人组织型纤溶酶原激活剂牛乳腺生物反应器的研究

目的 构建组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)乳腺定位表达载体,使其在牛乳汁中高效表达,从而建立牛乳腺生物反应器。方法 RT-TD-PCR法克隆目的基因,通过酶切、连接、分离、纯化等方法构建含t-PA-cDAN的乳腺定位表达载体;采用显微注射法和乳腺注射法将融合基因转入小鼠的受精卵和小鼠及牛的乳腺组织中。结果 显微注射法和乳腺注射法转基因后,t-PA可在小鼠和牛的乳汁中表达。结论 所构建的乳腺定位表达载体可有效地使t-PA基因在小鼠和牛乳汁中表达,t-PA基因的表达不受转基因方法的影响,但t-PA在牛乳汁中的表达量明显高于小鼠的表达量,提示不同动物的乳蛋白调控系统有一定的差异,可能受着不同的因素或调控系统的影响。     

组织型纤溶酶原激活剂cDNA克隆及其乳腺特异性表达载体的构建

目的：克隆组织型纤溶酶原激活剂(tissue—type plasminogen activator,tPA)基因及构建其乳腺特异性表达载体。方法：以PCR技术克隆2．1kb tPA cDNA片段;应用体外连接技术,连接乳腺特异性表达载体pWA和2.1 kb tPA cDNA片段;转化连接产物,以内切酶酶切、琼脂糖电泳及插入片段序列分析鉴定阳性克隆。结果：琼脂糖电泳显示,2．1 kb tPA cDNA片段克隆成功;内切酶酶切片段与预期片段长度一致;插入片段序列与文献报道一致。结论：tPA基因克隆及其乳腺特异性表达载体构建成功。     

MCF-7细胞中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA在乳癌细胞系MCF-7中的瞬时表达。方法：用脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000将pWTA DNA转染人乳癌细胞系MCF-7和食管癌细胞系Eca-109。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察PWTA的瞬时表达。结果：不同浓度Lipofectamine^TM2000 MCF-7细胞原位杂交均为阳性;Eca-109细胞及未加转染液者未见阳性信号。结论：载体pWTA为tPA乳腺特异性表达载体。     

小鼠乳腺组织中组织型纤溶酶原激活剂乳腺特异性表达载体的瞬时表达

目的：验证所构建的组织型纤溶酶原激活剂(tPA)乳腺特异性表达载体pWTA能否在小鼠乳腺组织中瞬时表达。方法：采用直接注射法将pWTA DNA、pWTA DNA／脂质转染胺试剂Lipofectamine^TM2000复合物及PBS分别注射入妊娠末期小鼠乳腺组织。应用原位杂交技术,以地高辛标记的tPA cDNA为探针,观察pWTA在小鼠乳腺组织中的瞬时表达。结果：tPA表达阳性细胞散在分布于pWTA DNA及pWTA DNA／Lipofectamine^TM2000复合物注射小鼠部分乳腺腺泡,PBS注射组无阳性细胞。结论：载体pWTA能够在小鼠乳腺组织中特异性表达tPA。     

组织型纤溶酶原激活剂研究新进展

组织型纤溶酶原激活剂,又称组织型纤溶酶原激活物(tissue-type plasminogen activator,tPA)或纤溶酶原激活因子(tissue plasminogen activator),是体内纤溶系统的生理性激动剂,在人体纤溶和凝血的平衡调节中发挥着关键性的作用。由于血栓性疾病的逐年上升,对溶栓药物的需求量逐     

组织型纤溶酶原激活剂的结构与功能

组织型纤溶酶原激活剂是重要的溶血栓药物,还能降低心脏病人的死亡率,因而日益受到人们的重视。近年来,研究者们利用重组DNA技术,构建t-PA突变体,探索它的结构与功能的关系,取得了新的进展。 t-PA是分子量为68000的单链多肽,由527个氨基酸组成。在纤溶酶及胰蛋白酶作用     

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞

重组组织型纤溶酶原激活剂静脉溶栓治疗急性心肌梗塞浙江医院（杭州：３１００１３）祝世法戴海文严静金宏义重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）是纤维蛋白特异性溶栓剂，该剂可降低急性心肌梗塞（ＡＭＩ）的病死率（１）。发病时间６小时内者，静脉溶栓血管再通率为...     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死

目的 观察重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)治疗急性心肌梗死(AMI)的临床疗效.方法 对所选病例在常规治疗的基础上早期使用rt-PA溶栓治疗.结果 rt-PA治疗急性心肌梗死疗效显著.结论 rt-PA治疗急性心肌梗死可降低患者的年并发症,减少病死率,临床上值得推广.     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性肺栓塞9例

采用重组组织型纤溶酶原激活剂(RT-PA)2h微泵输入治疗肺栓塞9例，总有效率为89％。无严重并发症。提示RT-PA溶栓疗法治疗急性肺栓塞疗效显著，副作用少。可明显降低其病死率及致残率。     

重组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死31例

观察重组织型纤维溶酶激活剂治疗急性心肌梗死效果。方法急性心肌梗死３１例，２１例在发病６ｈ内入院，１０例在发病６－１２ｈ入院，均接受了ｒｔ－ＰＡ治疗。结果治疗后血管再通率为６７％，有轻度出血者占６％，结论急性心梗死用ｒｔ－ＰＡ治疗血管再通率较高，且较安全。     

