人角膜缘干细胞体外培养的增殖与分化研究

目的了解角膜缘干细胞体外培养的增殖分化规律。方法组织块法培养细胞,测定细胞克隆形成率（ＣＦＥ）,免疫荧光染色检测干细胞表达角质蛋白Ｋ３的状况。结果原代培养２１天左右细胞生长达到饱和,传第１代７～１０天形成单层,ＣＦＥ为９．５２％±４．９７％;传第２代７天,ＣＦＥ为４．２５％±２．１０％（Ｐ＜０．０１）。正常角膜缘基底细胞不表达角质蛋白Ｋ３;原代培养的干细胞亦不表达Ｋ３,传第１代细胞有部分表达。结论人角膜干细胞位于角膜缘基底部,培养的角膜缘干细胞早期具有较高的增殖力并保持干细胞的分化特性。     

角膜缘干细胞的研究进展

健康的角膜上皮是维系完整的眼表以及良好视功能的前提条件,角膜上皮的稳定是由一群位于角膜缘基底部的干细胞实现的。一、角膜缘干细胞的概念Davanger和Evensen[1]于1971年首次观察到角膜缘色素样细胞作水平向心运动,推测角膜上皮细胞更替源于角膜缘,提出了角膜缘干细胞(limbalstem     

角膜缘上皮细胞分化与增殖及细胞周期素表达

目的：探讨角膜缘上皮细胞分化、增殖能力与细胞周期素D1、E、A表达水平的关系。方法：应用消化培养法分别培养人角膜缘及角膜中央上皮细胞,并将角膜缘上皮细胞传至第3代,将角膜中央上皮细胞传至第1代。分别选用抗细胞周期素D1、E、A的抗体,通过免疫组织化学染色检测各代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平。结果：角膜缘上皮原代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平最高,传代培养时细胞周期素的表达水平逐代下降,至第3代已基本上检测不到细胞周期素的表达。角膜中央上皮原代细胞仅极少数表达细胞周期素D1、E、A,传至第1代时已失去表达细胞周期素的能力。各代细胞表达细胞周期素D1、E、A的水平与其增殖能力一致。结论：细胞周期素D1、E、A表达水平的高低可反映角膜缘上皮细胞增殖能力的强弱。高度表达细胞周期素D1、E、A的角膜缘上皮细胞可能就是角膜缘干细胞。细胞周期素可能成为干细胞的一种新的免疫学或生化标记。     

角膜缘干细胞增殖分化调节机制的研究进展

角膜缘干细胞是一种独特类型的细胞，其增殖分化有特殊机制调节。对此机制进行研究，需先用一定方法分离纯化角膜缘干细胞，然后采用克隆培养及相应的增殖分化评价方法进行评价。角膜缘干细胞增殖分化受局部微环境调节。血清、各种细胞因子及基质细胞对其增殖分化均有调节作用     

角膜干细胞增殖与分化表达实验研究

目的 了解角膜缘干细胞体外生长的增殖分化特性,检测上皮细胞生长因子对干细胞增殖的促进作用。方法 采用ＤＭＥＭ和Ｆ１２培养基进行兔角膜上皮细胞培养,用克隆形成率（ＣＦＥ）、免疫组化染色和蛋白质免疫印迹等方法检测细胞的增殖力和分化表达状况。结果角膜缘干细胞（ＬＣ）在本培养条件下能够正常传代生长５代,ＣＦＥ为（５．０７±２．３５）％,而角膜中央上皮细胞（ＣＣ）仅第１次传代生长,ＣＦＥ为（１．１２±０．８     

角膜缘干细胞培养后移植的研究进展

眼表的许多疾病都是由于角膜缘干细胞功能障碍引起，角膜缘干细胞培养后移植是治疗角膜缘干细胞功能障碍的有效手段。本文将对培养的角膜缘干细胞移植的材料，角膜缘干细胞培养后自体和异体移植以及移植术后的处理等方面的研究作一简要综述。     

