人生精细胞体外分化的研究进展

哺乳动物生精细胞体外培养技术发展迅速，在人类，已经有体内发育阻滞生精细胞经体外培养发生分化，帮助生精阻滞患者生育遗传学后代的报道。研究较多的生精细胞体外培养和诱导分化的技术包括：生精小管片段培养、生精细胞-支持细胞共培养、生精细胞-Veto细胞共培养。人生精细胞体外分化由于研究例数少，目前技术还很不成熟，人体组织不易获得是限制人生精细胞体外分化研究的瓶颈。最新研究表明，通过建立人精原干细胞系，将有望为人生精细胞体外分化研究提供源源不断的研究材料。     

精原干细胞移植的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞.精原干细胞(SSC)是一种成体干细胞,是哺乳动物成体睾丸生精上皮中唯一可复制的多能二倍体细胞,能在体外分离纯化、培养、冻存,可进行同体或异体移植.1994年Brinster和Zimmermann首次进行SSC移植试验,有关SSC的研究越来越多,SSC成为生殖领域巾的研究热点.主要以小鼠为例,就SSC的生物学特征、增殖与分化和移植及其相关研究进行综述.     

精原干细胞移植的研究进展

干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,包括胚胎干细胞和成体干细胞。精原干细胞(SSC)是一种成体干细胞,是哺乳动物成体睾丸生精上皮中唯一可复制的多能二倍体细胞,能在体外分离纯化、培养、冻存,可进行同体或异体移植。1994年Brinster和Zimmermann首次进行SSC移植试验,有关SSC的研究越来越多,SSC成为生殖领域中的研究热点。主要以小鼠为例,就SSC的生物学特征、增殖与分化和移植及其相关研究进行综述。     

视黄酸通过miR-210促进隐睾生精细胞增殖分化

目的 探讨视黄酸(RA)通过miR-210对隐睾生精细胞增殖分化的影响。方法 使用氟他胺诱导隐睾小鼠模型,实验分为：正常对照组、氟他胺组、RA治疗组、miR-210敲降组、miR-210过表达组以及miR-210过表达+RA治疗组,每组各10只。使用RT-qPCR检测miR-210、C-kit和PLZF mRNA的表达水平。使用Western blot检测C-kit和PLZF的表达水平。结果 RA可显著上调隐睾组织中C-kit、PLZF mRNA和蛋白的表达水平,下调miR-210的表达水平。敲降miR-210可上调隐睾组织中C-kit、PLZF mRNA和蛋白表达水平,而过表达miR-210则具有相反的结果;同时,过表达miR-210+RA治疗可恢复过表达miR-210对C-kit和PLZF表达的抑制作用。结论 miR-210在隐睾组织中高表达,RA可通过下调miR-210的表达水平促进隐睾生精细胞增殖分化。     

小鼠精原干细胞生物学特征及其体外培养

精原干细胞是成年哺乳动物体内唯一能将遗传信息传递给下一代的成体干细胞,如能体外培养建系或建立其长期培养系统将会极大促进精原干细胞在生殖医学和干细胞研究中的实际应用。影响精原干细胞体外存活、增殖的因素很多,为促进精原干细胞体外培养条件最优化,综述小鼠精原干细胞基本生物学特征,血清和胶质细胞源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子、白细胞抑制因子等生长因子对精原干细胞体外培养的影响,以及精原干细胞在临床的应用前景。     

小鼠生精干细胞的初步分离与纯化

目的　寻求一种获取小鼠的生精干细胞的简单方法。方法　将新生小鼠睾丸采用改良的两步消化法消化 ,并通过贴壁分离方法纯化。结果　通过该方法能够获取较高纯度 ( 95 % )的A型精原细胞 ,并通过生精干细胞移植实验证实其有效性。结论　采用该方法对生精干细胞进行初步的分离和纯化是简单有效的     

胚胎干细胞向生殖细胞分化的研究进展

<正>近年来,不断有研究证明人胚胎干细胞(hESC)的多能性,以及小鼠胚胎干细胞(mESC)能够分化为早期配子并形成囊胚样结构。2003年5月,Hbner等研究发现,小鼠胚胎干细胞在体外可分化为卵母细胞。Nayernia等研究发现,mESC可于体外分化为未成熟的精子,并且成功获得了存活的后代。这些研究对发展新的生殖工程学提供了开创性思     