组织型纤溶酶原激活剂(tPA)研究新进展

摘 要 组织型纤溶酶原激活剂（tPA）是目前应用的一种较理想的溶栓药,也是目前为止被美国FDA批准的唯一种治疗缺血性脑卒中的溶栓药,但近年来发现tPA除了有溶栓功能外在其他的生理和病理过程中也发挥了重要的作用,这为寻找和改造溶栓效果更好、副作用更少的溶栓药提供了依据。本文主要对近两年来tPA的研究进展进行综述。     

嵌合纤溶酶原激活剂的研究

纤溶酶原激活剂有组织型和尿激酶型两类(tissue-plasminogen Activator,t-PA)(urokinase-plasminogen Activator,u-PA)。两者均属丝氨酸蛋白酶家系,通过水解纤溶酶原为纤溶酶参与血栓溶解。嵌合纤溶酶原激活剂(chimeric plasminogen Activotor,CPA)是指用基因工程的手段将t-PA和u-PA分子中的不同功能区域融合后得到的具有激活纤溶酶原活性的嵌合蛋白。     

组织型纤溶酶原激活剂及其抑制物的变化与冠心病的关系

目的：观察冠心病患者纤溶活性的变化及其在冠心病发病中的作用，探讨其临床意义。方法：用酶联免疫双抗夹心(ELISA)法测定58例冠心病患者血浆中组织型纤溶酶原激活剂(t—PA)及纤溶酶原激活抑制物-1(PAI-1)抗原含量，反映纤溶-抗纤溶活性的变化，并对冠心病患者组与对照组纤溶指标进行不同性别间的比较。结果：急性心肌梗死、不稳定心绞痛患者PM-1的含量、PAI-1／t—PA比值明显高于对照组，且急性心肌梗死患者PM-1的含量较不稳定心绞痛患者显著为高。但t—PA在急性心肌梗死、不稳定心绞痛患者均无显著降低。患者组及对照组不同性别间纤溶及抗纤溶水平均未见有显著差异。结论：血栓性疾病与纤溶系统的异常有密切关系。纤溶系统活性的变化及纤溶-抗纤溶的平衡失调在缺血性心脏病的发生、发展中起着重要作用。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗塞

应用重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)治疗15例急性心肌梗塞,对其临床效果进行分析,证实rt-PA具有缩小梗塞面积,改善心功能,提高患者生活质量和降低死亡率的作用,在使用过程中,本组病例未见到严重出血及其他严重副作用。作者对rt-PA的给药时机、应用指征及禁忌症作了探讨。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗死46例

挽救急性心肌梗死(AMI)患生命和改善预后的关键是尽早、充分、持久的开通梗死相关血管，目前国内外推荐的使栓塞的冠状动脉再通的有效方法之一是及早实施静脉溶栓治疗。重组组织型纤溶酶原激活剂(rt-PA)是一种针对纤维蛋白的特异性很强的溶栓制剂。我们于2000年10月。2002年6月期间在急诊科对46例AMI患采用rt-PA行静脉溶栓治疗，取得了较好效果，现报告如下。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗塞

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗急性心肌梗塞上海医科大学华山医院心内科盛长法，施海明，戴瑞鸿静脉溶血栓疗法的引入将急性心肌梗塞的治疗向前推进了一大步，使住院病死率下降，心功能得以改善。近年来，欧美国家的溶栓疗法多采用重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）...     

重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物在毕赤酵母中的表达

目的在毕赤酵母中表达重组人组织型纤溶酶原激活剂衍生物(rPAm),并检测rPAm的活性。方法用PCR从质粒pLFrGGI上扩增出目的蛋白(rPAm)基因,再亚克隆到酵母表达载体pMEX9K中,转化到宿主菌GS115,菌落PCR鉴定转化子,重组酵母经甲醇诱导后,通过SDS-PAGE及Western-blot分析鉴定表达产物,再通过层析法纯化目的蛋白,用溶圈法测定目的蛋白的活性。结果表达的重组蛋白分子量约为50kD。纯化后的目的蛋白的纯度可达到95%。Western-blot显示能与抗tPA抗体特异性结合,纯化后rPAm比活性为5.02×105IU/mg,比活性与t-PA相当。结论成功构建了rPAm酵母表达工程菌,建立了对目的蛋白的纯化方法。     

猪心组织型纤溶酶原激活剂的提纯和鉴定

取猪心组织用丙酮去脂,pH4.2、0.45mol/L醋酸钾缓冲液抽提组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)。抽提液经硫酸铵分段盐析,然后用纤维蛋白-Sepharose柱吸附t-PA,2mol/L硫氰酸钾洗脱的t-PA溶液经Sephadex G-150凝胶过滤,得到纯的t-PA。其比活性为39038.5 IU/mg,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定其分子量为67000。提纯过程中应用了蛋白酶抑制剂(aprotinin)以及6-氨基己酸,以抑制单链t-PA转变为双链t-PA。t-PA活性测定以尿激酶(UK)为参考标准。     

重组组织型纤溶酶原激活剂治疗缺血性卒中的进展

循证医学表明,目前只有溶栓治疗、抗血小板治疗和卒中单元是治疗缺血性卒中的有效方法,而溶栓治疗是其中最迅速有效的方法,是缺血性卒中治疗的里程碑。重组组织型纤溶酶原激活剂（Recombinant tissue plasminnogen activator,rt—PA）是第一个,也是目前唯一经美国食品药品监督管理局（FDA）批准用于缺血性卒中的溶栓药物。已有大量研究证实了rt—PA溶栓治疗缺血性卒中的疗效,并为多个国家的卒中指南所推荐使用。近年来,rt—PA治疗缺血性卒中的研究取得一些进展,现综述如下：