丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3的影响

目的观察丹参滴注液含药血清对缺氧海马神经元Caspase 3蛋白表达的影响。方法制备丹参滴注液含药血清,以含药血清干预原代培养缺氧海马神经元,MTT法检测神经元增殖活力,免疫荧光法检测神经元Caspase 3蛋白的表达。结果缺氧组海马神经元增殖活力低于正常组（P<0.05）,神经元Caspase 3蛋白表达高于正常组（P<0.05）,丹参滴注液含药血清能减少缺氧组海马神经元caspase 3蛋白表达,改善细胞增殖活力（P<0.05）。结论丹参滴注液含药血清能明显抑制缺氧海马神经元Caspase 3表达,促进缺氧神经元增殖,起到神经保护作用。     

鳖甲煎改良方含药血清对肝星状细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的 探讨鳖甲煎改良方含药血清对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6增殖、周期及凋亡的影响.方法 分别用高剂量[28.4 g/(kg·d)]、中剂量[14.2g/(kg·d)]与低剂量[7.1 g/(kg·d)]的鳖甲煎改良方及与鳖甲煎改良方高剂量相同剂量的鳖甲煎丸灌胃大鼠以制备含药血清.将等体积不同剂量的鳖甲煎改良方含药血清分别处理HSC-T6细胞,以等体积鳖甲煎丸含药血清处理的细胞为阳性对照组,生理盐水处理的细胞为空白对照组,正常大鼠血清处理的细胞为正常对照组.CCK-8检测不同处理组HSC-T6细胞的增殖情况,并绘制其增殖曲线;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测经不同处理的HSC-T6细胞的周期,Annexin V-PI染色法检测其凋亡;在mRNA及蛋白水平分别检测经不同处理的HSC-T6细胞的增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)基因及其编码蛋白的表达变化.结果 CCK-8检测结果显示,鳖甲煎改良方含药血清对HSC-T6细胞增殖具抑制作用,高剂量与中剂量组的增殖速度慢于正常对照组、阳性对照组和空白对照组(P ＜0.05,P＜0.01),且该抑制作用呈剂量-效应关系.FCM检测证实,鳖甲煎改良方含药血清可将HSC-T6细胞阻滞于S期,能诱导HSC-T6细胞的凋亡,与正常对照组比较,其凋亡诱导率差异具有统计学意义(P＜0.01).mRNA与蛋白水平检测结果显示,与空白对照组和阳性对照组比较,高剂量组能在基因与蛋白水平显著下调HSC-T6细胞PCNA的表达.结论 鳖甲煎改良方含药血清能明显抑制HSC-T6细胞的增殖,诱导HSC-T6细胞的凋亡,并能下调其PCNA基因及其编码蛋白的表达.     

Mechanism of Hewei Jiangni Capsule(和胃降逆胶囊)Regulating Proliferation and Apoptosis of Human Gastric Cancer AGS Cells Through PI3K/AKT Signaling Pathway

目的:探究和胃降逆胶囊对人胃癌AGS细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:用不同药物剂量(3 g/kg、6 g/kg、12 g/kg)制备的和胃降逆胶囊含药血清分别干预人胃癌AGS细胞,分为和胃降逆胶囊含药血清低剂量组、中剂量组、高剂量组及空白组,分别干预AGS细胞24 h、48 h、72 h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞周期分布情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞相关蛋白磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、促凋亡基因(Bax)、抑细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)和细胞周期蛋白依赖性抑制剂(p21)的表达情况;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2、Cyclin D1和p21 mRNA表达情况.结果:随着和胃降逆胶囊含药血清作用时间的延长,各药物组细胞活力逐渐降低,同剂量组24h、48 h、72 h比较差异有统计学意义(P＜0.05),48 h与72 h比较差异无统计学意义.在同一干预时间点,细胞活力随着药物血清浓度的增加而降低.各组含药血清处理AGS细胞48 h后,G0/G1期细胞比值与空白组比较,差异具有统计学意义(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白及抑制凋亡蛋白Bcl-2和Cyclin D1的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡蛋白Bax和p21的表达(P＜0.05);和胃降逆胶囊可以下调AGS细胞中抑制凋亡基因Bcl-2和Cyclin D1 mRNA的表达(P＜0.05),上调AGS细胞中促凋亡基因Bax和p21 mRNA的表达(P＜0.05),且呈现出浓度相关性.结论:和胃降逆胶囊通过抑制PI3K/AKT通路的活化,调控下游周期阻滞相关基因和凋亡相关基因的表达,进而抑制人胃癌AGS细胞增殖并促进AGS细胞凋亡.     

