INK4/ARF基因座甲基化协同调控与非小细胞肺癌的关系

目的 分析INK4/ARF基因座甲基化状态与非小细胞肺癌临床病理特征的相关性及探讨基因座内各编码基因甲基化协同调控的可能性。 方法 临床收集81例非小细胞肺癌患者手术切除的配对癌灶及癌旁石蜡组织标本;采用甲基化特异性PCR（MSP）对石蜡组织标本DNA进行p16INK4a、p15INK4b及p14ARF基因甲基化检测并与临床病理特征进行相关性分析。结果 癌灶组织中的p16 INK4a基因甲基化在鳞状细胞癌中的分布明显高于腺癌（P<0.01）,并与肿瘤大小密切相关（P<0.05）。癌灶组织中p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态密切相关（P<0.05）;结论 INK4/ARF基因座启动子区甲基化与非小细胞肺癌发生、发展相关;p16INK4a与p15INK4b基因甲基化状态的关联提示INK4/ARF基因座可能存在表观协同调控方式。     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。     

ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系

目的 探讨ASC和p16基因启动子甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系.方法 应用甲基化特异性PCR（MSP）检测非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子的甲基化发生率.结果 48例非小细胞肺癌中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率分别为47.9%和37.5%,显著高于癌旁正常组织（P＜0.001）;重度吸烟患者的肿瘤组织中ASC和p16基因启动子甲基化的发生率明显增高（P＜0.05）;ASC基因启动子甲基化在较小的肿瘤组织中的有较高的发生率（P＜0.05）.而且,重度吸烟患者的正常肺组织中亦可检测到ASC基因启动子的甲基化.结论 ASC和p16基因启动子的甲基化在非小细胞肺癌中有较高的发生率.ASC基因启动子的频繁甲基化可能与吸烟引起的非小细胞肺癌有关,并且ASC基因甲基化有可能是非小细胞肺癌发展过程中的一个早期事件。     

EC9706细胞和人食管鳞状细胞癌组织中MAL基因启动子区的甲基化状态

目的:探讨人食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)MAL基因启动子区的甲基化状态。方法:利用亚硫酸氢盐测序法检测人食管鳞癌细胞系EC9706中MAL基因启动子区CpG位点甲基化的发生情况。根据测序结果选用甲基化敏感性限制性内切酶酶切结合PCR技术进一步检测26例食管鳞癌组织及配对癌旁正常组织MAL基因启动子区的甲基化情况。结果:EC9706细胞中MAL基因启动子区检测出42个胞嘧啶位点的甲基化,占所有CpG位点的73.7%(42/57)。食管鳞癌组织中MAL基因的甲基化率为53.8%(14/26),远远高于配对癌旁正常组织的7.7%(2/26)(χ2=10.924,P<0.001)。不同临床病理特征食管鳞癌组织中MAL基因启动子区甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:MAL基因启动子区的甲基化可能是食管鳞癌发生的机制之一。     

喉鳞癌蛋白酪氨酸磷酸酶基因突变及甲基化研究

目的研究喉鳞状细胞癌(简称鳞癌)蛋白酪氨酸磷酸酶(PTEN)基因突变和启动子甲基化状况。方法应用聚合酶链反应-单链构像多态性方法(PCR-SSCP)分析银染系统,检测喉鳞状细胞癌新鲜或冰冻组织中PTEN基因第5、第8外显子的突变,采用甲基化敏感聚合酶链反应方法(MSP)分析喉癌及正常喉组织PTEN基因启动子过甲基化。结果PTEN基因突变均发生在喉鳞癌中,占17.5%(7/40),其中第5外显子有6例发生突变,突变率15.0%(6/40),这6例中有低分化3例,中分化3例,无高分化;淋巴结转移占83.3%(5/6)。第8外显子仅有1例发生突变,突变率为2.5%(1/40),该病例虽无淋巴结转移,但病理为低分化。40例喉鳞癌组织中,有40.0%(16/40)例PTEN基因启动子区甲基化,9例喉正常组织中未发现甲基化,喉癌中有2例既有第5外显子突变发生,又有启动子甲基化,占5.0%;有1例既有第8外显子突变,又有启动子甲基化,占2.5%。结论PTEN基因启动子甲基化及基因突变是其在喉鳞癌中失活的原因,并且该基因失活可能与喉鳞癌演进有关。     

