炭疽、Ebola病毒、马尔堡病毒以及委内瑞拉马脑炎病毒的单独和联合DNA疫苗的比较

作者首先构建了炭疽杆菌保护性抗原(PA)、Ebola病毒(EBOV)、Marburg病毒(MARV)和委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)DNA疫苗。并用基因枪在0、4、8和21周对新西兰白兔免疫20μg炭疽PADNA疫苗；而对照动物则在0、4、8和12周肌肉注射0．5ml人用吸附炭疽疫苗(AVA)或同剂量非重组质粒；在24周时皮下注射有毒力的热激活炭疽芽孢进行攻击。     

粘膜或注射给予微球化炭疽杆菌保护性抗原可保护小鼠抵抗炭疽感染

现行的英国肌注炭疽疫苗和美国皮下注射的吸附炭疽疫苗 ( AVA)都需多次接种才能获得恒定的保护性免疫。试验表明疫苗抗原微球化的优点多于传统疫苗配方。作者以小鼠为模型测定了将重组炭疽杆菌保护性抗原 ( r PA)制成微球进行免疫的效果。　　将 r PA按一定程序包入分子量为1 0 0 k Da的聚 - L-丙交酯中制成微球 ,分别在1和 2 1天肌注、鼻腔接种或者采用联合途径(初免用肌注、加强用鼻腔接种 )免疫 A/J小鼠 2次 ,2 8天时采血以 EL ISA测定血清抗体水平 ,于第 55天用剂量为 1 0 3平均致死量的炭疽杆菌 STI株芽胞腹腔注射攻击小鼠 ,或…     

免疫小鼠抗VEE病毒IA/IB和IE株的保护性免疫力

本文评价了三种 IA/IB亚型委内瑞拉马脑炎 ( VEE)病毒疫苗在小鼠中防御 IE亚型毒力株全身和粘膜攻击时的保护力三种疫苗分别为 :现今使用的豚鼠胎心细胞培养传代 83次的减毒活疫苗 TC- 83;TC- 83经福马林灭活制成的 C- 84 ;运用定点诱变由 Tr D感染性全长 c DNA克隆制备的候选减毒活疫苗 V352 6。免疫后 7或 1 4天及1年用毒力株 Tr D ( VEE IA/IB型 )和6 8U2 0 1 ( VEE IE型 )末梢注射或气溶胶法进行攻击。　　免疫后 1周攻击 ,TC- 83组半数以上、V352 6组绝大多数小鼠存活。C- 84组 (一针免疫 )对末梢注射攻击能提供防御作…     

接种编码乙型脑炎病毒E糖蛋白的质粒DNA可提供显著保护作用

作者构建了单独编码乙型脑炎病毒(JEV)包膜 (E)糖蛋白的 DNA质粒 p CMX-ENV,该质粒转染 Vero细胞后可在细胞内表达 E蛋白。作者就其在小鼠肌内 (im)和鼻内 (in)接种对脑内 (ic) JEV攻击的防御作用进行了研究。　　对 4～ 6周龄异系交配瑞士雄性小鼠间隔两周在四头肌 im接种 5 0 μg DNA质粒 ;或间隔 1周共五次 in接种 2 0 μg DNA质粒。末次接种后两周 ,用 JEV P2 0 788株作 ic攻击(1 0 0 pfu/鼠 ) ,每日观察至攻击后 1 5天。　　经 im免疫 p CMXENV的小鼠的存活率为 33%～ 70 % ,总体存活率为 5 1± 1 2 %。经 in免疫 p CMX…     

对呼吸道合胞病毒亚单位疫苗局部免疫的体液、粘膜和细胞免疫应答

本文用霍乱毒素B链(CTB)作为佐剂在小鼠体内评价了呼吸道合胞病毒(RSV)融合(F)蛋白局部免疫作用.免疫4周龄CD1小鼠、每组4～6只,亚单位疫苗鼻内接种(inl)10μl(含F蛋白2μg和CTB5～10μg),肌肉接种(im)100μl(只含F蛋白2μg),在0和4周各免疫1次,活病毒疫苗inl 50μl[含5×10~5蚀斑形成单位(pfu)],只免疫1次.最后一次免疫后4周用RSV10~6pfu inl攻击,取攻击前的血清检测抗体,攻击后5天的鼻洗液(NW)和支气管肺泡灌洗液(BAL)滴定病毒效价和抗体.     

