肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤修复

长期吸入高浓度氧可致肺氧化性损伤,是引起早产儿支气管肺发育不良的主要原因之一.正常肺泡上皮的修复增生有赖于肺泡Ⅱ型上皮细胞的增殖和分化.高氧肺损伤治疗的根本难题在于内源性肺泡上皮不能恢复,肺组织修复过程中不能由正常的肺泡卜皮替代,而是由成纤维细胞替代.该文就肺表面活性物质、干细胞、细胞因子与肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤修复的关系作一综述.     

利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用

目的：观察利多卡因（Lido）对高氧暴露的早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据。方法：原代培养的早产大鼠AECⅡ随机分为4组：空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+ Lido组。高氧、高氧+Lido组按5 L/min通入95%O2/5%CO2高纯混合气,10 min后密封。空气+Lido、高氧+Lido组加入20 μg/mL Lido。各组均置于培养箱(37℃,5%CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AECⅡ凋亡率和细胞周期;运用Western blot 检测增殖细胞核抗原（PCNA）蛋白表达。结果：与空气组比较,高氧组AECⅡ凋亡率增高,G2/M、S期细胞比例明显降低（P<0.01）;PCNA蛋白表达明显下调（P<0.01）。而Lido干预后可使AECⅡ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调。结论：高氧可使早产大鼠AECⅡ凋亡增加,增殖抑制; Lido对高氧所致的AECⅡ损伤有直接的抑制作用。     

高氧致慢性肺疾病新生鼠肺泡上皮细胞AQP_1和AQP_5表达及其意义

目的探讨高氧损伤状态下,肺组织内水通道蛋白1(AQP1)和AQP5 mRNA的动态变化规律及其在肺水肿中的作用。方法新生鼠320只,依据吸氧浓度(FiO2)分组:实验组1(FiO20.8)、实验组2(FiO20.6)、实验组3(FiO20.4)、空气对照组(FiO20.21)。每组分别于实验后1、3、5、7、14d行AQP1 mRNA、AQP5 mRNA RT-PCR检测,同时检测肺组织Evans蓝含量。结果高氧各组肺组织Evans蓝含量与空气组相比均显著增加,并随吸氧浓度、暴露时间的延长而增加。新生大鼠肺组织AQP1(高氧3d时)、AQP5(高氧5d时)基因表达明显低于对照组(F1=53.004,P=0.008;F2=16.617,P=0.01),总趋势上AQP1、AQP5 mRNA的表达实验组1、实验组2、实验组3依次降低。结论AQP1、AQP5 mRNA在高氧肺损伤时表达降低,并与肺水肿的严重程度密切相关。     

高氧致慢性肺疾病新生鼠肺泡上皮细胞AQP1和 AQP5表达及其意义

目的 探讨高氧损伤状态下，肺组织内水通道蛋白1（AQP1）和AQP5mRNA的动态变化规律及其在肺水肿中的作用。方法 新生鼠320只，依据吸氧浓度（FiO2）分组：实验组1（FiP2 0．8）、实验组2（FiO20．6）、实验组3（FiO20．4）、空气对照组（FiO20．21）。每组分别于实验后1、3、5、7、14d行AQP1mRNA、AQP，mRNART．PCR检测，同时检测肺组织Evans蓝含量。结果 高氧各组肺组织Evans蓝含量与空气组相比均显著增加，并随吸氧浓度、暴露时间的延长而增加。新生大鼠肺组织AQP1（高氧3d时）、AQP5（高氧5d时）基因表达明显低于对照组（F1=53．004，P=0．008；B=16．617，P=0．01），总趋势上AQP1、AQP5mRNA的表达实验组1、实验组2、实验组3依次降低。结论 AQP1、AQP，mRNA在高氧肺损伤时表达降低，并与肺水肿的严重程度密切相关。     

