杀菌性/通透性增加蛋白模拟肽对内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用

目的：通过杀菌性／通透性增加蛋白（BPI）模拟肽（BNEP）拮抗内毒素（LPS），观察对血管内皮细胞分泌白细胞介素－6（IL－6），肿瘤坏死因子－α（INF－α）以及表达细胞间黏附分子－1（ICAM－1）的影响，探讨BNEP对LPS致血管内皮细胞损伤的保护作用。方法：采用体外培养的原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为模型，分别观察单纯应用LPS，BNEP以及不同剂量BNEP与LPS作用后各细胞因子的分泌表达，IL－6，TNF－α应用双抗夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定。ICAM－1采用生物素－抗生物素－过氧化物酶复合物（SABC）－cy3免疫荧光染色，激光共聚焦扫描显微镜下观察其表达情况，结果：LPS 10ng/ml可使IL－6分泌量显著增加；BNEP 60ug/ml即可显著降低10ng/ml LPS诱导的IL－6分泌，随BNEP浓度增加IL－6分泌量呈降低趋势，达240ug/ml时，IL－6分泌量与单纯应用BNEP组比较，差异无显著性意义（P＞0．05），BNEP 120ug/ml与LPS10ng/ml作用后，可使TNF－α分泌量降低94％，BNEP 240ug/ml可完全阻断TNF－α的分泌。激光共聚焦扫描显微镜观察结果显示，BNEP与LPS作用后，ICAM－1在细胞膜及细胞浆的表达明显减弱。结论：BNEP在阻断LPS对细胞的激活和损伤，减少炎症介质和细胞因子的过度释放中具有明显的保护作用。     

LPS诱导肺微血管内皮细胞ICAM-1的表达及核调控机理的实验研究

目的：研究细胞脂多糖（LPS）诱导的肺微血管内皮细胞（PMVEC）ICAM－1的表达及调控机制，方法：100ng.ml^-1LPS刺激PMVEC0h,2h,4h,6h,8h或10ng.ml^-1，50ng.ml^-1,100ng.ml^-1LPS刺激6h，免疫细胞化学检测PMVECICAM－1的表达，凝胶电泳迁移率变化分析检测NF－κB的活化，并通过加入活化阻断剂PDTC观察对PMVEC ICAM－1表达的影响。结果：PMVECICAM－1的表达与LPS的刺激呈时相－剂量依赖方式，LPS的刺激迅速活化NF－κB，60min达到高峰，后逐渐下降，PDTC能显著降低ICAM－1的表达（P＜0．01），结论：LPS刺激诱导NF－κB的活化，启动ICAM－1的合成表达。     

人脑创伤后神经元凋亡及调节机制的观察

目的：观察人类急性脑创伤后迟发性神经元死亡现象，了解调节人类神经元凋亡的机制及相关基因表达变化，为临床治疗迟发性神经元死亡寻找新的方法。方法：收集急性脑创伤患者脑标本，采用光镜、电镜以及凋亡细胞原位末端标记法（TUNEL）观察创伤后神经元DNA损伤情况；用原位杂交、免疫组化法观察bcl-2、bax、p53、caspase-3 p20亚单位在mRNA与蛋白质水平表达变化。结果：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生，24h左右最为明显。正常人脑组织中几乎没有bcl-2、p53 mRNA及蛋白以及活化的caspase-3存在。急性创伤后bcl-2、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3被激活。正常人脑组织持续性表达高水平bax mRNA及蛋白，创伤后bax mRNA及蛋白表达升高。结论：人脑创伤后有细胞凋亡现象发生。人脑创伤造成bcl-2、bax、p53 mRNA及蛋白表达增加；caspase-3酶活性增加。     

