反义IGF-Ⅰ寡核苷酸转染抑制人肝癌细胞生长的实验观察

胰岛素样生长因子-Ⅰ(Insulinlikegrowthfac鄄torⅠ,IGF-Ⅰ)是一种多效的生长因子,在肿瘤的生长、分化和转移过程中起重要作用[1]。肿瘤细胞通过自分泌方式过度产生IGF-Ⅰ,激活IGF-Ⅰ受体,使自身不断生长,因此IGF-Ⅰ成为反义核酸治疗的良好靶分子。利用反义寡核苷酸(ASON)技术人工合成IGF-Ⅰ寡核苷酸片段,脂质体包裹并转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,可以抑制肿瘤细胞IGF-Ⅰ的过度表达,为IGF-Ⅰ反义核苷酸治疗肝细胞癌提供依据。1材料与方法1.1材料脂质体Lipofectin(GIBCO公司);正、反义IGF-Ⅰ寡核苷酸片段(上海博亚生物技术…     

Ⅰ型胰岛素样生长因子受体的反义寡核苷酸对胰腺癌细胞生长的抑制作用

I型胰岛素样生长因子受体(IGF-1R)是肿瘤治疗特别是基因治疗的良好靶体.本研究首先应用免疫细胞化学SP法检测IGF-1R在体外培养的胰腺癌细胞系SW1990上的表达,然后合成针对IGF-1R的反义寡核苷酸(ASON).所有反     

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体肿瘤靶向治疗

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-ⅠR)介导胰岛素样生长因子Ⅰ和胰岛素样生长因子Ⅱ的活性,促进细胞增殖、转化,抑制细胞凋亡,与肿瘤的发生、发展和转移密切相关。通过抑制 IGF-ⅠR治疗肿瘤已经成为肿瘤治疗的新途径。现从反义分子、小分子酪氨酸激酶抑制剂、单克隆抗体等方面综述以IGF-ⅠR为靶点肿瘤治疗的研究现状及进展。     

反义VEGF寡核苷酸抑制小鼠肺癌作用的实验研究

目的:观察阳离子脂质体介导反义血管内皮生长因子(VEGF)寡核苷酸对肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用.方法:取肺癌细胞悬液建立小鼠肺癌动物模型后,选择40只随机分成4组,分别为空白对照组、实验对照组、VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组和VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组.治疗结束后行大体、HE染色观察,并观察小鼠营养状况和症状.结果:对照组、VEGF反义寡核苷酸治疗组和VEGF正义寡核苷酸治疗组平均瘤质量分别为(7.14±1.68)、(4.26±1.37)和(7.33±1.56)g,VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为58.2%和7.4%,ASODN组与对照组及SODN组比较差异有统计学意义,x2分别为8.21和8.04,P值均<0.01.结论:阳离子脂质体介导反义VEGF寡核苷酸对小鼠肺癌的生长具有显著抑制作用,未发现明显的毒副反应,阳离子脂质体介导的基因转染技术有望成为治疗癌症的新方法.     

VEGF反义寡核苷酸治疗小鼠Lewis肺癌的研究

肺癌与其它实体瘤一样,其生长、转移和预后均依赖血管生成,以新生血管为靶点,抑制肿瘤血管生成,阻断肿瘤的营养来源和迁移通道,已成为癌症治疗的新策略.有研究发现,血管内皮生长因子(Vascular en-dothelial growth factor,VEGF)为一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素,可直接诱导肿瘤血管生成[1].我们利用近年兴起的反义技术,设计VEGF反义寡核苷酸片断,使其特异性封闭肿瘤细胞中的VEGF mRNA,通过研究它对肿瘤细胞合成VEGF及对肿瘤生长的影响,探讨其对肺癌治疗新途径的可能性.     