高氧暴露对新生鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞转分化水平的调节作用

目的 研究体内及体外高氧暴露对Ⅱ型肺泡上皮细胞(typeⅡalveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)转分化水平的影响,旨在阐明支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)肺上皮损伤的发生机制.方法 新生Wistar大鼠生后随机分为对照组(吸入空气)和模型组(吸入氧浓度为85％),于7d、14 d、21 d进行动物模型肺组织取材并分离AECⅡ.细胞标本检测Ⅰ型肺泡上皮细胞(type Ⅰalveolar epithelial cells,AEC Ⅰ)特异性标志物水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)及AECⅡ标志物表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)表达.从正常新生鼠肺分离的AECⅡ在体外原代培养24h后随机分为常氧组(21％ O2)和高氧组(85％ O2),培养48 h后收集细胞,应用免疫荧光双标染色观察AQP5和SP-C表达及定位,Western blot方法检测AQP5和SP-C蛋白表达水平,荧光实时定量PCR方法检测AQP5和SP-CmRNA表达水平.结果 BPD模型组大鼠AECⅡ中AQP5蛋白表达从7d开始较对照组增多,SP-C蛋白表达从14 d开始较对照组减少.模型组中AQP5 mRNA从7d开始表达增多,SP-C mRNA从7d开始表达减少(P＜0.05),且随高氧暴露时间延长两组间差异更加显著.由正常新生鼠肺分离的AECⅡ进行体外原代培养后,免疫荧光双染可见高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少,双染细胞明显增多.蛋白和mRNA定量检测结果均提示高氧组较常氧组AQP5表达增多,SP-C表达减少(P＜0.01).结论 无论体内还是体外高氧暴露下,AECⅡ特异性标志物SP-C表达下调,而AEC Ⅰ特异性标志物AQP-5表达上调,提示AECⅡ过度转分化参与高氧肺损伤后的修复过程.     

高氧对新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞上皮钠通道转运功能的影响

目的 探讨高氧对新生大鼠肺泡Ⅱ型上皮(alveolar epithelial typeⅡ,ATⅡ)细胞钠转运功能的影响.方法 分离提取新生大鼠ATⅡ细胞,随机分成高氧组和对照组,分别在氧浓度为85％和21％的细胞培养箱中原代培养.应用Western blot方法和全细胞膜片钳技术检测高氧暴露后上皮钠通道(epithelial sodium channel,ENaC)蛋白表达变化及高氧对阿米洛利敏感性钠电流的影响.结果 高氧使新生大鼠ATⅡ细胞中β-ENaC和γ-ENaC表达增加[β-ENaC:(1 d:0.43±0.06 vs0.32 ±0.04,P=0.047;2 d:0.73 ±0.06 vs 0.50±0.08,P=0.019;3 d:0.72±0.08 vs 0.52±0.06,P=0.027);γ-ENaC:(1 d:0.64 ±0.05 vs 0.53 ±0.05,P =0.044;2 d:0.76 ±0.03 vs 0.52 ±0.04,P =0.001;3 d:0.77±0.06 vs 0.61 ±0.05,P=0.025)],同时使阿米洛利敏感性钠电流增强(1 d:13.71±2.77 vs 8.92±1.38,P＜0.001;2 d:29.12±11.03 vs 10.41±1.80,P＜0.001),面对α-ENaC表达表现出一定的抑制作用(1 d:0.31 ±0.05 vs 0.46 ±0.05,P =0.025;2 d:0.30 ±0.01 vs 0.38 ±0.02,P =0.002;3 d:0.37 ±0.06vs 0.37 ±0.08,P=0.983).结论 高氧促进了 ATⅡ细胞ENaC钠转运功能,ENaC功能障碍并非高氧暴露后肺水肿发生的主要原因.     

