BMP-12诱导下对骨髓基质干细胞分化潜能及生物学行为影响的实验研究

目的:探讨(MSCs)在BMP-12诱导下向肌腱细胞分化潜能及其生物学行为。方法:将MSCs在含BMP-12的F12培养液中诱导分化后传代培养并与肌腱细胞对比,进行形态学观察、细胞增殖、细胞周期、细胞DNA指数及细胞凋亡检测。通过3H-Proline掺入实验了解对MSCs细胞胶原合成的影响。结果:MSCs细胞呈梭形生长,第2天进入对数增长期,倍增时间为3.2天,而单纯肌腱培养对照组倍增时间3.75天(P>0.05)。MSCs与单纯培养对照组比较3H-Proline掺入值无显著性差异(P>0.05),说明MSCs细胞分泌可分泌胶原。细胞功能向肌腱细胞方向转化。MSCs细胞DNA指数为0.96,增殖指数比对照组高11%,提示MSCs细胞生长速度快,增殖能力强。结论:MSCs在BMP-12诱导下具有向肌腱细胞分化潜能,可作为肌腱组织工程的有效种子细胞应用于组织工程化肌腱的构建。     

bFGF对骨髓基质干细胞体外培养及诱导分化时生物学特性的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对骨髓基质干细胞体外培养及定向诱导分化时生物学特性的影响。方法 将兔骨髓基质细胞(BMSC)经淋巴细胞分离液分离培养、传代扩增后，进行定向诱导分化，其中1组的培养液及矿化诱导液中始终含有bFGF。以MTT法描绘细胞生长曲线。结果 MTT法测定结果表明，BMSC加外源bFGF组细胞增殖较BMSC组细胞生长活跃。结论 骨髓基质细胞是一种良好的骨源细胞，具有定向分化能力，bFGF对其定向诱导分化具有良好的促进作用。     

骨髓基质干细胞的研究现状及其展望

随着组织工程的发展。作为种子细胞之一的骨髓基质干细胞越来越引起人们的关注。早在1867年。德国科学家Cohnheim在观察损伤修复时将可溶性染料Analine注入动物的静脉。他在远离注射部位的伤口周围找到被染色的细胞，其中包括一些纤维细胞样细胞．显然这些细胞来自血液，即由骨髓所释放出的细胞。Cohnheim首次提出了MSCs（mesenchymal stem cells MSCs）的假设。二十世纪70年代，Frendensten利用干细胞的黏附性培养出具有多分化潜能的黏附细胞，这种方法开始培养的细胞通常是异质性的。     

体外诱导骨髓基质细胞向心肌细胞分化的研究

目的　通过体外诱导骨髓基质细胞 (ＭＳＣ)研究其向心肌样细胞分化过程和心肌细胞特征表达情况。方法　抽取雄性ＳＤ大鼠骨髓 ,经分离培养和传代 ,获得较纯的ＭＳＣ ,体外连续传至第 8代 ,以去甲基化药物 - 5 -氮杂胞苷进行体外诱导 ,相差显微镜连续 8周观察其形态变化 ,通过流     

骨髓基质干细胞诱导分化滑膜样细胞移植预防屈肌腱粘连的实验研究

目的探讨移植的骨髓基质干细胞诱导分化的滑膜样细胞是否具有明显的防止屈肌腱粘连的功效。方法提取兔骨髓基质干细胞诱导下分化为滑膜样细胞。经鉴定后,将滑膜样细胞移植于大白兔损伤的跟腱处,术后l、2、4、8周取材,进行大体标本粘连等级评定、生物力学测试及组织学观察。结果对分化的滑膜样细胞鉴定,光镜下、电镜下均符合滑膜细胞结构特征,免疫组化Vimentin阳性,CD68阴性,符合成纤维细胞样滑膜细胞（B型滑膜细胞）的特征。滑膜样细胞移植术后,光镜及扫描电镜发现肌腱表面光滑,被覆大量滑膜样细胞。同一时相点实验组同对照组相比粘连明显减轻（P〈0.05）。结论骨髓基质干细胞在一定条件下可以诱导分化为滑膜样细胞。滑膜样细胞移植可以有效的防止肌腱粘连。     

