前列腺素E_1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡及bcl-2、bax蛋白表达的影响

目的:探讨前列腺素E1(PGE1)抑制缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的作用机制。方法:采用离体纯化培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,PGE1高、中、低各剂量组在缺氧复氧期分别给药;各组采用电镜技术和原位末端标记技术检测心肌细胞的凋亡情况,免疫组化技术检测bcl-2、bax蛋白表达情况。结果:与模型组比较,PGE1组心肌细胞的凋亡率显著降低,bcl-2蛋白表达明显上调而bax蛋白表达明显下调(P<0.01)。结论:离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡,而PGE1可明显抑制这种凋亡的发生,其机制可能与促进bcl-2蛋白表达、抑制bax蛋白表达有关。     

PGE_1对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的　研究PGE1对纯化培养心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法　采用纯化培养的心肌细胞建立缺氧 /复氧损伤模型 ,实验分 5组 :正常细胞培养组、缺氧 /复氧损伤模型组、缺氧 /复氧损伤 +PGE1(5、15、4 5 μg·L-1)组。分别用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力 ,硫代巴比妥酸显色法测定MDA含量 ,MTT染色法测定线粒体脱氢酶活性改变并测定LDH含量变化。结果　PGE1可明显提高SOD、LDH活性 ,降低MDA含量并可提高线粒体脱氢酶活性。结论　PGE1具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌作用     

内质网应激相关蛋白1过表达对缺氧/复氧诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响

目的 研究内质网应激相关蛋白1(SERP1)过表达对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠胚胎H9c2心肌细胞凋亡的影响.方法 2018年1—12月将中国科学院上海细胞库大鼠H9c2心肌细胞系建立H/R损伤大鼠心肌细胞模型,采用pCMV6质粒为载体构建内质pCMV6-网应激相关蛋白1(pCMV6-SERP1)过表达重组质粒,分...     

缺氧复氧诱导的心肌细胞凋亡及一氧化氮对此过程的作用

目的　研究缺氧复氧损伤诱导体外培养的新生大鼠心肌细胞凋亡及一氧化氮 (NO)对此过程的作用。方法　取体外培养的新生大鼠心肌细胞 ,分两组 ,一组于 0 95N2 、0 0 5CO2 孵箱中培养 16h、32h、4 8h ,再恢复正常条件培养6h ,造成缺氧复氧损伤的细胞模型 ,TUNEL法观察心肌细胞凋亡形态学特征 ,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率 ;另一组缺氧培养 16h、32h、4 8h后 ,将NO供体亚硝基青霉胺(SNAP)加入培养基中 ,使其终浓度为 10 0 μmol·L-1,再于正常条件培养 6h ,检测心肌细胞凋亡率。结果　心肌细胞在缺氧 16h、32h和 4 8h后复氧 6h ,TUNEL法可检测到阳性的凋亡细胞 ,流式细胞仪检测其凋亡率分别为 :5 5 %±0 7% ,11 0± 1 1%和 14 2 %± 1 6 % ;心肌细胞缺氧培养16h、32h、4 8h后加入SNAP ,再复氧 6h ,流式细胞仪检测其凋亡率分别为 :3 2 %± 0 7% ,7 8%± 0 7%和 10 9%±1 0 %。结论　缺氧复氧损伤引起的心肌细胞凋亡率随着缺氧时间的延长而增高 ;NO对缺氧复氧损伤引起的心肌细胞凋亡有抑制作用     

三七二醇对缺氧/复氧心肌细胞的保护机制及HSP70表达影响的研究

目的：探讨三七二醇对缺氧/复氧心肌细胞的保护机制及HSP70表达的影响。方法：选择刚出生的SD大鼠作心肌细胞原代培养及缺氧/复氧模型。将原代培养大鼠心肌细胞分为5组,A组为对照组;B组为缺氧/复氧对照组;C组为三七二醇低浓度组,D组为三七二醇中浓度组,E组为三七二醇高浓度组。用免疫组织化学法检测HSP70的表达,用生化比色法检测LDH活力。结果：三七二醇对SD大鼠缺氧/复氧心肌细胞具有明显保护作用,保护作用与三七二醇浓度有关。随着三七二醇浓度增加,缺氧/复氧心肌细胞HSP70表达增加,同时随时间延长,SD大鼠缺氧/复氧损伤心肌细胞内HSP70表达增加。结论：三七二醇对缺氧/复氧心肌细胞保护作用可能与HSP70表达增加有关。不同浓度的三七二醇对缺氧/复氧心肌细胞的保护均起一定作用。     