美国Vical公司的炭疽疫苗进入临床试验

美国 Vical公司将于年底开始 DNA炭疽疫苗的人体安全性试验 ,公司称此疫苗能有效保护家兔抵抗致死量炭疽杆菌的攻击。　　Vical公司的技术是将保护性抗原 ( PA)和致死因子 ( L F)两种免疫原联合 ,两者结合能形成致死毒素 ( L etx)。这两种免疫原提供的保护作用强于目前批准的炭疽疫苗或任一重组蛋白疫苗。　　首先 ,研究者在小鼠中试验了疫苗 ,以检测动物产生抗 PA和 LF抗体及 L etx中和抗体的能力。然后在家兔中检测了疫苗的免疫原性。家兔免疫后经气溶胶化炭疽杆菌定量吸入攻击 ,所有 PA DNA疫苗免疫兔产生的抗 - PA免疫应答等于…     

H9N2禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶DNA疫苗对小鼠的免疫保护研究

目的 检测H9N2禽流感病毒血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸酶(neuraminidase,NA)DNA疫苗保护小鼠抵抗致死量同源病毒感染的能力.方法 通过小鼠肺对肺传代,建立禽流感病毒A/chicken/Jiangsu/07/2002(H9N2)小鼠适应株.同时,构建病毒HA和NA DNA疫苗,以不同剂量电击法免疫小鼠1或2次,在初次免疫后4周或加强免疫后1周用致死量(40 LD50)鼠适应型病毒攻击小鼠.通过测定小鼠血清抗体滴度、小鼠存活率和肺部病毒滴度来评价疫占的效果.结果 HA或NADNA 10μg免疫1次或3μg免疫2次均可保护小鼠抵抗致死昔H9N2病毒的感染.结论 低剂量HA或NA DNA可为抗H9N2禽流感病毒感染提供有效的免疫保护.     

埃博拉病毒疫苗研究进展

埃博拉出血热是埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的人类和非人灵长类动物急性出血性传染病,目前尚无治疗药物和疫苗获得批准.科研人员正在进行EBOV疫苗的研发,包括病毒样颗粒疫苗、DNA疫苗和病毒载体疫苗等.虽然这些疫苗的免疫机制各不相同,但部分疫苗在非人灵长类动物中能有效对抗EBOV,提示有望成功研制出EBOV疫苗.     

全面防御流感、单纯疱疹、呼吸道合胞病毒共同感染的联合疫苗

为确定由甲型流感病毒血凝素 ( INF-HA)和核蛋白 ( NP)、1型单纯疱疹病毒糖蛋白 D( HSV1 - g D)、呼吸道合胞病毒糖蛋白 F( RSV- F)基因构成的联合疫苗的保护效果作者将 6～ 8周龄雌性 Balb/c小鼠随机分入试验组和对照组 ,试验组于 0、3、6周接种联合基因疫苗 ,对照组按同样免疫程序接种无抗原质粒 ( p CMVi- tpa)、p CMVi- RSV- F或p CMVi- Flu。全程免疫后采血 ,用 ELISA法检测血清中特异性 Ig G抗体 ;免后 1 4～ 2 1天 ,各组用 Flu、HSV、RSV、肺炎支原体( MP)单独或联合攻击 ,观察小鼠的行为改变和死亡率 ;用免疫组…     