胰岛素样生长因子-1受体在恶性肿瘤中的研究进展

胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)是胰岛素样生长因子家族蛋白系统主要成员之一,在人类大部分肿瘤组织中存在过度表达。其在肿瘤形成机制上具有促进肿瘤细胞生长增殖,抑制凋亡的作用,与恶性肿瘤的发生转移有密切关联。本文就IGF-1R在肿瘤中的表达、发生、发展及以IGF-1R作为靶点诊断治疗恶性肿瘤的进展作一综述。     

bFGF反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响

目的: 探讨碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)反义寡核苷酸对肾癌细胞凋亡的影响,以期寻找肾癌反义治疗的合适药物.方法: 以脂质体作为转染载体,将bFGF反义寡核苷酸转染人肾癌细胞系786-0,应用RT-PCR和Western印迹法检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达,应用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后肾癌细胞的凋亡率.结果: 与转染错义寡核苷酸组相比,转染bFGF反义寡核苷酸组786-0细胞中bFGF mRNA及其蛋白的表达有明显下降,且转染bFGF反义寡核苷酸可明显提高786-0细胞的凋亡率(P<0.01).结论: 经bFGF反义寡核苷酸作用后,肾癌细胞bFGF的表达受到了抑制,同时促进了肾癌细胞的凋亡,因此应用bFGF反义寡核苷酸治疗肾癌可能是一种较有希望的肿瘤治疗新方法.     

ODC反义寡核苷酸对K562细胞生长抑制作用

鸟氨酸脱羧酶(ornithine decarboxylase,ODC)是催化多胺生物合成的限速酶.过去的研究表明多胺在维持肿瘤恶性表型中起着重要作用.用ODC不可逆抑制剂抑制多胺生物合成不仅能抑制肿瘤细胞的增殖而且还诱导细胞分化.近年我们采用反义技术,以ODC反义RNA转染肿瘤细胞,通过对ODC表达的封闭,成功地使其恶性表型得到了逆转.提示抑制肿瘤细胞的多胺合成可能是抗癌的有效途径.本文用ODC反义寡核苷酸控制肿瘤细胞的多胺生物合成,观察了其对K562细胞生长特性的影响,以期为ODC反义寡核苷酸在肿瘤临床的应用提供实验依据.     

C-myc反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖及凋亡的影响

目的:观察脂质体介导的c-myc正反义寡核苷酸对结肠癌细胞SW480增殖和凋亡的影响.方法:通过脂质体将c-myc反义寡核苷酸转入人结肠癌细胞SW480,western blot动态监测c-myc蛋白的表达情况,MTT法、流式细胞仪测定c-myc正反义寡核苷酸对SW480细胞增殖和凋亡的影响.结果:c-myc反义核苷酸对SW480细胞有明显的促进凋亡和抑制增殖的作用,而正义寡核苷酸没有这样的作用.结论:c-myc反义核苷酸具有明显的抗肿瘤作用,可以抑制肿瘤细胞生长,促进肿瘤细胞凋亡,可能成为治疗肿瘤的药物.     

碱性成纤维细胞生长因子反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响

目的 检测碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)反义寡核苷酸对肝癌细胞凋亡的影响,探讨bFGF作为肝癌治疗靶点的有效性.方法 以脂质体作为转染载体,转染bFGF反义寡核苷酸于HepG2细胞,用共聚焦显微镜和Western blot方法,检测转染bFGF反义寡核苷酸后肝癌细胞株HepG2中bFGF蛋白的表达,用流式细胞仪检测转染bFGF反义寡核苷酸后HepG2细胞的凋亡率.结果 与转染错义寡核苷酸组相比,bFGF反义寡核苷酸对HepG2细胞中bFGF蛋白表达有明显抑制作用,转染bFGF反义寡核苷酸可明显增加HepG2细胞的凋亡率(P＜0.01).结论 bFGF在肝癌细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肝癌增敏治疗的有效靶点.     

反义Ki-67肽核酸对裸鼠人肾癌细胞移植瘤的治疗作用

目的:探讨Ki-67基因反义肽核酸(AS-PNAs)在体内对小鼠人肾癌移植瘤Ki-67表达和肿瘤生长的影响.方法:建立人肾癌移植瘤裸鼠模型,瘤体内注射反义肽核酸(AS-PNAs),定期测量肿瘤体积,处死小鼠后采用免疫组化、Western blot检测肿瘤Ki-67抗原表达,原位末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡,并与反义寡核苷酸(AS-ODN)处理组对照.结果:AS-PNAs处理组肿瘤生长受押(513.2±64.2)mm3,Ki-67表达下降(23.0±2.4)%、(59.7±2.3)%,细胞凋亡增加(31.1±2.0)%,与AS-ODN处理组(868.9±128.2)mm3、(33.6±2.6)%、(85.7±4.4)%、(18.3±2.3)%比较差异有显著性(P＜0.01).结论:反义Ki-67肽核酸能抑制小鼠人肾癌移植瘤Ki-67基因的表达,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肿瘤生长,且优于反义寡核苷酸.     

