食道癌ras癌基因产物P21免疫组织化学检测的研究

本文用免疫组化方法对３６例食道鳞癌、癌旁上皮及深部浸润癌组织的Ｐ２１蛋白进行半定量检测，以了解基因过量表达情况。结果证明，食道鳞癌组织中存在Ｐ２１蛋白过量表达，其表达强弱与肿瘤的分化程度成正比。     

P53和ras癌基因表达产物联合检测对胃癌早期诊断的意义

P53抑癌基因和ras癌基因表达产物(P53蛋白和P21蛋白)与肿瘤发生的关系越来越引起重视.本实验通过联合检测胃黏膜良性病变,胃黏膜上皮细胞不典型增生和早期胃癌标本中的上述两种蛋白,以探讨其在胃癌早期诊断中的价值.     

卵巢浆液性肿瘤血管生成与ras p21表达及临床预后

目的　探讨血管生成卵巢浆液性肿瘤 ras p2 1表达及预后的关系。方法　应用免疫组化 LSAB法 ,以 CD34单克隆抗体标记血管内皮细胞对 10例卵巢浆液性囊腺瘤 (囊腺瘤 )及 5 0例卵巢浆液性囊腺癌组织微血管密度 (MVD,微血管数 /2 0 0× )进行了观察。同时 ,检测肿瘤组织中 ras基因产物 p2 1蛋白的表达情况 ,并结合临床资料进行分析。结果　卵巢癌的 MVD显著高于囊腺瘤 (P<0 .0 5 ) ,ras p2 1过度表达组卵巢癌 MVD显著高于 ras p2 1非过度表达及阴性表达组 (P均 <0 .0 1)。病理分级 级及 级癌的 MVD均显著高于病理分级 级癌 (均 P<0 .0 1)。 Kaplan-Meier分析 MVD高密度组的生存率明显低于低密度组 (P<0 .0 1)。结论　卵巢浆液性肿瘤的血管生成与肿瘤细胞本身的生物学特性有关 ,肿瘤血管生成分析可以作为临床判断卵巢浆液性癌预后的指标之一。     

食管癌ras癌基因蛋白p21抑癌基因蛋白p53和DNA的定量研究

定量分析食管癌细胞ｒａｓｐ２１，ｐ５３蛋白表达和ＤＩ，ＰＩ对食管癌早期诊断预的作用。采用ＦＣＭ，应用单克隆抗体对５０例食管鳞状细胞癌组织及３９例残端组织蜡包埋标本定量检测显示，食管癌ｒａｓｐ２１，ｐ５３平均表达量，ＤＩ和ＤＩ均明显高于正常食管（Ｐ〈０．０１），淋巴结转移阳性组与阴性组ｐ５３蛋白高表达率分别为８３．３３％，６９．２３％（Ｐ〉０．０５）。３９例残端病理证实为阴性，不典型增生及原位癌中，     

胆囊胆汁中p53和K—ras基因的表达与大肠癌肝转移的关系

目的：研究大肠癌患胆囊胆汁中基因表达检测的可行性，探讨胆囊胆汁中微转移癌细胞与大肠癌肝转移间的关系。方法：应用DNA分析技术，检测33例大肠癌患胆囊胆汁中癌基因(p53和K—ras基因)的表达情况。结果：大肠癌33例胆囊胆汁中检出基因表达阳性17例(51．51％)，阳性检出与Dukes分期、肝转移显相关。随访发现胆囊胆汁中基因表达阳性，术后发生肝转移机会增加。结论：胆囊胆汁中微转移癌细胞的基因表达检测有助于判断大肠癌恶性程度和患预后，对早期诊断或预测大肠癌肝脏微小转移有一定的临床价值。     

P53,rasp21癌基因产物在肝细胞癌中的表达

应用免疫组织化学ＡＢＣ法，对３０例肝细胞癌、２０例肝细胞不典型增生、３０例肝硬变进行ｐ５３、ｒａｓＰ２１癌基因蛋白检测、结构表明，肝细胞癌Ｐ５３、Ｐ２１的阳性率分别为６０％、５６．６７％，肝细胞不典型增生Ｐ５３、Ｐ２１的阳性率为３４．５％，肝硬变Ｐ５３、Ｐ２１阳性率为４０％和５０％，而正常肝组织无一例阳性、肝细胞癌Ｐ５３、Ｐ２１的阳性明显高于不典型增生、肝硬变（Ｐ〈０．０５）和正常肝组织（Ｐ〈０．     