还原型辅酶Ⅰ(NADH)对PC12细胞鱼藤酮损伤的分子调控

为探讨NADH对PC12细胞线粒体鱼藤酮损伤的修复机制，采用细胞毒实验、免疫荧光和流式细胞仪检测细胞在鱼藤酮损伤前后细胞增殖基因（c-myc、c-erbB-2）、抗凋亡基因（bcl－2）、抑癌基因（p53）、细胞快反应基因（c-fos）相关蛋白和细胞增殖核抗原（PCNA）的表达。结果表明，鱼藤酮能明显抑制PC12细胞增殖，下调c-erbB-2、c-myc、bcl-2和p53基因的表达；NADH可以抑制鱼藤酮对PC12细胞线粒体的毒性作用，上调细胞bcl-2c、c-myc、c-erbB－2基因和PCR的表达，提示鱼藤酮可能通过控线粒体磷酸化过程和下调细胞增殖基因（c-rebB-2、c－myc）、抗凋亡基因（bcl-2），上调快反应基因(c-fos）表达致使细胞损伤，NADH抑制鱼藤酮对PC12细胞的损伤可能与bcl-2、c-myc、c-erbB-2和p53表达调控有关。     

N-乙酰-L-半胱氨酸对亚砷酸钠诱导的内皮细胞凋亡的防治作用

目的　全身炎症反应综合征时内皮细胞 (ECs)凋亡是许多继发性损伤发生、发展的重要环节 ,观察N -乙酰 -L -半胱氨酸 (NAC)对ECs凋亡的防治作用。　方法　采用亚砷酸钠(Ars)在体外诱导ECs凋亡 ,应用流式细胞术测定凋亡细胞比例、细胞间黏附分子ICAM - 1表达和细胞内氧化状态水平 ,以及NAC处理后上述指标的改变。　结果　 80 μmol LArs及 16 0 μmol LArs浓度时应用NAC可以使凋亡细胞百分率分别从 (2 5 .7± 2 .0 ) %、(5 4.4± 11.1) %降低至 (2 0 .4±1.3) %、(33 .1± 6 .5 ) % (P <0 .0 5 ) ,同时使ICAM - 1表达下降 ,40 μmol LArs及 80 μmol LArs浓度时应用NAC可以使细胞内氧化状态恢复到对照水平。　结论　NAC可以显著防治Ars诱导的内皮细胞凋亡 ,其防治作用可能与调节ICAM - 1表达及改变内皮细胞内氧化状态有关     

术前介入治疗对非小细胞性肺癌细胞凋亡的影响

目的：研究介入治疗对非小细胞肺癌细胞凋亡的影响，探讨介入治疗术前应用的疗效。材料和方法：采用流式细胞仪与免疫组化方法检查介入治疗后行手术35例标本和单纯手术31例标本的细胞凋亡率、p53和bcl-2蛋白表达。结果：介入治疗组的细胞凋亡率明显高于单纯手术组（P＜0．05）；介入治疗组的p53蛋白阳性表达明显低于单纯手术组（P＜0．05）；介入治疗组的bcl-2蛋白阳性表达与单纯手术组相比略有升高，但无显著性差异（P＞0．05）。结论：介入治疗可促进细胞凋亡，近期疗效较好，同时术前介入治疗可诱导肿瘤细胞的多药耐药性产生，疗程不宜过长。     

P53，Bax,Bcl—2蛋白表达及细胞凋亡在急性放射性皮肤溃疡发生发展过程中的作用探讨

目的：研究细胞凋及一些凋亡相关基因（p53,bcl-2,bax)的表达在急性放射性皮肤贵疡发生发展过程中的作用,方法：采用Wistar大鼠以^60Cor射线进行局部照射,建立急性放射性皮肤溃疡动物模型,观察病变40d,然后采用免疫组化方法检测皮肤溃疡组织中P53,Bcl-2,Bax蛋白表达,并采用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡,结果,照后14d照射野内开始出现皮肤细胞和小血管平滑肌中,照后14－21d为Bax蛋白表达高峰,之后逐渐减弱,主要定位于血管内皮细胞,部分成纤维细胞及新生表皮细胞中,Bcl-2则在照后1－11d呈弱或中度阳性,定位于表皮,毛囊上皮及血管内皮口,之后为阴性或可疑阳性,照后11－35d,上述细胞特别是血管内皮细胞凋亡率较正常伤口愈合早期增高,结论：辐射诱导的P53,Bax-Bcl-2表达的变化及细胞亡率特别是血管内皮细胞凋亡率的增主屿放射性皮肤溃疡发生,发展及难愈合（不能形成有效肉芽组织）的分子机制相关。     

