可溶性TLR4/MD-2体外对炎症反应的抑制作用

目的探讨利用可溶性TLR4受体复合物（TLR4/MD-2）阻断LPS/TLR-4信号通路,缓解过度炎症反应的可行性及其机制。方法用大肠杆菌K12感染正常人外周血的方法建立体外感染模型,观察加入可溶性TLR4/MD-2受体复合物后炎症介质IL-6、IL-8以及中性粒细胞表面CD11b、巨噬细胞表面CD80等的表达变化。结果与结论可溶性TLR4/MD-2受体复合物能显著降低细菌感染后炎症性细胞因子IL-6、IL-8的分泌水平,以及炎症细胞表面共刺激分子的表达。可溶性TLR4/MD-2能有效阻断体外感染模型中炎症介质的释放,为探索新的炎症性损伤防治途径提供了实验依据。     

脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化规律

目的探讨脓毒疗人鼠肝脏组织内毒素复合受体—Toll样受体4（TLR4）／髓样分化蛋白-2（MD-2）mRNA的表达变化，研究其与肝脏组织肿瘤坏死因子-α（TNF—α）mRNA表达的父系。方法腹腔注射内毒素（LPS）5mg／kg制作大鼠脓毒症模型。动物分为正常对照组（20只）及内毒素注射后1h、2h、6h组（各20只）．检测肝脏组织TLR4／MD-2以及TNF-α mRNA的表达。结果LPS注射后1h，TLR4／MD-2及TNF-α mRNA表达开始升高并达高峰．伤后2～6h逐渐下降，各时间点的表达量均显著高于对照组（P〈0．01）．TLR4与MD-2 mRNA的表达呈明显正相关（P〈0．05）．且分别与TNF—α mRNA的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论LPS可迅速上调肝脏组织TLR4／MD-2的基闪表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α的基因表达。脓毒症时TLR4识别LPS是可能以TLR4／MD-2复合体的形式完成的．且在识别过程中MD-2是TLR4必需的作用分子。     

乌头碱与新乌头碱对巨噬细胞RAW264．7的作用研究

目的:探索乌头碱、新乌头碱对巨噬细胞RAW264.7活性、分泌TNF-α和表达CD91、CD13的抑制作用.方法:加入不同浓度的乌头碱、新乌头碱与巨噬细胞RAW264.7共培养1 d后,采用MTT法检测巨噬细胞活性,采用ELISA方法检测培养液中TNF-α的含量.制作细胞爬片,与不同浓度的乌头碱、新乌头碱共培养,细胞爬片免疫组化染色,检测CD91和CD13的表达情况,采用图像分析系统对细胞爬片免疫组化染色图像进行分析,测量IOD值.结果:不同浓度的乌头碱、新乌头碱对巨噬细胞活性有不同程度的抑制作用,抑制巨噬细胞分泌TNF-α,浓度越大,抑制作用越强.乌头碱和新乌头碱均能抑制巨噬细胞表达CD91和CD13,其抑制作用随浓度变化而不同,20 mg/100 ml对巨噬细胞表达CD91和CD13的抑制作用最强.结论:乌头碱、新乌头碱均能抑制巨噬细胞RAW264.7的活性及分泌TNF-α,对巨噬细胞表达CD91和CD13有明显的抑制作用.     

骨髓间充质干细胞对大鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体mRNA和蛋白表达的影响

目的 观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)对肺泡巨噬细胞Toll 样受体(toll-like receptor,TLR2/4)基因和蛋白的影响,为探讨骨髓MSCs移植对早期炎症介质的影响及炎症级联反应的调控机制做铺垫。 方法 巨噬细胞分为PBS对照组、骨髓MSCs对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对照组和LPS+骨髓MSCs处理组,各组均取1,3,6,12 h时相点。流式细胞仪检测骨髓MSCs表面标记阳性细胞率和巨噬细胞TLR2/4蛋白的表达;RT-PCR方法检测各组不同时相点巨噬细胞TLR2/4 mRNA表达变化;ELISA法检测各组不同时相点上清液中TNF-α浓度变化。 结果 与PBS对照组、骨髓MSCs对照组比较,LPS对照组巨噬细胞TLR2/4mRNA和蛋白表达明显升高(P＜0.01),1h时开始增高,12h时达到峰值;同时TNF-α浓度也明显增高(P＜0.01),6h时TNF-α浓度达到峰值。与LPS对照组比较,LPS+ MSCs组巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01),TNF-α浓度也降低(P＜0.01)。 结论 LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达升高,TNF-α浓度也升高,后者峰值时间出现略早,说明TLR2/4表达与TNF-α之间存在一个正反馈环;骨髓MSCs可以明显降低LPS刺激后巨噬细胞TLR2/4 mRNA和蛋白表达及TNF-α浓度,说明骨髓MSCs打破了上述正反馈环。     