金雀异黄酮通过调控转胶蛋白-2表达对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响

目的 研究金雀异黄酮(GEN)对缺氧/复氧诱导的心肌细胞损伤的影响及可能分子机制.方法 本研究的起止时间为2018年10月至2019年11月.建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)模型(H/R组),以常规培养的细胞作为对照组;用浓度分别为5 mg/L、10 mg/L、20 mg/L的GEN处理H9c2细胞后再进行H/R处理,...     

巴戟天正丁醇提取物对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响研究

目的:研究巴戟天正丁醇提取物(BEM)对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:实验分6组,即正常、缺氧复氧模型(A/R)、丹参注射液(SM)及BEM高、中、低剂量组;通过电镜观察凋亡心肌细胞形态变化,原位缺口末端标记(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,免疫组化染色法测心肌细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和B细胞淋巴瘤-2连接X蛋白(Bax)的表达。结果:细胞形态学显示BEM对缺氧复氧过程中的心肌细胞的形态具有显著的保护作用(P<0.01);TUNEL结果显示,BEM高、中、低剂量组与A/R组比较可显著降低心肌细胞的凋亡指数(P<0.01);SM及BEM高、中、低剂量组均可使A/R乳鼠心肌细胞Bcl-2阳性表达灰度值显著升高(P<0.01),细胞Bax阳性表达灰度值显著降低(P<0.01)。Bcl-2与Bax的表达呈负相关(r=-0.983)(P<0.01)。结论:BEM可抑制缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的发生,其机制可能与促进Bcl-2蛋白的表达、抑制Bax蛋白的表达有关。     

曲美他嗪对缺氧/复氧诱导人心肌细胞凋亡的影响

目的研究曲美他嗪(trimetazidine)对缺氧/复氧致人心肌细胞凋亡及其信号改变的效应。方法通过采用胶原酶/胰酶联合消化法获取人心肌细胞,采用缺氧/复氧模拟缺血/再灌注诱导细胞凋亡,选取最佳凋亡时间为缺氧24h和复氧4h,并用免疫细胞化学法检测bcl-2、bax、细胞色素C和caspase-3蛋白的变化,用原位杂交法检测bcl-2mRNA和caspase-3mRNA表达的变化,用脂肪代谢试剂曲美他嗪不同剂量干预,观察对缺氧/复氧诱导人体外培养心肌细胞凋亡及其信号bcl-2、bax、细胞色素C和caspase-3蛋白及bcl-2mRNA和caspase-3mRNA表达的影响。凋亡信号表达用平均光密度表示。用SPSS10.0进行统计分析。结果①缺氧24h/复氧4h后细胞凋亡率明显升高(18.50%±1.00%);bcl-2(0.189±0.006)下降;bax(0.240±0.002)、caspase-3(0.230±0.002)和细胞色素C(0.225±0.003)升高;bcl-2mRNA(0.300±0.003)下降;caspase-3mRNA(0.307±0.004)升高;分别与对照组比较,差异均有显著性(P<0.01)。②曲美他嗪呈剂量依赖性明显降低细胞凋亡率,降低bax、caspase-3和cytochromeC蛋白阳性率和升高bcl-2蛋白阳性率,降低caspase3mRNA表达阳性率和升高bcl-2mRNA表达阳性率(均P<0.01)。结论曲美他嗪具有抗凋亡作用,可能与升高bcl-2蛋白和bcl-2mRNA表达与降低bax、caspase-3、cytochromeC蛋白和caspase-3mRNA表达水平有关。     

