Protective effect and mechanism of stronger neo-minophagen C against fulminant hepatic failure

AIM： To investigate the protective effect of stronger neo-minophafen C （SNMC） on fulminant hepatic failure （FHF） and its underlying mechanism.
METHODS： A mouse model of FHF was established by intraperitoneal injection of galactosamine （D-Gal N） and lipopolysaccharide （LPS）. The survival rate, liver function, inflammatory factor and liver pathological change were obtained with and without SNMC treatment. Hepatoo/te survival was estimated by observing the stained mitochondria structure with terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate fluorescence nick end labeling （TUNEL） method and antibodies against cytochrome C （Cyt-C） and caspase-3.
RESULTS： The levels of plasma tumor necrosis factor alpha （TNF-α）, nitric oxide （NO）, ET-1, interleukin-6 （IL-6）, and the degree of hepatic tissue injury were decreased in the SNMC-treated groups compared with those in the model group （P 〈 0.01）. However, there were no differences after different dosages administered at different time points. There was a significant difference in survival rates between the SNMC-treated groups and the model group （P 〈 0.01）. The apoptosis index was 32.3% at 6 h after a low dose of SNMC, which was considerably decreased from 32.3% ± 4.7% vs 5% ± 2.83% （P 〈 0.05） to 5% on d 7. The expression of Cyt-C and caspase-3 decreased with the prolongation of therapeutic time. Typical hepatocyte apoptosis was obviously ameliorated under electron microscope with the prolongation of therapeutic time. CONCLUSION： SNMC can effectively protect liver against FHF induced by LPS/D-Gal N. SNMC can prevent hepatocyte apoptosis by inhibiting inflammatory reaction and stabilizing mitochondria membrane to suppress the release of Cyt-C and sequent activation of caspase-3.     

血吸虫病小鼠肝纤维化肝组织中Fas/FasL的表达

目的 探讨Fas／FasL在血吸虫病肝纤维化肝组织中的表达及意义。 方法 采用免疫组化技术检测血吸虫病小鼠肝纤维化肝组织中Fas／FasL的表达,并对照经吡喹酮、已酮可可碱治疗前后其表达的变化,分析其意义。 结果Fas以肝细胞浆表达为主,FasL主要在浸润淋巴细胞浆、肝细胞核表达。经吡喹酮及高剂量已酮可可碱治疗后其肝组织Fas／FasL表达明显减少(P<0.01)。 结论 血吸虫感染可诱导肝细胞Fas／FasL的表达,增强Fas／FasL途径介导的肝细胞凋亡,这一机制在血吸虫病肝纤维化的发病中可能起重要作用。吡喹酮及高剂量已酮可可碱可明显下调Fas／FasL的表达,抑制肝细胞凋亡,改善肝功能。     

HDV/HBV感染树鼩肝组织Fas/FasL表达与肝细胞凋亡

目的 探讨HDV感染树鼩肝组织中Fas/FasL表达与HDV感染之间的关系,以及Fas/FasL在丁型肝炎肝细胞凋亡中的作用。 方法 采用免疫组化和原位杂交技术对45份HDV感染树鼩肝组织中HDAg,Fas/FasL和Fas/FasL mRNA的表达进行了检测;应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行了检测;并应用免疫组化双重染色对HDAg,Fas/FasL的表达以及肝细胞凋亡进行了检测。 结果 45份肝组织中有39份可检出Fas/FasL(阳性率87％),有41份可检出凋亡细胞(阳性率91％),HDAg表达与Fas/FasL表达之间有显著相关性(X_1~2=29.2,X_2~2=27.9,P<0.05),HDAg表达越强,Fas和FasL表达也越强,凋亡在HDAg阳性和阴性细胞中均可发生,以HDAg阳性细胞发生为主,Fas/FasL表达与肝细胞凋亡之间有显著相关性(X_1~2=35.1,X_2~2=40.2,p<0.05),Fas和FasL表达越强,凋亡阳性细胞越多。 结论 丁型肝炎病毒感染和未感染的肝细胞均可发生凋亡,但凋亡只在少数细胞发生;肝细胞内的病毒抗原表达可诱导Fas/FasL的表达;Fas/FasL肝细胞凋亡中起重要作用。     

