TNF抗妇科肿瘤细胞的实验研究

肿瘤坏死因子（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦ）是具有抗肿瘤特性的多功能物质，但不同种肿瘤细胞对ＴＮＦ的敏感性存在着明显差异。在体外试验中，发现卵巢癌细胞（ＡＯ）子宫颈癌细胞（Ｈｅｌａ）和绒癌细胞（ＪＡＲ）对ＴＮＦ都不甚敏感。若ＴＮＦ联合应用γ－干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－Ｔ，ＩＦＮ－γ）或放线菌素Ｄ，则对这３种细胞株的杀伤作用明显增强。提示它们与ＴＮＦ有协同杀伤妇科肿瘤细胞的作用，这对妇科肿瘤的治疗提供了新的线索。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）与死亡受体结合后,可启动凋亡信号的转导。它对肿瘤细胞的高效杀伤作用使其成为最具有潜力的肿瘤治疗药物,但在TRAIL的研究领域中仍然存在许多热点问题有待解决。本文综述了近年来TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡的胞内机制、抗肿瘤活性及安全性问题的研究进展。     

TNF,SODD与肿瘤细胞凋亡

肿瘤细胞增殖与凋亡之间的平衡,同肿瘤细胞的发生发展及抗肿瘤治疗的疗效有着密切的关系。TNF和SODD为TNF-R1信号传导通路关键环节中同一受体的竞争性配体,在维系增殖与凋亡平衡过程中起着至关重要的作用。     

乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生TNF活性的研究

本文对70例不同类型乙型肝炎患者,包括重症肝炎26例、急性肝炎19例、慢性活动性肝炎13例、以及慢性迁延性肝炎12例的外周血单个核细胞的TNF活性及其在肝细胞坏死中的可能作用进行了研究。研究中采用微量全血体外刺激,即以LPS刺激单个核细胞产生TNF_α、以PHA刺激淋巴细胞产生TNF_β,然后用国际通用的L_(929)细胞标准法检测TNF的活性。研究发现重症肝炎患者的TNF活性(TNF_α为15.76 U/ml;TNF_β20.13 U/ml)明显高于正常人(TNF_α为3.10U/ml;TNF_β为0.21 U/ml)与急性肝炎患者(TNF_α为3.44U/ml;TNF_β为0.24 U/ml)。又慢活肝患者的TNF活性(TNF_α为11.42U/ml;TNF_β为7.54 U/ml)明显高于慢辽肝(TNF_α活性为5.92U/ml;TNF_β为0.41 U/ml)。结果表明TNF活性的增高与肝损害的程度与肝炎的活动性呈正相关。     

蓖麻毒素诱导小鼠肝脏产生肿瘤坏死因子

蓖麻毒素(ricin toxin,RT)在第一、二次世界大战期间曾被作为候选化学战剂,它是一种剧毒的生物战剂.近期资料表明:国外的军事机构和普通院校从没有放弃对该毒物的研究.我们探讨了小鼠RT中毒以后,体内的肝脏、肾脏、心脏、肺脏等组织出现广泛性的细胞变性、细胞坏死、血管破裂和组织出血等病理现象[Flexner S.J ExptlMed,1987;2;197],以及这些现象是否与肿瘤坏死因子(TNF)有关.     

蛋白合成抑制剂促进TNFα诱导大肠癌细胞凋亡

目的 探索放线菌酮和TNFα协同诱导人大肠癌LoVo细胞凋亡的发生规律。方法 用细胞体外培养方法。以放线菌酮和TNFα均小剂量作用于人大肠癌LoVo细胞,经Hoechst33258荧光染色,光镜观察形态改变,并用流式细胞术检测DNA断裂情况。结果 单用TNFα5万U/L或放线菌酮4mg/L,均未引起LoVo细胞凋亡效应,而两者协同,作用12h至48h,LoVo细胞逐渐出现明显的凋亡形态学改变和DNA断裂,结论 小剂量的放线菌酮和TNFα协同作用于人大肠癌LoVo细胞,出现明显的凋亡效应。     

