凝血因子Ⅱ可诱导单核细胞和巨噬细胞分化为卵巢癌腹膜内肿瘤相关巨噬细胞

目的 探讨激活的凝血因子Ⅱ(Ⅱ因子)能否诱导外周血单核细胞分化为卵巢上皮性癌(EOC)腹膜微环境肿瘤相关巨噬细胞.方法 分离正常女性外周血单核细胞和巨噬细胞(MO/MA)以及EOC腹水内肿瘤相关巨噬细胞(TAM);凝血因子Ⅱ刺激后,检测MO/MA和TAM表面Ⅱ因子受体PAR1、3、4表达,分析MO/MA在Ⅱ因子或(Ⅱ因子+水蛭素)刺激后CD14、CD68和CD163表达比例,ELISA检测Ⅱ因子刺激后巨噬细胞表达的细胞因子,Real-time PCR检测细胞因子、趋化因子mRNA表达.结果 MO/MA及TAM细胞表面上均有Ⅱ因子受体PARI、3、4表达;Ⅱ因子刺激后,MO/MA高表达CD14[(50.23±4.34)%]及CD163[(3.82±1.93)%],与Ⅱ因子+水蛭素刺激组[CD14(32.37±6.24)%,CD163(0.56±0.28)%]及培养液对照组[CD14(40.06±8.06)%,CD163(1.02±0.38)%]相比差异有统计学意义(P<0.05);ELISA结果示Ⅱ因子刺激后IL-8、IL-10及TGF-β分泌表现出时间依耐性特征,刺激后3h表达量达高峰;Real-time PCR显示IL-8、IL-10、IL-12、CXCR2、CCR2、CCL18mRNA表达上调,CXCR1和TGF-β表达下降.结论 激活的凝血因子Ⅱ能诱导外周血MO/MA分化为CD163highIL-10highIL-12highCCL18highIL-8high,具有类似肿瘤相关巨噬细胞特征的M2型巨噬细胞亚型;Ⅱ因子可能参与了EOC腹膜微环境浸润的TAM的分化和极化作用.     

原因不明复发性流产患者巨噬细胞表面TSP1、CD36、CD47的表达及其细胞因子的分泌

目的:探讨巨噬细胞表面分子凝血酶敏感蛋白1(TSP1)、CD36、CD47及其分泌细胞因子IL-10和IFN-γ与原因不明复发性流产发病的关系。方法:采用流式细胞技术检测10例原因不明复发性流产患者和20例正常早孕妇女外周血及蜕膜巨噬细胞表面TSP1、CD36、CD47的表达;同时用ELISPOT法检测两组外周血及蜕膜分泌IL-10和IFN-γ的巨噬细胞数。结果:原因不明复发性流产患者外周血巨噬细胞TSP1、CD36、CD47表达水平及其分泌IL-10和IFN-γ的细胞数与正常早孕妇女均无统计学差异。与正常早孕妇女比较,原因不明复发性流产患者蜕膜巨噬细胞CD36表达水平明显升高(P<0.01),TSP1表达水平明显降低(P<0.01),CD47表达水平无明显差异(P>0.05)。蜕膜组织分泌IL-10的巨噬细胞数显著降低(P<0.05),而分泌IFN-γ的巨噬细胞数量无明显差异。结论:蜕膜巨噬细胞在维持正常妊娠免疫耐受和导致原因不明复发性流产发病中起重要作用。     

M2型巨噬细胞调控卵巢癌腹膜内肿瘤血管生成的实验研究

目的:探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)腹水中M2型巨噬细胞(M2 macrophage)调控腹膜内肿瘤血管生成的机制。方法:分离卵巢癌患者腹水中M2型巨噬细胞,体外无血清刺激后,收集上清M2作为条件培养基(M2 macrophage conditional medium,M2 CM),分别采用结晶紫染色实验、Transwell小室迁移实验和小管样结构形成实验,检测共培养刺激后其对人脐静脉血管内皮细胞系EA.hy926增殖、迁移以及小管样结构形成的影响;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测刺激后EA.hy926细胞分泌促血管蛋白因子——白细胞介素8(IL-8)以及血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果:①经M2 CM刺激后,EA.hy926细胞的增殖能力提高,结晶紫染色后检测OD值为0.192 6±0.002(P<0.05)。②细胞迁移能力提高,迁移细胞数为84.81±2.04(P<0.001)。③M2 CM可显著促进内皮细胞小管样结构形成,与对照组差异有统计学意义(P<0.05)。④ELISA显示经M2 CM刺激后,EA.hy926分泌IL-8为(1 570.45±118.64)ng/L,VEGF分泌量也显著升高,为(502.21±133.61)ng/L,与对照组差异有统计学意义(P<0.001)。结论:EOC腹水中M2型巨噬细胞可能通过上调内皮细胞分泌VEGF及IL-8等促血管生成因子,增加血管内皮细胞增殖、迁移能力及小管样结构形成,从而促进卵巢癌腹膜内血管生成。     