脾虚四号方含药血清对功能性腹泻脾虚证大鼠离体结肠平滑肌细胞的影响

目的从细胞水平角度,观察脾虚四号方含药血清干预离体培养功能性腹泻脾虚证模型大鼠的结肠平滑肌细胞的变化。方法对功能性腹泻脾虚证模型大鼠进行提取离体结肠平滑肌细胞并原代培养,将其分为6组:空白对照组、模型组、脾虚四号方低、中、高剂量组、蒙脱石散组,各组分别5%含药血清干预48 h,用细胞增殖和毒性检测(CCK-8)法测定细胞增殖活性,实时荧光定量PCR检测各组相关脑肠肽的基因表达。结果 CCK-8法检测结果显示:与空白对照组相比,模型组结肠平滑肌细胞OD值极显著降低(P0.01);与模型组相比,各含药血清干预组结肠平滑肌细胞OD值极显著升高(P0.01)。实时荧光定量PCR检测结果显示:与空白对照组相比,模型组胆囊收缩素(CCK)、血管活性肠肽(VIP)、生长抑素(SS)mRNA表达均显著降低(P0.05)。与模型组相比,各含药血清干预组均有表达升高趋势,脾虚四号方低剂量组较模型组CCK mRNA表达显著升高(P0.05),脾虚四号方低、中、高剂量组较模型组VIP mRNA表达极显著升高(P0.01)。结论脾虚四号方含药血清能够有效促进模型结肠平滑肌细胞的增殖活性,脑肠肽CCK、VIP、SS mRNA表达变化可能有利于进一步阐释功能性腹泻脾虚证在脑肠肽胃肠激素方面发病机制。     

芪药鸡金粥含药血清通过TLR4/NF-κB通路对Caco-2炎症细胞模型的影响

目的探讨芪药鸡金粥含药血清是否通过TLR4/NF-κB信号通路影响人结肠癌上皮细胞(Caco-2)炎症模型增殖活力及细胞间紧密连接蛋白表达水平。方法 Caco-2细胞分为空白组、模型组,高、中和低剂量含药血清组5组。采用四甲基氮唑盐比色法(MTT)检测,观察含药血清对Caco-2细胞炎症模型的增殖活力;运用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测Claudin-1、Occludin、JAM-1和ZO-1紧密连接蛋白的表达水平,及TLR4、NF-κBp50、NF-κBp65和磷酸化IκBα信号通路蛋白表达水平。结果与模型组比较,高、中、低含药血清组均可以促进细胞活力,以低剂量组活力最强,中剂量组次之,高剂量最弱,其中中剂量含药血清组和低剂量含药血清组与模型组比较,差异有统计学意义(P 0.05)。Caco-2细胞Claudin-1、Occludin、JAM-1和ZO-1蛋白表达水平以空白组最高,低、中、高剂量组次之,模型组最低,各组比较差异均有统计学意义(P 0.05)。Caco-2细胞TLR4、NF-κBp50、NF-κBp65和磷酸化IκBα蛋白表达水平,模型组最高,低、中、高剂量组次之,空白组表达水平最低,各组比较差异有统计学意义(P 0.05)。结论芪药鸡金粥含药血清可以促进Caco-2细胞炎症模型细胞增殖活力,修复Caco-2细胞炎症模型细胞间的紧密连接蛋白,其作用可能与抑制TLR4/NF-κB通路有关。     