肿瘤坏死因子受体基因转移增强TNF杀伤肿瘤细胞作用的研究

目的 :探讨肿瘤坏死因子受体 (TNFR)基因转移对肿瘤细胞表面 TNFR表达量的影响 ,进而观察其对TNF杀伤肿瘤细胞作用的影响。　方法 :建立 TNFR的逆转录病毒表达载体 ,通过转染包装细胞 PA 317产生完整病毒颗粒 ;人前列腺癌细胞株 PC- 3m和小鼠 Renca肾腺癌细胞株经病毒感染后 ,检测其细胞表面 TNFR数量及TNF在体内外对其杀伤作用的变化。　结果 :TNFR基因转移前后 PC- 3m细胞表面与 TNF结合的位点数量分别为 2 912个 /细胞和 8872个 /细胞 (P<0 .0 5 ) ,Renca细胞表面与 TNF结合的位点数分别为 783个 /细胞和 36 78个 /细胞 (P<0 .0 5 )。 TNFR基因转染后 ,TNF在裸鼠体内对 PC- 3m和 Renca的肿瘤抑制率分别增强 1.8和 2 .1倍。　结论 :以逆转录病毒为载体的基因转移方法 ,可以提高肿瘤细胞表面 TNFR的表达量 ,从而增强 TNF对肿瘤细胞的体外杀伤作用和体内抑制作用     

蛋白合成抑制剂促进TNFα诱导大肠癌细胞凋亡

目的探索放线菌酮和ＴＮＦ。协同诱导人大肠癌Ｌ。ＶＯ细胞凋亡的发生规律。方法用细胞体外培养方法，以放线菌酮和均小剂量作用于人大肠癌ＬｏＶｏ细胞，经Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８荧光染色，光镜观察形态改变，并用流式细胞术检测ＤＮＡ断裂情况。结果单用ＴＮＦａ５万［Ｊ／Ｌ或放线菌酮４ｍｇ／Ｌ，均未引起ＬｏＶｏ细胞凋亡效应。而两者协同，作用１２ｈ至４８ｈ，ＬＯＶＯ细胞逐渐出现明显的凋亡形态学改变和ＤＮＡ断裂。结论小剂量的放线菌阴和ＴＮＦＱ协同作用于人大肠癌Ｌ。ＶＯ细胞，出现明显的凋亡效应。     

重组干扰素γ及肿瘤坏死因子增强巨噬细胞产生超氧阴离子的初步研究

本文报道重组人干扰素(IFN-γ),肿瘤坏死因子(TNF-α)及细菌内毒素(LPS)刺激小鼠巨噬细胞,激发其产生超氧阴离子的能力。结果表明这两种细胞因子均可直接激发超氧阴离子的产生并呈剂量-时间依赖性,但内毒素无此作用。当肿瘤坏死因子或干扰素γ预激24h后再次激发可增强超氧阴离子产生,提示在炎症过程中,细胞因子诱导产生的超氧阴离子可能对胞内寄居病原菌及肿瘤细胞杀伤中起重要的作用。     

氧应激在TNFα诱导血管内皮细胞HO-1基因表达中的作用

目的探讨氧应激在肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导血管内皮细胞血红素氧化酶-1(HO-1)基因表达中的作用。方法RT-PCR法检测小鼠脑血管内皮细胞(BVEC)中HO-1mRNA表达,用氧化-还原敏感的荧光探针2,7-Dichlorofluorescein(DCF)检测细胞内氧化-还原水平。结果TNFα(5ng/ml)作用24h后,BVEC中HO-1的mRNA表达增加136%,但小分子抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC,20mmol/L)能明显阻断TNFα对HO-1mRNA表达的诱导作用;TNFα处理24hBVEC的氧应激水平明显升高,但可被NAC明显抑制(P<0.05)。结论ROS部分介导了TNFα对HO-1基因表达的诱导作用。     

人卵巢癌细胞C－erbB－2扩增及表达抑制TNF和LAK杀伤活性的实验研究

利用人卵巢癌细胞株，在确定Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增和过表达及Ｃ－ｅｒｂＢ２正常拷贝和低表达的基础上对Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增及表达与ＴＮＦ和ＬＡＫ杀伤活性的关系进行研究，并以非特异性杀伤物Ｈ２Ｏ２为对照。结果表明：Ｃ－ｅｒｂＢ－２扩增及过表达可明显抑制ＴＮＦ和ＬＡＫ的杀伤活性（Ｐ＜０．０５），但对Ｈ２Ｏ２的杀伤活性无显著影响。提示临床上部分卵巢癌患者用ＴＮＦ和ＬＡＫ治疗的疗效低或无反应性与Ｃ－ｅｒｂＢ－２的扩增及过表达有关。     