竹叶提取物对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用

目的本研究旨在探讨竹叶提取物(BLE)对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及其分子机制.方法采用原代培养的新生大鼠心肌细胞建立缺氧/复氧损伤模型,实验分为正常细胞培养组、缺氧/复氧损伤模型组、缺氧/复氧损伤+ BLE(10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5 g·L-1)组、缺氧/复氧损伤+ Xiangdan(2.5×10-3g·L-1)组.检测培养基质乳酸脱氢酶(LDH)的活性,细胞线粒体脱氢酶活性,超氧化物歧化酶活性(SOD),NO的含量,心肌细胞Ca2+和丙二醛(MDA)浓度.结果 BLE可显著提高缺氧/复氧心肌细胞SOD的活性及细胞线粒体脱氢酶活性,并能显著抑制LDH的活性、MDA的生成,提高NO的含量,降低Ca2+的含量.结论 BLE对缺氧/复氧心肌细胞损伤具有一定的保护作用.     

瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其机制研究

目的:研究瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法:以采用连二亚硫酸钠(Na_2S_2O_4)为化学缺氧剂,建立大鼠H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,筛选不同浓度Na_2S_2O_4(0.625～10 mmol/L)和不同缺氧时间(10～60min)、复氧时间(2～8 h)的造模条件,以及瓜蒌皮提取物给药浓度(12.5～400μg/mL)。将细胞分为正常组、模型组、瓜蒌皮提取物不同剂量组(即TPE低、中、高剂量组,25、50、100μg/mL)和阳性对照组(槲皮素,25μmol/L),加入相应药物进行预处理24 h后,再建立缺氧/复氧损伤模型。采用MTT法检测各组细胞存活率;采用酶联免疫吸附法检测细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平;采用流式细胞术观察细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测细胞中Bax、Bcl-2的蛋白表达水平。结果:心肌细胞缺氧/复氧损伤造模条件为Na_2S_2O_4造模浓度2.5 mmol/L,缺氧时间30 min,复氧时间4 h;12.5～400μg/mL的瓜蒌皮提取物对细胞均无毒性。分组处理后结果显示,与空白组比较,模型组细胞存活率显著降低、凋亡率显著升高,细胞中CK-MB、LDH、MDA水平均显著升高,SOD水平显著降低,Bax的蛋白表达水平及Bax/Bcl-2比值均显著升高,Bcl-2的蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,瓜蒌皮提取物各剂量组细胞上述变化均被逆转(P<0.05或P<0.01)。结论:瓜蒌皮提取物对缺氧/复氧损伤心肌细胞具有一定的保护作用;其机制可能与抑制细胞中脂质过氧化物的增加、提高细胞清除活性氧自由基的能力、上调Bcl-2/下调Bax蛋白表达等,从而抑制细胞凋亡有关。     

茜草双酯对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用研究

目的探讨茜草双酯对缺氧复氧的乳鼠心肌细胞是否具有保护作用。方法原代培养乳鼠心肌细胞,建立缺氧复氧模型,分别测各组细胞乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞的凋亡与坏死。结果与缺氧/复氧模型组比较发现,缺氧/复氧模型预先加茜草组较缺氧/复氧模型组LDH活性和MDA含量降低有统计学意义(P<0.05),细胞凋亡和坏死有所减少。结论茜草双酯对体外培养的缺氧/复氧心肌细胞具有保护和抗凋亡作用。     

染料木黄酮对缺氧复氧心肌细胞损伤的影响

目的 探讨染料木黄酮对缺氧复氧心肌细胞损伤的影响与其机制.方法 将心肌细胞H9 c2分成对照组、模型组(缺氧复氧)、染料木黄酮组(缺氧复氧,2 mol·L-1染料木黄酮预处理)、染料木黄酮+anti-miR-NC组(缺氧复氧,转染inhibitor control,2 mol·L-1染料木黄酮预处理)、染料木黄酮+an...     

