竞争性定量PCR检测TCRVγＩ—Ｊγ基因重排方法的建立及应用＊

目的 为提高急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）微小残留检测的临床意义。方法 建立竞争性定量聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ＴＣＲＶγＩ－Ｊγ基因重排技术并定量分析１６例ＡＬＬ病人残留白血病细胞。结果 建立定量ＰＣＲ方法的灵敏度为１０－＾５水平。１６例ＡＬＬ缓解期残留白血病细胞为（４２７±３６４）×１０－＾５病人。３例病人可检测出寡／亚克隆重排,白血病细胞定量为１１７×１０－＾５、１９６×１０－＾５及２１１×１     

老年人急性白血病T细胞受体VγI-Jγ基因重排分析

目的为研究老年人急性白血病分子生物学特点及临床意义。方法提取34例老年人急性非淋巴细胞白血病(ANLL)、9例老年人急性淋巴细胞白血病(ALL)及10名正常献血员DNA标本,应用PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排,对阳性的PCR产物进行SSCP分析。结果34例老年人ANLL中有16例(47.1%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,老年人ANLL TCRVγI-Jγ基因重排检测阳性率显著高于非老年人ANLL组(P<0.025)。9例老年人ALL中有7例(77.8%)发现TCRVγI-Jγ基因重排,其中3例(33.3%)存在寡/亚克隆重排,老年人ALL寡/亚克隆重排阳性率显著高于非老年人ALL组(P<0.05)。10例正常献血员PCR技术扩增TCRVγI-Jγ基因重排均为阴性。TCRVγI-Jγ基因重排阳性老年人ANLL完全缓解率为25.0%(4/16),显著低于重排阴性老年人ANLL组(61.1%)(P<0.05)。结论应用PCR/SSCP方法分析老年人急性白血病TCRγ重排可作为疗效和预后判断的新指标。老年人急性白血病寡/亚克隆重排检测阳性率显著高于非老年人组可能是导致其疗效差的一个重要因素。     

分子双标记鉴别急性淋巴细胞白血病细胞克隆起源

采用多聚酶链反应（PCR）技术，检测30例急性淋巴细胞白血病（ALL）患者IgH和TcRγ重排。结果显示：有23例至少可发现一种基因重排，其中，IgH重排11例，TcRγ重排4例，二者均重排8例。IgH重排多见于B－ALL，T－ALL则常见TcRγ重排，坦存在着系列交叉现象。结合免疫表型研究，有助于确定细胞克隆来源。采用PCR扩增、标记、制备的克隆探针进行分子杂交试验，可用于白血病缓解和复发或残留细胞克隆的检测。     

免疫球蛋白重链T细胞受体γ基因重排在急性淋巴细胞白血病中的表达

目的：探讨初诊急性淋巴细胞白血病（ALL）患者免疫球蛋白重链（IgH）、T细胞受体γ（TCRγ）基因重排情况。方法：应用多聚酶链反应（PCR）检测19例初发ALL患者骨髓IgH、TCRγ基因重排。结果：19例标本中10例发生单一IgH基因重排，5例发生单-TCRγ基因重排，2例同时出现IgH/TCRγ基因重排。结论：ALL患者IgH基因重排几率高于TCRγ基因重排，且存在着交叉重排现象。     

淋巴系统肿瘤免疫球蛋白和T细胞受体重排基因的指纹图谱特征

目的确定淋巴系统肿瘤的免疫球蛋白（Ig）和T细胞受体（TCR）基因重排的特征。方法：用PCR和单链构象多态性等分析108例各类淋巴系统肿瘤。结果：不同患者各有特征性指纹图谱。54％的急性淋巴细胞白血病（ALL）和43％多发性骨髓瘤（MM）存在IgH或者TCRγ双等位基因重排，6例ALL和3例MM存在寡克隆性。结论：指纹图谱可判断恶性克隆之间的基因差异和寡克隆性。     

急性白血病复发时克隆演化的研究

为研究克隆演化在急性白血病复发发病机制中作用，应用聚合酶链反应（PCR）联合Southern杂交检测75例及其中36例复发急性非淋巴细胞白血病（ANLL）IgH重排基因，PCR检测81例及其中35例复发急性淋巴细胞白血病（ALL）IgH、TCRVγ2－Jγ、TCRVδ－Dδ3重排基因及bcr／ablmRNA，配合形态学和免疫学检查发现8例ALL（22．9％）和4例（11．1％）ANLL复发时形态学，免疫学或／和重排基因类型发生改变（克隆演化）。克隆演化是某些急性白血病复发的主要原因，克隆演化发现对于白血病治疗改进有重要意义，其选择机制尚需进一步研究。     