尿脱落细胞ras癌基因突变的检测

目的 评价尿脱落细胞ｒａｓ癌基因突变作为肿瘤标记物诊断膀胱移行上皮细胞癌（ＴＣＣ）的临床价值。方法 用聚合酶链反应－单链构象多态性分析技术（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）银染色法检测４８例ＴＣＣ患者晨尿脱落细胞中ｒａｓ癌基因外显子１突变,同时对其做尿脱落细胞学检查。对所有泳动变位的ＤＮＡ片段进行Ｓａｎｇｅｒ双脱氧链终止法测序。结果 发现健康者尿脱落细胞和非恶性肿瘤泌尿系统其他疾病患者的尿脱落细胞均无ｒａｓ癌基因突变这个指标,对Ⅰ（３２份）,Ⅱ（９份）,Ⅲ（７份）级ＴＣＣ的检出分别为１６份,４份,３份,均约占１／２。测序结果证实,所有泳动变位的ＤＮＡ片段均存在基因点突变,突变的位点：２２例位于第１２密码子上（Ｇ→Ｔ）、１例位于第１３例密码子上（Ｇ→Ｔ）。结合临床和病理资料分析,发现该基因突变与临床分期呈明显正相关,而且复发组     

rasP21在食管不典型增生和食管癌细胞表达的定量研究

应用流式细胞术和细胞免疫荧光染色技术，对食管癌前病变和食管癌细胞ｒａｓＰ２１进行了定量研究，并分析ｒａｓＰ２１的表达量与ＮＤＡ倍体和细胞增殖指数的关系。结果表明：食管癌细胞ｒａｓＰ２１表达量（荧光指数ＦＩ）明显高于食管癌前病变的表达量，并发现ｒａｓＰ２１表达的荧光指数随组织学分级增高升高，ＤＮＡ倍体与Ｐ２１表达量密切相关。     

子宫内膜腺癌的p21ras,p53的表达及意义

应用免疫组化LSAB法对33例原发性子宫内膜腺癌进行p21ras、p53的检测，结果显示子宫内膜腺癌p21ras表达为51．5％，p53表达为78．8％，p21ras和p53在正常子宫内股无表达，说明p21ras和p53在子宫内膜腺癌的表达较特异。本研究显示p53与子宫内膜腺癌的病理分级有关（P＜0．05），p21ras与转移及临床分期有关（P＜0．05）。在子宫内膜腺癌中，p53的表达与p21ras的表达之间呈显著相关（P＜0．01）。另外发现随着肿瘤分化越差p21ras、p53阳性率增加。本研究提示子宫内膜腺癌的发生、发展，与p21ras、p53有关，p21ras、p53可作为诊断子宫内膜腺癌的参考指标。     

食管癌p53、p21和nm23基因表达的免疫组化研究

癌抑制基因p53是细胞生长控制的主要生化调节因子[1],它的异常或突变可能与肝癌、食管癌等发生和发展密切相关[2,3].p21癌基因能诱导肿瘤的形成,已发现在肺癌、结肠癌和食管癌中均有表达[3,5,6].     

甲状腺髓样癌的CGRP原位杂交检测

目的 ＣＧＲＰ在甲状腺髓样癌表达的意义及病理诊断和鉴别诊断的价值。方法 选择甲状腺髓样癌１０例,乳头状癌５例,滤泡癌５例,未分化癌５例,滤泡型腺瘤５例,行地高辛标记ＣＧＲＰ ｃＤＮＡ探针原位杂交检测。结果 １０例髓样癌和１例滤泡性腺癌呈强阳性;其它均呈阴性。结论 ＣＧＲＰ原位杂交分析是甲状腺髓样癌有价值的诊断和鉴别诊断方法。     

