督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进大鼠受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质

目的探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用能否促进受损伤脊髓组织产生神经生长活性物质。方法成年大鼠分为正常组、对照组、神经干细胞移植组（NSCs组）、督脉电针组（电针组）和督脉电针＋神经干细胞移植组（电针NSCs组）。除正常组外均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。分别于术后14d和28d取材,进行受损伤脊髓组织环-磷酸腺苷（cAMP）含量的放射免疫检测;用Westen blottlng检测神经营养素-3（NT-3）、神经营养因子受体（Trk）以及生长相关蛋白-43（GAP-43）的水平。结果 1．在术后14d,NSCs组、电针组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有增加。但除电针组外,脊髓损伤区的上段或下段组织cAMP含量低于正常组。在术后28d,电针NSCs组脊髓损伤区上段、下段组织cAMP含量仍保持较高水平。NSCs组和电针NSCs组的脊髓损伤区cAMP含量较正常组有所增加。2．NT-3、Trk及GAP-43的表达以电针组和电针NSCs组较为明显,对照组和NSCs组的3种蛋白表达均低于电针组和电针NSCs组。结论督脉电针能促进受损伤的脊髓组织产生cAMP;督脉电针与NSCs移植联合应用能保持受损伤的脊髓组织较高水平的cAMP,而且NT-3、Trk及GAP-43的含量也有增高的趋势。     

嗅鞘细胞移植联合督脉电针治疗大鼠前脊髓综合征

背景：电针在脊髓损伤的康复过程中有其一定的临床作用,同时以嗅鞘细胞为代表的细胞治疗在部分患者的康复过程中亦起到了一定的作用,两者是否具有协同应用尚不清楚。 目的：观察督脉电针联合嗅鞘细胞移植对前脊髓综合征大鼠神经营养因子3水平及P75NTR表达的影响。 方法：将40只成年大鼠随机分为对照组、督脉电针组、嗅鞘细胞移植组、督脉电针+嗅鞘细胞移植组,经嗅鞘细胞移植和督脉电针治疗2周后 ELISA法检测脊髓组织神经营养因子3水平,免疫组化检测P75NTR的表达。 结果与结论：督脉电针+嗅鞘细胞移植组神经营养因子3水平较对照组及其他实验组高(P < 0.05);嗅鞘细胞移植组和督脉电针+嗅鞘细胞移植组的脊髓损伤部位以及相邻的组织内均有P75NTR表达,且督脉电针+嗅鞘细胞移植组阳性表达明显较嗅鞘细胞移植组多。实验证实督脉电针联合嗅鞘细胞移植能够明显增高大鼠前脊髓综合征邻近组织的神经营养因子3水平;督脉电针可以有效促进移植的嗅鞘细胞在宿主内存活。     

电针调节糖原合成酶激酶3β/β-catenin信号通路对脊髓损伤大鼠室管膜区细胞CD133蛋白表达的影响

背景：前期研究表明,电针可改善脊髓损伤后功能障碍,并促进脊髓损伤后大鼠内源性神经干细胞增殖,然而其具体作用机制不明确。目的：观察电针对脊髓损伤大鼠糖原合成酶激酶3β/β-catenin信号通路相关因子表达和室管膜区细胞CD133蛋白表达的影响,探讨电针促进内源性干细胞增殖的作用机制。方法：将45只SD雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组,每组15只,后两组以精密打击器构建脊髓损伤大鼠模型。在造模后24 h,电针组接受电针治疗,选取督脉“百会”“脊中”穴及损伤脊髓上下节段夹脊穴,予疏密波,频率1 Hz/20 Hz,强度1.0-1.2 mA,30 min/次,1次/d,持续14 d。应用BBB运动功能评分评估大鼠运动功能,Nissl染色观察脊髓组织病理形态学改变及神经元数量,免疫荧光检测脊髓组织中室管膜区细胞CD133、脊髓灰质和白质中Nestin荧光强度,实时荧光定量PCR检测脊髓组织中Nestin、糖原合成酶激酶3β、β-catenin mRNA表达,Western blot检测脊髓组织中Nestin、糖原合成酶激酶3β、磷酸化糖原合成酶激酶3β、β-catenin、p-β-cat...     

