一种敏感的人甲胎蛋白测定新方法——单克隆抗体三点夹心放射免疫测定法

人甲脂蛋白(AFP)是一种分子量约为70,000dalt的简单多肽,其表面有多种抗原决定簇。本文通过抗人AFP单克抗体(mAb)检测,发现人AFP至少有a、b和c三种抗原决定簇。a、b和c决定簇在AFP分子上有一定的排列格局,其中任何一种被相应特异mAb结合封闭后,并不影响另二种决定簇的活性。利用这一原理,本文作者创建了三点夹心固相放射免疫分析法(3—site sandwichtype solid phase radioimmunoassay)来检测人AFP。     

应用两个单克隆抗体在双抗夹心法检测中提高人心肌肌凝蛋白放射免疫测定的特异性

杂交瘤单克隆抗体技术虽已大大提高了免疫学检测的特异性,但对具有多种决定簇相同抗原间的鉴别还时感困难。本文报告了用针对同一抗原上两个不同决定簇的单克隆抗体,作双抗夹心法放射免疫分析,以提高检测人心肌肌凝蛋白轻链的特异性。 心肌肌凝蛋白轻链在心肌坏死时释放到血循环中,故测定血清肌凝蛋白轻链水平对诊断急性心肌梗塞有意义。心肌肌凝蛋白轻链的氨基酸序列与骨骼肌轻链不同,但有许多结构特点相同,区分二者有助于特异性地诊断急性心肌梗塞。普通兔抗人心肌肌凝蛋白轻链抗血清     

ELISA夹心法鉴定单克隆抗体Ig亚类

单克隆抗体Ig亚类的鉴定,国内外常用琼脂双扩散法,但由于该法所需浓度较大,且受抗原、抗体浓度比的影响,灵敏度较低。常需浓缩杂交瘤培养上清液,且实验需时较长,给实验带来许多不便。作者以ELISA夹心法测定McAbs Ig亚类,并以琼脂双扩散法为对照。鉴定了16份McAbs,主要步骤是:以5种抗鼠Ig亚类抗血清〔IgG1,IgG2a,IgG2b,IgG3和IgM(sigma)〕包被反应板,加入杂交瘤培养上清波,再加酶标记     

甲胎蛋白放射免疫测定简易快速微量法及其应用

甲胎蛋白(AFP)不仅是诊断原发性肝癌的比较可靠指标之一,而且也可参照它预测异常胎儿。为了使其操作手续适应新的发展之需要,我们对之进行了一些改进。 经过实验,选择了抗体最佳浓度是1:20,000(最终反应浓度)。分离剂为22.5％的PEG(M=12,000)最终浓度达7.5％。标记抗原量定为5,000 CPM/分/管。除了PEG 100微升外,其它试液(包括标准液和正常兔新鲜血清)均为50微升。确定了上述条件后,我们进行了保温时间的选择。于37℃水浴中分别保温15、30、45、60、120、180分钟,再分别加入22.5％CPG 100微升,     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验，以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明，用正交法所得的安验结果中，最佳配用情况下，包被用抗体和主要的酶标记抗体的作同位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上，两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体央心去的本底很低．可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性，滴度为1：16(对流电泳法)的患者血清稀释至2^19时仍可得到P／N比≥2．1的读数，目测判定结果对至少在2^18稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

抗HBsAg单克隆抗体在诊断中应用错位点双单克隆抗体ELISA夹心法的建立

对5种过氧化物酶标记的抗HBsAg单克隆抗体和14种固相物包被用单克隆抗体做了筛选试验,以探讨实际应用中各单克隆抗体的较佳配用方案。试验结果表明,用正交法所得的实验结果中,最佳配用情况下,包被用抗体和主要的酶标记抗体的作用下位点是错位的。即捕捉抗体与标记抗体分别作用在HBsAg的不同位点上,两者之间基本上没有位阻现象。这种双单克隆抗体夹心法的本底很低,可以目测判定结果。敏感性和特异性较好。HBsAg阳性,滴度为1:16(对流电泳法)的患者血清稀释至2~(19)时仍可得到P/N比≥2.1的读数,目测判定结果时至少在2~(16)稀释度下可明确地判定出阳性结果。     