Role of Fas/FasL pathway in the activation of infiltrating cells in murine acute myocarditis caused by Coxsackievirus B3

OBJECTIVES: This study was designed to investigate the roles of Fas/FasL pathway in myocardial damage in murine acute myocarditis caused by Coxsackie virus B3 (CVB3). BACKGROUND: Cardiac myocyte apoptosis rarely occurs in murine acute myocarditis caused by CVB3. Fas/FasL belong to the tumor necrosis factor receptor/ligand superfamily of costimulatory molecules and are known to play a critical role in the induction of apoptosis, as well as in the cytotoxicty mediated by T-cells and natural killer cells. METHODS: We first analyzed the expression of Fas on cardiac myocytes in vivo and in vitro. Second, we examined the development of myocardial damage, in C3H/He mice treated with an anti-FasL monoclonal antibody (mAb), and in C3H/He-lpr/lpr mice and C3H/He-gld/gld mice infected with CVB3. Third, to investigate the effects of anti-FasL mAb treatment on the activation of the infiltrating cells, we examined the expression of interferon (IFN)-gamma and interleukin (IL)-2 as activation markers in the heart of mice by semiquantitative polymerase chain reaction. RESULTS: Fas was markedly induced on cardiac myocytes with acute myocarditis. Myocardial inflammation was decreased in mice treated with anti-Fas L mAb, C3H/He-lpr/lpr mice and C3H/He-gld/gld mice. Anti-FasL mAb-treatment also decreased the expression of IFN-gamma, IL-2, inducible nitric oxide synthase and CVB3 genomes in myocardial tissue. CONCLUSIONS: Our findings strongly suggested that the Fas/FasL pathway played a critical role in the development of massive myocardial necrosis through activation of infiltrating cells, and raise the possibility of immunotherapy by blocking the Fas/FasL pathway to prevent myocardial damage and improve the prognosis of patients with viral myocarditis.     

白藜芦醇对动脉粥样硬化兔Fas/FasL凋亡途径的影响

目的:探讨白藜芦醇对兔动脉粥样硬化斑块内细胞凋亡及Fas、FasL、Caspase-3基因转录的影响.方法:成熟健康雄性新西兰白兔70只,适应性喂养10 d后随机分为5组:A组继续喂普通饲料;B组喂高脂饲料;C、D、E组喂高脂饲料的同时分别给予白藜芦醇4 mg·kg~(-1)·d~(-1)、8 mg·kg~(-1)·d~(-1)、16 mg·kg~(-1)·d~(-1)进行干预.末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测Fas、FasL、Caspase-3mRNA转录水平.结果:高脂喂养12周后,成功建立动脉粥样硬化模型;病理对照组斑块内有大量的凋亡细胞;与病理对照组比较,正常对照组血管内膜偶见少量的凋亡细胞(P<0.01),低至高剂量白藜芦醇干预组细胞凋亡依次降低(P<0.05),其Fas mRNA、FasL mRNA转录水平也依次降低,白藜芦醇高剂量组Fas mRNA转录水平与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论:白藜芦醇可抑制动脉粥样斑块内细胞凋亡,从而稳定斑块、抑制动脉粥样病变进展,这一作用可能通过抑制Fas/FasL凋亡途径,降低Caspase-3基因转录来实现,并具有一定的量效关系.     