蜂毒肽MP-1体外拮抗内毒素作用及其机制

目的 观察蜂毒肽MP-1的体外抗内毒素(LPS)活性并探讨其作用机制. 方法 应用生物传感器检测MP-1对类脂A(lipid A)的亲合力,采用动态比浊法鲎试验检测MP-1对LPS(2μg/L)的中和作用,激光扫描共聚焦显微镜观察不同浓度MP-1(5,10,20,40 μmol/L)干预后异硫氰酸荧光素标记LPS(FITC-LPS,100 μg/L)与小鼠RAW264.7细胞的结合,免疫细胞化学法观察MP-1对LPS(100μg/L)诱导的RAW264.7细胞TLR4表达的影响;实时荧光定量RT-PCR和ELISA法检测不同浓度MP-1作用下LPS(100μg/L)刺激的RAW264.7细胞TLR4、TNF-α和IL-6基因及蛋白的表达;MTT法检测MP-1对RAW264.7细胞活力的影响. 结果 MP-1具有一定的结合lipid A及中和LPS的作用,在10 μmol/L浓度可显著抑制FITC-LPS与RAW264.7细胞结合(P<0.05),并对LPS刺激的小鼠RAW264.7细胞TLR4、TNF-α和IL-6的基因及蛋白表达有抑制作用(P<0.05或<0.01),该作用具有一定的剂量效应关系.MP-1体外实验浓度对细胞活力无影响(P>0.05). 结论 MP-1可能通过中和LPS作用,阻断LPS与RAW264.7细胞膜受体的结合,从而抑制LPS介导的细胞活化.     

JAK/STAT信号通路在胰弹性蛋白酶诱导大鼠Kupffer细胞分泌促炎因子中的作用

目的 探讨JAK/STAT 信号通路在胰弹性蛋白酶(elastase)诱导Kupffer细胞分泌促炎症因子中的作用机制.方法 采用酶消化法和密度梯度离心法将提取的肝脏Kupffer细胞分为4组:A组(正常对照组,在培养基上清液中加入30μl/ml生理盐水);B组[用50ng/ml脂多糖(LPS)进行处理];C组(用50ng/ml LPS和1U/ml elastase进行处理);D组[用AG490(30nmol/)预先刺激0.5h后,再用LPS(50ng/ml)和elastase(1U/ml)处理].采用酶免疫吸附(EIJSA)法检测Kupffer细胞上清液中IL-6和TNF-α含量;Western blotting法检测细胞总蛋白中JAK2的表达情况.结果 与A组比较,B组在给予LPS刺激后,JAK2的表达及上清液中IL-6和1NF-α的含量均明显增加(P<0.01);C组在同时给予LPS和elastase刺激后,JAK2的表达显著升高,上清液中IL-6和TNF-α含量与B组比较亦显著增加(P<0.01);而D组在预先给予AG490处理后,JAK2蛋白的表达明显下降,上清液中IL-6和TNF-α含量也有不同程度降低,与C组比较差异有统计学意义(P<0.01),但与B组比较,各值仅有轻微变化,差异无统计学意义(P>0.05).结论 抑制JAK/STAT通路的活化可下调elastase诱导Kupffer细胞分泌促炎症因子,有助于减轻急性胰腺炎时的炎症反应和肝损伤.     