多抗—单抗夹心法时间分辨免疫荧光分析人甲胎蛋白

本文应用兔抗ｈＡＦＰＩｇＧ包板，异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ－Ｅｕ＾３＾＋标记抗ｈＡＦＰＭｃＡｂ，建立子固相夹心二步法分析ｈＡＦＰ技术。结果显示，分析范围是６．２５－１００．００μｇ／ｍｌ，测定７６例孕妇血清样品，同所购ＤＥＬＦＩＡｈＡＦＰ药盒结果相关性好（ｒ＝０．９７）。表明该法较为实用。     

多抗－单抗夹心法时间分辨免疫荧光分析人甲胎蛋白

本文应用免抗ｈＡＦＰＩｇＧ包板，异硫氰酸苯基－ＥＤＴＡ－ＥＵ３＋标记抗ｈＡＦＰＭＣＡｂ，建立了固相夹心二步法分析ｈＡＦＰ技术。结果显示，分析范围是６．２５～１００．００μｇ／ｍｌ（ｒ＝０．９９），变异系数在１．６７～１７．７４％之间，ｈＡＦＰ最小可测值为０．３５μｇ／ｍｌ．测定７６例孕妇血清样品，同所购ＤＥＬＦＩＡｈＡＦＰ药盒结果相关性好（ｒ＝０．９７）。表明该法较为实用。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA检测技术的建立

目的制备、筛选多株具有商用价值的可配对的高特异性、高亲和力的抗人甲胎蛋白(hAFP)单克隆抗体,初步建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法通过经典的淋巴细胞杂交瘤技术筛选分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株;对筛选所得单抗的特性进行鉴定分析;双抗体夹心ELISA法筛选最佳配对抗体;初步建立DAS-ELISA检测方法并检测血样,绘制其标准检测曲线并与进口试剂盒比较。结果共获得12株稳定分泌抗hAFP单抗的杂交瘤细胞株,其中Ab 1~Ab 5 5株单抗的腹水效价均高于600万,Ab 5的效价高达3000万;特异性鉴定结果表明Ab 1~Ab 5均能够特异识别天然hAFP分子,但Ab 5与人血清白蛋白(HSA)存在较强交叉反应;抗体配对实验共筛选出5对(Ab 1/HRP-Ab 2、Ab 1/HRP-Ab 4、Ab 3/HRP-Ab 2、Ab 3/HRP-Ab 4和Ab 4/HRP-Ab 1)能够满足hAFP检测要求且无交叉反应的配对抗体,最终确定Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 2和Ab 1+Ab 3/HRP-Ab 4为最佳配对组合;利用最佳配对抗体组合建立标准检测曲线,其线性检测范围为5~250 ng/ml,最低检测限2 ng/ml,检测上限400 ng/ml,优于进口试剂盒的线性范围5~200 ng/ml和最低检测限5 ng/ml;样检结果显示自制试剂盒的阳性血清检测准确率99.2%(119/120例),阴性血清准确率100%(40/40例)。结论筛选获得的4株高亲和力、高特异性抗hAFP单抗均可应用于DAS-ELISA试剂盒的研制,Ab 1和Ab 3适合作为捕获抗体,Ab 2和Ab 4适合作检测抗体;自制试剂盒的线性检测范围和最低检测限均优于进口试剂盒,表明具有商用价值。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

应用抗甲胎蛋白单克隆抗体对AFP抗原性的研究

甲胎蛋白(AFP)是胎儿肝脏和卵黄囊合成的一种糖蛋白。在胎儿有神经管缺陷、先天性肾病、死胎等情况下,羊水及母体血清中AFP浓度升高。原发性肝细胞癌和内胚窦瘤患者血清中AFP浓度也升高。测定羊水及/或血清中AFP含量,有助于上述先天性畸形的产前诊断和有关肿瘤的早期发现及其疗效观察。目前利用传统的多克隆抗体(PcAb)的放射免疫分析     

应用单克隆抗体测定人白细胞干扰素的免疫放射法

干扰素研究因其测定问题常受阻碍,目前唯一普遍的测定方法是应用组织培养细胞,比较干扰素存在和不存在时病毒生长的一些参数(例如病毒RNA合成或寄主细胞的死亡),这些复杂的生物测定虽然灵敏,但很麻烦,且容易变动。     