参麦注射液和氨茶碱对慢性缺氧大鼠膈肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的　探讨参麦注射液和氨茶碱对慢性缺氧大鼠膈肌细胞凋亡及Fas/FasL基因蛋白系统表达的影响。方法　雄性Wistar大鼠 75只 ,随机分为空白组 (A组 )、参麦组 (B组 )和氨茶碱组 (C组 ) ,每组 2 5只 ,根据实验要求 ,3组再各分为缺氧前、缺氧 1周、2周、3周及 4周组 ,每组 5只。各组缺氧浓度均为 ( 10± 3 ) % ,7d/w ,8h/d ;B、C组在缺氧前分别注射参麦 ( 2ml/只 )、氨茶碱 ( 10mg/kg)。采用免疫组织化学及末端脱氧核苷酸转移酶介导的三磷酸脱氧尿嘧啶缺口末端标记 (TUNEL)法 ,检测各实验组Fas/FasL系统的表达及膈肌细胞凋亡 ,比较参麦和氨茶碱干预后对上述指标的影响。结果　 ( 1)A组膈肌细胞缺氧前Fas、FasL的表达阳性率分别为 ( 2 77± 0 45) %、( 2 3 2± 0 61) % ,缺氧后其表达随缺氧时间的延长而增加 ;经参麦干预后 ,B组在缺氧 1周、2周、3周、4周的Fas表达 [( 6 3 6±4 17) %、( 9 77± 4 12 ) %、( 18 0 2± 6 91) %、( 2 1 0 9± 8 0 9) % ]、FasL表达 [( 5 3 2± 6 16) %、( 9 58±3 79) %、( 12 0 1± 8 71) %、( 19 43± 10 3 1) % ]与A组同期比较差异有显著性 (P均 <0 0 5)。而氨茶碱对其表达的作用不明显 ,C组Fas表达 [( 10 87± 3 62 ) %、( 2 4 13± 3 79) %、( 3 5 3 9± 9 0     

凋亡相关基因Fas、Fas配体及bax在慢性病毒肝炎组织中的表达及意义

为探讨凋亡相关基因Ｆａｓ、Ｆａｓ配体及ｂａｘ在慢性病毒性肝炎中表达的意义。采用免疫组化技术研究４８例慢性肝炎（乙型肝炎３３例,丙型肝炎１５例）组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ及ｂａｘ的表达。结果：慢性乙型肝炎和丙型肝炎组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ及ｂａｘ表达均较正常肝增加,以细胞坏死和炎细胞浸润区域增加明显。结论：凋亡相关基因Ｆａｓ、Ｆａｓ及ｂａｘ可能参与了肝炎病毒致肝细胞的损伤过程。     

非酒精性脂肪性肝炎中细胞凋亡及相关基因表达的作用

目的探讨细胞凋亡在NASH发病中的作用,以及细胞凋亡相关基因Fas配体(FasL),Fas和半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,-8表达或激活在细胞凋亡及NASH病情进展中的作用。方法采用高脂、胆碱-蛋氨酸缺乏饮食(MCD-)建立小鼠进展性NASH模型(实验周期分别为2、5、10d、3周和8周),并以胆碱蛋氨酸充足饮食(MCD )设立对照组。HE染色观察肝脏脂肪变、炎症活动度及纤维化程度;TUNEL分析观察细胞凋亡情况;FasL、Fas及caspase-8 mRNA表达采用实时定量RT-PCR检测,蛋白质表达采用Western blot;caspase-3活性分析采用ApoAlert caspase-3分析试剂盒测定。结果实验组动物,实验5 d可见轻微肝细胞脂肪变性,10 d形成轻度肝脂肪变,可见炎性细胞浸润,3周形成中至重度肝脂肪变及明显的炎性细胞浸润,8周肝脂肪变、肝细胞坏死、炎性细胞浸润加重并可发生肝纤维化。TUNEL分析显示,实验3周、8周实验组细胞凋亡指数显著高于对照组(15.59%±4.87%对比5.17%±3.19%;11.29%±3.22%对比5.41%±1.54%,P<0.05)。肝组织FasL mRNA和蛋白质表达于实验10 d及3周实验组显著高于对照组(P<0.05和P<0.01);实验组Fas mRNA表达于实验3周及8周明显上调(P<0.01),而蛋白质表达以实验8周增强明显(P<0.01)。实验组caspase-8 mRNA表达于实验3周和8周显著增高(P<0.01和P<0.05),而caspase-8活化以8周为著(P<0.05)。除5 d组外,各实验组caspase-3活性均高于对照组(P<0.05)。结论肝细胞凋亡存在于NASH模型中,并与疾病的进展,如肝细胞炎症和肝纤维化有关,肝细胞凋亡与FasL/Fas及其下游的caspase信号转导通路激活有关,可能为NASH发病的重要机制之一。     