休克期切痂对大鼠肝组织ICAM—1及TNF—α mRNA表达的影响

为研究烧伤后肝组织细胞间粘附分子－1（ICAM－1）及肿瘤坏死因子－α（TNF－α）的表达及肝组织髓过氧化物酶（MPO）的规律，论证及早切除焦痂的重要性，取大鼠176只，30％Ⅲ度烫伤，观察伤后不同时相点及8不同时机切痂后肝组织ICAM－1、TNF－α mRNA的表达及肝组织MPO活性变化。结果显示，汤伤后肝组织ICAM－1及TNF－α的mRNA表达在伤后4h即已升高，8h和24h切痂组动物伤后96h恢复正常。未切痂组和96h切痂组在伤后7天仍未恢复正常；休克期切痂组MPO活性96h恢复正常，未切痂组和非休克期切痂组伤后7天仍未恢复正常。提示及早切痂去除了坏死组织，减轻了由粘附分子介导的中性粒细胞对内皮细胞的进一步损害。     

辐射诱导骨髓细胞凋亡及相关基因表达研究

目的 研究辐射诱导骨髓细胞凋亡、bcl-2和p53基因表达及意义。方法 γ射线全身照射小鼠,采用原位末端标记、原位杂交和图像分析等技术,骨髓细胞凋亡及bcl-2和p53表达。结果 照射后6h骨髓细胞凋亡;bcl-2于细胞凋亡时减少,而于其后修复早期增加;p53于造血细胞凋亡及之后修复均增多,mtp53仅其修复时阳性。结论 辐射可导致骨髓细胞凋亡,且呈剂量相关性;bcl-2与p53基因均参与其凋亡和修复过程。     

脑创伤早期大鼠肺组织细胞间黏附分子-1mRNA的表达及其意义

目的 观察脑创伤后早期大鼠细胞间黏附分子－1（ICAM－1）mRAN的表达及细胞定位,探讨其病理生理意义。方法 Wistar大鼠104只,随机分为假致伤组（8只）、致伤组（48只）、致伤加N－乙酰半胱氨酸（NAC）处理组（48只）。用牙科钻在大鼠冠状缝后缘、中线左侧开骨窗、保持颅脑膜完整,再用落体撞击装置撞击硬度,按各时相点麻醉成功后,取相同部位肺组织制作标本,采用原位杂交、计算机图像分析技术及病理学观察等方法,研究脑创伤后肺组织ICAM－1mRNA的表达和分布情况,以及病理学改变。结果 假致伤动物ICAM－1mRNA在肺组织中仅有少量表达。脑创伤后,大鼠肺组织ICAM－1mRNA表达强度明显增加;阳性细胞主要定位于支气管内皮细胞、肺间质细胞、血管内皮细胞及血管壁组织细胞。腹腔注射N－乙酰半胱氨酸（NAC）显著抑制脑伤后肺组织ICAM－1mRNA表达。结论 脑创伤后肺内ICAM－1mRNA表达分泌增加,可能是脑外伤后急性肺损伤发病的分子基础之一。     

