雌激素快速诱导小鼠囊胚细胞中钙离子增加在囊胚着床中的作用

目的 观察雌激素快速诱导小鼠囊胚细胞中钙离子增加在囊胚着床中的作用。方法 获取小鼠囊胚,将其分为空白组、耦联牛血清白蛋白的大分子雌激素组（E2-BSA组）和钙离子螯合剂预处理再给予E2-BSA组（BAPTA+E2-BSA组）,采用免疫细胞化学染色结合共聚焦显微镜观察,囊胚与子宫内膜上皮细胞体外共培养和异体胚胎移植技术研究雌激素快速诱导的小鼠囊胚细胞中钙离子增加对囊胚细胞整合素的表达和定位以及对囊胚黏附和植入的影响。 结果 共聚焦显微镜观察结果显示E2-BSA可引起囊胚细胞整合素αv、β3的聚集,而BAPTA可阻断雌激素所引起的整合素的聚集和迁移。体外黏附实验结果显示,空白对照组和BAPTA+E2-BSA组的囊胚黏附率分别为35.5% 和26.7%,低于E2-BSA组的囊胚黏附率（65.6%,\P\P<0.05)。结论 雌激素诱导的小鼠囊胚细胞内钙离子的快速增加可引起整合素聚集,并在囊胚的黏附和植入过程中发挥重要作用。     

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮（NO）在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制,进行小鼠胚胎着床实验,分3个实验进行。实验1及实验2,于小鼠妊娠第3d和第1－6d分别腹腔内注射N－硝基－L－精氨酸甲酯[L－NAME,一氧化氮合酶（NOS）的非特异性竞争抑制剂]0.5-5mg和3mg,观察其对胚胎着床的影响。实验3,给予L－NAME＋L－精氨酸（NO的前体）,观察L－精氨酸对L－NAME作用的影响,并评价胚胎发育情况。上术3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现：与对照组相比,妊娠第3d腹腔注射L－NAME1－5mg可减少胚胎的着床位点数（P＜0.05）,腹腔注射4、5mg的L－NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期（妊娠3－5d）给予L－NAME均可减少胚胎着床位点数。此时,子宫内膜血管通透性的改变被抑制,缺少蜕膜样变,同时胚胎发育阻滞。L－NAME的这种抑制作用可被同时给予的L－精氨酸抵消。提示NO通过增加子宫内膜的血管通透性、子宫内膜的蜕膜化以及胚胎的发育而促进小鼠胚胎着床的发生。     

超声波对小鼠胚胎表达整合素及其着床能力的影响

目的：研究超声波照射对小胎胚表达整合素α1、α5、β1、β3的影响充及与其着床能力的关系。方法：取小鼠二细胞胚经超声波照射后体外培养至囊胚期,用免疫组化法检测其整合素α1、α5、β1、β3的表达及其着床能力的改变,并与未经照射的正常胚胎比较,结果：1、超声波照射组胚贴附率,滋养细胞外延生长率均显著低于正常胚胎。2、正常胚胎桑椹胚期即有α5、β1、β3整合素表达,而无α1表达：囊胚期α5、β1、β3表达增强,仍无α1表达：α1只出现在外延生长的滋养细胞。3、超声波照射组胚胎β3整合素的表达明显弱于正常组。且未见α1表达,而α5、β1的表达两组间无差异。结论：超声波照射使胚胎着床能力明显降低。可能与其影响胚胎细胞α1、3整合素的正常表达有关。     

小鼠桑椹期,囊胚期胚胎移植方法的探讨

本文报告桑棋胚和囊胚移植方法的改进，即对桑植胚和囊胚移植到受体鼠角内的方法加改进，并探讨影响该方法成功率的相关因素，结果表明，该方法简单易行且有助于提高移植成功率。     

