血再罐注损伤模型,按照随机数字表法将Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、BMP-7治疗组.在缺血2h再灌注24 h后对各组进行神经功能评分.采用原位末端标记法（TUNEL法）检测皮质区神经细胞凋亡,采用实时定量-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹法（Western blotting）分别检测皮层区凋亡活化因子-1（apoptotic protease activating factor-1,Apaf-1）和Bcl-2/腺病毒E1B19kDa相互作用蛋白3（Bcl-2/adenovirus E1B 19 kDa interacting protein 3,BNIP3）的mRNA及蛋白的表达.结果：与模型组相比,BMP-7治疗组大鼠神经功能评分明显降低,TUNEL阳性细胞数减少,缺血侧皮层Apaf-1和BNIP3的mRNA和蛋白表达均降低.结论：BMP-7可能通过下调Apaf-1和BNIP3的表达抑制神经细胞凋亡,从而减轻脑缺血再灌注损伤.     

壳聚糖载体耦联骨形态发生蛋白2目的基因转染MC3T3-E1细胞后细胞生物学变化

背景：目前应用生长因子进行基因治疗成为最有前途的研究领域之一。骨形态发生蛋白具有诱导间充质细胞向成骨细胞方向分化,进而诱导新骨形成的能力,在骨愈合过程中发挥着重要作用。目的：选用MC3T3-E1细胞进行体外转染,以壳聚糖为输送载体将骨形态发生蛋白2导入MC3T3-E1细胞,以实现骨诱导蛋白的局部持续表达,促进细胞的增殖与分化。方法：采用复凝聚法制备壳聚糖-骨形态发生蛋白2复合体,琼脂糖凝胶电泳检测壳聚糖结合骨形态发生蛋白2的能力。采用壳聚糖纳米颗粒载体转染技术,将携带有骨形态发生蛋白2基因的表达质粒导入成骨细胞中,评价转染效率,同时运用四氮唑盐法检测细胞增殖情况以及细胞内碱性磷酸酶活性。结果与结论：电泳图显示壳聚糖能很好地结合骨形态发生蛋白2质粒;壳聚糖可成功将骨形态发生蛋白2目的基因导入成骨细胞,且转染率达35%左右;四氮唑盐法实验结果提示转染后可促进成骨细胞增殖;碱性磷酸酶结果显示细胞碱性磷酸酶活性增强。提示壳聚糖纳米粒载体系统成功耦联骨形态发生蛋白2目的基因并有效转染MC3T3-E1细胞,同时促进MC3T3-E1细胞的增殖与分化。