Relationships Between Superoxide Anion and Microangiopathy in Non-Insulin-Dependent Diabetes Mellitus

ＲｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓＢｅｔｗｅｅｎＳｕｐｅｒｏｘｉｄｅＡｎｉｏｎａｎｄＭｉｃｒｏａｎｇｉｏｐａｔｈｙｉｎＮｏｎ－Ｉｎｓｕｌｉｎ－ＤｅｐｅｎｄｅｎｔＤｉａｂｅｔｅｓＭｅｌｌｉｔｕｓＺｈａｏＭｉｎｇ（赵明）ＺｈａｎｇＷｅｎ（张雯）（Ｄｅｐａｒｔｍｅ...     

TNF与化疗药物联合应用对卵巢癌细胞株超微结构的影响

目的：探讨肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）和化疗药物联合应用的作用机制。方法：用３ＡＯ卵巢癌细胞株作为靶细胞，体外培养，分单独用药及联合用药组，于用药后不同时间收获细胞，制成电镜标本，在透视电镜下观察单独应用ＴＮＦ及ＴＮＦ与化疗药物（阿霉素、更生霉素）联合用药对卵巢癌细胞超微结构的改变。结果：电镜显示，单独应用ＴＮＦ，卵巢癌细胞无明显改变性多见，而细胞膜变化不明显。结论：ＴＮＦ与化疗药物有协同抗卵巢癌细胞的     

肺癌患者血清sTNFR I变化及意义

目的　研究可溶性肿瘤坏死因子受体 (sTNFRⅠ )在肺癌发病中的作用。方法　采用酶联免疫吸附 (ELISA)法检测了 30例肺癌患者血清sTNFRⅠ水平。结果　①肺癌患者血清sTNFRⅠ (3 5 4± 2 6 8) μg/L明显高于正常对照组 (1 5 2±0 6 5 ) μg/L ,P <0 0 0 1。②sTNFRⅠ值随病人的衰竭状态而渐增高。③sTNFRⅠ值随肺癌分期而渐增高。 结论　sTNFRⅠ在肺癌的发病中起重要作用 ,可做为肺癌临床观察的指标。     

重组人肿瘤坏死因子致肺癌细胞(LC-6)凋亡的研究

目的：探讨重组人肿瘤坏死因子（ｒｈＴＮＦ）引起肺癌细胞（ＬＣ－６）死亡的机制。方法：应用原位细胞毒性分析、ＤＮＡ解降片段琼脂糖凝胶电泳、形态学和流式细胞学测定的动态分析。结果：ｒｈＴＮＦ作用于肺癌细胞（ＬＣ－６）数小时后,引起细胞核ＤＮＡ解成寡聚核苷酸片断,说明肺癌细胞（ＬＣ－６）以细胞凋亡的方式死亡,并且细胞凋亡的程度与重组人肿瘤坏死因子作用的时间及浓度呈正相关。单纯应用放线菌素Ｄ后则肺癌细胞（     