两种督脉电针对大鼠脊髓受损伤神经元存活的影响

目的探讨脊髓损伤区近端督脉2个穴位电针和脊髓损伤区远、近端督脉4个穴位电针对全横断脊髓损伤大鼠腰段脊髓神经元存活与凋亡的影响。方法雌性SD大鼠30只,随机分为对照组、近端督脉穴电针组(EA2组)和远近端督脉穴电针组(EA4组),每组10只大鼠,其中每组各5只分别应用于免疫荧光染色和Western blot检测。在所有大鼠脊髓第10胸段(T10)进行全横断损伤手术。EA2组在脊中(GV9)和至阳(GV6)督脉穴位入针,EA4组在GV9、GV6、腰腧(GV4)和长强(GV1)督脉穴位入针。在术后第3 d开始电针,隔天1次,每次20 min。术后14d后将3组动物取材进行后续实验。Western blot检测脊髓组织活化型半胱天冬酶-3的表达情况。结果与对照组和EA 2组相比,EA 4组可增加脊髓腰段神经元存活数量、减少脊髓腰段神经元凋亡率和下调脊髓腰段组织表达活化型半胱天冬酶-3(P<0.05)。结论脊髓损伤区远近端督脉4个穴位电针要比脊髓损伤区近端督脉2个穴位电针更有效地促进受损伤脊髓腰段神经元存活和减少其凋亡,下调受损伤脊髓腰段组织表达凋亡相关蛋白。     

电针刺激对大鼠脊髓损伤部位神经胶质纤维酸性蛋白的影响

背景:神经胶质纤维酸性蛋白是一个中间丝过渡表达蛋白,其表达水平是最常用的星形胶质细胞的特异性标志蛋白。中医治疗脊髓损伤历史悠久,大量研究表明针刺"督脉""足阳明胃经"对脊髓损伤的神经再生修复具有一定作用。目的:观察电针刺激后脊髓损伤大鼠损伤部位神经胶质纤维酸性蛋白表达的变化,进一步探讨电针刺激对脊髓损伤大鼠神经再生的影响。方法:将120只SD大鼠随机分为5组,即督脉电针组、胃经电针组、混合电针组、模型对照组和假手术组,每组24只,除假手术组不进行脊髓切断外,其他各组均制备T₁₀脊髓半横断损伤模型。每个组再随机分为治疗后3,7,14,21 d组,每亚组6只。假手术组及模型对照组不进行干预,其他3个电针组进行相应电针干预。以免疫组化法检测损伤局部神经胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的表达;PCR、Western blot检测神经胶质纤维酸性蛋白m RNA及蛋白的表达情况。结果与结论:(1)模型对照组损伤后神经胶质纤维酸性蛋白的表达水平呈先增高后降低的趋势,与未损伤的假手术组相比差异有显著性意义(P<0.05);(2)督脉电针组、胃经电针组与模型对照组相比,神经胶质纤维酸...     

督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进全横断脊髓损伤组织产生内源性神经生长活性物质的研究

我们先前的研究发现,督脉电针与神经干细胞(NSCs)移植联合应用能够促进全横断损伤脊髓的结构和部分功能修复。但不清楚这是否通过督脉电针促进受损伤脊髓组织产生一些内源性神经生长活性物质,参与全横断损伤脊髓的结构和部分功能修复。为此,本研究检测督脉电针 神经干细胞移植组(电针NSCs组)、督脉电针组(电针组)、神经干细胞移植组(NSCs组)和实验对照组(对照组)共4组40只成年大鼠全横断损伤脊髓组织内的环磷酸腺苷(cAMP)、神经营养素-3(NT-3)、神经营养因子受体——Trk以及神经生长相关蛋白(GAP-43)的水平。     