GFP小鼠对三维体外着床模型的定位及验证

目的 本研究将基于已经建立的三维小鼠体外胚胎着床模型,运用绿色荧光（GFP）小鼠胚胎替代ICR小鼠胚胎,验证三维着床模型的可行性。方法 将孕第4天GFP小鼠及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠的内膜组织进行体外共培养。观察两组胚胎黏着率的差异。对GFP小鼠囊胚组通过荧光显微镜进行观察,共培养后进行组织学研究。结果 GFP小鼠囊胚及ICR小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h后的胚胎黏着率分别为46.6%及54.8%;两组黏着率之间差异无统计学意义（P=0.364）。GFP小鼠囊胚与ICR小鼠子宫内膜组织共培养28h及40h后均可在荧光显微镜下见到胚胎,组织学研究证实GFP小鼠囊胚可以黏着于ICR小鼠子宫内膜。结论 三维着床模型确实能够实现不同来源小鼠胚胎的黏附着床。运用GFP小鼠胚胎还发现了胚胎与子宫内膜组织之间存在着信息及分子联系。     

人胚胎囊胚期培养及相关因素研究

目的 分析受精后第3天 (D3)胚胎的细胞数、质量分级与囊胚形成之间的关系 ,比较不同囊胚培养液的囊胚形成率。方法 将体外授精 (IVF)患者胚胎移植后的剩余胚胎54个 ,移入含10 %合成血清代用品(SSS)的囊胚培养液 (IVC -Three、Blastocyst)或人输卵管液 (HTF)中 ,每天观察胚胎卵裂情况 ,直至退化或受精后第7天。 结果 总囊胚形成率29.6% ,囊胚形成率与D3胚胎细胞数呈显著正相关 (r=0.99,P<0.01) ,胚胎质量级别1～2.5级的卵裂球较3～4级者具有更高的囊胚形成率 (34.9%比9.1% )。IVC -Three培养液中囊胚形成率达56.1 % ,与其他两种培养液比较有显著差异 ( χ21=5.77,χ22=3.95,P<0.05)。 结论 序贯培养的囊胚期胚胎培养技术是简便可行的。D3胚胎细胞数及质量分级与囊胚形成有密切关系。IVC -Three培养液是良好的囊胚培养液 ,可应用于临床     

小鼠胚泡体外着床行为的研究

目的：用对比的方法观察纤粘连蛋白包被和与人蜕膜细胞共培养对小鼠胚泡体外着床的影响。方法：在FN包被组和共培养组分别移入胚泡观察并统计粘附率和铺展率。结果：FN包被组胚泡的粘附率(77．42％)与共培养组(93．33％)相比．差异无显著性(P＞0．05)，而共培养组的铺展率(80．00％)明显高于FN包被组(38．71％)．差异有圾显著性(P＜0．01)。结论：小鼠胚泡与人蜕膜细胞共培养是一个比较理想的体外着床馍型，可用来观察胚泡的粘附和铺展情况。     

囊胚期小鼠胚胎体外培养条件的研究

目的探讨体外不同培养条件对小鼠囊胚生长发育的影响。方法将妊娠d4小鼠囊胚分别培养在无血清培养液（组Ⅰ）、有血清培养液（组Ⅱ）和与无血清小鼠子宫内膜上皮细胞的共培养体系（组Ⅲ）中，观察囊胚的脱带率和扩展生长情况。结果组Ⅰ中的囊胚几乎不能脱带、生长，组Ⅱ和组Ⅲ的培养体系可以支持胚胎细胞的生长增殖。培养24h后，组Ⅲ囊胚的脱带率和扩展生长率明显高于组Ⅱ（P〈0.01），且组Ⅲ囊胚出现类似于“植入”的侵入行为。结论囊胚的孵出和生长发育有赖于外界培养条件，而囊胚与子宫内膜上皮细胞的共同培养，更接近体内发育环境，有利于囊胚的生长发育。     

