Membrane cell grafts, fresh and frozen to cover full thickness wounds in athymic nude mice

objective: To find a new way to cover full-thickness wounds. Methods: Biobrane(r), an adherent, flexible temporary wound dressing was incubated with cultured human keratinocytes. The cells adhered quickly forming "membrane-celgrafts" (MCG). Some of the grafts were frozen and after thawing viability was verified with a XTT colorimetric assay.MCGs, fresh and cryopreserved, were transplanted on full thickness wounds created on athymic nude mice. Conventional cultured epidermal grafts (CEG) and wounds without cell grafts served as control. Results: MCGs resulted in a differentiated epithelium of human phenotype and immunohistochemistry, immunofluorescence and electronmicroscopy were performed.Compared with CEG-grafted sites a reduced wound contraction was noticed and complete remodelling of the basement membrane zone was found. Conclusion: The efficiency of the easy, uncomplicated production, cryopreservation and use as well as the short culture period could lead to a new approach in the treatment of burn and chronic wounds.     

体外长期培养人转化角朊细胞系的生物学特征

目的：研究ＳＶ４０病毒转化的人角朊细胞系在体外长期培养过程中的细胞生物学特征。方法：采用细胞培养法观察转化细胞系的克隆形成率、细胞生命曲线以及血清、Ｃａ＾＋对其生长分化的影响。结果：与正常角朊细胞相比,转化角朊细胞系于体外形成克隆所需的最低接种密度有所降低,但接触抑制特性仍未丧失。转化细胞在体外已传代培养２５代,对血清的依赖性降低,可被Ｃａ＾２＋诱导分化而形成细胞膜片结构。结论：本研究所观察的转化     

L-谷氨酸/壳聚糖聚合物为支架的脂肪来源干细胞构建人造皮肤对糖尿病性损伤的加速愈合作用研究

研究背景 糖尿病性损伤如糖尿病足是糖尿病最严重的并发症之一。目前对慢性不愈合的糖尿病损伤尚没有明确有效的治疗方法。本研究探索应用以L-谷氨酸/壳聚糖为支架的人类脂肪来源干细胞构建的人造皮肤的可行性,这在链脲霉素致糖尿病的小鼠不愈合损伤的治疗上尚存很大争议。 方法 脂肪来源干细胞获得自新鲜的人体抽脂术,并间接体内扩增,之后植入L-谷氨酸/壳聚糖支架构建人造皮肤。将人造皮肤、单纯支架组织分别植于糖尿病模型小鼠损伤部位,并与正常小鼠及不处理糖尿病小鼠对比。同时分析人造皮肤的VEGF、TGFβ1表达,组织学指标,皮肤厚度和胶原含量。 结果 生长于支架的细胞显示了良好的增殖潜力和充分的基质胶原沉积,同时VEGF和TGFβ1保持较高的水平。人造皮肤治疗的糖尿病损伤相较单纯支架或者不处理的损伤明显愈合增速。组织学检查也显示皮肤修复提高。定量分析进一步显示人造皮肤厚度和胶原含量的增加。 总结 ASCs/ PLGA人造皮肤能有效促进糖尿病损伤愈合,其机制可能是血管生长因子和胶原合成的增加。     

组织工程皮肤修复动物皮肤缺损的实验研究

目的利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，探讨其用于修复动物皮肤缺损的可行性。方法将扩增的人表皮细胞复合异种（猪）脱细胞真皮支架构建组织工程皮肤，将制备的人工皮肤移植于裸鼠全层皮肤缺损，观察创面愈合情况并进行直接免疫荧光鉴定。结果构建的组织工程皮肤可用于修复裸鼠全层皮肤缺损，创面愈合良好，新生的表皮由移植的人表皮细胞增殖形成。结论利用表皮细胞复合脱细胞真皮构建的组织工程皮肤可用于修复动物全层皮肤缺损。     

小牛血去蛋白提取物对大鼠深二度烧伤创面愈合作用的研究

目的　探讨小牛血去蛋白提取物 (商品名 :奥德金 )对大鼠深二度烧伤的影响。方法　采用大鼠深二度烫伤模型 ,创面外用小牛血去蛋白凝胶 (商品名 :奥德金凝胶 ) ,通过伤后不同时间点创面取材 ,检测烧伤创面羟脯氨酸含量 (OHP)、创面含水量、创面愈合率、愈合天数及组织病理学变化 ,以基质凝胶作对照 ,观察小牛血去蛋白提取物对大鼠深二度烧伤创面愈合的影响。结果　创面外用小牛血去蛋白凝胶可以降低烧伤创面水肿 ,增加创面OHP含量 ,促进肉芽组织生长 ,缩短愈合天数。结论　小牛血去蛋白凝胶可增强胶原合成 ,促进上皮细胞增殖 ,减轻创面早期水肿 ,加速烧伤创面愈合。     