蜕膜巨噬细胞TSP-1 IL-10及IFN-γ的表达及其相互关系探讨

目的探讨蜕膜巨噬细胞凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)、白介素-10(IL-10)及干扰素-γ(IFN-γ)的表达。方法对2005年7月至2006年7月在上海交通大学附属仁济医院计划生育门诊要求人工流产的正常妊娠妇女20例(A组)和10例原因不明复发性流产(URSA)患者(B组)检测蜕膜TSP-1mRNA、蜕膜巨噬细胞表面TSP-1的表达及蜕膜巨噬细胞分泌IL-10和IFN-γ的量,并在培养液中加入相应刺激物,观察细胞因子分泌量的变化。结果与A组相比,B组蜕膜TSP-1mRNA表达明显降低(P<0·05)。蜕膜巨噬细胞TSP-1表达水平明显降低(P<0·01)。蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量显著降低(P<0·05);在培养液中加入各种干预因素对两组病例蜕膜巨噬细胞分泌IFN-γ无显著影响;加入TSP-1后,两组蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量均增加(P<0·05);加入抗TSP-1后A组蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量降低(P<0·05)。结论URSA患者蜕膜TSP-1表达下降,且蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的量降低,可能是导致URSA发病的原因。TSP-1可能在调控蜕膜巨噬细胞分泌IL-10的过程中起重要作用。     

原因不明复发性流产患者蜕膜CD4~+CD25~+CD127~(dim/-) Treg细胞的表达频率和功能研究

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者母胎界面免疫耐受环境的变化。方法:留取URSA患者21例(URSA组)和30例正常早孕人流妇女(对照组)蜕膜组织,制备成单个核细胞悬液,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率;取两组蜕膜单个核细胞悬液各5例,用免疫磁珠分离法分离出CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,流式细胞术分析CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β的表达水平;体外增殖抑制试验分别检测用抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞,和未用抗体处理的CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自身效应T细胞增殖的抑制作用。结果:URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的表达频率明显低于对照组(P=0.005);URSA组蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞内IL-10和TGF-β表达频率均较对照组明显降低(P=0.04,P=0.01);URSA组CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对自体效应性T细胞的增殖抑制作用显著低于对照组(P0.05),且抗IL-10抗体和抗TGF-β抗体可部分阻断蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞的免疫抑制功能(P均0.05)。结论:URSA患者蜕膜CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞不仅表达频率降低,而且免疫抑制功能也减弱,且这种免疫抑制功能的减弱主要受IL-10和TGF-β介导,揭示CD4+CD25+CD127dim/-Treg细胞对URSA患者蜕膜局部免疫耐受环境产生影响。     