子宫内膜癌中胰岛素样生长因子系统研究进展

子宫内膜癌的发生发展与多种因素有关,现在普遍认为雌激素和孕激素通过调控一些生长因子在子宫内膜的表达,影响子宫内膜的生长分化及病理变化.目前研究较多的是胰岛素样生长因子(IGF)系统.胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)、其受体(IGF-Ⅰ R)及其结合蛋白(IG-FBP-1)在内膜癌的发生、发展和转移过程中起着十分重要的作用,对其研究将有助于子宫内膜癌的诊疗.     

乳腺癌中ErbB/HER家族和胰岛素样生长因子1受体信号转导通路的交互作用

正胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)是受体酪氨酸激酶家族成员,可被胰岛素样生长因子(IGF)1z和2激活,该受体过度活化或信号转导通路增强与乳腺癌的发生发展、化疗和放疗耐药性的产生及预后不良密切相关,目前已被作为治疗乳腺癌的潜在靶点。已有实验证实IGF-1R过表达可诱导小鼠乳腺细胞迅速转化,而当IGF-1R表达下调时,大部分肿瘤细胞可逆转。因此,针对IGF的靶向     

以EGFR为靶点的肿瘤反义基因治疗策略

表皮生长因子受体(EGFR)在许多肿瘤细胞中超量表达,借助其介导的信号传导可使细胞生长失控与恶性转化,因此它是良好的肿瘤治疗靶点.现主要针对EGFR基因治疗中的反义策略作一综述.     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸对体外及裸鼠体内前列腺癌细胞PC3生物学特性影响的研究

 目的　探讨血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸对前列腺癌细胞PC3在体外和裸鼠体内生长特性的影响,以及局部注射反义寡核苷酸治疗裸鼠皮下移植肿瘤的疗效。方法　采用Oligofectamine携带VEGF反义寡核苷酸转染前列腺癌细胞PC3,实验分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组和对照组。软琼脂糖凝胶实验和细胞侵袭实验检测转染反义寡核苷酸的肿瘤细胞成瘤性和侵袭性。裸鼠成瘤实验观察VEGF反义寡核苷酸对体内PC3细胞增殖的影响。建立裸鼠前列腺癌种植瘤模型,局部注射VEGF反义核酸治疗,测定体内抑瘤率。结果　对照组、正义寡核苷酸组和反义寡核苷酸组的PC3细胞每组阳性克隆数分别为53.67±5.86、52.33±6.43和26±4.58（F＝13.73,P＜0.01）,反义组体外形成克隆数显著减少;三组细胞侵袭至下室的细胞数分别为45.60±5.53、42.35±6.21和18.37±3.52（F＝14.18,P＜0.01）;转染VEGF反义核酸的细胞移植瘤生长较慢,接种28 d后三组的肿瘤体积分别为（1330.32±81.38）、（1267.64±120.26）和（641.83±58.34）mm3（F＝17.26,P＜0.01）;局部注射治疗4周后,三组肿瘤质量分别为（1.25±0.08）g、（1.17±0.06）g和（0.41±0.05）g,与对照组比较,正义组和反义组肿瘤抑制率分别为6.4 %和67.2 %,差异有统计学意义（χ2＝17.72,P＜0.005）。结论　VEGF反义寡核苷酸可以抑制前列腺癌细胞PC3 VEGF的表达,进而促进细胞凋亡,降低其成瘤性,抑制侵袭能力。转染VEGF反义寡核苷酸的前列腺癌细胞PC3移植瘤在裸鼠体内生长受抑制,局部注射反义核酸可显著抑制移植瘤的生长。     