皮肤创伤修复中uPA/uPAR的表达及作用的研究

目的：探讨皮肤创伤修复中uPA/uPAR的表达规律及意义。方法：应用免疫组化,Western Blot细胞培养,ELISA等方法检测小鼠皮肤伤缘和培养的单层角质形成细胞创伤模型的uPA/uPAR的表达。结果：创伤后uPA/uPAR的表达增高,伤后12－24h uPA/uPAR的表达高峰。结论：创伤促进了uPA/uPAR的表达,伤后uPA/uPAR的表达增高促进了皮肤创伤愈合表皮再生过程。     

Accelerated healing of diabetic wound using artificial dermis constructed with adipose stem cells and poly(L-glutamic acid)/ chitosan scaffold

Background Diabetic wound is one of the most serious complications of diabetes mellitus.There are no significantly effective therapies for chronic non-healing diabetes ulcer so far.This study aimed to ...     

局部应用瘦素对大鼠烫伤创面愈合的实验研究

目的建立Wister大鼠的深Ⅱ°烫伤创面模型,外用瘦素来观察和研究瘦素在Waster大鼠烫伤创面愈合中的作用和意义,探讨瘦素在创伤修复过程中的作用及其机制。方法选用清洁级Wistar大鼠18只,建立深Ⅱ度烫伤模型,将创面分为实验组(创面涂400 ng/ml的瘦素溶液,用PBS释稀)和对照组(外涂PBS)。观察创面愈合时间;在烫伤后第3,7,11,15,19天5个时相点测量创面的上皮化率;于伤后第7、14和21天用手术刀切取各组的伤口及周边皮肤,做HE及免疫组化染色(PCNA),以观察创面的愈合时间和组织形态以及角质形成细胞在烫伤创面愈合过程增殖和迁移情况。结果实验组创面愈合时间快于对照组2~3 d左右,实验组愈合天数与对照组相比,差异具有显著性(P<0.05)。在伤后7、14和21 d创缘组织HE和PCNA染色见实验组创周表皮反应性增生快,表皮层明显厚于对照组,实验组创面上皮化过程短于对照组。实验组PCNA表达与对照组在7 d和14 d时有明显差异(P<0.05),在21 d时没有显著差别(P>0.05)。结论局部外用瘦素能提高深Ⅱ烫伤创面的愈合率,加快创面愈合时间,瘦素能加快深Ⅱ烫伤创面的愈合。     

Burn wound closure with cultured autologous keratinocytes and fibroblasts attached to a collagen-glycosaminoglycan substrate

Improved survival of patients with extensive burn injuries requires the development of better techniques for timely and permanent closure of the full-thickness wound. We developed procedures for establishing confluent, stratified layers of cultured, autologous keratinocytes on the surface of a modified collagen-glycosaminoglycan membrane that contains autologous fibroblasts. We transferred the composite grafts onto limited areas of excised full-thickness burn wounds of four patients with extensive burn injuries. Our results indicate that this composite graft material has acceptable "take," with formation of a basement membrane within 9 days of graft placement. Use of this technique for major wound coverage may offer a significant advance in the care of extensively burned patients and also may be useful for providing skin for reconstructive surgery.     

人皮肤细胞培养对同种异体创面移植的临床研究

本文是在人表皮细胞培养研究和临床应用的基础上,进行真皮成纤维细胞培养,并将其与表皮细胞分期移植于烧伤创面,收到满意效果。     

以纤维结合蛋白为底物培养人表皮细胞及临床试用

为探索效果更佳的表皮细胞培养与移植的方法,我们建立了以纤维结合蛋白(FN)为底物的培养人表皮细胞的模式。对FN浓度及表皮细胞接种量的影响进行了研究。结果 表明此培养系统具有效果佳、简便易行等优点,值得临床试用。报告4例用此法培养的表皮细胞膜片行自体烧伤创面回植,其中有2例膜片存活并生长成复层鳞状表皮。     