负压培养对大鼠骨髓基质干细胞增殖及分化的影响

目的探讨负压状态培养对大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)增殖及分化的影响。方法分离SD大鼠股骨骨髓中的单核细胞,常规培养,建立负压培养模型。设对照组(压力为0),低负压组(压力为-300mmHg)和高负压组(压力为-600mmHg)。观察细胞生长状况,绘制细胞生长曲线,通过倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态结构的变化,细胞免疫化学方法检测CD31受体的表达。结果低负压组细胞生长不受影响(>0.05),倒置显微镜下发现低负压组细胞形态与对照组类似,透射电镜下发现细胞内有大量线粒体和纤维束,CD31表达增加(<0.05);高负压组细胞增殖受抑制(<0.05),倒置显微镜下细胞稀少,透射电镜发现细胞内有纤维束,并且大量线粒体肿胀,呈空泡化,CD31表达明显增加(<0.05)。结论负压培养可诱导BMSCs向内皮细胞和成纤维细胞分化,但当负压增大为-600mmHg时,细胞增殖受到抑制。     

骨髓基质干细胞体外软骨定向诱导方法的研究进展

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点。其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的细胞。该文就BMSCs体外软骨定向诱导方法的研究进展进行综述,以期为应用BMSCs构建软骨组织提供参考。     

骨髓基质干细胞体外软骨定向诱导方法的研究进展

种子细胞来源一直是限制软骨组织工程发展的瓶颈,骨髓基质干细胞(BMSCs)具有取材创伤小、增殖能力强及具多向分化潜能等优点,已逐渐成为软骨构建种子细胞的研究热点.其关键问题是如何获得大量纯化的BMSCs并在体外定向诱导为软骨表型的细胞.该文就BMSCs体外软骨定向诱导方法的研究进展进行综述,以期为应用BMSCs构建软骨组织提供参考.     

骨髓基质干细胞定向诱导分化成骨的研究进展

近几十年来,骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）因其具有多方向分化的潜能而进行深人研究。上世纪80年代,Owen和Piersma等,通过实验使BMSCs分化为成骨细胞和脂肪细胞。2000年Woodbury等、Sanchez等也通过实验的方法证明BMSCs还可以分化为神经细胞。     

大鼠骨髓基质干细胞体外诱导向内皮分化的实验研究

目的分离培养大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs),并诱导其向内皮分化,为组织工程研究作准备。方法成年SD大鼠,应用Ficoll淋巴细胞分离液(密度为1．077g／m1)将长骨骨髓经非连续密度梯度离心,收集中层的单个核细胞,加入诱导培养基并置于纤维连接素包被的培养板上进行诱导分化,观察细胞生长状况,通过透射电镜观察、流式细胞仪检测阳性细胞百分率及Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组织化学检测,对培养细胞进行鉴定。结果细胞呈圆形、纺锤形单层融合贴壁生长;Ⅷ因子、CD31、Lectin免疫组织化学染色阳性;透射电镜示细胞具有内皮特征性的Weibel-Palade小体。结论Ficoll密度梯度离心可获得较高纯度的BMSCs,经体外培养并诱导分化,具有血管内皮特征。     

hBMP—4瞬时转染对家兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的：应用兔骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，MSCs）作为基因治疗的靶细胞，体外转染人骨形成蛋白4(human bone morphogentic protein-4，hBMP-4)基因，观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。方法：贴壁法培养兔MSCs，分别在体外转染pEGFP-hBMP-4和pEGFP基因并留置空白对照。检测转染效率及目的基因的转录和表达，观察细胞形态及生长情况，检测碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果：基因转染效率达到20％-30％，RT-PCR显示MSCs本身有目的基因的少量转录，转染pEGFP-hBMP-4后转录增强。目的基因转染后细胞形态略有变化，生长曲线与对照组相似，碱性磷酸酶阳性染色面积增加（P=0.0016），钙结节增多（P=0.0001），骨钙素表达增强（P=0.03）。结论：优化的条件下取得了较高的转染效率，hBMP-4基因转染可以增强目的基因的转录，加速MSCs向成骨细胞表型转化。HBMP-4转染的MSCs可望成为组织工程化骨理想的种子细胞。     