Chk1/2对肿瘤细胞凋亡的调节作用

目的:观察顺铂作用下K562细胞及白血病骨髓单个核细胞(BMMNC)的细胞周期变化和转染Chk1/2反义寡核苷酸对顺铂诱导下K562细胞及白血病BMMNC凋亡的影响.方法:用流式细胞仪检测顺铂作用下K562细胞及白血病BMMNC的细胞周期变化.转染Chk1和Chk2反义寡核苷酸于K562细胞及白血病BMMNC,检测顺铂作用下转染细胞的凋亡率.结果:10 μmol/L顺铂作用下K562细胞和白血病BMMNC均出现S期阻滞,转染Chk1/2反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下K562细胞凋亡,转染Chk1反义寡核苷酸可明显增加顺铂诱导下白血病BMMNC的凋亡率,但转染Chk2反义寡核苷酸未增加白血病BMMNC的凋亡率.结论:Chk1在肿瘤细胞凋亡中有重要调节作用,可作为肿瘤增敏治疗的有效靶点,Chk2在肿瘤细胞凋亡中的作用需进一步研究.     

卵巢癌组织IGF-1表达及其与凋亡和侵袭相关性分析

目的:探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在卵巢上皮性肿瘤组织中的表达,观察IGF-1反义寡核苷酸对卵巢癌细胞系3AO凋亡及侵袭能力的影响。方法:免疫组织化学方法检测60例卵巢上皮性癌、20例卵巢上皮性交界性肿瘤、20例卵巢良性肿瘤及20例正常卵巢组织中IGF-1蛋白表达;将3AO分为4组,用脂质体介导方法将IGF-1反义寡核苷酸转入其中,流式细胞仪AnnexinⅤ/PI双染色法检测其凋亡,Boyden小室检测其侵袭能力。结果:IGF-1在卵巢上皮性癌组、交界性组、良性组及正常卵巢组的阳性表达率分别为61.6%、25.0%、15.0%和10.0%,上皮癌组与其他3组比较差异有统计学意义,P<0.05;后3组之间比较差异无统计学意义,P>0.05。临床期别晚组及组织分化低组IGF-1阳性表达率为67.4%和81.8%,高于临床期别早组及组织分化高组的35.7%和52.6%,差异有统计学意义,P<0.05。IGF-1的阳性表达与发病年龄、有无腹水无关,≥50岁组阳性表达率为59.8%,<50岁组阳性表达率为54.0%,P>0.05;有腹水组阳性表达率为66.0%,无腹水组阳性表达率为52.0%,P>0.05。IGF-1反义寡核苷酸组卵巢癌细胞的凋亡率为(45.5±0.1)%,与对照组的(16.5±0.4)%比较差异有统计学意义,P<0.05;IGF-1反义寡核苷酸组癌细胞穿透Matri-gel胶的细胞数目为(42±6)个,与对照组的(132±26)个比较差异有统计学意义,P<0.05。结论:IGF-1表达与卵巢上皮性肿瘤的分期、分化有关,抑制IGF-1的表达能增加卵巢癌细胞凋亡,降低其侵袭能力。     

Bcl-xl反义寡核苷酸对裸鼠人鼻咽癌移植瘤抑制作用的研究

目的　探讨bcl xl反义寡核苷酸 (ASODN)对裸鼠人鼻咽癌移植瘤生长和基因表达的抑制作用。方法　建立裸鼠人鼻咽癌模型 ,接种肿瘤细胞后 2 4h之内将bcl xlASODN、序列对照寡核苷酸 (ODN)皮下注射进行治疗 ,观察肿瘤大小变化和组织形态学改变 ,并检测药物治疗后肿瘤细胞中bcl xlmRNA和蛋白表达情况。结果　Bcl xlASODN治疗组裸鼠鼻咽癌的生长受到明显抑制 ,抑瘤率为 41.7% ,其对应的bcl xlmRNA和蛋白水平明显降低 ,与对照组相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而序列对照ODN治疗组抑瘤率仅为 19.0 % ,差异无显著性 ,对基因的表达亦无明显影响。结论　Bcl xlASODN对裸鼠鼻咽癌移植瘤的生长具有一定的抑制作用 ,为鼻咽癌的治疗提供新的方法。     