凝血酶刺激单核/巨噬细胞产生IL-8增强卵巢癌细胞侵袭力的实验研究

目的:研究凝血酶刺激正常人外周血来源单核/巨噬细胞(MO/MA)后对卵巢癌细胞侵袭力的影响。方法:分离正常女性外周血单核细胞后,用印度墨汁吞噬试验检测凝血酶刺激MO/MA后吞噬功能的变化;以凝血酶刺激MO/MA后的上清为趋化物,检测对卵巢癌细胞系(ES-2,SKOV-3,HO-8910)体外侵袭力的影响;阻断侵袭实验中加入IL-8单克隆中和抗体。转录因子试剂盒AP1、STAT、Inflammation 1、Oncogene 3家族筛选凝血酶通过何种细胞信号转导途径激活MO/MA。结果:(1)凝血酶未显著提高MO/MA的吞噬能力;(2)基质胶体侵袭实验表明,上皮性卵巢癌细胞系ES-2在MO/MA+凝血酶刺激组上清作用下,侵袭力增强(161.9±11.18,n=6),其侵袭细胞数目与卵巢癌腹水刺激组(157.5±14.86,n=4)类似,但显著高于阴性对照组普通培养基(47.25±12.45,P<0.05),添加水蛭素(凝血酶抑制剂)后能显著降低其侵袭力(73.5±17.3,P<0.01);抗IL-8单克隆抗体对ES-2细胞侵袭的阻断作用呈浓度依赖性,相同体外侵袭实验在SKOV-3细胞系(n=2)及HO-8910细胞系(n=2)中得到类似结果;(3)转录因子检测表明,In-flammation 1及Oncogene 3家族中几乎所有涉及炎症的转录因子包括c-Fos,c-Rel,NF-κbp50,NF-κb p65,c/EBPa,Egr-1,HIF-1,OctⅠ,OctⅡ在凝血酶刺激巨噬细胞后活性增加(n=4)。结论:凝血酶刺激MO/MA通过上调IL-8产生,显著增强卵巢癌细胞的侵袭力,表明卵巢癌腹膜内凝血酶可能通过教育和诱导MO/MA向TAM样细胞分化后,加速肿瘤细胞腹膜内转移。     

白细胞介素1α、β及γ干扰素mRNA在子宫内膜异位症患者异位和在位子宫内膜巨噬细胞中的表达

目的探讨白细胞介素(IL)1α、β mRNA和γ干扰素(IFN-γ)mRNA在子宫内膜异位症(内异症)患者异位和在位内膜巨噬细胞中的表达变化及意义.方法采用原位杂交技术检测40例内异症患者(内异症组)异位和在位内膜(增生期18例,分泌期22例)和15例子宫肌瘤患者(对照组)的内膜(增生期8例,分泌期7例)巨噬细胞中IL-1α、β和IFN-γmRNA表达水平.结果(1)内异症组患者异位、在位内膜及对照组内膜巨噬细胞中IL-1α mRNA阳性表达率分别为70%(28/40)、38%(15/40)和20%(3/15),表达水平分别为3.12±0.32、2.65±0.34、1.32±0.23;IL-1βmRNA阳性表达率分别为75%(30/40)、40%(16/40)和20%(3/15),表达水平分别为3.45±0.43、2.74±0.39、1.45±0.18;内异症组IL-1α、β mRNA的表达水平较对照组明显升高,内异症组异位内膜较在位内膜的表达水平也明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).(2)内异症组在位内膜和对照组内膜巨噬细胞中IL-1α、β mRNA表达分泌期高于增生期,差异也有统计学意义(P＜0.05).(3)内异症组内膜巨噬细胞中IFN-γmRNA的表达水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05),且无周期性变化.结论内异症患者在位内膜和异位内膜巨噬细胞IL-1表达明显增强,而IFN-γ表达则无明显变化,推测内膜巨噬细胞及其分泌的细胞因子,可能参与了内异症的发生、发展过程.     

静脉免疫球蛋白对新生儿脐血淋巴细胞干扰素γ和白细胞介素4分泌的影响

目的研究静脉免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)对新生儿淋巴细胞免疫功能的调节作用。方法分离8例新生儿的脐血单个核细胞和CD3+T细胞,并利用IVIG和植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)不同组合(即(1)对照组、(2)PHA刺激组、(3)IVIG先抑制组、 (4)PHA先活化组和(5)PHA+IVIG组)对细胞进行刺激培养,然后利用ELISA法检测细胞干扰素 (interferon,IFN)γ和白细胞介素(interleukin,IL)4的分泌,RT-CR法检测细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达,并与8例成人外周血单个核细胞做比较。结果加入IVIG后,PHA诱导的脐血单个核细胞和CD3+T细胞IFN-γ的分泌下降,其中以单个核细胞下降的程度更为明显;并且单个核细胞IFN-γ分泌下降与IVIG加入的先后顺序无关PHA刺激组(313．34±108．00)pg／ml,先抑制组 (17．68±17．98)pg／ml,先活化组(170．72±38．25)pg／ml,PHA±IVIG组(11．10±8．92)pg／ml;但是CD3+T细胞IFN-γ的分泌下降只出现在先加入或同时加入IVIG时PHA刺激组(35．30±12．21) pg／ml,先抑制组(8．61±6．21)pg／ml,PHA±IVIG组(8．54±1．57)pg／ml。另外加入IVIG后,脐血单个核细胞IFN-γ分泌下降不如成人外周血单个核细胞明显,PHA刺激组(1121．11±344．58) pg／ml,先抑制组(29．08±11．20)pg／ml,先活化组(339．63±47．43)pg／ml,PHA±IVIG组(26．40± 21．97)pg／ml。单独加入PHA后,脐血单个核细胞和CD3+T细胞IL-4的分泌无明显变化,但是经过PMA、PHA和rIL-2反复刺激后脐血单个核细胞却能表达IL-2 mRNA和IL-4 mRNA,并且加入 IVIG后,脐血单个核细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA表达明显下降。结论 IVIG除了可以直接抑制脐血T细胞分泌IFN-γ外,还可能通过其他免疫细胞或分子间接地介导这种抑制作用。IVIG 也可以抑制脐血单个核细胞IL-2 mRNA和IL-4 mRNA的表达。因此IVIG对脐血淋巴细胞增殖和 B细胞免疫球蛋白释放的影响可能与这些抑制作用有关。     