经典Wnt信号途径相关基因异常甲基化与肺癌发生的关系

目的检测肺癌中经典Wnt信号途径相关基因(WIF-1,sFRP-1,DKK-3)启动子的甲基化状态及β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况,探讨其在肺癌发病中的作用。方法应用巢式甲基化特异性聚合酶链反应(nMSP),检测66例肺癌组织、25例相应的癌旁组织和10例正常肺组织以及肺腺癌A549细胞株中WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因启动子区域的甲基化;免疫组化SP法检测β-catenin的表达情况。结果正常肺组织均未检测到所选基因的甲基化,肿瘤组织和癌旁组织中WIF-1,sFRP-1,DKK-3基因启动子甲基化的发生率分别为:50·0%vs24·0%(P<0·05),36·4%vs12·0%(P<0·05)和36·4%vs8·0%(P<0·01);重度吸烟患者肿瘤组织3个基因的甲基化发生率明显增高(P<0·05)。肺腺癌A549细胞株中WIF-1和DKK-3基因呈甲基化状态,而sFRP-1基因呈未甲基化状态。免疫组织化学显示肺癌组织中β-catenin的阳性表达率为81·2%,异常表达率为64·4%,且与组织学类型无关(P>0·05)。结论经典Wnt信号途径相关基因启动子甲基化可能与吸烟引起的肺癌有关,甲基化的WIF-1,sFRP-1和DKK-3基因可能成为肺癌表观遗传干预治疗的新靶点。     

Rb/p16路径在非小细胞肺癌中的表达意义

目的:探讨Rb和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与临床病理因素的关系.方法:采用免疫组化SP法检测80例NSCLC组织中Rb和p16的表达.结果:在80例NSCLC组织中,分别有56例和47例显示Rb和p16表达缺失.两者之间有一定相关(P＜0.05).p16在鳞状细胞癌比腺癌中有较高的表达(P＜0.05),而Rb蛋白的表达异常与肿瘤分期有关(P＜0.05).结论:Rb/p16路径的中断在肺癌的发生发展中是常见事件.     

应用SSCP-PCR技术研究非小细胞肺癌p53基因突变

目的 :探讨非小细胞肺癌 (NSCLC) p5 3基因突变与临床病理及预后的关系 ,评价检测 p5 3基因点突变作为基因标记物在判断患者预后中的意义 .方法 :应用聚合酶链反应 单链构象多态性 (PCR SSCP)分析技术 ,检测 31例NSCLC及5例肺良性病变石蜡包埋标本 p5 3基因的点突变 .结果 :肺癌组织 p5 3基因点突变率为 4 8% (15 / 31) ,肺良性病变未检出该基因突变 ,两组相比有显著性差异 .各组织学类型肺癌p5 3基因 5～ 8外显子点突变检出频率为 :鳞状细胞癌 9例(9/ 16 ) ,腺癌 3例 (3/ 10 ) ,肺泡细胞癌 1例 (1/ 3) ,大细胞癌 2例 (2 / 2 ) .肺腺癌组织 p5 3基因点突变率比鳞状细胞癌低 .Ⅲ Ⅳ期肺癌点突变率明显高于Ⅰ期肺癌 (P <0 .0 5 ) ,p5 3基因点突变与临床分期有关 ,在低分化肺癌其突变频率明显高于分化好的肺癌 (高分化和中分化肺癌 ) ,p5 3基因突变率与年龄、性别、肿瘤大小和组织学类型无相关性 .结论 :应用PCR SSCP技术检测 p5 3基因突变能够反映肺癌的进展情况、临床分期及肿瘤分化程度 ,是判断肺癌预后的重要生物学指标 .     

肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。     

贲门癌组织RASSF1A基因启动子甲基化测定

目的:检测贲门腺癌组织中RASSF1A基因启动子的甲基化.方法:取42例贲门腺癌患者癌及癌旁正常组织,用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测RASSF1A甲基化.结果:癌旁组织RASSF1A甲基化表达率为2%(1/42),而癌组织中达64%(27/42),2者比较,差异有统计学意义(x2=36.214,P＜0.05).结论:RASSF1A基因启动子区甲基化是贲门癌经常发生的分子事件,可成为对贲门腺癌高危人群进行筛选的一项重要候选指标.     

P53基因突变、人乳头瘤病毒16，18型感染与肺鳞癌发病的关系

应用单链构象多态性分析多聚酶链反应ＥＢ染色法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ－ＥＢ）对４０例肺癌组织标本的Ｐ５３基因序列５～８外显子突变进行分析，同时应用ＰＣＲ方法检测上述标本及１８例肺良性疾病组织标本中ＨＰＶ１６、１８型ＤＮＡ相关序列，旨在分析二者在肺鳞癌发病中的作用及相互关系，并就肺鳞癌与Ｐ５３基因结构和功能异常的关系进行初步探讨。     

食管癌组织RASSF1A基因启动子区甲基化检测及其临床意义

目的探讨Ras相关结构域家族基因1A（RASSF1A）启动子区异常甲基化与食管癌发生发展的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法,检测66例食管癌组织及相应的癌旁正常组织RASSF1A基因启动子区异常甲基化。分析食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与临床病理特征的关系。结果在食管癌组织、癌旁正常组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率分别为48．5％（32／66）、6．1％（4／66）。淋巴结转移者食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（61．1％）明显高于无淋巴结转移者（33．3％）（χ^2=5．055,P=0．025）;晚期（Ⅲ～Ⅳ期）食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化的发生率（69．2％）明显高于早期（Ⅰ～Ⅱ期）（35．0％）（χ^2=7．392,P=0．007）;食管癌组织中RASSF1A基因启动子区异常甲基化与肿瘤分化程度无相关性（P〉0．05）。结论食管癌组织中存在RASSF1A基因启动子区的异常甲基化,甲基化与食管癌病理分期和淋巴结转移有关。     

HPV16、HPV18感染及p53蛋白过度表达与肺癌的相关性研究

为研究人乳头瘤病毒１６和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）感染及ｐ５３基因突变与肺癌的关系，应用经病理学证实的肺癌活组织，行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测癌组织中的ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；并用ＬＳＡＢ免疫组化法检测相应蜡块标本中ｐ５３蛋白的过度表达。在４８例肺癌组织标本中未检出ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；ｐ５３蛋白表达呈阳性，阳性率为５４．２％（２６／４８），其中鳞癌６６．７％（１８／２７），腺癌５７．１（４／７），小细胞癌３３．３％（１／３），大细胞癌３３．３％（２／６），类癌２０．０％（１／５）。提示肺癌的发生可能与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染无关，而与ｐ５３基因突变有关，尤以与鳞癌和腺癌关系密切     

甲基化特异PCR方法对p16肿瘤抑制基因的研究

目的：研究肺癌、结肠癌组织中p16肿瘤抑制基因甲基化状态及其临床意义。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）方法,特异扩增分析甲基化和非甲基化两种状态。结果：p16基因在人胚肺组织处于非甲基化状态;在人肺巨细胞癌细胞系（PLA801-D）呈甲基化状态;在检测的肿瘤标本中,60%肺癌组织及70%结肠癌组织出现甲基化状态。结论：p16基因的甲基化状态是肺癌、结肠癌组织中p16基因异常形式之一,有可能成为肿瘤分子诊断的重要标志,MSP方法有临床普及应用前景。     

p53蛋白在肺癌中的表达及其意义

应用免疫组织化学S～P法检测50例肺癌组织中p53蛋白表达情况，结果发现：50例肺癌中，p53总阳性率为46％（23／50），其中肺鳞癌为44％（11／25），肺腺癌为46．67％（9／21），未分化癌为75％（3／4），其阳性表达与患者局部淋巴结有无癌转移有显著相关性，与肺癌的组织学类型及鳞癌的分化程度无关。在肺腺癌中p53表达越高，预后越差。未分化癌中p53强阳性均伴有局部淋巴结的转移。     