烧伤血清诱导RAW264.7细胞分泌TNF-α的规律

目的：探讨烧伤血清诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7细胞分泌TNF-α的规律及其在脓毒症中的作用。方法：烧伤血清的剂量效应组分别用含有0．5,1．0,1．5,2．0,2．5ml烧伤血清的培养基与小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7共培养6h,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。采用流式细胞技术观察细胞的凋亡。烧伤血清的时间效应组以含有2．5ml烧伤血清的培养基,对照组以不含烧伤血清的培养基,另外以含有2．5ml烧伤血清和100mg／L LPS的混合组的培养基分别培养RAW264．7细胞0,2,4,6,8,10,12,24h,同上留取离心后的培养液上清,用双抗体夹心ELISA法测其上清中的TNF-α含量。结果：将烧伤血清加入到小鼠单核巨噬细胞RAW264．7培养液中能明显刺激TNF-α的分泌。在0．5ml～2．5ml范围内,烧伤血清诱导RAW264．7细胞的TNF-α分泌增加,呈显著的剂量依赖性关系,2．5ml烧伤血清能明显诱导RAW264．7细胞的凋亡;烧伤血清组和烧伤血清与LPS的混合组RAW264．7细胞的TNF-α分泌在0～24h间呈双相性规律。结论：烧伤血清能诱导小鼠单核巨噬细胞系RAW264．7的TNF-α分泌与凋亡,初步证实烧伤血清在脓毒症的发生、发展中发挥重要作用。     

凋亡相关基因与食管鳞状细胞癌放射敏感性相关关系的研究

目的 探讨凋亡相关基因ｂｃｌ－２,ｃ－ｍｙｃ,ｐ５３与食管鳞癌放疗敏感性的关系。方法 采用免疫组化ＬＳＡＢ方法检测食管癌活检组织中ｂｃｌ－２,ｃ－ｍｙｃ,ｐ５３基因表达水平,病人接受放射治疗观察疗效,分析基因表达与放射敏感性的关系。结果 ｂｃｌ－２蛋白表达阳性者放射敏感性明显低于表达阴性者,ｐ５３蛋白表达阳性者略差于阴性者;ｃ－ｍｙｃ基因表达与放射敏感性无关。结论 ｂｃｌ－２,ｃ－ｍｙｃ,ｐ５３等凋亡相关基因表达产物的检测及综合分析有助于食管鳞癌放疗疗效的预测。     

碱性成纤维细胞生长因子和丹参对反复高 G_Z暴露大鼠脑组织中bcl-2和p53 mRNA表达的影响

目的　探讨细胞凋亡在反复高 GZ暴露所致脑损伤中的病理作用以及碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)和丹参对反复高 GZ暴露致脑损伤的防护作用及其机制。　方法　 2 0只 SD大鼠随机分成 5组 ,对照组大鼠 G值为 1GZ,实验组大鼠在动物离心机上经历了 3次 14GZ/4 5 s(两次间间隔 30 m in)作用。 b FGF处理组、丹参处理组和生理盐水处理组在 GZ暴露前后分别给予腹腔注射 b FGF(10 0 μg/kg)、丹参 (15 g/kg)或生理盐水 (2 m l)各一次。于暴露后 6 h处死大鼠取脑 ,用半定量反转录聚合酶链反应 (RT- PCR)方法检测大鼠脑组织中 bcl- 2和 p5 3m RNA表达以及用原位末端脱氧核苷酸转移酶 (Td T)标记法 (TUNEL )检测脑内神经元细胞凋亡情况。　结果　 GZ暴露组可见明显的 bcl- 2、p5 3m RNA表达变化和部分神经细胞凋亡 ,而 b FGF和丹参能阻断 bcl- 2和 p5 3表达变化和抑制神经细胞的凋亡。　结论　 GZ重复暴露可引起大鼠脑神经细胞凋亡及凋亡相关基因 bcl- 2和 p5 3的表达变化 ,细胞凋亡是反复高 GZ暴露致脑损伤的机制之一 ,而 b FGF和丹参对 GZ暴露所致的脑损伤具有防护作用。     

Effect of bcl-2 deficiency on the radiation response of clonogenic cells in small and large intestine,bone marrow and testis