干细胞向生殖细胞分化的研究进展

胚胎干细胞（ESC）是一种多能干细胞,具有向生殖细胞分化的能力,由于具有致瘤性和伦理问题,限制了ESC向临床应用发展的前景。成体干细胞（ASC）也是一类多能干细胞,理论上也能分化为生殖细胞,但诱导分化过程往往受到阻滞。诱导性多能干细胞（iPS）是一种具有多能性的重编程体细胞,一定程度上可替代ESC用于基础和临床研究。目前,全球不孕不育的发生率呈逐年递增的趋势,充分认识干细胞向生殖细胞分化的机制是解决该难题的重要理论前提。就各种干细胞向生殖细胞分化的研究进展作一综述。     

精原干细胞移植技术及其应用的研究进展

精原干细胞(SSCs)是雄性生殖系干细胞,能自我增殖和减数分裂,形成精母细胞,最终形成精子细胞,向下一代传递遗传信息,是生殖系中唯一在成年之后还能增殖的细胞。将可育供体的SSCs移植到受体睾丸中,可使供体SSCs的生精能力在受体睾丸中恢复,将供体基因型通过受体传给子代。SSCs移     

抗肿瘤药物对生精功能的损害

抗肿瘤药物对生精功能的损害已引起人们的高度关注。但确切机制尚不清楚，可能与抗肿瘤药物直接损伤生精细胞，促进生精细胞的凋亡，抑制精原细胞的分化及自由基损伤等机制有关。目前尚无公认的防治措施，研究者从不同的角度提出了几种可能的保护措施：激素疗法，应用成纤维细胞生长因子，借助现代辅助生育技术及移植精原干细胞等。随着现代生殖生育技术的发展，一定会有办法解决患者化疗后的生育问题。     

人胎脑神经干细胞增殖分化的形态学观察

【目的】从32周人胎脑纹状体中分离培养神经干细胞并观察其增殖分化潜能,旨在为中枢神经系统的移植治疗寻找更广阔的材料。【方法】采用无血清培养和单细胞克隆技术,从32周自愿水囊引产人胎脑纹状体中分离出神经干细胞,并进行培养、传代、分化观察。【结果】从32周人胎脑纹状体中成功分离出具有自我更新和多分化潜能的神经干细胞,在无血清培养时细胞呈悬浮状态生长,形成神经球,该细胞具有连续克隆能力,可传代培养;在含血清培养时诱导神经干细胞分化,分化后的细胞具有神经元细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞的形态。【结论】32周人胎脑纹状体能培养出具有自我复制和分化潜能的神经干细胞。     

Evaluation of toxicity of methyl tert-butyl ether (MTBE) on mouse spermatogenic cells in vitro

As a synthetic organic chemical, methyl tert-butyl ether (MTBE) is the most common fuel oxygenate. The increasing use of MTBE has raised concern over its safety. Previous studies in vivo revealed that MTBE could alter the male reproduction system. Therefore, the current experiments were designed to evaluate whether isolated mice spermatogenic cells in vitro were sensitive to exposure to MTBE at environmental levels, and to evaluate whether spermatogenic cells had undergone changes in morphologic, activity and viability parameters after exposure to MTBE. Spermatogenic cells in vitro were incubated with medium alone (control), 100 ppb, 10 ppm, 1000 ppm, 3000 ppm MTBE, respectively, for 6, 12, 18 h. MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazo liumbromide) assay, staining with fluorescein diacetate (FDA) and propidium iodide (PI), and flow cytometric analyses were used to assess MTBE toxicity on cells and DNA. The results showed that there were no significant differences between control and treatments of < or = 1000 ppm MTBE at the same time point. Although 3000 ppm MTBE could exert toxic effects directly on spermatogenic cells, environmental levels of MTBE did not exert toxic effects on cultured spermatogenic cells.     

