不同浓度富硒温泉水对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

背景:临床研究证实,富硒温泉水对增生性瘢痕有明显的抑制作用。目的:观察富硒温泉水对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法:组织块法体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取第3~5代细胞,用含10%,20%,30%富硒温泉水及自来水和蒸馏水的培养基培养48h,测细胞增殖情况。结果与结论:富硒温泉水培养的人增生性瘢痕成纤维细胞数量减少,突起不同程度的变短或者缺失,细胞质及胞核浓缩。不同浓度的富硒温泉水、自来水、蒸馏水均对成纤维细胞的增殖有抑制作用,以富硒温泉水培养基的抑制作用最明显(P<0.05),且随浓度的升高,抑制率增大。说明富硒温泉水可以剂量依赖性地抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景：蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。目的：体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。方法：体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。结果与结论：蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为（15.2±2.0）μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达（P〈0.05）。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达

背景:蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究。目的:体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1的影响。方法:体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响。免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1的表达。结果与结论:蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长。MTT法检测的IC50为(15.2±2.0)μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1的表达(P<0.05)。说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1的表达。     

A型肉毒毒素引起人增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡

背景：A型肉毒毒素临床上可以治疗增生性瘢痕,体外细胞培养研究发现可以抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖。目的：观察A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的抑制作用,以及对人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响。方法：通过消化法分离培养出人增生性瘢痕成纤维细胞,分别用不同浓度的A型肉毒毒素对细胞的生长增殖过程进行干预,通过MTT染色,于酶联免疫检测仪570nm测定吸光度来研究细胞生长增殖情况,计算抑制率。通过Hoechst33342及PI染色检测人增生性瘢痕成纤维细胞凋亡隋况,并计算凋亡率。结果与结论：人增生性瘢痕成纤维细胞生长过程中呈梭形,细胞生长旺盛,细胞融合成单层,细胞排列成高度一致性。经A型肉毒毒素处理后,细胞增殖速度明显减慢,细胞数量减少,细胞排列方向散乱。MTT染色后吸光度减弱,随A型肉毒毒素浓度增加,吸光度明显减弱,与对照细胞比较,差异有显著性意义（P〈0．05）,半数抑制率出现在0．4IU/L。在荧光显微镜下,人增生性瘢痕成纤维细胞经Hoechst33342和PI染色后细胞核呈现蓝色,细胞核为光滑的圆形或椭圆形外观。A型肉毒毒素干预后细胞核致密浓缩,染色不均匀,折光性增强,核膜皱缩,部分细胞核碎裂,出现碎块,有凋亡小体出现。随着A型肉毒毒素浓度的增加细胞凋亡率逐渐增高,与对照细胞比较差异有显著性意义（P〈0．05）,半数凋亡率在0．4IU／L。说明A型肉毒毒素可以抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖,其主要通过引起细胞凋亡的途径来抑制成纤维细胞的增殖。     

A型肉毒毒素可抑制人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和胶原蛋白的合成

背景:A型肉毒毒素伤口周围局部注射可以减少瘢痕的形成,而且对瘢痕的增生挛缩有抑制作用,可以促进瘢痕的萎缩变平。目的:观察A型肉毒毒素对人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原蛋白合成的影响。方法:体外分离、培养人增生性瘢痕成纤维细胞,取对数生长期的细胞接种培养,使用稀释浓度为0.1U/LA型肉毒素DMEM细胞培养基对细胞的生长过程进行干扰,对照组以含胎牛血清的DMEM培养基培养。结果与结论:细胞接种第1～15天,对照组可见梭形的增生性瘢痕成纤维细胞分裂增殖,局部融合成细胞单层,细胞生长旺盛,细胞排列呈现高度一致性。A型肉毒毒素组细胞增殖速度慢,细胞数量少,细胞排列方向散乱,A型肉毒毒素组细胞数为对照组细胞数的79.3%,A型肉毒毒素实验组胶原蛋白合成量为正常对照组的48.4%,差异有显著性意义(P<0.05)。提示A型肉毒毒素可以抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖以及胶原蛋白的合成。     