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

降钙素对小鼠胚泡发育及植入的影响

目的:探讨降钙素对小鼠胚泡发育及植入的影响。方法:将孕4d小鼠胚泡随机接种到添加不同浓度降钙素的培养液内培养,观察记录胚泡的孵化、粘附及扩展等生长情况。于孕4d给小鼠子宫角注射降钙素抗体,孕8d检查胚胎植入数并进行组织学观察。结果:培养液内加入10nmol/L降钙素后,胚泡的孵化、粘附及扩展率均明显提高(P<0.01),注射降钙素抗体的小鼠,其胚胎植入数明显减少(P<0.001),镜下可见胚胎组织蜕化坏死,蜕膜细胞空泡变性。结论:降钙素可促进小鼠胚泡的孵化、粘附及扩展和促进胚泡植入。     

p38丝裂原活化蛋白激酶特异性抑制剂对小鼠早胚发育及植入的影响

目的观察p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）特异性抑制剂SB203580对小鼠早胚发育及植入的影响。方法①采用体外胚胎培养技术,将孕2?d小鼠早胚随机分组,接种到添加不同浓度抑制剂的培养液内进行培养,以观察p38MAPK特异性抑制剂对早胚发育的影响;②体内宫腔注射：取孕4?d小鼠,由子宫角注射不同浓度的SB203580,于孕8?d检查胚胎植入数,同时取子宫,观察内膜的组织学变化。结果①添加抑制剂组的早胚不能发育为胚泡,停滞在8～16细胞阶段。但去除抑制剂后继续培养,幼胚仍能发育到胚泡阶段;②注射SB203580组的小鼠,胚胎植入数明显少于对照组（P＜0.01）。镜下可见,其胚胎组织呈退化坏死状态,胚胎周围蜕膜细胞呈明显的空泡样变性,蜕膜及胚胎中均见大量血细胞浸润。结论①p38MAPK在小鼠植入前胚胎发育过程中起作用;②p38MAPK特异性抑制剂SB203580可抑制在体小鼠胚泡植入及植入后胚胎和蜕膜细胞的发育。     

小鼠胚泡黏附时已黏附侧与未黏附侧子宫内膜蛋白质组差异的研究

目的:用蛋白质组相关技术分析小鼠胚泡黏附时已粘附侧与未黏附侧子宫内膜蛋白质组的差异,探讨小鼠胚泡在双侧子宫黏附不同步现象发生的可能机制.方法:用固相pH梯度双向凝胶电泳(2D-PAGE)分别分离妊娠五天(D5)小鼠胚泡已黏附侧与未黏附侧子宫内膜的蛋白质组.银染显色,PDQuest 2DE软件分析.结果:图像分析测得两种胶的匹配率达82.5%,在等电点pI4～7、分子量14.0～75.4kD范围内分离得胚泡黏附侧小鼠子宫内膜蛋白点大约760个,胚泡未黏附侧小鼠子宫内膜蛋白点大约720个,其中至少60个蛋白点在两种子宫内膜间有2倍以上的量变.结论:小鼠双侧子宫内膜蛋白质的差异表达,是造成两侧子宫内膜胚泡附着不同步的一个可能原因.     

盐酸异丙嗪对小鼠胚泡植入的影响

目的 :研究盐酸异丙嗪对小鼠胚植入的影响。方法 :取孕 3～ 7d小鼠 ,每天上午 10时腹腔注射盐酸异丙嗪溶液 ;另取孕 4d小鼠 ,于上午 10时子宫角注入盐酸异丙嗪溶液 ,对照组同时用同法注射生理盐水 0 .2ml。于孕 8d检查胚胎植入数 ,同时 ,取子宫观察内膜的组织学及免疫组织化学变化。结果 :腹腔 2mg药物注射组抗植入率达 10 0 % ,腹腔 1mg药物组的抗植入率为 75 % ,子宫角药物注入组抗植入率达 75 % ,均明显少于对照组。组织学及免疫组化结果表明 ,盐酸异丙嗪可引起蜕膜细胞退化、解体 ,使蜕膜细胞不能正常形成纤维粘连蛋白 (FN)和层粘连蛋白 (LN)。结论 :盐酸异丙嗪对小鼠有明显的抗植入作用     

保存的人羊膜移植进行结膜表面重建

目的：观察用保存的人羊膜对结膜大片缺损患者进行结膜表面重建的效果。方法：对翼状胬肉,睑球粘连和结膜肿瘤患者手术后引起的大片结膜缺损进行保存的人羊膜移植。结果：在随访期间（4－36个月）,29例（33眼）中25例（29眼）术后没有复发,结膜上皮愈合稳定,没有出现明显的炎症和瘢痕,术后4例（4眼）患者结膜表面重建失败：初发性翼状胬肉1例（1眼）,复发性翼状胬肉2例（2眼）,睑球粘连1例（1眼。结论：羊膜移植可以用作翼状胬肉,睑球粘连,肿瘤等手术后的大片结膜缺损的结膜表面重建。     