肿瘤坏死因子α主要通过其受体1作用于鼠肾上腺皮质Y1细胞皮质醇的表达

背景和目的：全身炎症反应综合征时肿瘤坏死因子α（TNF-α）在导致肾上腺相对不足中起着重要的作用。为探讨TNF-α是通过其哪个受体来抑制皮质醇释放,我们研究肾上腺皮质Y1细胞TNF-α受体表达情况及其受体阻断与皮质醇释放间的关系。 方法: 应用RT-PCR和免疫细胞化学方法来评估Y1细胞中的TNF受体的表达。 合成与TNF受体1（TNF-R1）DNA片段相对应的shRNA序列,并克隆于表达载体pcDNA™6.2-GW/EmGFP中,然后转染Y1细胞。采用实时定量PCR（Q-PCR）检测转染shRNA或 mock-shRNA Y1细胞TNF-R1表达的阻断率,同时对转染的Y1细胞加入TNF-α 和 ACTH,检测Y1细胞皮质醇的表达水平。 结果： RT-PCR和免疫细胞化学方法,在肾上腺皮质Y1细胞检测到TNF-R1的表达,而检测不到TNF-R2的表达。shRNA 转染的Y1细胞中TNF-R1 mRNA表达明显低于mock shRNA转染的Y1细胞（P<0.05）。通过shRNA阻断TNF-R1表达,TNF-α就不能抑制ACTH促皮质醇的合成,shRNA 转染Y1细胞的皮质醇表达水平明显高于mock-shRNA Y1细胞(P<0.05)。 结论：我们的结果显示,在肾上腺皮质中,TNF-α抑制ACTH促皮质醇的合成是通过TNF-R1受体。     

新型人TNFα对小鼠Lewis肺癌的抗肿瘤作用

本文研究了一种重组人ＴＮＦα衍生物（ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ）对小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌的抗肿瘤作用。同时与原型重组人ＴＮＦα（ｒｈＴＮＦα）的抗肿瘤作用进行了比较，并对它们全身给药和局部给药的抗瘤效果作了对比。Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接种肿瘤细胞后ｄ７，将ｒｈＴＮＦαＤ１１ａ和ｒｈＴＮＦα以高、中、低三种剂量分别连续肌肉注射４ｄ，或瘤内注射３ｄ，停药后１ｄ处死动物，根据抑瘤率进行疗效评价。结果表明，ｒｈＴＮＦα     

胃肠道肿瘤患者外周血中SS,TNF-α,IL-6和sIL-2R检测的临床意义

目的:观察胃肠道肿瘤患者外周血生长抑素(SS)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、可溶性白介素-2受体(sIL-2R)表达水平的变化. 方法:正常对照组23例,胃癌组37例,结肠癌组23例,直肠癌组29例. 放射免疫法(RIA)检测SS, ELISA法检测TNF-α,IL-6和sIL-2R水平. 结果:与对照组相比,胃癌组、结肠癌组、直肠癌组SS水平明显降低,而血清中IL-6,sIL-2R水平则明显升高(P<0.05),且后两者在三种类型的胃肠道肿瘤间显示组间差(P<0.05);结肠癌组、直肠癌组TNF-α与对照组及胃癌组间差别有显著性(P<0.05). 结论:检测血液中SS,TNF-α,IL-6和sIL-2R对胃肠道肿瘤的诊断有一定的意义.     

Tumor necrosis factor alpha affect hydrocortisone expression in mice adrenal cortex cells mainly through tumor necrosis factor alpha-receptor 1

Background  Tumor necrosis factor alpha (TNF-α) is important in promoting relative adrenal insufficiency (RAI) due to systemic inflammatory response syndrome (SIRS). We identified the TNF-α receptor involved in the inhibition of adrenal corticotrophin (ACTH)-stimulated hydrocortisone release by studying the expression of TNF-α receptors in adrenal cortex Y1 cells and the effect of downregulating TNF receptors on ACTH-stimulated hydrocortisone release.

Methods  We used real-time PCR and immunocytochemistry to evaluate the expression of TNF receptors on Y1 cells. TNF-receptor 1 (TNF-R1) DNA fragments corresponding to the short hairpin RNA (shRNA)-sequences were synthesized and cloned into pcDNA^TM 6.2-GW/EmGFP expression vector. Knockdown efficiency of TNF-R1 expression was evaluated in miRNA transfected and mock-miRNA transfected Y1 cells by quantitative real-time PCR (Q-PCR). Hydro- cortisone expression levels were determined in TNF-R1-knockdown and control Y1 cells treated with TNF-α and ACTH.

Results  Mouse adrenal cortex Y1 cells were positive for type I TNF-R1, but not type II TNF-receptor (TNF-R2). Blocking TNF-R1 expression resulted in loss of TNF-α-mediated inhibition of ACTH-stimulated hydrocortisone expression, suggesting a role for the TNF-R1 related signaling pathway in ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis.

Conclusion  The inhibitory effect of TNF-α on ACTH-stimulated hydrocortisone synthesis was mediated via TNF-R1 in adrenal cortex.