角膜缘干细胞培养体系的研究进展

正常角膜上皮形态稳定和功能的维持是依靠角膜缘干细胞的不断增殖和移行来实现。近年来，角膜缘干细胞的重要作用逐渐被人们所认识。本文从角膜缘干细胞的定位、体外取材、分离培养、培养条件的选择、常用体外培养的载体、鉴别方法等对角膜缘干细胞培养体系进行综述。     

培养的角膜缘干细胞移植研究进展

由于传统治疗方法的局限性，培养的角膜缘干细胞移植成为近年来眼表疾病研究的核心内容之一。动物实验和基础临床研究证实，培养的角膜缘干细胞移植能有效恢复眼表正常结构，具有较多优越性，但仍有诸多问题亟待解决。本就其近年的进展进行综述。     

角膜干细胞和角膜缘缺陷症

本文总结了近年来国内外有关角膜干细胞的概念，组织学鉴定、细胞生物学特征、增殖调节以及由于角膜缘功能障碍导致角膜干细胞丧失后引起的角膜缘缺陷症及其临床表现，对认识干细胞在角膜疾病中的重要作用具有一定意义。     

角膜缘干细胞缺乏的临床诊疗

许多严重的眼表疾病与角膜缘干细胞缺乏相关:先天性无虹膜症、眼表烧伤、接触镜相关眼病、眼表多次手术、长期局部滴眼剂损伤和各种眼表自身免疫性疾病等都将因角膜缘干细胞缺乏导致角膜结膜化或血管化而致盲。本文对角膜缘干细胞缺乏的诊疗原则作一系统介绍,着重讨论角膜缘干细胞移植术的多种术式和术后处理。     

角膜缘干细胞在重建眼表中的作用研究进展

正常角膜上邓小平的完整性依赖于基底层角膜缘干细胞的不断增殖。角膜缘于细胞对角膜上皮的再生起着重要的作用。如果角膜缘干细胞因各种原因严重缺乏，会导致持续性角膜上皮糜烂、角膜新生血管和假性翼状胬肉形成，角膜的完整性和透明性将受到破坏。本对角膜缘干细胞的性质、特点、分布、检测、各种干细胞移植术、干细胞的体外培养及其适宜的载体等进行综述，以便对角膜缘干细胞进行更深入的研究。     

角膜缘干细胞移植的研究进展

角膜缘干细胞(LC)的研究进展为临床上角膜缘干细胞移植铺平了道路。眼表疾病的研究进展向角膜缘干细胞移植提出了新的挑战。角膜缘干细胞移植的研究进展为有效治疗眼表疾病，恢复患者视功能提供了一个契机。通过查阅国内外的资料，主要综述了角膜缘干细胞移植的研究进展以及角膜缘干细胞和眼表疾病关系的研究进展。     

角膜缘干细胞生存微环境的研究进展

目前,角膜缘移植术已成为重建角膜上皮的重要手段,但尚少对角膜缘干细胞生存微环境的深入研究。本文通过温习近10年来有关角膜缘干细胞研究的文献,着重论述在角膜缘干细胞生存微环境中对干细胞的增生和分化有重要影响的因素以及影响干细胞凋亡的主要因素。旨在提供通过改善干细胞生存微环境,提高角膜表面重建术的成功率。     

新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠角膜缘干细胞增殖效应的影响

目的：观察新鲜羊膜移植对碱烧伤大鼠模型角膜缘干细胞增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达的影响。

方法：SD大鼠40只40眼制作眼碱烧伤模型; 随机选取20只20眼行新鲜羊膜移植为实验组,对照组为不处理的烧伤模型眼。于术后1,2,3,4wk取角膜缘组织,采用免疫组化技术观察PCNA在角膜缘干细胞的表达情况。