小鼠骨髓基质细胞诱导分化为神经细胞的实验研究

目的探讨小鼠骨髓基质细胞体外诱导及向神经细胞方向分化.方法从小鼠骨髓中分离培养骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSC),应用碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF),维甲酸(retinoic acid, RA),二甲亚砜和神经生长因子(nerve growth factor, NGF)对细胞诱导分化,72 h后对细胞表达神经微丝蛋白(NF-200),胶质原性纤维酸性蛋白(GFAP),纤维结合素(fibronectin)的结果进行荧光和组化检测.结果诱导72 h后细胞形态类似神经细胞改变,免疫组化显示约60%细胞分化为NF-200阳性细胞,约50%细胞分化为GFAP阳性细胞,同时细胞fibronectin表达明显降低,与对照组比较相差显著.结论维甲酸,神经生长因子,二甲亚砜,碱性成纤维细胞生长因子的联合作用可体外诱导骨髓基质细胞向神经细胞分化.     

骨髓基质细胞向神经细胞诱导分化的研究进展

骨髓基质细胞(BMSCs)作为一种成体干细胞,具有一定的自我更新、高度增殖和多向分化的潜能。在适宜的条件下,可以诱导分化为神经样细胞。骨髓基质细胞来源方便,取材较容易,体外培养和扩增的技术条件简便,具有向神经系细胞分化的潜能,可以考虑作为细胞移植治疗的种子细胞。     

大鼠骨髓基质干细胞分离、纯化与诱导分化的研究进展

骨髓基质干细胞(BMSCs)是一类具有自我增殖和分化潜能的多能干细胞,在骨髓中含量极少。目前对其生物学特性研究比较成熟,在培养过程中展示出贴壁性、异质性、自我更新能力、可塑性、易受细胞因子影响及低免疫原性等生物学特征。BMSCs独特的生物学特性及目前的研究现状都预示着其具有广泛的应用前景。现就大鼠BMSCs的生物学特性、分离与纯化、诱导分化的方法等方面予以综述。     

小鼠骨髓基质干细胞体外分化为前体心肌细胞的初步实验

目的 研究体外诱导小鼠骨髓基质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的可能性。方法 MSCs通过细胞传代培养，并通过流式细胞仪进行鉴定。MSCs经过5-杂氮胞苷诱导后，通过RT—PCR、半定量RT—PCR、Westem—blotting和透射电镜检测诱导后的MSCs。结果 培养的MSCs为形态均一的梭形细胞，有时可见细胞融合。流式细胞仪显示诱导后的MSCsCD29、CD44表达阳性，而CD34、CD45表达阴性。经过5-杂氮胞苷诱导后的MSCs表达Nkx2—5／Csx、GATA4、β—MHC基因和α-sarcomenic actin和desmin蛋白，透射电镜显示诱导后的MSCs有肌丝形成。诱导后的MSCsDNA甲基化转移酶表达降低。结论 小鼠MSCs能够向前体心肌细胞分化。     

体外诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化的实验研究

目的：探讨成体骨髓基质干细胞体外定向诱导分化为内皮细胞的可行性，为心血管组织工程提供新的种子细胞来源。方法：骨髓穿刺抽取绵羊骨髓液，密度梯度离心法获取骨髓单个核细胞，通过贴壁培养纯化骨髓基质干细胞。以含EGF、bFGF、IGF和肝素的M199培养液培养原代细胞，并以VEGF诱导骨髓基质干细胞向内皮细胞分化。通过CD34、CD31流式细胞仪分析，免疫组化CD34、CD31、Ⅷ因子相关抗原染色鉴定内皮细胞，UEA结合实验及NO含量测定评价内皮细胞功能。结果：骨髓基质干细胞表达α-SMA，不表达CD34和CD31。体外定向诱导2周后分化为内皮细胞。呈梭形，表达CD34和CD31及Ⅷ因子相关抗原，UEA结合试验阳性，并具有分泌NO的功能。结论：体外培养条件下骨髓基质干细胞能够分化为内皮细胞，并具有成熟内皮细胞的生物学特性和功能。     