细胞色素氧化酶在高体积分数氧暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞表达的变化

目的 观察高体积分数氧(高氧)暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的线粒体DNA编码细胞色素氧化酶亚基Ⅰ、Ⅱ(COXⅠ、COXⅡ)mRNA表达的动态变化,探讨其在早产鼠高氧肺损伤发生发展的可能作用.方法 分离、培养19 d胎鼠AECⅡ,经贴壁纯化后随机分为高氧组和空气组.高氧组在更换培养液后通入950 mL/L氧气及50 mL/L二氧化碳混合气,3 L/min,10 min后密封.2组均置于37 ℃、 50 mL/L二氧化碳培养箱中培养.2组分别于高氧或空气暴露 6、12、24 h提取AEC Ⅱ总RNA,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定其COXⅠ和COXⅡ mRNA表达.采用SPSS 12.0软件进行统计学分析.结果 与同时间点空气组比较,高氧暴露6、12 h时,COXⅠ mRNA的表达显著升高(t=3.832 P=0.019,t=10.431 P=0),其后下降,24 h时2组比较无显著性差异(t=0.360 P=0.731).高氧暴露6 h时,COXⅡ mRNA表达显著升高(t=2.795 P=0.035),12、24 h时2组无显著差异(t=0.892 P=0.40,t=2.018 P=0.071).结论 高氧暴露诱导胎鼠AECⅡ中COXⅠ mRNA和COXⅡmRNA表达上调,可能是高氧肺损伤的保护作用机制之一.     

组蛋白H2AX在高体积分数氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞中的动态表达及其意义

目的研究组蛋白H2AX在高体积分数氧(高氧)暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)中的动态表达,探讨其在高氧致肺细胞损伤中的作用。方法以原代培养的AECⅡ为研究对象,随机分为高氧组和空气组。在实验开始后6 h、12 h、24 h、48 h收集细胞,运用免疫荧光、Western blot及实时荧光定量PCR技术检测AECⅡ中H2AX的表达规律。结果高氧组H2AX蛋白平均荧光强度在实验开始后6 h、12 h均明显高于空气组(Pa<0.05),24 h与空气组比较差异无统计学意义(P>0.05),48 h明显低于空气组(P<0.05)。高氧组H2AX蛋白平均荧光强度随着高氧暴露时间延长渐下降(F=62.7,P<0.01),空气组无明显变化(F=0.3,P>0.05)。H2AX蛋白相对表达量和H2AX mRNA相对表达量的变化趋势与免疫荧光法结果基本相同,高氧暴露6 h后明显升高,随高氧暴露时间延长逐渐降低(F=126.6、244.4,Pa<0.01)。结论在高氧暴露早期,H2AX表达明显升高,随着高氧暴露时间的延长H2AX逐渐降低,这可能造成AECⅡ中DNA双链断裂修复障碍,导致细胞凋亡和坏死,提示H2AX可能与肺损伤密切相关。     

高体积分数氧致慢性肺疾病新生鼠肺泡II型上皮细胞超微结构的改变

目的 探讨高体积分数氧(高氧)损伤状态下,新生鼠肺组织通透性及肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)超微结构的动态变化.方法 新生大鼠320只,依据吸氧体积分数(FiO2)分组:实验组1(FiO2 800 mL·L-1)、实验组2(FiO2 600 mL·L-1)、实验组3(FiO2 400 mL·L-1)、空气对照组(FiO2 210 mL·L-1).每组分别于实验1 d、3 d、5 d、7 d、14 d取 8只鼠,计算其肺湿/干质量比值(W/D);另取8只新生鼠行支气管肺泡灌洗,检测其支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白水平的动态变化; 透射电镜及硝酸镧示踪技术观察其AECⅡ超微结构及细胞膜通透性改变.结果 各实验组5 d、7 d、14 d肺W/D比值明显高于空气对照组,差异均有统计学意义(Pa<0.05),高氧3 d后实验组1与实验组2、实验组3的BALF中蛋白水平与空气对照组比较均显著增高(Pa<0.05);各实验组 7 d 内随暴露时间延长呈上升趋势;BALF 中蛋白水平在实验组3、实验组2、实验组1也呈逐渐增高趋势,且与空气对照组比较均显著增高(Pa<0.05).实验组AECⅡ的超微结构在出生后不同时间可以出现明显改变,且对硝酸镧颗粒通透性明显增加.结论 高氧肺损伤早期存在肺泡上皮通透性增加导致的肺水肿改变;新生鼠随着高氧暴露浓度的增高和时间的延长,肺损伤加重.     