半重叠PCR检测急性淋巴细胞白血病微小残留病的临床意义

目的 用半重叠多聚酶链反应（PCR）检测免疫球蛋白重链（Ign）、T细胞受体γ链（TCR7）克隆性基因重排，研究急性淋巴细胞白血病（ALL）微小残留白血病（MRD）的动态变化和消长规律，预测复发，判断预后。方法 选择14例完全缓解（CR）的AI上患者，采集CR后不同时期骨髓标本，用半重叠PCR检测Ign、TCR7克隆性基因重排。结果 经过正规化疗的14例ALL患者在CR后不同时期，MRD水平不同；MRD的消长规律为波浪式7例，呈直线下降3例，持续阴性2例，复发2例中1例为MRD持续阳性、1例MRD由阴性转为阳性。结论 一次MRD-PCR检测不足以说明体内残留白血病细胞水平，连续PCR检测及动态观察对于预测复发、判断预后、评价骨髓移植（BMT）效果、研究白血病化疗方案及停药时间更有临床价值。     

儿童急性淋细胞性白血病MRL与mdr1基因表达动态监测

目的 探讨儿童急性淋巴细胞性白血病（ALL）中，微小残留白血病（MRL）与mdr1基因表达动态监测的临床意义。方法 对35例ALL患儿不同病期骨髓标本进行PCR或巢式PCR检测IgH和TCR Vδ2Dδ3基因重排，同时应用半定量RT－PCR检测mdr1基因表达。结果 随着完全缓解期延续，IgH或／和Vδ2Dδ3基因重排检出率逐渐下降，而mdr1基因阳性表达检出率增加，IgH或／和Vδ2Dδ3基因重排持续检测阳性或mdr1表达水平增高者易复发。结论 动态监测MRL和mdr1基因表达可判断疗效和预知复发，且较一次单独检测更为重要。当IgH或／和Vδ2Dδ3转阴后检测mdr基因表达可作为预知复发的一个辅助指标。     

CML患者外周血TCR Vγ亚家族T细胞的谱系变化研究

目的 探讨慢性粒细胞白血病（CML）慢性期（CP）和缓解期（CR）病人外周血T细胞中T细胞受体（TCR）Vγ基因谱系的分布和克隆性情况。方法 利用RT-PCR检测8例CML-CP和8例CML-CR病人外周血T细胞3个TCR Vγ亚家族的表达,了解TCR Vγ亚家族T细胞的分布和利用情况;阳性产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。10例健康成人外周血作为对照。 结果 8例CP期和8例CR期的CML病人外周血T细胞分别平均表达（1.88±0.64,2.13±0.83）个亚家族,两者比较尚无统计学差异,但均明显低于健康对照组（P=0.000,P=0.036）。CP和CR期病人TCR VγⅢ的表达率明显低于健康对照组（2.9±0.32）（P=0.013,P=0.043）,基因扫描显示CML-CP 和CML-CR出现克隆模式的改变主要集中在TCR VγⅡ亚家族。结论 CP期病人外周血 TCR Vγ基因谱系出现限制性利用和克隆性增殖T细胞,主要可能与病人处于细胞免疫抑制状态有关,即使CR期病人其T细胞仍处于一定程度的免疫抑制状态。     

应用RT—PCR和基因扫描分析TCR Vβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞

目的：了解急性单核细胞白血病（AML-M5）病人TCR Vβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法：利用RT-PCR分别扩增9例M5病人外周血单个核细胞的TCR Vβ24个亚家族基因的CDR3,了解TCR Vβ谱系的表达情况。PCR 产物进一步经基因扫描分析,确定T细胞克隆性。结果：9例AML-M5病人仅存在1-10个Vβ亚家族T细胞,而正常血标本则可检测到24个Vβ亚家族。基因扫描分析显示：8例病人的某些Vβ亚家族出现这一主峰图象（寡克隆性T细胞）。Vβ2寡克隆T细胞发现于6例病人中。结论：结果提示AML-M5病人存在克隆性增殖的T细胞,主要为Vβ2亚家族,推测这可能是对白血病细胞（M5）相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

应用PCR技术检测急性淋巴细胞白血病T细胞受体γ基因重排

目的寻找可作为急性淋巴细胞白血病恶性克隆的基因标记。方法应用ＰＣＲ技术扩增Ｔ细胞受体γ链基因重排，选用四种限制性核酸内切酶消化扩增产物。结果初诊或复发１０例急性淋巴细胞白血病病人中，有５例出现清晰扩增带，约４００ｂｐ，扩增物经四种限制性核酸内切酶消化后形成的限制性核酸内切酶图谱各具特色；５例处于缓解期的急性淋巴细胞白血病病人，有４例被检出清晰扩增带。结论应用ＰＣＲ扩术扩增Ｔ细胞受体γ链基因重排，能用于检测急性淋巴细胞白血病微小残留病，如果结合限制性核酸内切酶图谱分析，则能用于研究白血病细胞的克隆演化     

