柯萨奇B4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的 探讨柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法 采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法,结合病理学观察,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果 克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变;发病区88．89％的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号;95．24％的亚急型克山病出现阳性杂交信号,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论 柯萨奇B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致。     

柯萨奇B_4病毒感染与克山病及其病区病毒性心肌炎

目的　探讨柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎的关系。方法　采用寡核苷酸探针的原位核酸杂交方法 ,结合病理学观察 ,对比研究克山病与病毒性心肌炎的异同。结果　克山病与病毒性心肌炎各自具有特征性的病理学改变 ;发病区 88.89%的病毒性心肌炎出现阳性杂交信号 ,而且几乎每例的所有心肌细胞均见阳性杂交信号 ;95 .2 4%的亚急型克山病出现阳性杂交信号 ,且半数以上的标本几乎所有的心肌细胞内出现阳性杂交信号 ;阳性信号在病毒性心肌炎和亚急型克山病的心肌细胞内的分布及阳性信号颗粒的形态并无明显区别。结论　柯萨奇 B4病毒与克山病及其病区病毒性心肌炎密切相关 ,其不同的病变特征可能是由于组成病因网的诸因素发生变动所致     

潜慢型克山病患者柯萨奇B组病毒特异性IgM的检测

目的研究柯萨奇Ｂ组病毒（ＣｏｘｓａｃｋｉｅｖｉｒｕｓＢ,ＣＶＢ）感染与克山病发病的关系。方法采用间接酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）对陕西省黄陵县克山病病区潜、慢型克山病患者血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ和ＣＶＢ１－６ＩｇＧ进行检测。结果①潜在型、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＭ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（２８．５７％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但明显低于心肌炎组（６０．００％,Ｐ＜０．０５）。②潜、慢型克山病组血清ＣＶＢ１－６ＩｇＧ抗体阳性率明显高于非病区健康对照组（３８．１０％ｖｓ７．５％,Ｐ＜０．０５）,但与心肌炎组比较无明显差异。结论病区潜、慢型克山病患者有ＣＶＢ感染存在     

Coxsackievirus B3 infection in human leukocytes and lymphoid cell lines

Although coxsackie B viruses (CBVs) are known to cause viremia during acute infection, the role of the blood cells as a target for virus replication is poorly understood. We have analyzed the susceptibility of human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs), granulocytes, bone marrow (BM) cells, and lymphoid cell lines to coxsackievirus B3 infection. Lymphoid cell lines with B- and T-cell characteristics (Raji and Molt-4, respectively) supported virus replication to high titers and virus protein synthesis was detected by metabolic labeling and immunoprecipitation. CBV3 synthesis in the U937 cell line with mononuclear phagocytic characteristics was very limited. The virus was able to infect a small proportion of leukocytes and BM cells, and intracellular virus antigens were detected by immunofluorescent staining. However, only a diminutive amount of infectious virus was produced in isolated PBMCs and granulocytes, and no virus protein synthesis was detected by metabolic labeling and immunoprecipitation in these cells.     