Purpose : Overexpression of bcl -2 protects against radiation induced apoptosis in lymphohaematopoietic cell types in vivo, whilst bcl -2 deficiency radiosensitizes murine T-lymphocytes in vitro. However, there are few data regarding the influence of bcl-2 deficiency on the radiosensitivity of non-lymphoid cell types. The purpose of this study was to investigate the role of bcl-2 in the clonogenic radiation response of intestinal crypts, bone marrow progenitor cells and testicular stem cells. Method : Survival curves were obtained for each cell type from bcl -2 null (-/-), heterozygote (+/-) and wild type (+/+) mice. Crypt survival in the small and large intestine was assessed using the crypt microcolony assay. Committed haemopoietic progenitors were assayed using in vitro colony-forming cell (CFC) assays and survival of clonogenic spermatogonia was assessed by scoring regenerative tubules at 35 days post-irradiation. Results : There was no difference in small intestine crypt survival between the three genotypes. In the colon, there was a tendency towards lower clonogen survival in the +/- and -/- animals. Haemopoietic in vitro CFC from -/- animals showed lower survival in comparison to +/+ mice, but spermatogonial stem cells were comparatively more radioresistant. Conclusions : Deficiencies in bcl -2 a ffect the radiation response of different cell populations in small but different ways. This may be due to variations between cells in their innate capacity for apoptosis, their dependence on different members of the bcl -2 family gene and their cell-cycle status and p53 expression.     

转染野生型p53基因介导的HL—60细胞凋亡与p21蛋白表达的关系

目的：探讨野生型p53基因对HL－60细胞的作用机制,并检测p21的表达,探讨二者在白血病中的关系。方法：用脂质体介导的方法将野生型p53基因导入p53基因严重缺失的人髓细胞白血病细胞系HL－60中,用形态学,电镜,流式细胞仪,间接免疫荧光等方法检测p53对HL－60细胞的促凋亡作用及对p21表达的调节作用。结果：野生型p53基因能促进HL－60细胞凋亡及上调p21表达。结论：p21可能在p53促HL－60细胞凋亡中起协同作用。     

bcl-2反义寡核苷酸对HL-60细胞作用的研究

探讨ｂｃｌ－２反义寡核苷酸对ＨＬ－６０细胞的作用,将人工合成的ｂｃｌ－２反义寡核苷酸片段与ＨＬ－６０细胞共培养,在作用的第０、１、３、５天通过细胞计数和锥虫蓝染色法检测细胞的生长、存活情况,并通过免疫组化法（ＡＰＡＡＰ法）检测细胞内ｂｃｌ－２蛋白表达水平的变化,通过流式细胞仪分析细胞凋亡的情况。结果表明,ｂｃｌ－２反义寡核苷酸可显著地抑制ＨＬ－６０细胞增殖,而且可以调ＨＬ－６０细胞内ｂｃｌ－２蛋白     

Effects of Serum Starvation on Radiosensitivity,Proliferation and Apoptosis in Four Human Tumor Cell Lines with Different p53 Status

PURPOSE: The effects of serum starvation on radiation sensitivity, cell proliferation and apoptosis were investigated with particular consideration of the p53 status. MATERIAL AND METHODS: Four human tumor cell lines, Be11 (melanoma, p53 wild-type), MeWo (melanoma, p53 mutant), 4197 (squamous cell carcinoma, p53 wild-type) and 4451 (squamous cell carcinoma, p53 mutant), were used. After the cells had been incubated in starvation medium (0.5% FCS) for 1-6 days, changes in cell cycle distribution, induction of apoptosis and necrosis, and changes in radiation sensitivity were assessed by two-parameter flow cytometric measurements of DNA-dye-exclusion/Annexin V binding, and a conventional colony assay, respectively. RESULTS: p53 wild-type cell lines showed a decrease in the BrdU labeling index and an increase in the apoptotic cell frequency in starvation medium. p53 mutant cell lines showed a decrease in the BrdU labeling index but no evidence of apoptosis. These cells went into necrosis instead. The radiation sensitivity was increased in 4451 and slightly decreased in Be11 and 4197 in starvation medium. CONCLUSION: These data suggest a functional involvement of p53 in starvation-induced G1-block and apoptosis in tumor cells. Altered radiosensitivity after culture in starvation medium seemed to be explained at least in part by the starvation-induced G1-block. The frequency of starvation-induced apoptosis or necrosis was not correlated with radiation sensitivity.