腺病毒介导的神经营养素-3基因能够在大鼠脊髓前角运动神经元内过表达神经营养素-3

目的观察腺病毒介导的神经营养素-3(NT-3)基因在发出坐骨神经传出纤维的大鼠脊髓前角运动神经元的过表达。方法在坐骨神经内直接注射含有绿色荧光蛋白(GFP)基因(报告基因)的NT-3基因重组腺病毒(Ad-NT-3-GFP),7d后应用免疫荧光组织化学染色技术,在荧光显微镜下观察脊髓前角运动神经元的NT-3过表达。结果 GFP表达组(对照组)和NT-3加GFP表达组两组动物的L4和L5脊髓段横切片上,有绿色荧光蛋白阳性标记的细胞。在NT-3加GFP表达组,还可以观察到NT-3阳性标记的细胞,这种细胞能与绿色荧光蛋白阳性标记的细胞重合,是过表达NT-3的前角运动神经元。与GFP表达组的前角运动神经元形态比较,NT-3加GFP表达组的过表达NT-3的前角运动神经元呈现更富有分支的突起。结论腺病毒介导的NT-3基因能够在发出坐骨神经传出纤维的大鼠脊髓前角运动神经元内过表达NT-3,这为下一歩应用NT-3基因治疗策略修复实验性脊髓损伤提供初歩的实验资料。     

督脉电针对移植在大鼠脊髓全横断损伤处的神经干细胞存活分化和迁移的影响

目的探讨督脉电针对脊髓全横断损伤处移植的神经干细胞存活、分化和迁移的影响。方法将20只成年SD大鼠分为神经干细胞移植14d组（NSCs14d组）、督脉电针＋神经干细胞移植14d组（电针NSCs14d组）、神经干细胞移植30d组（NSCs30d组）和督脉电针＋神经干细胞移植30d组（电针NSCs30d组）4组。所有动物均实施T10段脊髓全横断手术,其中电针组和电针NSCs组于术后5d进行电针治疗。分别于术后14d和30d取材检测移植在脊髓损伤处的神经干细胞存活、分化和迁移情况。结果1．电针NSCs14d组或电针NSCs30d组移植的神经干细胞存活数量均多于NSCs14d组或NSCs30d组,但是电针NSCs30d组或NSCs30d组移植的神经干细胞存活数量均少于电针NSCs14d组或NSCs14d组。2．电针NSCs30d组和NSCs30d组的脊髓全横断损伤处及其相邻的组织均有少量移植的神经干细胞呈现微管相关蛋白2（MAP2）阳性染色。3．电针NSCs30d组和NSCs30d组的脊髓全横断损伤处及其相邻的组织均可观察到较多移植的神经干细胞呈现胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）阳性染色。4．在电针NSCs14d组或电针NSCs30d组,移植的神经干细胞向脊髓损伤处尾端组织迁移的距离明显长于NSCs14d组或NSCs30d组。结论督脉电针能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的神经干细胞存活,这些细胞能分化为MAP2或GFAP阳性细胞;督脉电针对移植在脊髓损伤处的神经干细胞向宿主脊髓组织迁移方向有一定的影响。     

神经营养素-3能够促进体外受损伤大鼠脊髓神经元的存活及其神经突起生长

目的探讨神经营养素-3(NT-3)对体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长影响。方法将体外培养的大鼠脊髓神经元分为4组:正常组、对照组、20 ng/ml NT-3组和40 ng/ml NT-3组。培养4 d后,除正常组外,其余3组建立划痕损伤模型。在划痕损伤后,对照组不做处理,另外2组分别在培养液中加入20 ng/mlNT-3和40 ng/ml NT-3继续培养。直至培养第6 d,应用4%多聚甲醛固定4组细胞。固定后的细胞分别做转移酶介导的三磷酸脱氧鸟苷-生物素刻痕末端标记(TUNEL)、微管相关蛋白2(MAP2)和生长相关蛋白-43(GAP43)免疫荧光染色,检测划痕损伤的神经元凋亡及其神经突起生长情况。结果免疫荧光化学染色显示,与对照组相比,应用NT-3处理的2组可以显著降低划痕损伤后的脊髓神经元凋亡率,并促进其神经突起生长。尤其是40 ng/mlNT-3组的神经元凋亡率最低,其神经突起可穿过划痕损伤边界。结论 NT-3能够促进体外机械性损伤的大鼠脊髓神经元存活及其神经突起生长。     