复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

目的：观察复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用，为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法：体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞，加入不同含量的复方苦参碱，24h后观察细胞形态学，以乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)为指标观察细胞毒性，用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其增殖活性。结果：不同含量的复方苦参碱均能改变成纤维细胞形态，抑制细胞增殖，含量在300mg／L以下无明显的细胞毒作用，：EC50值约为20mg／L。结论：复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

目的:观察复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,加入不同含量的复方苦参碱,24h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶(lactatedehydroge-nase,LDH)为指标观察细胞毒性,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其增殖活性。结果:不同含量的复方苦参碱均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,含量在300mg/L以下无明显的细胞毒作用,EC50值约为20mg/L。结论:复方苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,具有防治增生性瘢痕的应用前景。     

吡非尼酮对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响

目的 观察吡非尼酮(PFD)对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响.方法 人增生性瘢痕标本取自整形患者,采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞.根据PFD用药的不同浓度分为对照组(0mg·mL-1),实验1组(0.15mg·mL-1)、实验2组(0.3mg·mL-1)及实验3组(1mg·mL-1),加药24、48、72h后,提取细胞上清,EIISA法检测PFD干预下体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ胶原蛋白的分泌情况.结果 与对照组比较,各实验组对人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白分泌有明显的抑制作用,呈浓度依赖性,随着药物浓度的增大,抑制作用明显增强(均P＜0.05),但对胶原蛋白分泌抑制作用与干预时间的延长无明显的关系(均P＞0.05).结论 PFD对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌有明显的抑制作用,对增生性瘢痕的防治有一定意义.     

槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用

背景:目前有关槟榔成分对成纤维细胞增殖的影响存在两种截然不同的结果.有学者用较低浓度的槟榔碱能促进成纤维细胞增殖,另有实验显示槟榔碱在高于15.6 mg/L时对成纤维细胞的直接作用是抑制成纤维细胞生长和胶原合成.目的:进一步验证槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据.设计、时间及地点;分组对比观察,于2002年在解放军总医院烧伤研究所完成.材料:槟榔生药为北京问仁堂提供.手术中取下的2例增生性瘢痕患者组织,年龄30岁以下,病程半年～2年,患者对治疗及研究均知情同意.方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入15.63,31.25,62.5,125,250,500 mg/L不同剂量的槟榔提取物作用.主要观察指标:24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性,以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性.结果:加入不同剂量提取物作用24 h后,培养上清液中乳酸脱氢酶与对照组无显著性差异(P>0.05);不同浓度的槟榔提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500 mg/L以下无明显的细胞毒作用.结论:槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.     

维药异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕及转化生长因子β/Smad信号通路的影响

背景：近年来,研究发现异常黑胆质成熟剂具有良好的减轻瘢痕增生的作用,但具体机制尚未清楚,考虑异常黑胆质成熟剂是否是通过影响转化生长因子β/ Smad信号通路的表达来抑制瘢痕增生的。目的：验证维药异常黑胆质成熟剂对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及对转化生长因子β/Smad 信号通路的影响。方法：用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,将成纤维细胞分为6组：①空白对照组：加入等体积的培养液。②异常黑胆质成熟剂处理组：分成5组,分别加入质量浓度为0.2,0.4,0.6,0.8,1.0 g/L的异常黑胆质成熟剂。对各组细胞采用相应药物进行干预,采用MTT、流式细胞术、免疫细胞化学方法检测其在正常状况和应用维药异常黑胆质成熟剂后细胞增殖与转化生长因子β/Smad信号通路的改变。结果与结论：与空白对照组相比,异常黑胆质成熟剂对增生性瘢痕来源成纤维细胞的增殖有抑制作用,且在0.2-0.8 g/L质量浓度范围之间,随着质量浓度增加,抑制作用呈增强趋势。细胞免疫化学结果测定表明,异常黑胆质成熟剂干预后减少了成纤维细胞中转化生长因子β1的含量,增加了细胞中Smad7的含量。提示异常黑胆质成熟剂抑制瘢痕的作用可能是通过转化生长因子β/Smad 通路,使成纤维细胞增殖受阻而发挥作用的。     