DNA免疫诱导的免疫优势HCV特异性CTL表位特异性CTL的定量

确定丙型肝炎病毒 (HCV)的免疫优势细胞毒性 T淋巴细胞 (CTL)表位对筛选能诱导强 CTL 应答的 HCV疫苗策略非常必要。作者采用流式细胞术检测 DNA免疫小鼠 CD8+T细胞内 γ干扰素 (IFN- γ)的方法来确定 HCV的免疫优势 CTL表位 ,同时进行细胞定量。　　将表达 HCV- 1 a基因型全长核心、E2、NS5 a、NS5 b的不同 DNA疫苗分别肌注 3种 H- 2 d 小鼠和 4种 H- 2 k 小鼠 ,4～ 6周后 ,对免疫小鼠腹腔攻击表达 HCV- 1 a核心 /E1、E1 / E2、NS5 a和 NS5 b的重组痘苗病毒 ,于 5天后处死 ;或加强 1次 DNA疫苗 ,于 1 2天后处死。小…     

炭疽芽胞对疫苗效力起主要作用

炭疽是由产芽胞的革兰阳性炭疽杆菌引起的 ,感染宿主常因败血症和毒血症而死亡。炭疽杆菌分泌保护性抗原 ( PA)、水肿因子( EF)和致死因子 ( LF)这三种蛋白。有证据表明活芽胞疫苗的芽胞抗原具有保护作用。从改善无细胞疫苗的效力出发 ,作者就无细胞 PA疫苗中加入甲醛灭活的炭疽芽胞( FIS)能否提高疫苗的效力进行了探讨。　　用于免疫的组分为纯化的 PA(每只小鼠 1 0 μg,每只豚鼠 4 0 μg)和 /或炭疽杆菌RPLC2株的 FIS,0 .3%氢氧化铝作为佐剂。分别采用皮下与皮内途径于第 0及 1 5天 2次免疫小鼠和豚鼠 ,于第 33天采集血清标本 ,以…     

与TPA信号序列融合的JEV包膜蛋白编码质粒DNA在小鼠脑内病毒攻击模型中的保护效力研究

为了研究特异信号序列对乙型脑炎病毒( JEV)包膜 ( E)蛋白在小鼠脑内病毒攻击模型中的保护效力 ,作者分别构建了全长 E蛋白 ( E)和仅含 N末端 398年氨基酸 ( ΔE)的质粒 DNA p CMVE和 p CMVΔE;在此基础上 ,又构建了含来源于组织纤溶酶原激活物( TPA)的分泌型信号序列的质粒 p CMVTE和 p CMVTΔ E。将以上 4种质粒体外瞬时转染 Cos7细胞 ,检测 E蛋白表达量和亚细胞定位。分别于 0、 1 4天将 1 0 0 μg的不同质粒DNA肌肉或 1 0 0 μl的 BIKEN JEV疫苗皮下接种 4～ 6周龄的远交瑞士雄性小鼠。末针接种后 1周 ,用 1 0 L D50…     

马尔堡出血热感染非人灵长类动物后用重组水泡性口炎病毒载体疫苗治疗的保护效力评估

马尔堡病毒（MARV）是引起致死性出血性疾病的一种丝状病毒，目前尚无人用治疗药物或疫苗。先前的研究表明，一种表达MARV跨膜糖蛋白的减毒重组水泡性口炎病毒（rVSV）活疫苗（VSVΔG／MARVGP）可保护非人灵长类动物防御致死性MARV攻击。美国陆军传染病医学研究所Dadd—ario—DiCaprio等用这种疫苗对MARV接触后的治疗效果进行研究。     