过量酒精对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的　研究酒精致生精细胞凋亡发生的机制及酒精凋亡相关基因Bcl- 2、Bax在睾丸及生精细胞表达的影响。方法　利用人类饮用白酒制备大鼠的酒精毒性模型 ,采用组织学技术和免疫组织化学技术检测酒精对生精细胞凋亡及其相关基因Bcl- 2、Bax表达的影响。用 2种剂量的酒精作用于大鼠的 2个生精周期 ,检测睾丸生精小管中Bcl- 2、Bax蛋白表达的阳性细胞数和表达强度。结果　每个生精小管中Bcl- 2蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 96± 3 3 74,低剂量组为 15 6 6± 2 8 5 2 ,均显著低于正常对照组 (2 2 2 6± 5 6 86) (P <0 0 1) ;每个细胞中Bcl- 2蛋白表达强度 (OD值 )在高剂量组 (0 142± 0 0 3 5 )、低剂量组 (0 15 1± 0 0 2 6) ,都明显低于对照组 (0 196± 0 0 3 2 ) (P <0 0 1) ;Bax蛋白表达的阳性细胞数在高剂量组为 (412 4± 96 75 ) ,低剂量组为 (3 3 7 5± 94 3 9) ,均明显高于对照组(2 14± 82 5 7) (P <0 0 1) ,Bax蛋白的表达强度 (OD值 )也有同样的变化 ,高剂量组 (0 113± 0 0 3 6)和低剂量组 (0 0 82± 0 0 17) ,均明显高于对照组 (0 0 5± 0 0 2 4) (P <0 0 1)。凋亡细胞增多 ,平均每个生精小管中的凋亡细胞数目在高剂量组为 15 5 3± 3 75 ,显著高于正常对照组 (2 2     

间充质干细胞向肝细胞分化研究

目的探讨间充质干细胞在体外诱导分化为肝细胞后,细胞增殖能力和免疫抑制能力等干细胞生物学的改变。方法间充质干细胞在体外进行向肝细胞诱导分化培养,分化为具有部分成熟肝细胞功能的肝细胞样细胞,并对这些肝细胞样细胞继续培养。流式细胞仪检测细胞表型,BrdU法检测细胞增殖能力,与CD4⁺T淋巴细胞共孵育实验检测细胞免疫抑制实验。结果间充质干细胞分化为肝细胞后,虽然具备了部分成熟肝细胞的功能,亦丧失了间充质干细胞本身的一些特性;BrdU法测增值能力,其OD值从1.859±0.117降到1.24±0.103,抑制CD4+T细胞激活的能力从94.8%(100%-5.2%)降到68.8%(100%-31.2%)等;而且分化后的细胞处于不稳定的分化状态,继续培养后,其细胞生物学相关特性和功能均出现去分化的现象,比如增殖能力恢复到OD值为1.501±0.229,免疫抑制能力恢复到81.8%(100%-18.2%)。这种不稳定的状态,进入体内后,是否会增加突变或致癌的概率,仍需进一步的研究。结论间充质干细胞比其向肝细胞诱导分化后的细胞更具安全性,更适合肝病治疗。     

诱导多能干细胞体外分化为雄性生殖细胞的研究进展

男性不育是影响生殖健康的重要问题,由于致病因素和发病机制复杂,临床上针对非梗阻性无精子症等不明原因的男性不育症往往缺乏特异性治疗措施。随着生殖细胞体外诱导培养的技术的发展,研究者们希望利用无精子症患者源性的多能干细胞体外培养出自身具有功能性的精子,从而治疗男性不育症。体外培养生殖细胞的策略,通常是先将诱导多能干细胞分化...     

Effect of selenium supplementation on spermatogenic cells of goats

Selenium is an essential trace mineral that is required for many physiological functions in animals and the potential relevance of selenium to the reproductive system of livestock has been considered by many researchers. The objective of this study was to examine the effect of selenium supplementation on the spermatogenic cells of goat. Eight young male crossbred (Katjang x Boer) goats, aged between 9 to 11 months, were used in this study. The control group (CON; n = 4) was fed with a diet consisting of 60% Guinea grass and 40% concentrates while the treatment group (Se-SUP; n = 4) was fed with the same diet as the goats in the control group but with supplementation of 0.6mg selenium (sodium selenite powder) per goat daily for 100 days and were slaughtered on the 101st day. There were no significant differences (p>0.05) in the mean number of spermatogonium, spermatocytes, spermatozoa and the total number of spermatogenic cells between the CON and Se-SUP goat respectively. However, there was a significant increase (p< 0.05) of spermatid in Se-SUP goats. The mean percentage of spermatids was significantly increased (p< 0.05) while spermatozoa was significantly decreased (p< 0.05) in Se-SUP goats. In conclusion, selenium supplementation increased the percentages of spermatids and decreased the percentages of spermatozoa in the seminiferous tubules in goats.     