高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响

目的 探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响.方法 无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎.采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组.于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 l/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养.二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达.采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验.结果 细胞爬片上AEC Ⅱ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用.与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AEC Ⅱ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AEC ⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达最强.结论 高氧暴露可促使胎鼠AEC ⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一.     

高浓度氧暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸表达的影响

目的探讨高浓度氧(高氧)暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-脱氢酶亚基4(ND4)表达的影响。方法原代培养早产Sprague-Dawley(SD)大鼠AECⅡ,待其在含50mL/L二氧化碳(CO2)培养箱中生长至接近融合状态时随机分为高氧组和空气组。高氧组持续暴露于常压高浓度氧中,氧体积分数>900mL/L,CO2体积分数为50mL/L;空气组仍置于含50mL/L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露6、12、24h提取细胞RNA,采取半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ND4 mRNA的表达;采用免疫细胞化学染色法检测细胞爬片ND4蛋白的表达。结果与空气组比较,免疫细胞化学结果显示高氧暴露6、12h ND4的表达无显著性差异(Pa>0.05),高氧暴露24h ND4的表达显著减弱(P<0.05);RT-PCR检测显示高氧暴露6h ND4 mRNA表达无显著性差异(P>0.05),高氧暴露12、24h ND4 mRNA表达显著减弱(Pa<0.05)。结论高氧暴露下调早产SD大鼠AECⅡ ND4 mRNA和蛋白水平的表达,这种改变可能参与高氧肺损伤的发病过程。     

降钙素基因相关肽调控细胞外信号调节激酶减轻高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤作用

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高体积分数氧(高氧)暴露下胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)氧化损伤的影响,及其作用是否由细胞外信号调节激酶(ERK)所介导.方法 原代分离培养孕21 d胎鼠AECⅡ,培养12 h待细胞贴壁后分为6组:空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组.空气组和高氧组分别在氧体积分数为210 mL·L-1的空气或850 mL·L-1的氧气中培养18 h.CGRP组和CGRP拮抗剂组分别在空气或高氧暴露前加入CGRP或同时加入CGRP和其受体拮抗剂CGRPS-37,终浓度分别为10-8 mol·L-1和10-7 mol·L-1.用免疫比浊法测定培养液LDH、AKP和丙二醛(MDA)水平,流式细胞术测定细胞内活性氧(RoS)水平,荧光显微镜检测胞质表面活性蛋白C(SP-C)的表达情况,Western blot检测磷酸化ERK1,2(p-ERK1/2)的表达水平.结果 高氧组MDA、LDH、AKP、ROS及p-ERK1/2水平均明显高于空气组[(2.29±0.10) μmol ·L-1 vs (1.06 ±0.14)μmol·L-1,( 58.79±5.01)U·L-1 vs(25.92±3.68)U·L-1,(24.63±2.92)U·L-1 vs (10.34±1.78)U·L-1,47.74±3.35 vs 25.96±5.04,1.21±0.06 vs 0.45±0.05,Pa＜0.01],而细胞内SP-C表达则明显低于空气组(22.75±3.31 vs 43.50±4.42);与高氧组及高氧CGRP拮抗剂组比较,高氧CGRP组MDA、LDH、ROS及AKP水平显著降低,而p-ERK1/2及SP-C的表达水平则明显增高(Pa＜0.01).空气组、空气CGRP组、空气CGRP拮抗剂组组间MDA、LDH、ROS、AKP及SP-C表达水平比较差异均无统计学意义;空气CGRP组p-ERK1/2表达水平明显高于空气组及空气CGRP拮抗剂组(Pa＜0.01).结论 CGRP可减轻高氧对AECⅡ的氧化损伤,其作用机制可能是通过ERK的活化来介导.     

苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞的保护作用

目的 探讨苦杏仁甙对体外高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型细胞(type 2 alveolar epithelial cell,AECⅡ)的保护作用机制。方法 原代培养早产鼠AECⅡ,建立高氧细胞模型,采用MTT比色法、流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)等方法,观察苦杏仁甙对高氧暴露早产鼠AECⅡ增殖及表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)mRNA表达的影响。结果 高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制,AECⅡ SPs mRNA表达降低。MTT试验显示,苦杏仁甙50～200μmol／L时呈剂量依赖方式促进早产鼠AECⅡ细胞增殖,200μmol／L浓度时,其作用最强,400μmol／L浓度时反而呈抑制作用。200μmol／L苦杏仁甙可显著促进体外高氧暴露AECⅡ增殖,提高其SP mRNA表达水平。结论 高氧暴露导致早产鼠AECⅡ增殖抑制及SP mRNA表达降低,200μmol／L苦杏仁甙对体外高氧暴露的早产鼠AECⅡ有一定保护作用。     

高氧致慢性肺疾病新生大鼠肺泡损伤及肺泡上皮细胞的变化

目的 探讨高浓度氧致新生鼠肺损伤时肺泡形态学变化和肺泡上皮细胞动态变化.方法 通过吸入85%～90%高浓度氧气建立新生鼠慢性肺疾病组织模型.80只新生鼠分为实验组和对照组,实验组(n=40)吸人85%～90%氧气,对照组(n=40)吸入空气.分别留取1、3、7、14、21 d的肺组织,应用放射状肺泡计数(RAC)并且测量肺泡间隔厚度以判定肺泡发育情况,应用免疫组化及RT-PCR技术测定肺组织表面活性蛋白C(SPC)、水通道蛋白-5(AQP5)蛋白及mRNA表达.结果 在生后1 d和3 d,两组RAC和肺泡间隔厚度差异无显著性(P>0.05).在7 d和14 d,实验组的RAC明显低于对照组(P<0.01),肺泡间隔厚度高于对照组(P<0.01),21 d时肺泡间隔厚度升至最高,与对照组间比较差异有显著性(10.62±5.01 vs 3.62±0.88,P<0.001),RAC降至最低,与对照组间比较差异有显著性(3.57±1.24 vs10.47±0.88,P<0.001).高氧肺损伤实验组SPC 3 d时表达明显减少,7d后开始增多,14 d、21d明显高于对照组;而AQP5随着肺损伤的加重表达进行性下降.结论 高氧肺损伤可导致肺泡发育停滞,明显损伤肺泡上皮细胞,肺泡上皮细胞特异性标志物SPC、AQP5表达结果提示I型肺泡上皮细胞损伤严重,Ⅱ型肺泡上皮细胞虽然数量有所增加但其分化与转化能力明显下降.     

哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤及机制研究

目的观察哮喘大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT_Ⅱ)损伤情况并探讨其可能机制。方法用卵白蛋白(OVA)制备Wistar大鼠哮喘模型,分别测定支气管肺泡灌洗液(BALF)中一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子_α(TNF_α)浓度并检测AT_Ⅱ细胞的凋亡率和坏死率,将AT_Ⅱ细胞凋亡和坏死率之和(总损伤率)与NO和TNF_α浓度进行相关分析。结果哮喘组AT_Ⅱ细胞的凋亡率和坏死率[(11.55±2.82)%和(10.69±3.99)%]分别显著高于正常对照组[(2.81±2.22)%和(1.84±0.95)%],P均<0.01;BALF中的TNF_α和NO[(93.23±19.84)pg/ml和(7.36±0.63)μmol/L]也显著高于正常对照组[(26.97±5.85)pg/ml和(3.99±0.42)μmol/L],P均<0.01;BALF中TNF_α和NO浓度分别与AT_Ⅱ细胞总损伤率呈显著正相关(P均<0.01)。结论哮喘大鼠AT_Ⅱ细胞损伤明显,而TNF_α及NO的生成和释放增加可能是导致AT_Ⅱ细胞损伤增加的重要原因。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养及高体积分数氧-停氧对其细胞内钙离子水平的影响