P53蛋白及EGFR在肺癌中的表达及其意义

应用S－P免疫组化法对85例肺癌及25例肺良性疾病标本进行了P53蛋白及EGFR的检测。结果：P53蛋白在肺癌中的阳性率为50．6％（43／85）。鳞癌及大细胞癌阳性率显著高于腺癌及小细胞癌的阳性率（P＜0．05）。肺良性疾病标本均阴性。P53蛋白阳性者的淋巴结转移率（79．1％，34／43）显著高于P53蛋白阴性者的转移率（57．1％，24／42）（P＜0．05）。提示P53蛋白在肺癌的发生发展及转移中起重要作用。EGFR在肺癌中的阳性率为72．9％（62／85），而在肺良性病变中为12％（3／25），两者阳性率差异显著（P＜0．05）。EGFR过度表达与肺癌病理类型及是否发生转移均无相关性。肺癌癌旁组织EGFR阳性率65．3％（62／95）。增生组癌旁组织阳性率（81．0％，47／58）显著高于无增生组阳性率（40．5％，15／37）（P＜0．05），无增生组癌旁组织阳性率显著高于肺良性疾病阳性率（P＜0．05）。提示EGFR过度表达与癌旁组织的增生密切相关，可能是肺癌发生的早期事件，在肺癌的发生中起重要作用。P53蛋白及EGFR共同表达者淋巴结转移率（85．3％，29／34）显著高于非共同阳性者的转移率（48．8％，21／43）（P＜0．01）。因此，P53蛋白及EGFR共同阳性提示肺癌具有高度转移潜能，预后可能较差。     

p16基因CpG位点甲基化在维吾尔族宫颈鳞癌及HPV16感染中的意义

目的:探讨p16 基因启动子区CpG 位点甲基化及HPV16 感染与新疆维吾尔族宫颈鳞癌的关系及其意义。方法:采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法(MALDI-TOF MS) 对20 例维吾尔族宫颈鳞癌及20 例对照组维吾尔族宫颈组织中的p16 基因启动子CpG 位点甲基化进行定量检测;采用聚合酶链反应(PCR) 的方法检测两组HPV16 的感染状况。结果:宫颈鳞癌及对照组中p16 基因启动子区16 个CpG 位点中CpG1-2, CpG6 为甲基化差异位点, 宫颈鳞癌组中CpG1-2, CpG6 位点甲基化水平明显高于对照组;宫颈鳞癌组的HPV16 感染率明显高于对照组, 差异有统计学意义(P<0.05);所检测的维吾尔族宫颈鳞癌组织中p16 基因启动子区CpG 位点甲基化与HPV16 感染无明显相关。结论:p16 基因启动子区CpG1-2, CpG6 位点高甲基化及HPV16 感染均与维吾尔族宫颈鳞癌的发生有关系, 但为两个独立事件。     

P53 GENE MUTATIONS IN NON-SMALL CELL LUNG CANCER DETECTED BY POLYMERASE CHAIN REACTION SINGLE-STRAND CONFORMATION POLYMORPHISM ANALYSIS

Mutations of the p53 tumor suppressor gone are the most frequent genetic akerations detected in human lung cancer. To assess the pathogenic significance of p53 gone alterations in Chlnege non-small cell lung cancer (NSCLC), 74 paired samples of primary lung cancer and normal lung tissue far away from the cancer were analyzed for mutations of the p53 gene(exons 5-8) using exon-specific PCR, single-gtrand conformation polymorphimax (PCR-SSCP). p53 mutations were observed in 55.4% (41/74) of the samples.No linkaiges were detected between the incidence of p53 mutations and histological type, lymph node metastasis, age or sex. Significant association between p53 mutations and degree of differentiation in edenotmremmnas, not in squamous cell carcinomas, was observed, The frequency of p53 mutations in(65. 3%) was higher than in nonsmokers (33. 3%) and reached stafisrical significance. We also found p53 mutations in 6/7 samples which had tissue invasion and distant metastasis. These results suggest that smcking could be an important factor in lung carcinogenesis, p53 mutation is a worse prognosis indicator in ade and nocarcinomas and related to high aggressive behavior of human lung cancer.