原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞的生物学行为

背景：增生性瘢痕组织的形成是创面愈合过程中不可避免的,但是增生性瘢痕组织的形成产生很多不良的影响。目的：建立可靠的人增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养方法。方法：采用组织贴壁法和消化法分别进行人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养,使用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养基,37℃,体积分数5％C02,饱和湿度下培养,分别描述其生长曲线、形态及波形蛋白的表达。结果与结论：组织贴壁法人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞培养成功,20-40d可传第1代,以后每7—10d可传1代,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性;消化法培养人皮肤增生性瘢痕成纤维细胞成功,15—20d细胞可融合成片,细胞为长梭形,波形蛋白表达阳性。进一步证实两种方法进行人增生性瘢痕成纤维细胞的原代培养均培养成功。     

骨髓间充质干细胞条件培养液对瘢痕成纤维细胞生物活性的影响

背景：间充质干细胞移植可通过多种调节机制促进皮肤创伤修复,抑制瘢痕形成,目前多数学者认为间充质干细胞分泌的生物活性因子起主要作用。 目的：观察骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞增殖能力及胶原合成的影响。 方法：分离培养人骨髓间充质干细胞和增生性瘢痕成纤维细胞,制备骨髓间充质干细胞条件培养液。将12,24,48 h收集的条件培养液孵育体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞24 h,并与空白对照组比较,采用CCK-8实验检测增生性瘢痕成纤维细胞的增殖活性,Real-time PCR 检测增生性瘢痕成纤维细胞中Ⅰ型和Ⅲ型胶原的表达。 结果与结论：与空白对照组相比较,在24 h和48 h收集的骨髓间充质干细胞条件培养液对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖具有明显的抑制作用（P〈0.01）,对其胶原的合成也具有显著的抑制作用（P〈0.01）。结果表明骨髓间充质干细胞条件培养液可通过分泌抗纤维化的生物活性因子抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原产生,为细胞疗法策略减轻瘢痕提供了新的理论支持。     

红花对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞及Ⅰ、Ⅲ型胶原的影响

背景：研究发现红花对体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成有抑制作用,但其具体作用机制与活体研究尚未进一步展开。目的：观察红花对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞及Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。设计、时间、地点：随机对照动物实验,于2006-11/2008-03在重庆医科大学附属儿童医院动物实验中心及研究所完成。材料：新西兰大白兔27只,雌雄不限;50%红花注射液由山西太原华卫药业有限公司产品,批准文号：国药准字Z14020008。方法：兔耳腹侧建立增生性瘢痕模型,每耳2块。分为5组。术后第45天开始对增生性瘢痕行注射治疗。①正常皮肤组：为自身兔耳腹侧皮肤。②阳性对照组：右耳外侧增生性瘢痕,不予以任何处理。③生理盐水组右耳内侧增生性瘢痕,注射生理盐水。④低浓度红花组：左耳内侧增生性瘢痕,注射125 g/L红花液。⑤高浓度红花组：左耳外侧增生性瘢痕,注射500 g/L红花液。1次/周,连续注射4次。注射后第2,4,6周分别切取8只兔耳增生性瘢痕及皮肤待查。主要观察指标：瘢痕厚度,硬度;Mallory染色检测成纤维细胞密度胶原纤维排列及致密度。免疫组织化学方法检测每块组织Ⅰ、Ⅲ型胶原面密度,计算Ⅰ/Ⅲ型胶原比值。结果：注射后第4,6周,各组增生性瘢痕色泽均逐渐变浅,厚度及硬度均逐渐变小,尤以高浓度组明显,差异与其他增生性瘢痕组比较存在显著性意义（P 〈 0.05）。注射后第4,6周,高浓度红花组成纤维细胞密度较其他增生性瘢痕组低（P 〈 0.05）。注射后第4,6周,高、低浓度红花组I型胶原面密度值较阳性对照及生理盐水组低（P 〈 0.05）,且高浓度红花组低于低浓度红花组（P 〈 0.05）;各增生性瘢痕组Ⅰ/Ⅲ型胶原比值在注射后第2,4,6周均逐渐增高;同一时间段,高浓度红花组Ⅰ/Ⅲ型胶原比值为所有增生性瘢痕组中最低（P 〈 0.05）,低浓度红花组Ⅰ/Ⅲ型胶原比值与阳性对照及生理盐水组比较,差异有显著性意义。结论：高浓度红花液能促进兔耳增生性瘢痕的软化,组织顺应性增加。     