大鼠严重创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体2/4基因表达及受体反应性

目的 观察大鼠创伤后腹腔巨噬细胞Toll样受体(TLR)2/4基因表达及受体反应性变化.方法 建立大鼠严重创伤(右侧胸部撞击伤复合双侧股骨闭合性骨折)模型,分别于创伤后2、6、12、24小时取腹腔巨噬细胞,以逆转录-聚合酶联反应(RT-PcR)测定TLR2/4的mRNA表达,以脂多糖(LPS)、Pam3CSK4刺激后取细胞上清液测定肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 创伤后2小时腹腔巨噬细胞TLR2、TLR4的mRNA表达较正常对照组降低(P<0.05),直至创伤后24小时.行不同浓度LPS、PandCSK4刺激后细胞上清液TNF-α水平较对照组降低(P<0.01).结论 严重创伤后腹腔巨噬细胞TLR2/4基因表达降低,受体反应性下降.     

创伤患者外周血单核细胞Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化

目的 研究创伤患者外周血单核细胞内内毒素复合受体-Toll样受体4（TLR4）/髓样分化蛋白-2（MD-2）mRNA的表达变化，观察其与临床预后的关系。方法 35例创伤患者[损伤严重度评分（ISS）≥9分]与14例正常对照，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法扩增TLR4，MD-2，以β肌动蛋白（β-actin)的表达作为内参照，比较TLR4，MD-2的表达水平；采用鲎试剂法测血浆脂多糖（LPS）浓度；同时观察患者的预后情况。结果 所观察的创伤患者中，血浆LPS浓度均发生不同程度的升高；TLR4，MD-2基因的表达均降低，但预后良好的可在伤后第5天恢复正常水平，预后差的在伤后第5天的表达仍处于低水平。结论 创伤可引起内毒素血症创伤后人外周血单核细胞内TLR4，MD-2mRNA的表达与患者的免疫机能，预后情况密切相关。     

术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4及其下游细胞因子表达的变化

目的 探讨术后疼痛大鼠切口组织Toll样受体4(TLR4)及其下游细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达的变化. 方法 健康成年雄性SD大鼠74只,体重200～250 g,建立大鼠术后疼痛模型.于术前1d、术后0.5,1,2,6,12h及1,2,3,5,7d测定术侧与非术侧机械缩足反射阈值(PMWT);于术前1d、术后2,8h、1,2,3,5,7d采用荧光定量PCR法检测皮肤切口组织TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA的表达. 结果 与术前比较,大鼠术侧术后0.5 h～5 dPMWT降低,术后2h术侧切口组织TLR4mRNA表达下调,之后逐渐升高,IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA于术后2,8h、1,2,3,5d表达上调(P＜0.05),非术侧PMWT差异无统计学意义(P＞0.05);术侧PMWT术后6h最低,之后逐渐升高,术侧切口组织TLR4mRNA术后2d表达水平最高,IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA分别于术后2h、1d、3d表达水平最高(P＜0.05).TLR4、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达水平与术侧PMWT呈负相关(r=-0.501,-0.743,-0.893,-0.657,P＜0.05),IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA与TLR4 mRNA表达水平呈正相关(r =0.764,0.283,0.667,P＜0.05). 结论 术后疼痛大鼠切口组织TLR4及其下游炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α mRNA表达上调,该变化可能参与了术后疼痛的产生和维持.     

2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇对内毒素诱导巨噬细胞活化的影响

目的 检测2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇对细菌内毒素诱导的巨噬细胞RAW264.7释放TNF-α、IL-6及′TNF-α mRNA表达的影响.方法 RAW264.7细胞经不同浓度(0、10、20、40、80、160 mg/L)2′,5,6 ′,7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,ELISA法分别检测LPS( 100 μg/L)刺激的RAW264.7细胞释放TNF-α和IL-6的水平,Real-Time PCR法检测TNF-α mRNA的表达水平.MTT法检测2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞活力的影响,以排除实验用量2 ′,5,6 ′,7-四羟基二氢黄酮醇的细胞毒性作用.结果 不同浓度的2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇预处理后,可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞释放′NF-α和IL-6,显著抑制TNF-α mRNA的表达,并都具有量效关系.MTT实验结果显示,低于320 mg/L浓度的2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇对RAW264.7细胞无明显的毒性作用.结论 2′,5,6′,7-四羟基二氢黄酮醇能够拮抗LPS对炎症反应细胞的刺激效应,有望成为脓毒症防治药物的候选药物前体.     