目的 原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并动态观察高体积分数氧(高氧)-停氧对其细胞内钙离子([Ca2 ]I)的影响,为体外研究AECⅡ及阐明高氧肺损伤发病机制提供实验基础.方法 孕19 d SD大鼠麻醉消毒后超净台内剖腹取出所有胎鼠.用胎鼠肺组织进行AECⅡ分离、纯化及原代培养,倒置相差显微镜下观察其细胞的形态及生长状况.通过激光共聚焦显微镜观察其肺表面活性蛋白C(SP-C)免疫荧光的阳性表达鉴定AEC Ⅱ.鉴定为AECⅡ的细胞通以高氧(氧流量为3 mL/min,测氧仪检测氧体积分数为930～970 mL/L),持续约5 min后立即停氧,用激光共聚焦显微镜动态观察[ca2 ]I的变化情况,记录其随时间改变的动态变化曲线,同时观察钙离子荧光强度的变化并连续拍摄照片.结果 例置相差显微镜观察AEC Ⅱ呈岛状分布,铺路石状,细胞核及核仁明显,胞核圆形,胞浆内较多颗粒.激光共聚焦显微镜下可见AECⅡ胞浆中呈现绿色荧光的SP-C阳性表达.予AECⅡ高氧刺激时,[Ca2 ]I出现短暂下降后持续上升,上升至一定程度后又缓慢下降,甚至出现[Ca2 ]I耗竭现象,并维持该水平.予停氧刺激,[Ca2 ]I出现短暂下降后迅速上升,然后逐渐趋于平稳.随着[Ca2 ]I水平的增减,Ca2 荧光强度相应的增强或减弱.结论 高氧及给氧后停氧均可使[Ca2 ]I产生明显变化,可能是高氧导致AECⅡ损伤的重要途径之一.     

高氧对胎鼠远端肺上皮细胞液体转运功能及上皮钠通道表达的影响

目的 探讨高氧对胎鼠远端肺上皮(FDLE)液体转运功能及上皮钠通道(ENaC)表达的影响.方法 分离提取大鼠FDLE细胞,随机分成高氧组和空气组,分别在氧浓度为85％和21％的细胞培养箱中原代培养.检测高氧暴露24h和48 h经FDLE细胞单层液体转运量的变化.应用Western blot方法检测高氧暴露后α-ENaC蛋白表达的变化.结果 高氧48h使大鼠FDLE液体转运增加(1.78±0.19 vs.1.06±0.11,P＜0.001),并且该促进作用可被阿米洛利抑制.高氧24h FDLE中α-ENaC蛋白表达与空气组比较差异无统计学意义(0.44 +0.04 vs.0.40±0.04,P=0.22),而高氧48h α-ENaC蛋白表达显著低于空气组(0.35±0.03 vs.0.47±0.06,P=0.03).结论 高氧增强了FDLE液体转运功能,且以阿米洛利敏感性液体转运增加为主.该促进作用并非通过增加α-ENaC蛋白表达来实现.     