乳化异氟醚后处理对成年大鼠缺氧/复氧心肌细胞超微结构的影响

目的 观察乳化异氟醚(emulsified isofurane,EI)对原代培养成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤后超微结构的影响.方法 体外培养成年大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,然后将心肌细胞随机分为7组,正常组(N组)、缺氧/复氧组(H/R组)、缺氧后处理组(HPO组)和不同浓度EI后处理组(0.84 mmol/L、1.68 mmol/L和2.52 mmol/L,EI1～EI3组)及脂肪乳组(F组),倒置显微镜观察心肌细胞生长的特性及形态的变化;采用透射电子显微镜观察缺氧/复氧损伤后心肌细胞超微结构的变化.结果 心肌细胞电镜显示正常组心肌细胞超微结构正常,缺氧/复氧组超微结构损伤严重,HPO组、EI1-EI3均可减轻H/R心肌细胞的损伤,但EI2组与EI1组和EI3组比较减轻更明显;F组无明显效果.结论 缺氧/复氧对原代培养的成年大鼠心肌细胞可以造成明显损伤;EI后处理对原代培养成年大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤具有一定的保护作用.     

神经生长因子对H9c2心肌细胞缺氧/复氧后凋亡的保护作用及其机制

目的探讨神经生长因子(NGF)对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)后凋亡的保护作用及其机制。方法将培养的H9c2心肌细胞随机分为5组:正常对照组(C组)、缺氧/复氧组(H/R组)、NGF组(N组)、NGF+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(N+L组)和LY294002组(L组)。C组用正常培养液在通有95%空气+5%CO2的37℃培养箱内正常培养8 h;H/R组用预先经95%N2+5%CO2的混合气饱和1 h的模拟缺氧液置换正常培养液后,放入通有95%N2+5%CO2的37℃培养箱缺氧培养4 h,然后将模拟缺氧液换用预先经95%空气+5%CO2饱和的正常培养液,在正常条件下复氧4 h;N组、N+L组和L组先缺氧培养4 h(缺氧条件同H/R组),再分别用预先经95%空气+5%CO2饱和的含NGF、NGF+LY294002和LY294002的正常培养液置换模拟缺氧液,在正常条件下复氧4 h。NGF和LY294002的终浓度分别为0.05 mg·L-1和3 mg·L-1。CCK-8比色法测定各组细胞的存活率;应用碘化丙啶(PI)染色流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot法检测胞内Akt磷酸化水平及内质网应激蛋白Caspase-12蛋白的表达。结果 N组与N+L组或H/R组或L组相比能明显提高H9c2心肌细胞经H/R损伤后的存活率,减少细胞凋亡率,上调Akt磷酸化水平,降低内质网应激蛋白Caspase-12表达;LY294002明显抑制了NGF对Akt磷酸化水平的上调作用。结论 NGF对经H/R损伤的H9c2心肌细胞有抗凋亡作用,其机制可能与PI3k-Akt通路有关。     

紫檀芪通过PI3K-AKT信号途径抑制缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡

目的 探讨紫檀芪对缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,以及对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法 乳鼠心肌细胞经过缺氧/复氧(H/R)处理,再模拟心肌缺血再灌注损伤。实验分为正常组,模型组(H/R),紫檀芪组(H/R+0.5,5,50μmol/L紫檀芪)。MTT法检测各组心肌细胞活力;倒置显微镜拍照检测各组心肌细胞形态;Annexin V-FITC/PI流式双染法检测各组心肌细胞凋亡;Western blot分析PI3K/AKT激活状况。结果 与正常组比较,模型组中心肌细胞皱缩,变圆变亮,细胞活力降低,细胞早期凋亡和晚期凋亡率显著提高,PI3K表达量及AKT磷酸化程度降低,差异均具有显著性(P0.05);与模型组比较,5,50μmol/L紫檀芪组中心肌形态恢复,细胞活力上升,PI3K表达量提高,差异均具有统计学意义(P0.05);0.5,5,50μmol/L紫檀芪组心肌细胞凋亡程度下降,AKT磷酸化水平上升,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论 紫檀芪可抵抗缺氧/复氧诱导的乳鼠心肌细胞凋亡,PI3K/AKT信号被激活是其作用表达的主要方式。     