良恶性胃黏膜中p21ras、表皮生长因子受体和p53蛋白的表达及意义

目的研究p21^ras、表皮生长因子受体（EGFR）和p53突变蛋白在良恶性胃黏膜组织中的表达及其对胃癌早期诊断的意义。方法应用免疫组织化学方法对31例胃癌、49例癌前病变、21例萎缩性胃炎和28例正常胃黏膜组织中的p21^ras、EGFR和p53突变蛋白的表达进行检测。结果31例胃癌组中,p21^ras、EGFR和p53突变蛋白的阳性表达率分别为64．5％、54．8％和32．3％;49例癌前病变组中,p21^ras、EGFR和p53突变蛋白的阳性表达率分别为59．2％、53．1％和22．4％;癌前病变组和胃癌组间3种基因蛋白的阳性表达率差异均无显著性（均为P〉0．05）,但均显著高于正常胃黏膜组（P〈0．05或P〈0．01）。结论胃癌和癌前病变胃黏膜组织中存在多种基因的表达异常,检测胃黏膜中p21^ras、EGFR和p53蛋白对胃癌早期诊断的意义不大。     

p53、p73蛋白在甲状腺乳头状癌中表达的意义

目的:探讨甲状腺乳头状癌(PTC)中p53、p73蛋白的表达情况及其临床意义。方法:选取100例PTC病理标本和31例良性甲状腺病变病理标本,应用免疫组化SP法检测两者中p53和p73蛋白的表达情况,并分析p53、p73蛋白与临床病理特征间的关系及其相互关系。结果:PTC组织中p53的阳性表达率为72.0%,p73的阳性表达率为67.0%,较良性甲状腺病变组织(均为12.9%)中的阳性表达率高,差异均有统计学意义(P均<0.01)。p53在TNM分期Ⅰ和Ⅱ期患者中的表达率较Ⅲ和Ⅳ期患者低(P<0.05)。结论:PTC组织中p53、p73的高表达与肿瘤的发生、发展有一定相关性,可作为PTC发生、发展的客观指标。     

p21Ha-ras原核表达载体的构建、表达及纯化的研究

目的：构建PET-28a（＋）Ha-ras原核表达质粒，并表达、纯化得到p21ras蛋白，为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及p21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定基础。方法：培养人肝癌细胞株7703，提取总RNA，通过RT-PCR特异扩增出Ha-ras cDNA，然后应用TA克隆策略将纯化后的Ha-ras插入至中间载体pMD18-T vector中得到重组质粒PMD-18T vector-ras．重组质粒PMD-18T vector-Ha-ras经过BamH I和Hind Ⅲ双酶切后纯化回收得到具有黏性末端的Ha-ras cDNA．将PET-28a（＋）同样经过BarnH I和Hind Ⅲ双酶切后纯化回收得到与ras cDNA相同的黏性末端的线形质粒片段，将具有黏性末端的ras cDNA与酶切后的PET-28a（＋）定向连接，构建出重组质粒PET-28a（＋）-Ha-ras，经酶切鉴定，并通过核苷酸序列测序证实。将鉴定正确的PET-28a（＋）．Ha-ras转入感受态BL-21（DE3）中诱导表达，利用组氨酸“标签”（His-Tag）对p21ras进行金属螯合亲和层析纯化。结果：测序分析证实，克隆入PET-28a（＋）的Ha-ras序列与Genbank登录号为“NM_005343”的Ha-ras cDNA序列一致，将重组质粒PET-28a（＋）．Ha-ras转化BL21（DE3），用IPTG诱导目的蛋白表达。SDS、PAG和蛋白纯化结果表明，PET-28a（＋）-Ha-Ras在E-coli中获得可溶性高表达，经Ni-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了PAGE纯的p21ras蛋白。结论：成功构建了原核表达载体PET-28a（＋1）-Ha-ras，并经表达、纯化得到活性形式的p21ras蛋白，从而为研究p21ras在肿瘤发病中的作用和机制以及P21ras细胞内抗体抗肿瘤的研究奠定了基础。     