LC/MS/MS法测定法罗培南血尿药浓度及药动学研究

目的研究法罗培南钠片在健康人体内的药动学及饮食对药动学的影响。方法药动学试验：采用低、中、高三个剂量组的平行试验设计；饮食对人体药动学的影响试验：采用自身对照的双周期交叉试验设计。血浆样品处理后采用LC／MS／MS测定血药浓度。结果空腹po100、200、400mg法罗培南片，主要药动学参数AUC和Cmax随剂量呈线性相关。进餐后影响药物的Tmax和Cmax，其他药动学参数无变化。给予法罗培南在100、200、400mg的剂量，受试者尿中0～24h原形药物的平均累积排泄率分别为4．52％、7．73％和3．28％。结论LC／MS／MS方法操作简单，结果准确，专属性强，灵敏度高，适用于法罗培南人体药动学研究。     

LC/MS/MS分析方法测定人血浆中匹多莫德的浓度

目的建立LC/MS/MS测定人血浆中匹多莫德的浓度。方法以舒巴坦为内标,采用甲醇-1%甲酸水溶液(10∶90,v/v)为流动相,以SymmetrySheildC18(3.5μm,20cm×2.1mm)色谱柱为分析柱,通过电喷雾电离源(ESI),以正离子多离子反应监测(MRM)方式进行检测。用于定量分析的离子反应分别为m/z245.2→m/z134.0(匹多莫德),m/z234.0→m/z124.2(舒巴坦)。结果匹多莫德线性范围0.010~20.0mg·L-1,定量下限为0.010mg·L-1(n=5)。日内、日间的RSD均<6.7%,平均回收率>90%。结论本法专属性强,样品处理方便,灵敏度高,适用于匹多莫德临床药动学研究。     

11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸的定量分析

目的:用GC/MS/MS法测定尿中11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸(THC-COOH)的浓度.滥用大麻后,主要起精神兴奋作用的是11-羟基-△9-四氢大麻酚二酸(THC-COOH),它也是鉴定滥用大麻的依据.GC/MS/MS提供了灵敏可靠的鉴定技术.方法:本方法在进入GC/MS/MS分析之前, 尿样要进行碱水解(10%KOH甲醇溶液), 以破坏其结合型,然后用浓盐酸HCl和冰醋酸HAc调至pH=3.5左右, 加2ml正庚烷提取3次, 在N2下吹干.残渣衍生化后, 进1μl于GC/MS/MS进行分析.结果: 本方法能灵敏地检测到15ng/ml左右的THC-COOH.结论: 满足IOC检测要求.     

LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮浓度及其在药代动力学研究中的应用

目的：建立LC／MS／MS测定比格犬血浆中丁螺环酮的方法,并应用于其缓释制剂药代动力学研究。方法：血浆样品经液-液萃取,内标选用曲马多,色谱柱采用Zorbax SB-C18柱（2．1mm×100mm,3．5μm）;流动相为甲醇-水-甲酸（40：60：0．1）,流速0．2ml／min;用美国Finnigan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪器,配有电喷雾离子化电离源（ESI）,正离子检测模式,扫描方式为选择反应监测（SRM）,用于定量分析的离子反应分别为m／z 386．2→121．97（丁螺环酮）和m／z 264．3→58．0（内标,曲马多）。结果：测定丁螺环酮的线性范围为0．025→7．5μg/L,相关系数为0．99893,提取回收率为72．2％,方法回收率为99．1％,日内日间精密度均小于10．7％,血浆中丁螺环酮的最低定量下限为0．025μg／L。结论：该方法简便、快速、准确,灵敏度高,专一性好,成功应用于丁螺环酮缓释制刺的药代动力学研究。     