鞘磷脂酶在柯萨奇病毒B3感染心肌细胞中的作用

目的检测柯萨奇病毒B3(CVB3)感染心肌细胞后鞘磷脂酶活性的变化、鞘磷脂酶mRNA、CVB3RNA的表达、病毒滴度的变化及心肌细胞表型的变化。初步探讨鞘磷脂酶在CVB3感染的心肌细胞中的作用。方法 CVB3感染心肌细胞后不同时间点,用薄层色谱法(TLC)检测鞘磷脂酶活性;用Real time-PCR检测心肌细胞中鞘磷脂酶mRNA与CVB3RNA的表达;同时取细胞培养上清液检测CVB3滴度。用Annexin V-FITC,PI双染法观察心肌细胞表型变化。设正常心肌细胞对照组,每个时间点设三个复孔。结果病毒感染组与正常心肌细胞相比,酸性鞘磷脂酶在4h、12h时活性有升高,其mRNA表达在2h时有升高趋势(P0.05);中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶活性在4h时有明显升高,在12h时活性下降,而其mRNA表达在20h时升高(P0.05);中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶活性于病毒感染后4h、12h无明显变化,其mRNA表达在各组间也无明显变化。心肌细胞内病毒RNA表达在4h时有升高趋势,8h后开始明显升高(P0.01)。CVB3病毒滴度在2h时明显升高(P0.05)。心肌细胞在病毒感染2h后早期凋亡及坏死开始增加,4h时凋亡坏死增加更明显,到24h时坏死心肌细胞明显增多。以上实验均重复3次。结论中性Mg2+非依赖性鞘磷脂酶与酸性鞘磷脂酶在CVB3侵入心肌细胞及病毒的扩散增殖过程中可能起重要作用;而中性Mg2+依赖性鞘磷脂酶在此过程中可能不起作用。     

克山病与乙型肝炎病毒感染的病例对照研究

目的　探讨克山病与乙型肝炎病毒 (HBV)感染的关系。方法　采用病例对照研究方法 ,以确诊的 12 7例克山病人为病例组 ,平衡年龄、性别和民族等影响因素 ,随机抽 12 2例病区健康人作为内对照组 ,非病区健康人 47例为外对照组 ;用酶联免疫 (ELISA)法筛检 3组人群中HBV感染者。数据资料管理和 χ2 检验在SPSS10 .0软件包上进行。结果　HBV感染率在病区与非病区人群间有显著性差异 (P <0 .0 1,OR =3 .94) ,而病区健康人群与克山病人群间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。提示克山病与HBV感染有关联 ,且呈剂量 -反应关系 (r =0 .93 5 ,P <0 .0 1)。结论　在克山病区 ,HBV感染可能是人易患克山病的重要危险因素 ,应当重视人群中HBV感染的监测和预防 ,改善当地居民的生活水平和卫生条件     

克山病患者血清细胞间粘附分子1的变化及与柯萨奇B组病毒感染的关系

目的 探讨克山病患者血清可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）的水平变化及与柯萨奇B组病毒（Coxsackievirus B，CVB）感染的关系。方法 利用酶联免疫吸附法及间接酶联免疫吸附法分别测定22例慢型克山病患者、27例潜在型克山病患者、28例健康对照者血清中sICAM-1和CVB—IgM特异性抗体。结果 潜在型、慢型克山病患者血清中sICAM-1水平均明显高于健康对照者（q值分别为9．00、18、75，P〈0．01），慢型高于潜在型（q=10．15，P〈0．01）。慢型克山病患者心功能越差，血清中sICAM-1水平越高；克山病患者组CVB—IgM阳性率显著高于健康对照组（χ^2=5．13，P〈0．05）；克山病CVB—IgM（＋）患者血清sICAM-1水平显著高于CVB—IgM（-）患者（t=2．87，P〈0．01）。结论 sICAM-1在克山病的发生与发展中起重要作用，其升高可能与柯萨奇B组病毒感染有关：sICAM-1水平可作为评价慢型克山病患者心功能程度的重要指标。     

Coxsackievirus B4 infection of sympathetic ganglia in squirrel monkeys

Lumbar sympathetic ganglionitis was found by light microscopy in 2 of 17 (12%) squirrel monkeys (Saimiri sciureus) experimentally infected with Coxsackievirus B4. This finding shows that viruses can cause ganglionitis which, in turn, must cause autonomic nervous system dysfunction. Such viral ganglionitis may explain some diseases, including cardiovascular ones, of poorly understood or unknown etiology which present with manifestations of dysfunction of the sympathetic nervous system.     