cFLIP反义寡核苷酸对人肺腺癌SPCA-1细胞作用的探讨

目的:研究脂质体介导的反义寡核苷酸cFLIP对人肺腺癌细胞系SPCA-1凋亡的影响,探讨反义技术选择性封闭目的基因表达进而发挥抗肿瘤作用的机制.方法:用脂质体lipofectamineTM2000将反义寡核苷酸cFLIP(Lipo-ASODN)和无义寡核苷酸cFLIP(Lipo-NASODN)片断导入人肺腺癌细胞系SPCA-1,通过MTT法分别检测细胞生长情况;应用RT-PCR检测cFLIP基因表达,并用Western Blot检测cFLIP蛋白表达,同时原位末端标记(TUNEL)和流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:MTT实验显示浓度为0.5μmol/L时Lipo-ASODN组细胞生长曲线逐渐降低,24h细胞抑制率可达71.52%,显著高于Lipo-NASODN组和Liposome对照组(P＜0.01);转染24h后LipoASODN组RT-PCR可见cFLIP基因表达量明显少于对照组(P＜0.01),Western Blot可见cFLIPS蛋白表达呈下降趋势,但cFLIPL变化不明显;TUNEL检测可见反义寡核苷酸组细胞核内出现阳性染色,流式细胞仪检测可见明显凋亡峰,且其作用呈一定的剂量依赖性.结论:反义寡核苷酸转染SPCA-1细胞后,cFLIPL/S基因与蛋白表达显著下调,表明此途径是cFLIPL/S mRNA基因片段诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一.     

乳腺癌组织IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2的表达与相关性

目的:研究胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ, IGF-Ⅰ)、胰岛素样生长因子-Ⅰ受体(insuline-like growth factor-Ⅰ receptor, IGF-ⅠR)和胰岛素样生长因子结合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2, IGFBP-2)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理学特征的关系及其在乳腺癌发病过程中的作用机制.方法:免疫组织化学SP法检测42例乳腺癌患者肿瘤组织和42例癌旁3 cm外正常乳腺组织中IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2的表达水平.结果:IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2在乳腺癌组织中的表达率显著高于在正常乳腺组织中的表达,P＜0.05.IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2原发灶≤2 cm的乳腺癌中的表达均低于原发灶＞2 cm的肿瘤,P＜0.05;在有淋巴结转移乳腺癌中的表达显著高于无淋巴结转移乳腺癌,P＜0.05.IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2在乳腺癌组织中的表达相互具有明显正相关性,P＜0.01.结论:IGF-Ⅰ、IGF-ⅠR和IGFBP-2的过度表达在乳腺癌原发灶的发展和侵袭转移可能起重要作用,IGFBP-2水平升高可能增强IGF-Ⅰ与IGF-ⅠR的结合产生活性促进肿瘤细胞的增殖从而与乳腺癌发生的生物学行为和浸润转移有关.

Abstract：

OBJECTIVE:To study the expressions of IGF-Ⅰ, IGF-ⅠR and IGFBP-2 in breast cancer tissues and the correlation among them and with the clinical pathological characteristics, and explore the mechanisms of development of breast cancer. METHODS: The expressions of IGF-Ⅰ, IGF-ⅠR and IGFBP-2 in each of the 42 cases of breast carcinomas as well as normal tissues 3 cm off the tumor region were determined by the immunohistochemical technique (SP method). RESULTS: The positive expression rate of IGFBP-2 in breast carcinomas was significantly higher than that in normal breast tissues, P＜0.05. When breast cancers with primary sized ≤2 cm compared with that of ＞2 cm, the positive percentages of IGF-Ⅰ, IGF-ⅠR and IGFBP-2 in the former were significantly lower than those in the latter, P＜0.05. In addition, the positive percentages of them in breast cancers with metastasis in lymph node were higher than those of absence of metastasis in lymph node, P＜0.05. The expressions of IGF-Ⅰ, IGF-ⅠR and IGFBP-2 in breast tumor tissues showed a significant positive correlation (P<0.01). CONCLUSIONS: The excessive expressions of IGF-Ⅰ, IGF-ⅠR and IGFBP-2 may be the vital role in primary lesion development, invasion and metastasis of breast cancer. The increased IGFBP-2 level can import IGF-Ⅰ into IGF-ⅠR to promote tumor cell proliferation, which suggests that the three factors may cause biological actions and infiltration and metastasis of breast cancer.