Th17/Treg平衡与正常妊娠及子痫前期关系的研究

目的:探讨Th17及CD4+CD25+Foxp3+调节性T(regulatory T,Treg)细胞介导的免疫反应在子痫前期发病中的作用。方法:选取在山东大学齐鲁医院进行产前检查的子痫前期患者25例及正常晚孕期妇女27例,并选取育龄期健康未孕妇女20例。利用流式细胞技术检测3组患者血样中分泌IL-17的Th17及CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞亚群占CD4+T淋巴细胞的百分比,并计算Th17/Treg比率,比较其在子痫前期与正常妊娠时的变化;再用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测3组患者外周血中IL-17、IL-10、TGF-β1等细胞因子的表达并进行比较。结果:(1)与正常未孕组及正常妊娠组相比,子痫前期患者外周血中分泌IL-17的Th17细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显升高(P<0.01),CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞占CD4+T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.01);与正常未孕组相比,正常妊娠组Th17细胞的比例明显降低(P<0.01),Treg细胞比例明显升高(P<0.05);(2)子痫前期患者外周血中Th17/Treg比率明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.01),正常妊娠组外周血中Th17/Treg比率与健康未孕组相比明显降低(P<0.01);(3)子痫前期患者外周血中IL-17及TGF-β1的TGF-β1表达明显高于正常未孕组及正常妊娠组(P<0.05),而IL-10的表达未见明显差异(P>0.05);与正常未孕组相比,正常妊娠组外周血中IL-17、IL-10及TGF-β1的水平均未见明显变化(P>0.05)。结论:正常妊娠可能依赖于Treg细胞介导的免疫耐受状态,子痫前期患者外周血中Th17/Treg之间的平衡失调而倾向于Th17介导的促炎状态,这一机制可能参与了子痫前期的发生发展。     

TGF-β1在早孕妇女外周血和蜕膜组织中诱导生成T调节性(Treg)细胞

目的:研究TGF-β1是否能在人母-胎界面诱导生成T调节性(Treg)细胞。方法:早孕妇女外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞中加入不同浓度的TGF-β1(0 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml)分别于培养后第2日、第4日和第6日用流式细胞仪检测培养Foxp3的表达情况,随后将诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞与CD8+T细胞混合培养,观察后者凋亡因子CD95配体(CD95L)的表达情况。结果:体外培养中,TGF-β1可诱导早孕妇女的外周血和蜕膜CD4+CD25-T细胞生成诱导性Treg细胞,随着培养时间增加而增强诱导效应,且在TGF-β1浓度为5 ng/ml时诱导功能最强;诱导生成的CD4+Foxp3+T细胞具有促进效应细胞CD8+T细胞凋亡的功能。结论:体外培养中,TGF-β1能将人外周血和蜕膜诱导生成Treg细胞,且具有免疫抑制功能,有良好的免疫治疗前景。     

CD4+CD25+调节性T细胞在妊娠免疫耐受中的研究

免疫抑制是母体成功妊娠必需的,近来研究认为CD4+CD25调节性T细胞(Treg)是免疫抑制机制中的关键成分.该类细胞是Treg的重要亚群,在体内自然存在,能分泌白细胞介素10(IL-10)、转化生长因子-β(TGF-β),表达IL-2Rα(CD25),细胞毒性T淋巴细胞抗原4(CTLA-4)分子等.在早、中期妊娠,母体全身和蜕膜的CD4+CD25Treg比率明显增加,通过细胞直接接触的方式抑制效应性T细胞的活性及分泌抑制性细胞因子等,可能在人类妊娠中扮演重要的角色.     