Balb/c小鼠接种呼吸道合胞病毒融合蛋白后的肺免疫应答

为了确定局部浸润的肺单个核细胞（PMC）在清除下呼吸道病毒中的作用,作者研究了与氢氧化铝佐剂混合的纯化呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白（5μg）接种Balb/c小鼠的效果。 作者在0及3周对小鼠肌肉接种F蛋白以诱导保护性免疫力,同时与实验感染RSV（1～2×10~6 pfu）的小鼠进行比较,末次免疫或感染后3或4周用1×10~7pfu病毒作鼻内攻击,测定攻击后4和8天每克肺组织的病毒效价,并检测初次免疫后3和6周混合血清样本的中和抗体效价。 结果表明,F蛋白诱生的免疫应答与实验感染相似,能抑制攻击后4～8天的病毒复制,而未免疫对照小鼠在攻击后8天才有抑制作用。接种组和实验感染组于6周后查到抗RSV中和抗体。作者用~(51)Cr释放试验检测了初次接种后3周及RSV攻击后5和7天肺组织中浸润PMC的杀细胞作用,发现有抗原依     

吸附于阳离子微粒的HIV-1 gag DNA粘膜免疫延长基因表达并增强局部和全身免疫

迫切需要开发一种安全有效而又廉价的抗人类免疫缺陷病毒 ( HIV)感染的疫苗 ,已经证实开发粘膜投递性疫苗是一良好的选择。作者探讨了用吸附于聚丙交酯 -乙交酯( PLG)微粒表面的 HIV- 1 gag DNA( PLG-DNA)疫苗鼻腔免疫小鼠后所诱导的局部与全身免疫应答的潜力。　　以 1 0 0 μg PL G- DNA或裸 DNA疫苗按2～ 3周间隔 4次鼻腔接种雌性 CB6 F1小鼠 ,于末次免疫后 1周处死小鼠。于处死前 1日采集小鼠血清并以 ELISA检测抗体水平 ;经鼻孔冲洗获得 30 0 μl鼻洗液 ;从每组 5只小鼠收集并混合颈淋巴结和脾脏 ,并将相应器官组织制备…     

人结核分枝杆菌hsp70DNA疫苗的免疫保护作用研究

目的研究人结核分枝杆菌hsp70 DNA疫苗对小鼠的免疫保护作用.方法用人结核分枝杆菌hsp70 DNA疫苗免疫雄性BALB/c小鼠,8周后,用结核杆菌H37Ra进行攻击8周,检测小鼠淋巴细胞刺激指数(SI)、腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量、小鼠血清IFN-γ、IL-2的含量,并计数小鼠肝、肺活细菌数.结果hsp70 DNA疫苗免疫的小鼠,其脾淋巴细胞刺激指数(SI)为3.24±0.57,与对照组(2.63±0.47)比较,差异不具有显著意义;腹腔巨噬细胞培养释放NO量与对照组比较无显著差异,但较对照组高26%.免疫小鼠其血清IFN-γ量为981.40pg/ml,与对照组(565.90pg/ml)相比,差异具有显著意义(P＜0.05);小鼠血清中IL-2的浓度较对照组明显提高(P＜0.05).经hsp70 DNA疫苗免疫的小鼠受结核杆菌攻击后其肺、肝脏结核杆菌数较对照组少.结论人结核分枝杆菌hsp70 DNA疫苗免疫小鼠后能提高小鼠腹腔巨噬细胞培养上清释放NO量,刺激IFN-γ、IL-2的分泌,说明此疫苗能诱导CD4+Th1和CD8+ CIL的细胞免疫反应,增强小鼠细胞免疫功能,并使小鼠能抵抗结核杆菌的攻击.     

增强口服DNA疫苗和表达HIV包膜糖蛋白病毒载体免疫效果的策略

作者研究了先口服编码 HIV gp1 6 0的DNA疫苗进行初免 ,然后用表达 gp1 6 0的重组痘苗病毒 ( r VV)载体 ( v PE1 6 )进行加强的免疫方法的效果 ,分析了香菇多糖和 IL - 2 / Ig佐剂对免疫应答的作用。　　作者采用水包油包水的方法制备编码HIV gp1 6 0 DNA和 IL - 2 / Ig DNA的聚丙交酯 -乙交酯 ( PL G)微粒 ,并制备了与 v PE1 6或香菇多糖结合的阳离子脂质体。试验动物是 6周龄的 BALB/ c小鼠 ,小鼠饲养在无特定病原体的隔离环境中。在设立相应的对照组后 ,对实验组在 0、7、1 4天进行口服免疫 ,1周后用表达 HIV- 1 B gp1 …     