结果：PCNA在实验组和对照组的角膜缘干细胞中均有表达,位于角膜缘上皮细胞基底层的细胞核内,但羊膜移植组显著高于对照组,两者比较有统计学意义(P<0.05); 羊膜移植术后1,2,3,4wk时PCNA蛋白在角膜缘干细胞的表达不一致,呈线性趋势,1wk达到高峰,以后逐渐降低。

结论：眼碱烧伤后行羊膜移植术可促进角膜缘干细胞的增殖表达,利于角膜上皮的修复。     

角膜缘干细胞标记物的研究进展

迄今为止尚无明确的鉴别角膜缘干细胞的标记物,而角膜缘干细胞的标记物对研究角膜上皮及眼表十分重要。本文就代谢酶、生长因子受体、细胞骨架蛋白以及其他成分包括p63、整合素、ABCG2等对目前角膜缘干细胞标记物的研究进展作一综述。     

角膜缘干细胞缺乏的临床诊疗

许多严重的眼表疾病与角膜缘干细胞缺乏相关：先天性无虹膜症、眼表烧伤、接触镜相关眼病、眼表多次手术、长期局部滴眼剂损伤和各种眼表自身免疫性疾病等都将因角膜缘干细胞缺乏导致角膜结膜化或血管化而致盲。本对角膜缘干细胞缺乏的诊疗原则作一系统介绍，着重讨论角膜缘干细胞移植术的多种术式和术后处理。     

角膜缘干细胞标志物的研究进展

角膜缘干细胞(LSCs)通过不断地增殖分化维持着角膜上皮的完整性和内稳态,对保护角膜和维持角膜透明性起着重要的作用。角膜缘干细胞缺乏症(LSCD)是目前角膜疾病致盲的主要原因之一,LSCs移植是治疗的热点。移植的有效性主要取决于LSCs占移植细胞总数的比例,因此明确识别LSCs至关重要。虽然LSCs标志物有很多,但它们的特异性备受争议,故LSCs移植的主要挑战之一是缺乏明确的细胞标记物。本文将对LSCs标志物的最新研究进展做一综述。     

人角膜及角膜缘上皮细胞分化标记的检测

目的检测分化标记在人角膜及角膜缘上皮细胞的表达,以了解角膜及角膜缘细胞分化状态,旨在发现新的角膜上皮干细胞的阴性标记。方法获取人角膜及角膜缘组织,对冰冻切片及整个角膜组织行免疫荧光染色检测分化标记钙粘连素E、角蛋白3(CK3)、角蛋白12(CK12)、缝隙连接蛋白43、巢蛋白(nestin)和包壳蛋白(involucrin)的表达,经荧光显微镜及激光扫描共焦电镜观察,并行半定量RT-PCR以检测其相关分化标记基因的表达。结果分化标记CK3、CK12、缝隙连接蛋白43、巢蛋白和包壳蛋白在角膜和角膜缘上皮的表层细胞表达,角膜缘基底细胞不表达。激光扫描共焦电镜观察及RT-PCR结果显示角膜缘基底上皮细胞不表达细胞CK3、连接蛋白43和巢蛋白,而角膜上皮细胞则明显表达。结论角膜及角膜缘表层上皮较为成熟分化,而角膜缘基底细胞具有未分化细胞的特征,很可能是干细胞的部位。     

利用组织工程方法治疗角膜缘干细胞缺失的相关研究进展

角膜缘干细胞在角膜上皮更新和创伤愈合中起重要作用,角膜缘干细胞缺失可导致各种严重眼表面疾患。因为治疗上存在自体移植的健眼损伤问题,同种异体移植的排斥反应以及供体不足等问题,近年来随着对干细胞研究的深入以及组织工程学的发展,有利于克服和解决上述问题,为角膜缘干细胞缺乏的治疗带来了曙光。本文通过近年来组织工程治疗角膜缘干细胞缺失的相关研究的回顾,归纳了种子细胞和支架材料选择两方面的研究进展,以探索该领域存在的问题和未来的研究方向。（国际眼科纵览, 2017,  41:   346-351）