督脉电针与神经干细胞移植联合应用促进脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生

目的探讨督脉电针与神经干细胞移植联合应用对脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生的影响。方法将对照组、神经干细胞移植组、督脉电针组和督脉电针＋神经干细胞移植组的成年大鼠胸10脊髓段做全横断损伤;其中神经干细胞移植组和电针神经干细胞组在损伤处移植神经干细胞。电针组和电针神经干细胞移植组在术后开始接受督脉电针治疗。所有动物存活67d。结果1．电针神经干细胞移植组脊髓损伤处的去甲肾上腺素能、5-羟色胺受体、降钙素基因相关肽能和生长相关蛋白-43阳性染色的4种神经纤维均明显多于其他几组。2．电镜下可观察到脊髓横断处有再生的神经纤维穿越,在电针神经干细胞移植组尤为明显。3．大脑体感运动区皮质和中脑红核受损伤的神经元存活数量也多于其他几组,一些神经元的再生神经纤维可能穿越横断处,进入尾端脊髓组织。结论督脉电针与神经干细胞移植联合应用能促进脊髓全横断大鼠受损伤的神经元存活及其轴突再生。     

Electro-acupuncture promotes differentiation of mesenchymal stem cells,regeneration of nerve fibers and partial functional recovery after spinal cord injury

In order to improve the structure and function of acute spinal cord injury, the present study investigated the effect of electro-acupuncture (EA) on the differentiation of mesenchymal stem cells (MSCs) and the regeneration of nerve fibers in transected spinal cord of rats. The differentiation of MSCs into neuron-like cells and neuroglial cells and regeneraton of 5-hydroxytrptamine (HT) nerve fibers in the injured site of spinal cord were assessed after treatment with EA, MSCs transplantation, and EA plus MSCs transplantation. Compared with the control and MSCs groups, the content of endogenous neurotrophin-3 (NT-3) in the injured site and nearby tissues was increased in EA and EA+MSCs group. The differentiation of MSCs into neuronal-like cells and oligodendrocyte-like cells and number of 5-HT positive nerve fibers in the injured site were enhanced in the EA+MSCs group. Basso, Beattie, Bresnahan score of the paralyzed hindlimbs was highest in the EA+MSCs group. The present study demonstrates that electro-acupuncture can promote the differentiation of MSCs and regeneration of nerve fibers in injured spinal cord through induction of endogenous NT-3, and that combination of EA and MSCs transplantation can improve partial function of paralyzed hindlimbs.     

神经营养因子-3对大鼠脊髓半横断后背根神经节c-Jun表达的影响

目的：研究神经营养因子-3(NT-3)对脊髓半横断后背根神经节c-Jun表达的影响，探索NT-3促进脊髓修复的作用机制。方法：将实验动物分为：对照组，损伤组和NT-3注射组，应用荧光免疫组化法结合激光扫描共聚焦显微镜，观察各组背根神经节c-Jun的表达，并计数细胞核完整的神经元数目。结果：脊髓损伤后，背根神经节的细胞内c-Jun的表达上调；NT-3注射组脊髓损伤侧背根神经节神经元的c-Jun表达明显上调，背根神经节内细胞核呈完整状态的神经元数量明显增多。结论：(1)c-Jun在轴突损伤后表达上调。(2)NT-3对轴突损伤后的神经元有保护作用。(3)NT-3可能通过使c-Jun表达上调而发挥其促神经再生作用。     