儿童急性淋巴细胞性白血病IgH基因和TCR基因重排的研究

采用PCR或巢式PCR方法对71例未治疗的急性淋巴细胞性白血病（ALL）患儿骨髓样本的免疫球蛋白重链基因（IgH）和T细胞受体基因（TCR）进行了克隆性重排检测，结果显示在52例B系ALL及19例T系ALL中分别存在82．7％（43例）和15．8％（3例）的IgHCDRⅢ区域重排，而TCRVδ2Dδ3基因重排见于32．7％的B系ALL（17例）和63．2％的T系ALL（12例），二种基因重排在儿童ALL的覆盖面达到88．7％（63例），此结果提示IgHCDRⅢ和TCRVδ2Dδ3基因可作为监测儿童ALL的标志基因；采有相同方法对完全缓解期患儿的67份脑脊液标本进行了检测，结果显示9例存在IgHCDRⅢ基因重排，4例存在TCRVδ2Dδ3基因重排（与骨髓标本重排类型一致），提示采用PCR技术对ALL患儿CSF标本进行IgH和Vδ2Dδ3基因重排的检测对早期诊断中枢神经系统白血病（CNSL）具有较大价值；采用有限稀释法对完全缓解期的儿童ALL病例骨髓样本进行上述二种基因重排的定量分析，结果提示对儿童ALL进行微小残留病（MRD）的持续追踪监测可指导化疗方法的选择，观察治疗效果并预测预后。     

多聚酶链反应检测淋巴细胞白血病免疫球蛋白重链基因重排及其临床意义

用多聚酶链反应技术扩增42例急、慢性白血病患骨髓白血病球蛋白重链（IgH)基因重排产生的第三互补决定区（CDR-Ⅲ）DNA序列。结果显示：35例淋巴细胞白血病中25例出现IgH基因单克隆性重排（71.4%)，其中急、慢性B淋巴细胞白血病各为80%（16/20）和87.5%(7/8)及2例T、B淋巴细胞双表型白血病，另外有1例急性未分化白敌国病也出现这种重排，而5例，急性T淋巴细胞白血病和6例急性髓细胞白血病均无重排，对3例CDR-Ⅲ阳性克隆的B-ALL病例在完全缓解期进行微小残留病变检测，其中2例PCR阳性病人先后复发，1例PCR阴性病人缓解持续时间明显长于阳性病人。     

应用RT-PCR和基因扫描分析TCRVβ谱系的CDR3长度了解急性单核细胞白血病病人克隆性增殖T细胞(英文)

目的　了解急性单核细胞白血病 (AML M5 )病人TCRVβ亚家族T细胞的分布及其克隆性。方法　利用RT PCR分别扩增 9例M5病人外周血单个核细胞的TCRVβ2 4个亚家族基因的CDR3,了解TCRVβ谱系的表达情况。PCR产物进一步经基因扫描分析 ,确定T细胞克隆性。结果　 9例AML M5病人仅存在 1 10个Vβ亚家族T细胞 ,而正常血标本则可检测到 2 4个Vβ亚家族。基因扫描分析显示 :8例病人的某些Vβ亚家族出现一主峰图象 (寡克隆性T细胞 )。Vβ2寡克隆T细胞发现于 6例病人中。结论　结果提示AML M5病人存在克隆性增殖的T细胞 ,主要为Vβ2亚家族 ,推测这可能是对白血病细胞 (M5 )相关抗原的特异性免疫反应并可能具有抗白血病的活性。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排检测在急性非淋巴细胞白血病患者中的意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者中的临床意义。方法 用聚合酶链反应（PCR）检测50例ANLL患者骨髓、外周血单个核细胞（MNCs）中克隆性IgH、TCRγ基因重排。结果 克隆性IgH和／或TCRγ基因重排在50例ANLL中检出率为32.0%（16／50），其中IgH为28.0%（14／50），TCRγ为16.0%（8／50）。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重排。27例非M3初发ANLL患者经DA或HA标准方案化疗，10例基因重排阳性的患者1疗程后获完全缓解3例（30.0%），而17例基因重排阴性患者1疗程后完全缓解13例（76.5%），两者判别具有显著性意义（P＜0.05）。结论 （1）IgH、TCRγ基因重排不仅出现于淋巴细胞来源的的肿瘤，也可见于部分ANLL患者；（2）出现IgH和／或TCRγ基因重排可能是ANLL患者预后不佳的指标之一。     