Ca2+/PKC通路在大鼠缺氧复氧心肌细胞Egr-1高表达中的作用

目的:观察Ca2+/PKC通路在大鼠心肌细胞缺氧复氧状态下参与Egr-1高表达。方法:取生长5~6 d的大鼠心肌细胞分为对照(Control)组、缺氧复氧(H/R)组、溶剂(DMSO)组、EGTA组、维拉帕米(VER)组、H7组和BIM组。各组心肌细胞制作H/R模型。RT-PCR法检测培养心肌细胞中Egr-1 mRNA的表达水平。Western-blot法检测培养心肌细胞中Egr-1蛋白的表达水平。结果:与Control组相比,H/R组及DMSO组心肌细胞Egr-1 mRNA的表达水平明显增高(P<0.05);与H/R组相比,VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1 mRNA的表达明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。与Control组相比,H/R组及DMSO组心肌细胞Egr-1蛋白表达水平明显增高(P<0.05);与H/R组相比,VER组、EGTA组、H7组、BIM组Egr-1蛋白的表达明显下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:在大鼠心肌细胞缺氧复氧状态下,Ca2+/PKC信号通路参与介导了Egr-1的高表达。     

阿托伐他汀对心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的探讨阿托伐他汀保护心肌细胞缺氧/复氧损伤的机制,为临床防治缺血再灌注损伤寻找新思路。方法分离SD乳鼠(出生1～3d)心肌细胞进行原代培养,建立H/R模型,取培养第3d的心肌细胞随机分成3组:正常对照组(CON组)、H/R组、H/R+ATV组。应用MTS法检测心肌细胞的存活率;化学发光免疫分析法检测心肌细胞特异性损伤指标肌钙蛋白I(cTnI)的含量;采用SYBR GREEN荧光定量PCR检测各组HIF-1α、VEGF mRNA表达水平。结果与CON组比较,H/R组心肌细胞存活率明显降低(P<0.05),血清肌钙蛋白I明显升高(P<0.05),HIF-1α和VEGF mRNA表达水平显著升高(P<0.05);用阿托伐他汀预处理后心肌细胞存活率明显升高(P<0.05),血清肌钙蛋白I明显降低(P<0.05),HIF-1α和VEGF mRNA表达水平进一步升高(P<0.05)。结论阿托伐他汀可能通过上调HIF-1α及VEGF的表达水平进而保护缺氧/复氧损伤的心肌细胞。     

硫酸镁对缺氧/复氧诱导海马神经元凋亡的作用

无论是创伤性或缺血性脑损伤后,脑组织以及神经细胞内Mg2 含量、血清Mg2 含量皆明显下降,而且Mg2 下降程度和脑外伤伤情明显相关.Mg2 对缺氧/复氧诱导的新生大鼠离体海马神经神经元凋亡的作用,目前报道甚少.本研究在缺氧/复氧诱导离体培养海马神经元凋亡的模型上,观察了Mg2 对损伤海马神经元的作用.     

大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤细胞凋亡的影响

目的 探讨大蒜素对培养乳鼠心肌细胞缺氧／复氧损伤的保护作用及对心肌细胞凋亡的影响。方法 利用乳鼠培养心肌细胞缺氧／复氧（A／R）损伤模型,将培养心肌细胞分为正常对照组（C组）、缺氧预处理组（AP组）、缺氧/复氧组（A／R组）、大蒜素预处理组（G组）,测定各组缺氧后、复氧后细胞损伤指标乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,并应用DNA琼脂糖凝胶电泳及原位末端标记（TUNEL）法检测各组凋亡指数（AI）。结果G、AP组LDII、MDA明显较A／R组降低（P＜0．01）,SOD明显增高（P〈0．01）;A／R、AP、G组AI较C组明显增高（P〈0．01）,AP、G组AI较A／R组显著降低（P〈0．01）,G组AI较AP组稍高（P〉0．05）。结论 大蒜素具有抗心肌细胞凋亡作用。可减轻心肌细胞A／R损伤。