大鼠脊髓全横断后神经营养素-3在红核表达的变化

目的:研究大鼠脊髓全横断后神经营养素-3(NT-3)在红核表达的变化,为进一步探索脊髓损伤后的再生修复机制和神经营养因子治疗脊髓损伤提供实验依据。方法:雄性SD大鼠36只随机分为3组,脊髓横断组:大鼠脊髓在胸10~11节段之间完全横断,按存活时间不同又分为术后1、3、7及14d组;假手术组(只行椎板切除术);正常对照组。动物到达存活时间点后,应用免疫组织化学ABC法和图像分析技术检测NT-3在红核的表达。结果:对照组和实验组红核有NT-3阳性细胞。脊髓全横断后红核NT-3的表达逐渐增高,于术后7d达高峰,后缓慢下降。结论:脊髓全横断后红核对NT-3的表达增加,内源性NT-3的增加可能有利于受损的红核内神经元的存活与再生。     

An experimental electro-acupuncture study in treatment of the rat demyelinated spinal cord injury induced by ethidium bromide

Oligodendrocyte precursor cells (OPCs) are one of the potential treating tools for multiple sclerosis (MS). Therefore, the cell number and differentiation of OPCs in a demyelinated spinal cord are crucial for improvement of reparative process. In the present study, we investigated whether "Governor Vessel (GV)" electro-acupuncture (EA) could efficiently promote increase in cell number and differentiation of OPCs into oligodendrocytes, remyelination and functional recovery in the demyelinated spinal cord. The spinal cord of adult Sprague-Dawley rats was microinjected with ethidium bromide (EB) at T10, to establish a demyelinated model. Six groups of animals were performed for the experiment. After 15 days EA treatment, neurotrophin-3 (NT-3) level and number of NG2-positive OPCs were significantly increased. Compared with the sham group, more NG2-positive OPCs were distributed between neurofilament (NF)-positive nerve fibres or closely associated with them in the lesion site and nearby tissue. In rats given longer EA treatment for 30 days, the number of adenomatous polyposis coli (APC)-positive oligodendrocytes was increased. Concomitantly, the number of newly formed myelins was increased. This was coupled by increase in endogenous oligodendrocyte involved in myelin formation. Furthermore, behavioural test and spinal cord evoked potential detection demonstrated a significant functional recovery in the EA+EB day 30 group. Our results suggest EA treatment can promote NT-3 expression, increase the cell number and differentiation of endogenous OPCs, and remyelination in the demyelinated spinal cord as well as the functional improvement of demyelinated spinal cord.     

直流电场诱导神经干细胞桥接横断脊髓的实验研究

目的:探讨直流电场(direct current field,DC)诱导神经干细胞(neural stem cells,NSCs)桥接横断脊髓的作用。方法:将54只雌性成年SD大鼠随机分为脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)组、NSCs移植组、NSCs移植联合直流电场诱导组(DC+NSCs组),各组分7,14,28d三个时间点取材,HE染色观察神经纤维再生情况,透射电镜下观察脊髓白质内髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)表达变化。结果:在光镜下,DC+NSCs组神经纤维较其他两组都多,排布均匀且走行较规则,部分纤维穿越损伤脊髓断端两侧。在电镜下,DC+NSCs组髓鞘松散程度明显减轻,部分髓鞘结构规整,排列有序,线粒体肿胀减轻,微管空泡样变较轻,可发现大量突触,薄髓的再生髓鞘明显增多。DC+NSCs组大鼠脊髓组织中可见直径大小不等的MBP阳性的圆形结构,MBP阳性表达最多,较其他两组有显著性差异(P0.01)。结论:直流电场诱导NSCs治疗SCI可以促进损伤处脱髓的轴突再髓鞘化和MBP的表达,促进神经纤维再生,从而起到桥接横断脊髓的作用。     