IL-4与IL-10联合免疫对趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3的选择性诱导对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响

目的:观察IL-4与IL-10对趋化因子受体CCR3、CCR5和CXCR3的选择性诱导对自然流产模型小鼠胚胎丢失率的影响,探讨趋化因子受体CCR3、CCR5、CXCR3在诱导妊娠免疫耐受中的作用。方法:建立自然流产小鼠模型与正常妊娠小鼠模型,观察细胞因子IL-4与IL-10对CCR3、CCR5、CXCR3的选择性诱导作用,用双标记流式细胞分析技术,检测正常妊娠模型组孕鼠(CBA/J×BALB/c)、自然流产模型无干预组孕鼠(CBA/J×DBA/2)、自然流产模型IL-4免疫组孕鼠、自然流产模型IL-4+IL-10联合免疫组孕鼠和自然流产模型-生理盐水(NS)免疫组孕鼠中外周血CD4+T细胞CCR3、CCR5、CXCR3等3类趋化因子受体的表达率,并观察各组孕鼠胚胎丢失率。结果:(1)流产模型无干预组胚胎丢失率显著高于正常妊娠模型组,差异有统计学意义(P<0.01),IL-4免疫组、IL-4+IL-10联合免疫组胚胎丢失率皆明显低于NS组与流产模型无干预组(P<0.01,P<0.01);(2)自然流产模无干预组外周血CD4+T细胞CCR3表达水平明显低于正常妊娠模型组(P<0.01),而CCR5、CXCR3表达率明显高于正常妊娠模型组(P<0.01);转输IL-4、IL-4+IL-10后CCR3表达率明显上调、CXCR3表达率明显下降,均与流产模型无干预组差异有显著性(P<0.01)。此外,IL-4+IL-10联合免疫组外周血CD4+T细胞上CCR5表达率也明显低于流产模型无干预组(P<0.05),但IL-4免疫组与流产模型无干预组无明显差异(P>0.05)。结论:CD4+T细胞上CCR3、CCR5、CXCR3表达异常可能在自然流产发病中起重要作用,细胞因子IL-4与IL-10联合作用可能通过诱导CCR3高表达,抑制CCR5与CXCR3表达来诱导妊娠免疫耐受,降低胚胎丢失率。     

血清白介素-1β和乳酸脱氢酶在卵巢上皮性癌患者中的表达及意义

目的探讨卵巢上皮性癌(EOC)患者血清中白介素-1β(IL-1β)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测收集2015年1月至2016年12月兰州大学第一医院妇产科收治的卵巢上皮性癌组、良性卵巢肿瘤组和正常对照组共268例受试者血清中IL-1β和LDH表达水平,及其与EOC患者间的临床病理及预后的关系。结果卵巢上皮性癌组患者血清中IL-1β和LDH含量水平显著高于良性卵巢肿瘤组和正常对照组(P 0.05);IL-1β和LDH高表达与EOC患者肿瘤分级、临床分期及盆腹腔淋巴结转移密切相关,IL-1β和LDH是影响EOC患者预后的独立风险因素(P 0.05)。结论 IL-1β和LDH表达水平与EOC进展及预后有关,IL-1β和LDH高表达可作为EOC患者不良预后的重要指标。     

康妇炎胶囊对兔盆腔炎性疾病后遗症炎症因子影响的实验研究

目的通过观察康妇炎胶囊对兔盆腔炎性疾病(PID)后遗症模型血清白介素(IL)-4、IL-10、IL-8、转化生长因子(TGF)-β1水平的影响,探讨康妇炎胶囊治疗盆腔炎性疾病后遗症的机制。方法将5~6个月龄新西兰雌兔分为对照组、模型对照组和康妇炎组。模型对照组和康妇炎组在逆行宫腔插管灌注细菌法建立盆腔炎性疾病模型成功后,分别灌服蒸馏水和康妇炎胶囊3周。肉眼和HE染色观察各组兔子宫及输卵管情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组兔血清IL-4、IL-10、IL-8和TGF-β1水平的变化。结果模型对照组兔腹膜明显增厚,盆腔积液,子宫充血、质脆、弹性差,输卵管管壁粗糙、增厚,与周围组织粘连,或外观略呈串珠样;康妇炎组兔腹膜增厚不明显,无盆腔积液、子宫无明显充血、输卵管与周围组织无明显粘连;康妇炎组兔血清IL-4、IL-10水平较模型对照组明显升高(P0.01),而IL-8、TGF-β1水平较模型对照组明显降低(P0.05)。结论康妇炎胶囊可能通过下调前炎症细胞因子、腹腔粘连因子和上调抗炎症细胞因子的表达,调整致炎和抗炎的动态平衡,促使盆腔炎性疾病的愈合。     