黑龙江省克山病病区内外环境硒水平及人群柯萨奇B组病毒感染现况调查

目的 了解黑龙江省克山病病区内外环境硒水平及柯萨奇B组病毒(CVB)人群感染情况,为采取有针对性的防治措施提供依据.方法 在克山病病区设立病区病例组和病区对照组,在非病区设立非病区对照组,采集血液样品用于检测血硒及CVB IgM抗体,同时采集病区和非病区土壤、粮食用于硒测定;硒的测定采用氢化物发生原子荧光光度法.CVB IgM抗体采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测.结果 病区土壤、玉米、小麦、大豆含硒量[(0.092±0.011)、(0.003±0.001)、(0.005±0.003)、(0.006±0.001)mg/kg]均低于非病区[(0.198±0.016)、(0.012±0.004)、(0.037±0.007)、(0.037±0.008)mg/kg],二者比较差异均有统计学意义(t值分别为17.007、8.551、15.842、12.109,P<0.01).病区病例组血硒[(34.803±13.302)μg/L]低于病区对照组[(41.235 ±13.571)μg/L],二者比较差异有统计学意义(P<0.05);病区病例组、病区对照组、非病区对照组的CVB感染阳性率分别为90.0%(36/40)、68.3%(41/46)、45.8%(22/48),病区和非病区CVB感染的比值比(OR)为3.957,95%可信区间为1.898～8.246;病区病例组和病区对照组CVB感染的OR值为4.171,95%可信区间为1.298～13.404;CVB感染组与未感染组血硒水平比较,差异无统计学意义(t=1.179,P>0.05).结论 黑龙江省克山病病区仍存在低硒及CVB感染情况.     

乙型肝炎病毒基因突变与临床疾病进展的关系

乙型肝炎病毒感染人体可以引起急性和慢性乙型肝炎病毒感染。慢性乙型肝炎病毒感染后疾病的转归包括慢性肝炎、肝硬化、肝细胞癌以及肝衰竭。宿主、病毒因素及它们相互作用影响着疾病的进程。HBV 基因突变导致病毒生物学特性改变是影响乙型肝炎病毒感染转归的重要因素之一。     

克山病与Desmin基因突变的关系探讨

目的探讨Desmin基因exon6的A360P错义突变与克山病心肌损伤发生发展的关系。方法采用临床流行病学方法调查,随机抽取年龄、性别相匹配的慢型和潜在型克山病患者,病区正常组和非病区正常组各30例的血样,提取基因组DNA,采用PCR扩增、酶切,电泳等技术比较各组Desmin基因片断酶切位点的变化。结果慢型和潜在型克山病患者与病区正常组未检出Desmin基因exon6的A360P错义突变错义突变位点。结论Desmin基因exon6的A360P错义突变可能不是克山病心肌损伤的易感基因突变。     

Coxsackievirus B3 mutator strains are attenuated in vivo

Based on structural data of the RNA-dependent RNA polymerase, rational targeting of key residues, and screens for Coxsackievirus B3 fidelity variants, we isolated nine polymerase variants with mutator phenotypes, which allowed us to probe the effects of lowering fidelity on virus replication, mutability, and in vivo fitness. These mutator strains generate higher mutation frequencies than WT virus and are more sensitive to mutagenic treatments, and their purified polymerases present lower-fidelity profiles in an in vitro incorporation assay. Whereas these strains replicate with WT-like kinetics in tissue culture, in vivo infections reveal a strong correlation between mutation frequency and fitness. Variants with the highest mutation frequencies are less fit in vivo and fail to productively infect important target organs, such as the heart or pancreas. Furthermore, whereas WT virus is readily detectable in target organs 30 d after infection, some variants fail to successfully establish persistent infections. Our results show that, although mutator strains are sufficiently fit when grown in large population size, their fitness is greatly impacted when subjected to severe bottlenecking, which would occur during in vivo infection. The data indicate that, although RNA viruses have extreme mutation frequencies to maximize adaptability, nature has fine-tuned replication fidelity. Our work forges ground in showing that the mutability of RNA viruses does have an upper limit, where larger than natural genetic diversity is deleterious to virus survival.     