hBMP-4瞬时转染对兔骨髓基质干细胞生物学行为的影响

目的应用兔骨髓基质干细胞(bonemarrowstromalcells,MSCs)作为基因治疗的靶细胞,体外转染人骨形成蛋白4(humanbonemorphogeneticprotein-4,hBMP-4)基因,观察瞬时转染对兔MSCs生物学行为的影响。方法贴壁法培养兔MSCs,分别在体外转染pEGFP-hBMP-4和pEGFP基因并留置空白对照。检测转染效率及目的基因的转录和表达,观察细胞形态及生长情况,检测碱性磷酸酶、钙结节及骨钙素等成骨细胞表型。结果基因转染效率达到20%～30%,RT-PCR显示MSCs本身有目的基因的少量转录,转染pEGFP-hBMP-4后转录增强。目的基因转染后细胞形态略有变化,生长曲线与对照组相似,碱性磷酸酶阳性染色面积增加(P=0.0016),钙结节增多(P=0.0001),骨钙素表达增强(P=0.03)。结论优化的条件下取得了较高的转染效率,hBMP-4基因转染可以增强目的基因的转录,加速MSCs向成骨细胞表型转化。hBMP-4转染的MSCs可望成为组织工程化骨理想的种子细胞。     

聚乳酸对体外培养的骨髓基质细胞生物学行为的影响

目的 检测聚乳酸（ＰＬＡ）对骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）体外成骨的过程及其生物学行为的影响。方法 将ＢＭＳＣ传代细胞分别与ＰＬＡ进行复合培养，观察细胞生长基与生物材料附着情况，检测ＭＢＳＣ的增殖能力，蛋白含量及碱性磷酸酶（ＡＬＰ）含量。结果 ＢＭＳＣ可以在ＰＬＡ表面贴附，ＰＬＡ对ＢＭＳｃ的增殖及功能表现无明显差异。结论 ＰＬＡ的生物相容性良好，有望作为ＢＭＳｃ的载体用于骨组织工程研究。     

兔骨髓基质干细胞诱导成骨的实验研究

目的:研究兔骨髓基质干细胞(BMSCs)的生长特点和在诱导条件下的成骨特性。方法:使用密度梯度法分离骨髓基质细胞并进行培养,传2代后运用成骨诱导剂地塞米松、β-甘油磷酸钠(β-Gp)、L-坏血酸(AA)进行诱导,测试骨髓基质细胞的生长变化和成骨分化。结果:形态学表明骨髓基质细胞呈集落生长,有成纤维细胞样外观,诱导后细胞生长较前明显减慢,逐渐变为立方形、锥形或梭形。汇合时细胞呈铺石状重叠生长,进而形成“钙结节”样表现。染色及电镜观察可见细胞诱导前后有明显区别,细胞增殖吸光度(OD值)及细胞碱性磷酸酶测试表明,随着时间的延长,细胞增殖变慢,但分化能力增强(P<0.05)。结论:骨髓基质细胞作为构建组织工程骨的种子细胞在地塞米松、β-甘油磷酸、L-坏血酸诱导下成骨具有可靠的重复性。     

神经干细胞分化及诱导的研究进展

神经干细胞(NSC)的分化及诱导是目前神经科学研究的热点。因其有着巨大的潜在应用价值和重大的理论研究意义，越来越引起学者们的关注。为此，作者从NSC的体内发育、分化开始，到体外培养分化诱导的研究，从内因(基因)和外因(细胞因子、微环境)两个方面对近年来NSC诱导分化研究的一些进展作一综述。