脂多糖诱导的急性肺损伤幼鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构研究

目的急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征是儿科常见的和危害极大的疾病,病死率高达40％-70％。含有板层小体（LB）的肺泡Ⅱ型（ATⅡ）上皮细胞可合成和分泌肺表面活性物质,对维持肺内环境稳定和肺部免疫功能具有极其重要的意义。ATH上皮细胞的结构与其功能是相互协调一致的。本研究的目的是研究脂多糖（LPS）诱导的急性肺损伤幼鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化。方法腹腔内注射LPS（4mg/kg）建立SD幼鼠急性肺损伤模型。正常对照组注射相同剂量的0．9％生理盐水。分别于注射后24、48、72h随机处死每个亚组中8只幼鼠。于左肺下部取1mm^3的肺组织固定于2．5％戊二醛中待透射电镜检查。结果注射LPS24h后,ATH细胞微绒毛消失,LB数量增加,LB呈指环状绕核排列,细胞中有二个细胞核。细胞质中LB48h出现明显空泡变形,出现巨大LB,细胞核形态不规则。在48和72h部分核边界不清。72h细胞质中可见破碎及残余的LB,LB数目也明显减少,部分细胞核出现核溶解。结论急性肺损伤时以LB、细胞核、核仁等的变化为主要特征的ATH细胞超微结构的改变是时间依赖性的。ATH细胞在48和72h破坏严重,这可能导致肺表面活性物质合成不足和肺动态平衡的不稳定,进而造成急性肺损伤。     

肺泡上皮Ⅱ型细胞的免疫学相关因素

肺泡上皮Ⅱ型细胞的主要功能是合成、贮存、分泌表面活性物质，可在组织修复中起干细胞作用。不断有研究表明其分泌的表面活性物质SP-A、SP-D具有十分重要的免疫学作用；在各种病理生理条件产生的细胞因子、补体系统、具有免疫调节作用的蛋白和具有特殊功能的蛋白分子结构，都能参与免疫反应过程，在肺泡防御和免疫调节中发挥重要作用。     

肺泡Ⅱ型上皮细胞的生长状况及其转分化的鉴定

目的 观察肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)体外培养的生长状况及转分化过程.方法 通过差速贴壁法对原代培养的AECⅡ进行分离、纯化,并将AECⅡ随机分为第0天、第2天、第4天、第6天、第8天8个时间点.利用倒置显微镜观察细胞生长情况,记录细胞数目,绘制生长曲线;锥虫蓝染色观察细胞活力;流式细胞仪观察细胞生长周期和细胞凋亡情况;电子显微镜观察细胞超微结构;采用免疫荧光技术,共聚焦显微镜观察肺表面活性蛋白(SP-C)、水通道蛋白5(AQP5)的阳性表达.结果 倒置显微镜下第 0天、第2天、第4天、第6天及第8天细胞数分别为(4.02±0.99)×108L-1、(10.41±0.24)×108L-1、(27.90±1.91)×108L-1、(27.12±0.85)×108L-1及(26.29±1.59)×108L-1,第2天与第0天、第4天与第2天细胞数比较差异均有统计学意义(Pa<0.05).第2天、第4天、第6天及第8天的细胞活力分别为(97.00±0.71)%、(97.20±0.84)%、(95.00±0.71)%及(92.80±1.30)%,第6天与第4天、第8天与第6天比较差异有统计学意义(Pa<0.05).细胞周期:空气组细胞G1期、S期细胞所占比率分别在第6天、第4天最高,但各时间点与前一时间点比较差异均无统计学意义(Pa>0.05).细胞凋亡:空气组Annexin-V+/PI-亚群在第4天所占比例最高,与第2天及第6天比较差异均有统计学意义(Pa<0.05);Annexin-V+/PI+亚群细胞所占比例在第8天时最高,但与第6天比较差异无统计学意义(P>0.05),而第6天与第4天比较差异有统计学意义(P<0.05).细胞超微结构:第6天时可见介于AECⅡ和AECⅠ之间的中间状态细胞,此类细胞在细胞表面有微绒毛,但胞质内无板层小体或胞质内有板层小体但细胞表面无微绒毛.免疫荧光:第6天可见部分细胞胞质内有呈绿色荧光的SP-C阳性表达,荧光强度较第2天、第4天减弱,伴有胞膜点状分布的呈红色荧光的AQP5阳性表达,细胞表达强度不等,表达AQP5相对较弱的细胞表达SP-C的强度相对增强.结论 原代培养的AECⅡ在培养早期增殖能力最强,细胞增殖分化能力在培养晚期降低.体外培养的AECⅡ有向AECⅠ转分化的能力.