柯萨奇病毒B3m重复感染致病毒性心肌炎的心脏形态学改变

目的探讨柯萨奇病毒B3m(CVB3m)重复感染致病毒性心肌炎的心脏形态学改变。方法用梯度倍增法连续4次经腹腔注射CVB3m病毒液感染昆明小鼠,分别于末次感染后10、30、60d处死动物,HE和VG染色观察心肌病变和纤维增生情况;免疫组化法检测心肌中Ⅰ、Ⅲ型胶原。结果(1)HE染色显示末次感染后10d心肌损伤严重,30d时仍可见小灶坏死,60d时未检出心肌的炎性损伤。(2)VG染色表明末次感染后10d心肌即出现较弱的胶原染色,30d时胶原明显可见,60d时心肌组织的胶原显著增加,心肌组织血管周围胶原面积(PCVA)和心肌胶原容积分数(CVF)均显著增加。(3)心肌胶原的免疫组化进一步显示心肌胶原的增加以Ⅰ型为主,Ⅲ型胶原在末次感染后10、30d未见表达,60d时表达量亦较少,而Ⅰ型胶原的表达与胶原染色结果基本一致。结论CVB3m重复感染可导致心肌纤维化和心室重构,使室壁僵硬而影响心脏的收缩和舒张功能,是心力衰竭发生的重要原因之一。     

Coxsackievirus infection in mice.

White mice of the NYA: NYLAR strain were infected with coxsackie B1 or B4 virus and studied for persistence of virus, antibody conversion, histologic changes, and glucose tolerance during periods up to 13 months. Pancreatitis was observed during the acute phase of infection. Suggestions of subclinical diabetes were found during the first six months after virus inoculation. A normal glucose tolerance at 10 to 13 months suggestes that the functional lesion is temporary.     

柯萨奇B组病毒感染与云南省地方性猝死的关系

目的探讨柯萨奇B组病毒(CoxsackievirusB,CVB)感染与云南省地方性猝死的关系。方法根据流行病学现场调查和临床检查资料,在病区设立病例组和内对照组,在非病区设立外对照组。酶联免疫法(ELISA)检测3组人群近期CVB感染情况及CVB阳性患者CVB1～6型的分布。结果CVB非特异性IgM抗体阳性率在内对照组为88.5%,外对照组为29.2%,两组之间差异有统计学意义(χ2=33.975,P<0.01);病区CVB非特异性IgM抗体阳性率在病例组为92.0%,内对照组为88.5%,两组之间差异无统计学意义(χ2=0.248,P>0.05)。CVB阳性患者亚型分布,在病区内以CVB5(53.3%)、CVB6(34.8%)为主,CVB3未检出,CVB1(2.2%)、CVB2(1.1%)、CVB4阳性患者(8.7%)有少量检出;在非病区内以CVB1(42.9%)为主,CVB3、CVB5未检出。结论CVB感染与云南省地方性猝死有一定的关联,CVB感染是云南省地方性猝死的可疑危险因素。     

化学合成siRNA体外对柯萨奇B3病毒的影响

目的RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具。本研究是在培养HELA细胞中，体外化学合成siRNA（small interfering RNA）对柯萨奇B3病毒（Coxsackievirus B3，CVB3）的影响，探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则，设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA，并在体外通过化学合成形成siRNA。同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA。用CVB3感染培养HELA细胞，将其分为3组，即siRNA组（n=8），阴性siRNA组（n=8），病毒对照组（n=8），分别观察转染后第1天到第5天的细胞病变，并与未感染CVB3的空白对照组进行比较；采用RT-PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断，观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值；用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达。结果RT-PCR检测各组CVB3病毒5’端非编码区（5’UTR）RNA，siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化（P〉0．05）；免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异；细胞病理效应（cytophatic effects，CPE）各组问未见明显差异。结论本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制。