七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响

目的:观察七叶灵方对紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol增殖和凋亡的影响。方法:将10只SD大鼠随机分为中药组和空白组,每组5只。中药组大鼠灌胃给予18 g/kg七叶灵方药液,每日2次,连续给药3 d。空白组大鼠灌胃给予等体积0.9%NaCl溶液。分别制备含药血清和空白血清。采用浓度梯度诱导法构建紫杉醇耐药肺癌细胞株A549/Taxol。①将细胞分为空白组及不同浓度(5%、10%、20%)含药血清组,各组分别给予空白血清和相应浓度含药血清干预。药物干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况,筛选含药血清干预的最佳浓度。②将细胞分为空白组(常规培养基)、含药血清组(筛选的最佳浓度含药血清)、紫杉醇组(2 mg/L紫杉醇)、含药血清+紫杉醇组(最佳浓度含药血清+2 mg/L紫杉醇),各组予以相应干预。干预前及细胞培养24、48 h后,CCK8法检测各组细胞增殖情况。细胞培养48 h后,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、剪切型Caspase-3(cleaved Caspase-3)、聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、剪切型PARP (cleaved PARP)的蛋白表达。结果:①与干预前相比,各浓度含药血清作用24、48 h后,A549/Taxol细胞的增殖抑制率显著升高(P0.05,P0.01),具有浓度/时间依赖性。选取20%含药血清进行后续实验。②细胞培养48 h后,紫杉醇组的细胞增殖抑制率明显高于含药血清组(P0.05),含药血清+紫杉醇组对耐药细胞的生长抑制作用明显强于紫杉醇组(P0.01);与空白组相比,含药血清组、紫杉醇组及含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率均明显升高(P0.01),且含药血清+紫杉醇组的细胞凋亡率高于紫杉醇组(P0.01)。③与空白组相比,紫杉醇组、含药血清组和含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量显著降低(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著上调(P0.01)。与紫杉醇组相比,含药血清+紫杉醇组细胞Bcl-2、Caspase-3、PARP的蛋白表达量明显下降(P0.01),Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP的蛋白表达量显著增加(P0.05,P0.01)。结论:七叶灵方含药血清可抑制紫杉醇耐药肺癌细胞A549/Taxol的增殖,诱导细胞凋亡,且与紫杉醇联合应用具有一定的协同效应,其机制可能与调控Bcl-2/Caspase-3/PARP通路有关。     

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK1/2-AP-1通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲(EsA)含药血清对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖及其对IL-1β诱导rGMC的ERK1/2-AP-1通路活化的影响.方法 用不同剂量EsA(5、10、20、40 mg/kg)将SD大鼠灌胃后获取含药血清,并设对照组(0.5％羧甲基纤维素钠灌胃);用上述各组浓度的EsA含药血清处理rGMC,并设对照组血清组.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组EsA含药血清对rGMC增殖的影响;将rGMC分为空白对照组、IL-1β单独作用组、IL-1ββ+ EsA双重作用组、IL-1β+U016双重作用组、IL-1β+U0126+EsA共同作用组,同步化后培养48 h,Western Blot法检测p-ERK1/2、AP-1的表达并成像分析.结果 EsA(5～10 mg/kg)含药血清抑制了细胞增殖(P＜0.05或P＜0.01);ILqβ组促进了rGMC的p-ERK1/2、AP-1表达(P＜0.05),IL-1β+EsA组、IL-1β+ U0126组,IL-1β+U0126+EsA组作用rGMC后,其p-ERK1/2、AP-1表达均降低(P＜0.05).结论 EsA含药血清(5～10 mg/kg)显著抑制了rGMC的增殖;EsA通过下调p-ERK1/2、AP-1表达,抑制了IL-1β诱导的rGMC增殖,EsA作用于ERK1/2-AP-1通路是其抑制rGMC增殖的机制之一.     