血清白介素-1β和乳酸脱氢酶在卵巢上皮性癌患者中的表达及意义北大核心CSCD

目的探讨卵巢上皮性癌(EOC)患者血清中白介素-1β(IL-1β)和乳酸脱氢酶(LDH)的表达及临床意义。方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测收集2015年1月至2016年12月兰州大学第一医院妇产科收治的卵巢上皮性癌组、良性卵巢肿瘤组和正常对照组共268例受试者血清中IL-1β和LDH表达水平,及其与EOC患者间的临床病理及预后的关系。结果卵巢上皮性癌组患者血清中IL-1β和LDH含量水平显著高于良性卵巢肿瘤组和正常对照组(P <0.05);IL-1β和LDH高表达与EOC患者肿瘤分级、临床分期及盆腹腔淋巴结转移密切相关,IL-1β和LDH是影响EOC患者预后的独立风险因素(P <0.05)。结论 IL-1β和LDH表达水平与EOC进展及预后有关,IL-1β和LDH高表达可作为EOC患者不良预后的重要指标。     

凝血因子Ⅻ刺激外周血单核细胞对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

目的 探索凝血因子Ⅻ刺激正常人外周血单核细胞(monocytes,MOs)后对卵巢癌细胞侵袭能力的影响.方法 正常女性外周血来源MOs在体外经Ⅻ因子刺激12h后,以卵巢癌患者腹水来源的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)为阳性对照,通过印度墨汁吞噬实验检测经Ⅻ因子刺激后,MOs吞噬功能的变化;检测经Ⅻ因子刺激后MOs培养上清对卵巢癌细胞系ES-2,SKOV-3,HO-8910体外侵袭能力的影响;采用AP-1、STAT、Inflammation-1、Oncogene-3家族转录因子试剂盒筛选Ⅻ因子可能通过何种细胞信号转导途径激活MOs.结果 (1)卵巢癌腹水来源的TAM和经Ⅻ因子刺激后MOs吞噬印度墨汁的比例分别为0.66±0.04和0.36±0.03,显著高于外周血来源的MOs(0.27±0.018)(P<0.01,P=0.033).(2)卵巢上皮性癌细胞ES-2在MOs+Ⅻ因子组上清为趋化诱导物时侵袭细胞数目为110.9±5.046,略少于腹水组(157.5±14.86),但显著高于使用普通培养基作为趋化诱导物的阴性对照组(39.14±10.91),在MOs+Ⅻ因子组上清中添加Ⅻ抑制剂西妥昔单抗后,侵袭细胞数量减少为42.43±9.097.结论 卵巢癌腹膜内上调的Ⅻ因子可能通过教育和诱导MOs向具有类似TAM特征的M2型巨噬细胞亚型分化,成为加速卵巢癌细胞在腹膜转移的诱导因素之一.     

外周血叉头框蛋白P3的表达与原因不明复发性流产关系的研究

目的:探讨外周血叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达与原因不明复发性流产(URSA)的关系。方法:选择2018年5月至2020年5月于本院进行治疗的126例URSA患者作为URSA组,选择同期于本院进行产前检查的82例健康孕妇作为对照组。比较两组的一般资料;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Foxp3的mRNA表达;多因素Logisitic回归分析影响URSA发生的相关因素;Pearson相关性分析外周血Foxp3水平与导致URSA发生的危险因素的相关性;流式细胞术检测Foxp3对Th17/Treg平衡的调控作用;ROC曲线分析Foxp3水平对发生URSA的预测价值,并评价其准确度和有效性。结果:两组的孕酮、白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)、Foxp3、Th17、Treg、Th17/Treg差异均有统计学意义(P0.05)。孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平及IL-6、IL-17、Th17水平、Th17/Treg比值均是影响URSA发生的独立危险因素(OR1,P0.05)。Foxp3分别与孕酮、IL-10、TGF-β、Treg呈显著正相关(r0,P0.05),与IL-6、IL-17、Th17、Th17/Treg呈显著负相关(r0,P0.05);Foxp3刺激CD4~+T细胞12小时和24小时能够显著降低Th17细胞比例和Th17/Treg比值,增加Treg细胞比例。ROC曲线分析Foxp3预测URSA发生的曲线下面积为0.795,准确度和有效性较好。结论:孕酮、IL-10、TGF-β、Treg、Foxp3水平降低及IL-6、IL-17、Th17水平及Th17/Treg比值增加均可能导致URSA的发生风险增加,Foxp3对Th17/Treg平衡具有调控作用。     