PCR与单克隆抗体ELESA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶性反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测．ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｈｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性．ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳＡ检测的被感性为１５ｎｇ／ｍｌ．应用ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ检测了９６份结核临床标本．ＰＣＲ的检出率高于抗酸染色涂片的阳性率（Ｐ＜０．０５），ＰＣＲ的检出率虽高于细菌培养的阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．ＥＬＩＳＡ检测阳性率明显高于抗酸染色涂片、细菌培养和ＰＣＲ的阳性率（Ｐ＜０．００１）．ＥＬＩＳＡ的假阳性率高于ＰＣＲ的假阳性率，但相差不显著（Ｐ＞０．０５）．研究表明，ＰＣＲ及ＥＬＩＳＡ均是特异、敏感、快速的诊断结核病的方法．但在使用中又各自有其特点．     

PCR与单克隆抗体ELISA夹心法快速诊断结核病的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术建立的扩增结核杆菌复合体特异重复序列ＩＳ９８６基因的方法和用单克隆抗体ＴＢ１５－Ｃ３经ＥＬＩＳＡ夹心法检测结核杆菌特异性抗原决定簇，对１０种抗酸杆菌，２种普通菌进行了检测。ＰＣＲ仅对结核杆菌复合体扩增出２４５ｂｐ特异性条带，ＥＬＩＳＡ检测除人型结核杆菌、ＢＣＧ阳性外，还与鸟型及瘰疬分枝杆菌反应阳性。ＰＣＲ检测人型结核杆菌的敏感性为１ｐｇ，相当于１３个左右细菌，ＥＬＩＳ     

测定尿激酶含量夹心法ELISA的建立

采用两种识别不同抗原决定簇的抗尿激酶(UK)单克隆抗体建立了测定人 UK 含量的夹心法ELISA.本法灵敏度为0.15ng/ml,批内 CV4.3%,批间 CV8.7%,平均回收率98%.应用本法测定了部分正常细胞和肿瘤细胞株培养上清中的 UK 含量,肿瘤细胞培养上清 UK 量明显高于正常细胞.测定82名正常人血浆中 UK 含量,其结果为1.31±0.6ng/ml.     

单克隆抗体ELISA夹心法定量测定一种多聚体分子:铁蛋白

铁旦白(P.M.=465000)是一种确定亚基的多聚体,显示某些重复的决定簇,超过一种单克隆抗体分子可与相同的铁旦白分子结合。作者已建立了一种ELISA夹心法:将单克隆抗体Bambou 8包被于聚苯乙稀珠上,再用相同的抗体辣根过氧化物酶标记。是一种一步法:     

抗AFP单克隆抗体夹心ELISA检测试剂盒的研制及应用

甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)是一种癌胚抗原,在胚胎期由肝细胞和卵黄囊合成并出现在胎儿血清中,出生后血清中AFP的含量很低,正常人血清中的AFP浓度在20μg/L以下。当机体发生原发性肝癌时,肝癌细胞可合成和分泌大量AFP,在癌组织提取液、血清及腹水中均可检出高水平的AFP,现已作为肝癌的标志物,广泛应用于肝癌的普查、诊断、     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定

本研究应用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),对6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(单抗)的抗原结合位点及相亲和力进行了测定。通过ELISA相加试验证实,6株单抗识别5个不同的抗原位点。2H_4和2F_2的相加指数小于50％,表明二者识别相同的抗原位点,而其余单抗则具有不同的抗原位点。由本测定可知,JEV表面至少有5种不同的抗原决定簇。 从50％最大结合的单抗浓度分析可知,6株单抗的相对亲和力为nG_2>2H_4>2F_2>mG_9     

双单克隆抗体ELISA间接夹心法检测HFRS病毒抗原的实验研究

本文建立了检测HFRS病毒抗原的双McAb ELISA间接夹心法。用该法和IFAT分别观察感染细胞培养上清中或细胞中HFRS病毒抗原的动态变化,结果IFAT检出细胞内病毒抗原的高峰在感染后第8天,而FLISA检测感染上清中病毒抗原则在第14天才达高峰。另外,检测179份人工感染HFRS病毒的乳鼠脑、肺组织标本,结果ELISA和IFAT的阳性检出率分别为72.1％和68.2％,前者略高于后者(配对资料X~2检验,P<0.05)。买验结果表明,双McAb ELISA间接夹心法是一种特异、敏感、简便的方法,不仅可用于HFRS病原学研究中检测可溶性抗原,也适用于流行病学调查中检测大量鼠肺标本。