保胎液对胚泡着床障碍小鼠着床位点数及分布形态影响的实验研究

目的观察保胎液对胚泡着床障碍模型小鼠着床位点数及分布形态的影响。方法采用米非司酮小鼠胚泡着床障碍模型。将孕鼠随机分为正常组、模型组、西药对照组和中药(高、中、低三种剂量)治疗组,从妊娠第1天起分别给予生理盐水、地屈孕酮和保胎液(高、中、低三种剂量)灌胃治疗。于妊娠第4天上午皮下注射米非司酮,每只0.08 mg。正常组不予任何处理。于妊娠第5天腹腔静脉注射1%浓度的Trypan Blue 0.3 mL,观察10 min,取出子宫,观察蓝染点,计算胚泡着床位点数。结果中药高、中、低治疗组,西药对照组,模型组小鼠胚泡着床位点数均低于正常组(P<0.05);与模型组比较,中药各治疗组、西药组小鼠着床位点数明显提高(P<0.05)。结论保胎液能够增加着床障碍小鼠的胚泡着床位点数,从而有利于胚泡的着床,提高妊娠率。     

新鲜羊膜移植治疗角膜溃疡23例

目的观察新鲜羊膜移植治疗角膜溃疡的疗效。方法将新鲜健康胎盘羊膜移植角膜缘外3 mm浅层巩膜上,促使角膜上皮生长和溃疡愈合,治疗23例23眼角膜溃疡。结果21眼溃疡愈合,前房积脓吸收形成不同程度的角膜瘢痕,2眼在移植早期羊膜溃烂溶解。结论新鲜羊膜移植是治疗角膜溃疡的有效方法。     

实验性小鼠皮肤癌基底膜分布变化的研究

目的研究实验性皮肤癌基底膜的变化。方法用甲基胆蒽诱发的Balb／c小鼠，对其癌组织基底膜的层粘蛋白进行免疫组化染色。结果在皮肤不典型增生，皮肤乳头状瘤和原位癌，基底膜呈完整的线性分布，随着肿瘤分化程度的降低，基底膜的线性分布出现不连续缺损，甚至基本消失。结论基底膜的分布状态与肿瘤组织的分化程度有密切关系。     

结膜瓣联合羊膜移植术治疗22例翼状胬肉疗效分析

[背景]比较分析结膜瓣联合羊膜移植术与单纯结膜瓣移植术治疗翼状胬肉的临床疗效.[病例报告]将原发性翼状胬肉患者45例(45眼)随机分为2个组,即结膜瓣联合羊膜移植组(22例)及单纯结膜瓣移植组(23例),分别对两组患者行胬肉切除,并行结膜瓣联合羊膜移植及单纯结膜瓣移植.术后随访6~12个月,结膜瓣联合羊膜移植组患者术后早期不适症状明显轻于单纯结膜瓣移植组,相比较有显著性差异.[讨论]结膜瓣联合羊膜移植术可减轻患者术后痛苦,改善术后眼表微环境,较单纯结膜瓣移植术更为理想.     

多层羊膜移植治疗真菌性角膜溃疡疗效观察

目的观察多层羊膜移植治疗真菌性角膜溃疡的临床效果。方法真菌性角膜溃疡16例,于手术显微镜下彻底剖切溃疡灶及周围水肿混浊的角膜组织,取3～5层羊膜修剪成与植床大小相当的块状,上皮面朝上贴敷于溃疡面,再取1块较大的羊膜覆盖于最外层并以100尼龙线缝合固定。结果16例(16眼)均临床治愈,溃疡面遗留不同程度的瘢痕。术后6个月视力0.04者3眼,0.02者6眼,指数/10cm7眼。结论多层羊膜移植治疗真菌性角膜溃疡方法简单,疗效较好,尤其适用于无条件作角膜移植的患者和基层医院。