血竭提取物促进成纤维细胞增殖及胶原分泌

背景：血竭为传统医学中生肌方剂的主要成分,长期应用于临床治疗多种难愈性创面,具有确切的疗效,但血竭在创面愈合过程中对正常成纤维细胞分泌胶原的影响,目前未见报道。目的：观察血竭提取物对成纤维细胞增殖及胶原分泌的作用。方法：应用氯仿、乙酸乙酯、乙醇对血竭依次回流提取得到血竭提取液,用DMEM培养液稀释后培养成纤维细胞。将人正常皮肤来源成纤维细胞分别培养于血竭氯仿提取液（氯仿提取组）、血竭乙酸乙酯提取液（乙酸乙酯提取组）、血竭乙醇提取液（乙醇提取组）含1%二甲基亚砜DMEM（含1%二甲基亚砜DMEM组）和正常培养（对照组）条件下。MTT法检测不同血竭提取物在不同质量浓度（0.002,0.02,0.2,2,20 g/L）培养条件下,确定最适合成纤维细胞生长的血竭提取物,并检测在此条件下,成纤维细胞形态、生长曲线、细胞周期、分泌Ⅲ型前胶原水平的变化。结果与结论：血竭乙酸乙酯提取物在0.2-2 g/L范围内,可以促进正常人成纤维细胞增殖,在2 g/L浓度值时促进增殖作用最显著,因此2 g/L乙酸乙酯提取物为最适合成纤维细胞生长的一组血竭提取物。与对照组相比,2 g/L乙酸乙酯提取组成纤维细胞的细胞融合现象增多,细胞浓度增加,S期的细胞比例增加,减少Ⅲ型前胶原表达。提示血竭乙酸乙酯提取物既可促进创面愈合,又不致于过度增生形成病理性瘢痕。     

椎间盘骨水泥颗粒对人髓核细胞增殖的影响并非无足轻重

背景：椎体成形和椎体后凸成形治疗骨质疏松性椎体骨折过程中,常发生椎间盘骨水泥渗漏,但有关骨水泥进入椎间盘后对椎间盘细胞的影响尚不明确.目的：观察骨水泥颗粒对人髓核细胞增殖能力的影响.方法：采用体积分数0.001%,0.01%,0.1%,0.5%,1.0%的磷酸钙骨水泥颗粒或聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒处理人正常髓核细胞,以常规培养的人正常髓核细胞为对照,以 CCK-8法检测各组细胞增殖活性.结果与结论：不同体积分数的磷酸钙骨水泥颗粒对人正常髓核细胞增殖无影响.体积分数0.001%,0.01%的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒对人正常髓核细胞增殖无显著影响;体积分数0.1%,0.5%,1.0%的聚甲基丙烯酸甲酯骨水泥颗粒明显抑制人正常髓核细胞的增殖,与对照组比较差异有显著性意义（P 〈0.05）,且该效应具有时间依赖性和剂量依赖性：在处理3,6 d 时,对人正常髓核细胞增殖的抑制效应随颗粒体积分数的增加而逐渐增强;当颗粒体积分数为0.1%,0.5%和1.0%时,对人正常髓核细胞增殖抑制的效果随着时间的延长逐渐加强.