SV40病毒对体外培养的人角朊细胞的转化

目的：研究ＳＶ４０病毒对人角朊细胞的体外转化作用以及转化后细胞生物学特性的改变。方法：采用体外共培养法以ＳＶ４０野生型病毒感染人包皮角朊细胞,观察病毒基因在细胞内的表达以及细胞表型的改变情况。结果：分离获得了可长期体外培养的ＳＶ４０转化细胞克隆,已传２３代以上,体外存活超过２５０ｄ;ＤＮＡ印迹实验显示ＳＶ４０大Ｔ基因已整合至细胞染色体内,间接免疫荧光检测示多数细胞胞核内有大Ｔ基因产物的表达;转化细     

Management of different types of wound by cyanoacrylate glue fixation: a random study of 213 patients

A random study for management of wound by cyanoacrylate glue in 213 patients, irrespective of age and sex with different types of wounds was carried out over a period of 4 years (1996-2000). In this series both dean surgical wounds and infected accidental wounds were included. Most of the patients recovered uneventfully, except 5, who showed wound gap. Reapplication of glue was done on them and 3 had similar wound union but 2 patients (0.94%) required surgical suture.     

头皮撕脱伤的早期处理与晚期修复

目的探讨伴颅骨外露的头皮撕脱伤的治疗方法.方法早期清创,将撕脱头皮修剪成全厚皮片移植于创面,待肉芽组织覆盖创面后,清除干性坏死的头皮,创面用大张中厚皮片修复;对有足够残留发区者,则于术后6个月采用扩张术治疗秃发畸形.结果自1994年4月以来治疗8例,肉芽组织完全覆盖创面时间平均为51天,移植中厚皮片均100%成活;5例接受头皮扩张术治疗秃发畸形,效果满意.结论早期创面修复结合晚期秃发畸形整复是治疗伴颅骨外露的头皮撕脱伤的适宜方法.     

Perivenous application of fibrin glue prevents the early injury of jugular vein graft to arterial circulation in rabbits

Background Placement of an external support has been reported to prevent intimal hyperplasia of vein grafts. However, it is limited by potential complications. In the present study, we investigated the effect of fibrin glue on preventing vein graft failure as perivenous application. Methods Twenty-four rabbits were divided into non-supported group （n=12） and fibrin glue group （n=12）. All animals underwent unilateral jugular vein into common carotid artery interposition grafting and then fibrin glue was applied as perivenous support. Samples of tissues were harvested after 4 weeks. Results The vein grafts with fibrin glue demonstrated a statistically significant decrease in proliferating cell nuclear antigen in the medial/intimal region [13.38% （11.26%-15.11%）] compared with non-supported vein grafts [31.22% （27.15%-35.98%）] （P〈0.001）. Light microscopy showed remarkable attenuation of endothelial cell loss and numerous microvessels in neoadventitia in the fibrin glue group compared with the non-supported group. The smooth muscle cells migrated into adventitia significantly in fibrin glue group, whereas the smooth muscle ceils migrated into intima in non-supported group. Conclusion Perivenous support of vein graft with fibrin glue in vivo can attenuate the severe injury encountered in the non-supported vein grafts exposed to artery.     

血糖及皮肤组织糖含量对大鼠浅二度烫伤创面愈合影响的实验研究

目的研究血糖及皮肤组织糖含量对浅二度烫伤创面愈合的影响。方法96只清洁级SD大鼠随机分成正常组和以STZ诱导的速发型糖尿病组,并造成10%体表总面积(TBSA)的浅二度烫伤模型,分别测定伤前、伤后第1天、3天、5天、7天、10天和14天的血糖、皮肤或创面组织糖含量;大体和组织学动态观察创面愈合过程;伤前和伤后3d、7d和14d检测表皮细胞增殖周期。结果糖尿病大鼠血糖浓度明显高于正常组(27.28mmol/L±0.80mmol/Lvs4.65mmol/L±0.14mmol/L,P<0.01);皮肤组织创面中局部的糖含量与血糖变化有显著的相关性(r=0.881,P<0.05),糖尿病组大鼠浅二度烫伤创面局部糖含量明显高于正常烫伤组(14.2mmol/L±3.0mmol/gvs4.5mmol/L±0.5mmol/g,P<0.01)。糖尿病烫伤创面愈合明显延迟,新生上皮明显减少,表皮细胞进入S期和G2/M期百分比增殖较正常大鼠显著减少。结论糖尿病大鼠局部创面组织糖含量增加与血糖变化密切相关,而创面局部糖含量的增加与创面愈合延迟存在着不可分割的联系。高糖环境可抑制浅二度烫伤创面表皮细胞增殖。     