丹防胶囊对肝星状细胞PDGF-B和ERK1/2表达的影响

目的:探讨大鼠丹防胶囊含药血清对肝星状细胞合成血小板源性生长因子-B(PDGF-B)及细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)的影响.方法:将大鼠分为3组,分别经丹防胶囊、复方鳖甲软肝片及生理盐水灌胃后股动脉取血制备大鼠丹防胶囊含药血清、鳖甲含药血清及生理盐水血清,3组血清分别干预肝星状细胞(HSC-T6),免疫细胞化学法、蛋白印迹法检测PDGF-B及ERK1/2表达的水平.结果:丹防胶囊血清组HSC-T6中PDGF-B及ERK1/2蛋白表达强度均较生理盐水血清组明显降低(P＜0.01),与鳖甲血清组相当(P＞0.05).结论:丹防胶囊大鼠含药血清对肝星状细胞合成PDGF-B及ERK1/2有明显的抑制作用,提示丹防胶囊可能对大鼠肝星状细胞的增殖具有抑制效应.     

温胆汤含药血清对PC12细胞Bax、Bcl-2mRNA表达的影响

目的:探讨温胆汤含药血清对PC12细胞Bax/Bcl-2mRNA表达的影响.方法:(1)含药血清制备:30只SD大鼠随机分为三组:温胆汤高剂量组(A),温胆汤中剂量组(B),温胆汤低剂量组(C).温胆汤灌胃,一天一次,8天后处死大鼠,股动脉取血,离心取血清,灭活无菌过滤备用.(2) PC12细胞分组培养:将PC12细胞分为4组,即:正常对照组(普通培养基培养)、温胆汤高剂量含药血清组、温胆汤中剂量含药血清组、温胆汤低剂量含药血清组,按照相应的分组更换含药血清进行培养16小时后,提取总mRNA,应用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法,检测PC12细胞Bax/Bcl-2mRNA的表达量.结果:温胆汤各组Bax mRNA的表达量较对照组有所降低,有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01);而温胆汤高剂量组和温胆汤中剂量组使Bcl-2 mRNA的表达量比对照组有所升高,有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01).结论:温胆汤能够降低PC12细胞Bax mRNA的表达量,并且可升高Bcl-2 mRNA的表达量.     

参芪益心方抑制阿霉素诱导心肌细胞凋亡作用研究

目的:证实参芪益心方可以抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡。方法:用SD大鼠制备含药血清,用阿霉素诱导H9c2心肌细胞凋亡建立模型,将细胞设置为空白对照组、模型组、含药血清高剂量组(8%)、含药血清中剂量组(4%)、含药血清低剂量组(2%)和卡托普利组。含药血清提前预处理,阿霉素造模72 h后进行试验检测,倒置显微镜下观察H9c2心肌细胞形态,MTT法检测细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI双染法检测H9c2心肌细胞凋亡。结果:H9c2心肌细胞形态:参芪益心方含药血清高、中、低剂量组及卡托普利组可改善细胞凋亡现象,其中以含药血清高剂量组、卡托普利组改善最为明显。MTT法检测H9c2心肌细胞增殖率:模型组OD值、增殖率与空白对照组比较差异具有统计学意义(P0.01);含药血清高、中、低剂量组及卡托普利组OD值、增殖率与模型组比较差异具有统计学意义(P0.05,P0.01);含药血清高剂量组与卡托普利组OD值比较,差异无统计学意义(P0.05)。流式细胞仪测得结果示:与空白对照组比较,模型组细胞凋亡数量(Q2+Q4)明显增多;含药血清预处理后(Q2+Q4)明显降低,含药血清高、中剂量组及卡托普利组与模型组比较差异具有统计学意义(P0.01)。结论:参芪益心方可以抑制阿霉素诱导的细胞凋亡。