小鼠暴发性肝衰竭肝细胞凋亡形态学及其调控机制

目的:研究在实验性暴发性肝衰竭(fulminant hepatic failure,FHF)中肝细胞凋亡的形态学变化以及一氧化氮(nitric oxide,NO)、Fas和Bcl-2对肝细胞凋亡的调控作用．方法:脂多糖(LPS)和D-氨基半乳糖(D-GalN)联合应用制备FHF小鼠模型;采用免疫组化方法检测肝组织Fas 及Bcl-2表达,分别采用硝酸还原酶法和RT-PCR法检测血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达;TUNEL法检测肝细胞凋亡;在用药后动态观察Fas及Bcl-2表达、血清NO水平及肝组织iNOS mRNA表达及肝细胞凋亡的变化,并对模型鼠给予iNOS的抑制剂L-NMMA,动态观察上述指标的变化．结果:在FHF模型小鼠中,用药后2 h开始血清NO水平及iNOs mRNA的表达即升高,于4 h达高峰;用药后2 h 开始Fas有少量表达,至8 h和12 h表达均明显增多,与 2 h组比较差异显著(100％ vs 20％,P<0．01),与4 h组比较差异也比较显著(100％ vs 40％,P<0．05)．模型组2 h Bcl-2有较多表达,4 h表达最多,4 h与2 h比较差异显著 (90％ vs 60％,P<0．05),与8,12h比较差异非常显著(90％ vs 20%,均P<0．01)．8 h可出现典型的肝细胞凋亡表现．与模型组各时间点比较,给予iNOS的抑制剂L-NMMA 后血清NO水平及iNOs mRNA的表达均为正常水平, Fas及Bcl-2表达均无显著差异(P>0．05),阻断后8 h亦可见典型的肝细胞凋亡表现,阻断NO可使病变较模型组更为严重．结论:在FHF中,Fas及Bcl-2的表达均增加,Fas的表达与肝细胞凋亡相一致,而Bcl-2的表达与肝细胞凋亡呈负相关．单纯应用NO拮抗剂对肝细胞凋亡及肝损伤无保护作用．     

噻托溴铵对慢性阻塞性肺疾病大鼠膈肌细胞凋亡的影响

目的探讨噻托溴铵对COPD大鼠膈肌细胞过度凋亡的调节作用及其机制。方法60只雄性Wistar大鼠随机分成健康对照组、COPD组和噻托溴铵干预组。采用烟熏及气管内注射脂多糖建立COPD模型,第91天将大鼠处死,观察各组大鼠肺组织的病理变化,TUNEL法检测各组膈肌细胞的凋亡率,免疫组织化学法检测膈肌细胞内Fas蛋白的表达,Westrenblot法检测膈肌细胞中FasL及Caspase-3的含量,RT—PCR法检测Caspase-3基因表达。结果噻托溴铵组大鼠膈肌细胞的凋亡率、Fas、FasL、Caspase-3蛋白含量及Caspase-3基因表达均低于COPD组,高于健康对照组,3组之间差异有统计学意义（Pd0．05）。结论cOPD的发生发展过程中存在膈肌细胞过度凋亡,Fas／FasL途径参与了膈肌细胞凋亡的调控,噻托溴铵可抑制膈肌细胞的过度凋亡,延缓COPD的进程。