人工真皮支架修复猪Ⅲ度烧伤动物模型的构建

目的建立猪Ⅲ度烧伤所致全层皮肤缺损并植入人工真皮支架的动物模型,观察人工真皮支架移植后1、2、3周,支架血管化情况以及人工真皮支架上移植刃厚皮片的可能性。方法造成直径约3 cm的Ⅲ度烧伤创面,48 h后清创后植入胶原-磺化羧甲基壳聚糖/硅橡胶双层人工真皮支架,术后悬吊饲养、隔天换药护理。支架植入后1、2、3周观察创面并植刃厚皮片,植皮2周后观察植皮成活及创面修复。结果①造成约3 cm直径烧伤创面的铜锭最佳直径为2.5 cm;②为防止创面收缩必须应用移植环,手术后必须悬吊饲养;③支架植入后植皮时间最好选择在2周以后;④良好的术后处理是实验成功的重要因素。结论本实验模型稳定、可重复性强,为人工皮肤的研究和生物学意义的验证提供了良好的大型动物模型。     

体外扩增恒河猴自体内皮细胞人工血管移植研究

目的为自体内皮细胞移植的临床应用奠定理论基础。方法将恒河猴表浅静脉内皮细胞在体外培养１３．９±１．４天;扩增培养的自体细胞衬里于用纤维蛋白胶预衬的膨体聚四氟乙烯（ｅＰＴＦＥ）人工血管,继续培养９天。１５只恒河猴随机分为两组。实验组（１０只）用衬有自体静脉内皮细胞的人工血管置换骼总动脉;对照组（５只）用未衬里内皮细胞的人工血管置换。结果细胞数增加１４８±８９倍。所培养的细胞为二倍体细胞,纯度９９％。原代及传代细胞培养上清液中６－酮－前列腺素Ｆ１ａ（６－ｋｅｔｏ－ＰＧＦ１ａ）和ＶｏｎＷｉｌｅｂｒａｎｄ因子（ｖＷＦ）含量差异无显著意义。细胞种植后２小时和９天,人工血管腔面见一层均匀的基质,基质表面有一层连续的内皮细胞单层。内皮细胞紧密排列。呈梭状,形态饱满。实验组除１只于术后１２小时因近端吻合口破裂腹腔内出血死亡,１只人工血管于术后４周阻塞外,其余８只恒河猴人工血管术后４周均保持通畅,内膜下组织厚度为８０±１２μｍ;对照组５条人工血管全部阻塞。结论自体内皮细胞移植可有效地提高人工血管的通畅率。     

医用胶补贴法在腹内脏器切口和创面的应用

目的探讨补片喷涂医用生物胶在腹内脏器手术中的粘贴效果。方法用可溶性止血纱布或明胶海绵喷涂医用胶粘贴于实质脏器的创面止血,用腹膜或胆囊浆肌层薄片借助医用胶粘贴于胆总管缝合切口。结果本文32例均明显有效,随访6~12个月,无后遗症及并发症。结论腹内实质脏器破裂和淋巴清扫创面,可用止血纱布喷涂医用胶粘贴创面,对胆总管切口,经一期缝合后,加用自身腹膜或胆囊浆肌层薄片喷涂生物胶粘贴,效果更佳,达到密闭、不透水、减张作用,可预防胆漏发生。避免了胆管内留置T形管的弊端。     

聚乳酸-羟基乙酸共聚物和胶原膜对体外培养人表皮角质细胞分泌细胞因子的影响

目的探讨聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）和胶原膜对表皮角质细胞分泌细胞因子的影响及其在创面修复中的可能作用机制。方法实验组分为PLGA组和胶原膜组,表皮角质细胞以3×10^7cm^-2密度分别种植于PLGA和胶原膜上;对照组为单层表皮角质细胞培养。于第7天和第14天扫描电镜下观察细胞生长状况;种植后第1,3,5,7,14天收集细胞培养上清液,检测乳酸脱氢酶（LDH）水平观察细胞损伤程度,应用ELISA法检测培养上清液中自细胞介素一18（IL-18）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素8（IL-8）的水平。结果表皮角质细胞种植后第7天,扫描电镜下可见细胞粘附于PLGA和胶原膜呈原有三维结构稳定均一生长,第14天有纤维丝状细胞外基质生成。实验组和对照组各时相点LDH水平差别无统计学意义。PLGA组和胶原膜组表皮角质细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8水平与对照组比较均有不同程度上升,其差别具有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）。结论PLGA和胶原膜在构建组织工程皮肤中作为一种生物支架,增强表皮角质细胞分泌IL-1β、IL-6和IL-8能力,对加速创面愈合可能起着积极作用。