叶酸对体外胎鼠神经干细胞增殖分化的影响

目的探讨叶酸对体外培养的胚胎大鼠神经干细胞(NSCs)增殖分化的影响。方法采用无血清悬浮培养方法分离培养NSCs,光镜下观察不同时间点各组NSCs形态变化,并采用MTT法、生长曲线法检测叶酸对细胞增殖和功能的影响。培养6天后用含5%胎牛血清的培养基进行分化培养,于分化第7天用免疫荧光技术做Nestin/BrdU双标染色,共聚焦显微镜下观察,每组随机选择8个非重叠视野,计数做统计处理。结果MTT结果显示,两叶酸干预组NSCs增殖较对照组快(P<0.05),分化后免疫荧光双标试验中,两叶酸干预组NSCs增殖率高于正常对照组,且差异有显著性(P<0.05)。结论叶酸可以在一定程度上增强NSCs的增殖能力,促进NSCs的生长与分化。     

Integrase-defective lentiviral vectors encoding cytokines induce differentiation of human dendritic cells and stimulate multivalent immune responses in vitro and in vivo

Integrase-defective lentiviral vectors (ID-LVs) show several hallmarks of conventional lentiviral vectors such as absence of cytotoxic effects and long-term expression in non-replicating target cells. The integration rate of ID-LVs into the genome of target cells is dramatically reduced, which enhances safety and opens perspectives for their use in vaccine development. ID-LVs have been shown to be effective vaccines in mouse models, but functional studies with human cells in vitro and in vivo are lacking. Here, we evaluated whether ID-LVs expressing combinations of cytokines (GM-CSF/IL-4 or GM-CSF/IFN-α) used to transduce human monocytes would result in functional "induced dendritic cells" (iDCs). Overnight transduction of monocytes with high titer ID-LVs generated highly viable (14 days) and immunophenotypically stable iDCs expressing GM-CSF/IL-4 ("SmartDCs") or GM-CSF/IFN-α ("SmyleDCs"). SmartDCs and SmyleDCs maintained in vitro continuously secreted the transgenic cytokines and showed up-regulation of several endogenously produced inflammatory cytokines (IFN-γ, IL-2, -5, -6, and -8). Both iDC types potently stimulated T cells in mixed lymphocyte reactions at levels comparable to conventional DCs (maintained with exogenous cytokines). A single in vitro stimulation of CD8(+) T cells with autologous SmartDCs or SmyleDCs pulsed with peptide pools of pp65 (a human cytomegalovirus antigen) resulted in high expansion of central memory and effector memory CTLs reactive against different pp65 epitopes. We further evaluated the effects of SmartDCs and SmyleDCs to expand anti-pp65 CTLs in vivo using immune deficient NOD/Rag1((-/-))/IL-2rγ((-/-)) (NRG) mice. NRG mice immunized subcutaneously with SmartDCs or SmyleDCs co-expressing the full-length pp65 were subsequently infused with autologous CD8(+) T cells. Both types of iDCs effectively stimulated human CTLs reactive against different pp65 antigenic determinants in vivo. Due to the simplicity of generation, robust viability and combined capacity to stimulate homeostatic, antigenic and multivalent responses, iDCs are promising vaccines to be explored in immunization of lymphopenic patients in the post-transplantation setting.     

体外诱导胚胎干细胞分化为神经细胞特性的实验研究

目的研究体外利用全反视黄酸(RA)诱导小鼠胚胎干细胞(mESC)分化为神经细胞的培养方法。方法悬滴3天转悬浮1天两者结合的培养方法得到胚体(EBs),再利用RA对其处理4天后,进行免疫组织化学、RT-PCR以及兴奋性功能的检测,观察神经细胞获得的效率及其生理特性。结果利用RA诱导方法得到的神经细胞,免疫组化表明nestin蛋白表达的阳性率为(53.49±6.02)%,且RT-PCR法分析其能表达nestin、glutaminase和Brn-3等神经细胞特异基因,同时在Glu刺激下具有与脑来源神经元相似的特性和功能。结论利用本实验诱导方法,获得神经细胞的比例较高,且具有与神经元相似的生物学特性。