汉滩病毒核酸疫苗滴鼻免疫小鼠表达动力学研究

目的 构建汉滩病毒DNA疫苗，考查小鼠鼻内接种DNA疫苗后的基因组织定位及表达动力学，为进一步研究汉滩病毒DNA疫苗粘膜免疫的疗效作前期准备。方法 采用PCR法从PJSA1175-S质粒扩增汉滩病毒的S基因片段后装入PcDNA3．1B(-)载体，并以此候选DNA疫苗滴鼻免疫BALB／c小鼠，在不同时间、不同部位取其组织抽提基因组DNA和组织总RNA，用PCR及RT-PCR检测质粒的分布和表达动力学。结果 构建了汉滩病毒DNA疫苗PcDNA3．1B-S1.3。免疫接种该疫苗第1天后在小鼠鼻咽、肺、肾、肝、脾、小肠等组织中均有质粒分布；第1周内上述组织中均可检测到特异mRNA，第2周起小肠、肝及肾中特异mRNA消失。结论成功构建了PcD-NA3．1B-S1.3DNA疫苗，构建的疫苗滴鼻免疫后在小鼠体内得到广泛的分布及表达。     

用呼吸道合胞病毒亚单位疫苗粘膜免疫接种小鼠

作者评价了用纯化的呼吸道合胞病毒（RSV）融合(F）蛋白和霍乱毒素（CT）佐剂疫苗粘膜免疫接种小鼠的保护效力。 取4周龄小鼠进行实验。用于鼻内接种的10μl疫苗中含CT2.5μg、F蛋白3μg;肌肉接种的0.1ml明矾疫苗中含F蛋白3μg,用PBS作安慰剂。活病毒疫苗为2.5μl中含2×10~6空斑形成单位（PFU）病毒。在0和4周各免疫1次,8周时用RSV Long株5×10~6PFU攻击。病毒攻击后4天杀死小鼠,取血清,用酶免疫试验测定抗F蛋白和CT的IgG抗体,并作微量中和试验。无菌取鼻洗液,一部分立刻用HEp-2细胞滴定病毒滴度,一部分测定IgA。 动物共分9组,每组6只。实验结果表明,鼻内接种活RSV组血清中有高滴度抗F特异IgG具有强的中和力,鼻洗液中有IgA,病毒攻击后,所有小鼠均未检出病毒。鼻内和肌肉同时接种PBS组,无抗体产生,不能阻止病毒复制,鼻内病毒滴度为log_210.1±0.2PFU。鼻内或肌肉接种F蛋白组,鼻洗液中均无IgA,不能阻止病毒复制,但后者有血清抗体。鼻内和肌肉同时接种F蛋白组亦有高滴度血清抗体但无鼻洗液IgA,病毒复制力比PBS组低。鼻内单独接种CT组,虽无抗F抗体,但能轻度抑制病毒复制,鼻洗液中病毒滴度为log_26.8±2.2 PFU,每只小鼠皆查到病毒说明与免疫接种无关。鼻内接种F+CT组,血清中有高滴度F和CT特异性IgG并     

埃博拉病毒疫苗最新研究进展

埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)是引起人类和非人灵长类动物严重出血热的最危险病原体之一,1976年首次得到报道.2014年撒哈拉以南非洲暴发的EBOV病的病死率高达90％.研究表明EBOV灭活疫苗无效,但多个新型EBOV候选疫苗已在临床前试验中显示有效,其中部分已进入临床试验.这些新型疫苗包括病毒载体疫苗、病毒样颗粒疫苗和核酸疫苗.此文对EBOV疫苗的研究进展做一综述.