免疫球蛋白重链和T细胞受体γ基因重排在非霍奇金淋巴瘤中检测的临床意义

目的：探讨免疫球蛋白重链（IgH)和T细胞受体γ（TCRγ）基因重排在非霍奇金淋巴瘤（NHL）中的检测意义。方法:PCR方法检测25例NHL和1例反应性淋巴结炎患者,及20例正常人骨髓、周围血和／或淋巴结核细胞（MNCs0中克生性IgH、TCRγ基因重排。结果：克隆性IgH和／或TCRγ基因重排在25例NHL中检出为84.0%（21／25）;克隆性IgH基因重排在B－NHL和T－NHL中检出分别为86.7%(13/15)和20.0%(2/10),克隆性TCRγ基因重排分别为53.3%(8/15)和80.0％（8／10）。1例反应性淋巴结炎和20例正常人均未检测到IgH和TCRγ基因重。结论：IgH、TCRγ基因重排检测有助于NHL的诊断和鉴别诊断,及发现NHL早期骨髓浸润 和判断预后。     

极限稀释定量PCR法动态监测儿童急性淋巴细胞性白血病MRD

为探讨一种简便易行检测儿童急性淋巴细胞性白血病 (AL L)微小残留白血病 (MRD)的方法 ,应用 Chelex10 0为介质抽提 4 1例 AL L 患儿不同病期未染色骨髓涂片 DNA,以 TCR Vδ2 Dδ3基因重排为标志 ,采用极限稀释定量PCR法扩增 ,动态监测 MRD的消长与临床病情变化的关系。结果发现 :2 4例患儿在初诊时检出 TCR Vδ2 Dδ3基因重排(5 9% ) ,灵敏度均为 4个拷贝。经诱导缓解后 ,12例 TCR Vδ2 Dδ3基因重排仍为阳性 ,MRD值为 2× 10 - 6 ～ 1× 10 - 3,其中 7例 MRD值于 3～ 6个月内迅速下降转阴 ,骨髓检测未见复发 ,另 5例 MRD持续阳性或 MRD持续高值 ,早期复发。骨髓检测复发患儿缓解期时 MRD平均值为 1.9× 10 — 3明显高于同期骨髓检测未复发患儿的 3× 10 - 6 (P<0 .0 1)。余 12例诱导缓解后 TCR Vδ2 Dδ3基因重排转阴 ,MRD值均 <1× 10 - 6 ,其中 3例 MRD由阴性转阳后加强化疗力度 ,未复发。结果提示 :以 Chelex 10 0为介质抽提 DNA进行 PCR扩增 ,操作简便 ,敏感度高 ;动态监测 MRD的消长对指导临床治疗 ,判断疗效和预知复发具有重要的临床意义     

非同位素的PCR-RNA转录本分子杂交法检测急淋微小残留病

以T细胞抗原受体γ链重排基因（TCRγ）为标志,运用分别与V区和J区片段的保守序列一致,并带有T_7RNA聚合酶启动子序列的引物,将急性淋巴细胞白血病（ALL）初诊期的骨髓标本进行PCR（聚合酶链反应）.并将其产物转录成为RNA,以该RNA为探针,与ALL缓解期骨髓标本DNA的PCR产物所转录的 RNA杂交,杂交体用RNA酶消化,消化产物行聚丙烯酰酰凝胶电泳（PAGE）,尔后硝酸银染色观察检测结果。实验表明:该方法特异性强.灵敏度可达10~(-5)水平.具有快速、经济、没有同位素污染的优点,便于临床运用。     

儿童急性淋巴细胞性白血病MRL与mdr 1基因表达动态监测

目的　探讨儿童急性淋巴细胞性白血病 (ALL)中 ,微小残留白血病 (MRL)与mdr 1基因表达动态监测的临床意义。方法　对 35例ALL患儿不同病期骨髓标本进行PCR或巢式PCR检测IgH和TCRVδ2 Dδ3 基因重排 ,同时应用半定量RT PCR检测mdr 1基因表达。结果　随着完全缓解期延续 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排检出率逐渐下降 ,而mdr 1基因阳性表达检出率增加 ,IgH或 /和Vδ2 Dδ3 基因重排持续检测阳性或mdr 1表达水平增高者易复发。结论　动态监测MRL和mdr 1基因表达可判断疗效和预知复发 ,且较一次单独检测更为重要。当IgH或 /和Vδ2 Dδ3 转阴后检测mdr 1基因表达可作为预知复发的一个辅助指标     

急性髓性白血病免疫球蛋白重链重因和T细胞受体γ基因重排的检测及意义

为检测急性髓性白血病（AML）患者免疫球蛋白重链基因（IgH)和T细胞受体γ基因（TCRγ）克隆性重排情况，并初步探讨其意义，采用聚合酶链反应（PCR）检测51例AML患者IgH及TCRγ基因重排。结果表明，51例患者中9例（17．65％）发生IgH基因重排，11例（21．57％）出现TCRγ基因重排。由此可见，AML中确实存在系列失真现象，可有IgH及TCRγ重排发生。