BCL3在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探究B细胞淋巴瘤因子3(BCL3)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达、基因改变及临床意义。方法:应用Oncomine数据库和GEPIA网站分析BCL3 mRNA在EOC中的表达水平,KM plotter数据库分析BCL3 mRNA表达水平对患者预后影响。使用cBioPortal网站探究BCL3发生基因改变、拷贝数改变(CNA)频率及对预后影响。选取80例EOC与18例正常卵巢组织标本,免疫组化(IHC)染色验证BCL3蛋白在EOC中的表达水平。结果:Oncomine数据库对7项数据集整合分析示,BCL3 mRNA在EOC中高表达(P=0.016),GEPIA分析同样证实BCL3 mRNA高表达(P0.05)。KM plotter分析示,BCL3 mRNA高表达患者的整体生存率(OS)降低(P=0.012)。cBioPortal分析BCL3发生基因改变频率8%、CNA频率3%,均显著降低患者的OS(P分别为0.0161和6.206×10~(-6))。IHC证实,BCL3蛋白在EOC中显著高表达(P0.001),细胞核蛋白表达水平与有无局部淋巴结转移(P=0.048)、腹水含量(P=0.035)及分化级别(P=0.017)相关。生存分析示,BCL3核蛋白中高表达有降低患者生存率趋势,但差异无统计学意义(P=0.394)。结论:BCL3 mRNA及蛋白均在EOC中高表达,且BCL3 mRNA高表达、BCL3发生基因改变或CNA均可降低患者OS,BCL3基因有望成为EOC患者治疗的潜在靶点。     

胚胎停育绒毛组织中TGF-β1、MMP-9及TIMP-1的表达及意义

目的:探讨TGF-β1、MMP-9及TIMP-1 mRNA的表达在胚胎停育发病机制中的作用。方法:用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测正常人工流产(20例)和胚胎停育(25例)患者绒毛组织中TGF-β1、MMP-9与TIMP-1 mRNA的表达量。结果:(1)与对照组相比,实验组绒毛中TGF-β1 mRNA和TIMP-1 mRNA的表达量降低(P<0.05),而MMP-9 mRNA表达量升高(P<0.05);(2)绒毛组织中TGF-β1 mRNA与MMP-9 mRNA的表达呈负相关(r=-0.82,P<0.05)。结论:胚胎停育患者绒毛组织TGF-β1、MMP-9以及TIMP-1 mRNA表达有明显改变;TGF-β1表达的降低可能上调MMP-9表达,通过破坏MMPs/TIMPs动态平衡,最终导致胚胎停育发生。     

腹腔巨噬细胞CD54和TNF-α mRNA表达与妊娠期高血压疾病关系的研究

目的研究妊娠期高血压疾病患者腹腔巨噬细胞CD54和TNF-αmRNA的表达变化,探讨它们在妊娠期高血压疾病发病机理中的作用。方法体外培养30例妊娠期高血压疾病患者和10例正常孕妇腹腔液中的巨噬细胞,分别用流式细胞术半定量和逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)方法测定实验组及对照组腹腔巨噬细胞表面CD54+及细胞内TNF-αmRNA的表达。结果轻度子痫前期、重度子痫前期组患者腹腔巨噬细胞CD54+细胞百分率较正常对照组明显增高,差异均有显著性(P<0.05);妊娠期高血压疾病组腹腔巨噬细胞TNF-αmRNA表达水平均明显高于对照组(P<0.05);相关性分析显示,CD54表达量与TNF-αmRNA含量呈正相关。结论在妊娠期高血压疾病中,巨噬细胞高表达CD54与TNF-αmRNA,二者表达量呈正相关;CD54与TNF-α可能是参与妊娠期高血压疾病的重要因子。