血小板衍生生长因子受体与P21ras在大肠良恶性肿瘤中的表达及意义

目的研究血小板衍生生长因子受体(PDGFR)与P21^ras在大肠良恶性肿瘤中的表达，及其与临床病理指标的关系，以探讨其在大肠癌发生、发展中的作用。方法应用免疫组化法检测22例大肠腺瘤，40例大肠癌中PDGFR—α、P21^ras的表达情况，分析它们与大肠癌临床病理指标的关系。结果22例大肠腺瘤及40例大肠癌中PDGFR低表达率分别为72．7％和25％，40例大肠癌中PDGFR高表达率为42．5％，22例大肠腺瘤中无PDGFR高表达(P=0．002)。大肠癌PDGFR染色强度随肿瘤细胞的分化程度增高而增高。PDGFR的表达与组织学分级、临床Dukes分期有关(r=-0．315，-0．478；P=0．048，0．002)。PDGFR的表达与P21^ras的表达密切相关(r=0．442，P=0．004)：结论PDGFR在大肠肿瘤的发生发展中起重要作用，检测大肠肿瘤组织中PDGFR的表达对大肠癌早期诊断及判断大肠癌预后有一定意义。     

辛伐他汀对大鼠血管平滑肌细胞增殖及FGFR1与p21ras表达的干预作用

目的:观察辛伐他汀对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中FGFR1、p21ras蛋白表达的影响。方法:体外培养大鼠VSMC,建立VSMC增殖模型,应用不同浓度的辛伐他汀干预,MTT法测定细胞增殖活力;免疫印迹法检测FGFR1与p21ras蛋白的表达。结果:与对照组比较,辛伐他汀各浓度组细胞增殖活力均显著降低(P<0.05);与对照组(FGFR1208.07±10.70,p21ras202.43±12.36)相比,低剂量组(FGFR1181.47±7.43,p21ras182.00±8.98)的FGFR1、p21ras表达差异无显著性(P>0.05),中剂量组(FGFR1144.90±9.03,p21ras147.03±9.13)、高剂量组(FGFR1104.43±8.08,p21ras100.3±8.37)的表达均较明显降低(P<0.05),中、高剂量组FGFR1、p21ras表达较低剂量组均显著降低(P<0.05),高剂量组表达又较中剂量组显著降低(P<0.05),呈剂量依赖性。结论:辛伐他汀能抑制VSMC增殖,该作用是通过抑制FGFR1、p21ras蛋白表达实现的,这可能是辛伐他汀治疗动脉粥样硬化、再狭窄及高血压等心血管疾病的重要机制之一。     

骨巨细胞瘤mdm2和p21~(H-ras)的免疫组化研究

目的　探讨癌基因mdm2和 p2 1H ras在骨巨细胞瘤 (GCT)中的表达及与GCT病理分级和复发的关系。方法　应用SP免疫组织化学方法检测mdm 2和p2 1H ras在 5 2例GCT(GCT按Jaffe分级 :Ⅰ级 15例、Ⅱ级 2 5例、Ⅲ级 12例 )中的表达。结果　 18例mdm 2表达呈阳性 ,阳性率 34.6 % ,7例 p2 1H ras表达呈阳性 ,占 13 .5 %。其阳性表达与病理分级均无显著性相关 (P值分别为 0 .871;0 .6 5 8)。mdm 2和 p2 1H ras在复发和无复发的病例中 ,阳性表达率分别为 6 1.5 %、2 5 .6 %和2 3 .1%、10 .3 %。两者同时阳性表达的有 3例 ,mdm2和p2 1H ras同时过表达与GCT病理分级无显著性相关 (P =0 .75 7) ,而与其复发有显著性相关 (P =0 .0 41)。结论　mdm 2和 p2 1H ras在GCT中的表达与病理分级无关而与其复发有关。     

杂色曲霉素处理后体外培养的人胚肺细胞增殖情况及p53和rasp21蛋白表达的变化

以人胚肺组织体外培养和流式细胞光度术相结合的方法，分析河北省肿瘤高发区饮食优势污染霉菌毒素－杂色曲霉素处理后的人胚肺组织细胞ＤＮＡ含量、增殖状态和抑癌基因ｐ５３、癌基因ｒａｓｐ２１蛋白表达的变化及其相互关系．结果表明，杂色曲霉素处理后，体外培养的人胚肺细胞周期Ｓ期细胞比例、增殖指数明显增高，ｐ５３和ｒａｓｐ２１均出现过度表达，提示杂色曲霉素可诱发人胚肺细胞恶性转化。