不同脊髓损伤模型大鼠行为学及形态学的变化

背景：在脊髓全断模型中有切割伤模型、切除伤模型,为了更好地选择脊髓损伤修复研究的全断动物模型,有必要对这两种模型进行比较及探讨。 目的：分析不同脊髓损伤模型的行为学及病理变化,选择适用于再生研究及治疗的脊髓损伤动物模型。 方法：将160只SD大鼠随机均分为2组,分别制作切割型脊髓损伤模型与切除型脊髓损伤模型,术后1,2,4,8,10,20,30,50周内进行后肢行为学BBB评分及组织化学、免疫组织化学染色,观察损伤区残余纤维情况;术后4,10,26,52周分别在大鼠脑皮质运动区与颈髓注射BDA-FITC示踪剂,观察损伤区残余纤维的连续性。 结果与结论：切割脊髓损伤模型组大鼠术后2-50周双后肢的BBB得分明显高于切除脊髓损伤模型组(P < 0.05);切割脊髓损伤模型组在损伤区残存大量组织和神经丝、胶质纤维酸性蛋白纤维,而切除脊髓损伤模型几乎没有残存纤维;不论是切割脊髓损伤模型还是切除脊髓损伤模型,皮质脊髓束均不能通过损伤区,终止于损伤区的头端;在切割脊髓损伤模型中,脊髓固有束重新进入尾侧端的宿主脊髓组织中,而在切除脊髓损伤模型中脊髓固有束终止于损伤区的头端。表明切除脊髓损伤模型更适用于脊髓损伤后再生效果及治疗手段或药物的筛选与评价。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程      

脊髓脱细胞支架对大鼠脊髓缺损修复的影响

目的 用振荡法制备脊髓脱细胞支架修复同种异体大鼠脊髓缺损,观察术后大鼠行为学及组织再生情况。为脊髓缺损后修复提供新的研究思路。方法 将30只SD大鼠脊髓分别用50 ml 3%聚乙二醇辛基苯基醚（Triton X-100）和2%脱氧胆酸钠溶液在摇床上做振荡处理,对比处理前后细胞残留情况及组织的空间结构,了解支架本身的组织构成。将90只SD大鼠随机分成空白对照组、单纯脊髓缺损组和支架移植组。切除单纯脊髓缺损组和支架移植组大鼠腰椎9～10节段,移植脱细胞支架至支架移植组大鼠。术后饲养12周,期间进行行为学评分观察,分别在4、8及12周时取大鼠损伤部位的脊髓进行HE染色及神经再生相关蛋白免疫荧光检测。结果 通过HE、Masson、甲苯胺蓝染色显示,脱细胞处理后的脊髓脱细胞支架上神经细胞及轴突彻底清除,保留了脊髓细胞外基质。扫描电子显微镜观察发现,支架保留一定多孔网状支架结构。脱细胞支架在体实验中,Basso-Beattie-Bresnahan（BBB）评分显示,移植有脱细胞支架的大鼠后肢运动功能恢复优于单纯损伤组大鼠。组织学HE染色显示,脱细胞支架能够填补缺损的脊髓节段,加快损伤脊髓的修复过程。免疫荧光显示,支架移植组大鼠的损伤部位有一定轴突再生。结论 脊髓脱细胞支架保留了细胞外基质并具有一定空间结构,能够一定程度加快脊髓缺损修复,对神经再生具有一定的促进作用。     

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后移植神经干细胞存活、增殖与迁移的影响

目的:探讨补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)灌胃对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后移植胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存活、增殖与迁移的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、NSCs移植组、NSCs移植联合补阳还五汤灌胃组。制作大鼠脊髓横断损伤模型,将BrdU标记NSCs细胞按浓度1×106/ml分别移植入移植组和联合组的脊髓横断处,损伤组用等量DMEM/F12完全培养基代替。术后联合组每天用BYHWD予以灌胃治疗1次,损伤组和移植组用生理盐水代替。各组在7、14、28 d后分别取材,用免疫荧光组织化学法检测移植在SCI处的NSCs存活、增殖和迁移情况。结果:损伤组未见BrdU标记阳性细胞;联合组各时间点BrdU标记阳性细胞数量均多于移植组各时间点,并有显著性统计学意义(P<0.05);联合组28 d时BrdU标记阳性细胞数量最多,与联合组7 d和14 d相比有显著性统计学意义(P<0.05);在联合组各时间点,BrdU标记阳性细胞向SCI处头尾端组织迁移的距离明显长于移植组各时间点。结论:脊髓横断损伤后,移植胚胎NSCs能够存活并增殖和迁移。补阳还五汤能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的NSCs存活、增殖和迁移。