液相色谱-串联质谱法测定人血浆中拉米夫定浓度

 目的 试图建立测定人血浆中拉米夫定浓度的液相色谱-串联质谱法.方法 以吉西他滨为内标,内标法定量.流动相:甲醇-10 mmol/L乙酸铵(12: 88,v/v);质谱采用离子喷雾离子源,扫描方式为多反应监测(MRM),用于定量分析的离子反应分别为m/z 230m/z 111.9(拉米夫定)和m/z 263.8m/z 111.9(吉西他滨);药动学参数采用DAS2.0软件处理获得.结果 拉米夫定和内标吉西他滨的保留时间分别为2.9 min和2.4 min;拉米夫定的线性范围为0.0100~2.0000 μg/ml ,r=0.9996,回归方程:Y=0.0032X+0.0003,最低检测浓度为0.0100 μg/ml;提取回收率为95%～105%范围内;日内日间精密度RSD<6%.结论 此法适合人体血浆拉米夫定浓度的监测及生物利用度研究,结果准确、可靠.     

LC／MS／MS法测定中国健康志愿者血浆中瑞舒伐他汀浓度及药动学

目的 建立人血浆中瑞舒伐他汀的液相色谱-质谱-质谱联用测定方法，研究中国健康人体药代动力学。方法 以氢氯噻嗪为内标物，采用液相色谱-质谱-质谱联用法，电喷雾电离源选择性正离子峰检测。测30名健康男性志愿者单剂量口服瑞舒伐他汀钙片的体内血药浓度，获得药动学参数。结果 口服瑞舒伐他汀钙片5、10、20mg后的主要药代学参数：达峰时间Tmax分别为（3．10±0．99）、（2．00±0．82）、（3．40±1．58）h；峰值血浆浓度Cmax分别为（8．32±2．44）、（14．8±3、97）、（20．1±5．0）ng·ml^-1；药时曲线下面积AUC0-∞分别为（77．0±22．6）、（153±38）、（270±61）ng·h·ml^-1；AUCo．1分别为（75．8±22．0）、（151±37）、（258±62）ng·h·ml^-1；T1／2分别为（13．0±3．9）、（12．5±3．5）、（18．5±4．9）h。结论 受试者口服瑞舒伐他汀钙片后，在人体内表现为线性药代学特征。     

LC/MS/MS法测定家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物含量及其药代动力学研究

目的建立准确、灵敏、可靠的LC/MS/MS方法,定量检测家兔血浆和房水中咪哒酚衍生物浓度,并用于家兔给予咪哒酚衍生物滴眼后血浆及房水中药代动力学研究。方法血浆及房水样品经蛋白沉淀前处理,内标选用Amms,液相色谱柱为TOSOHTSKgel Amide,流动相为含0.1%甲酸的甲醇∶水（80∶20,体积比）,仪器选用Finni-gan公司TSQ Quantum型液相色谱-质谱联用仪,采用电喷雾离子化电离源（ESI）,选择反应离子监测（SRM）方式进行正离子检测,用于定量分析的离子反应分别为m/z 381→308（咪哒酚衍生物）和m/z 285→138（Amms）。结果在本实验条件下,咪哒酚衍生物与内标Amms分离良好,保留时间分别为1.48和1.55 min,血浆和房水中药物浓度分别在5~2000和10~10 000 ng/ml范围内线性关系良好,相关系数（r2）分别为0.9971和0.9999,定量下限分别为5和10 ng/ml,回收率均大于80%,日内、日间精密度均小于15%（n=5）。结论该方法快速、准确、灵敏度高,专属性好,可用于咪哒酚衍生物在家兔体内的药物代谢动力学研究。     

PET/MRI of the breast

The future clinical use of the combination of positron emission tomography (PET) with 2-Fluoro[F-18]-2-Deoxy-d-Glucose (FDG)and MRI is still unclear. If a patient requires a PET and breast DCE-MRI for staging purposes, both scans can be done in the same visit. In the breast, DCE-MRI is better at lesion detection (sensitivity), margin evaluation, and has a higher specificity than CT. The potential for multiparametric qualitative and quantitative imaging is also an advantage of PET/MRI which provides opportunity to improve tumor characterization and may ultimately lead to outcome prediction. This review discusses technical and clinical aspects of this emerging technology in breast cancer patients.     

MEBT/MEBO对慢性难愈合创面组织内Nrf2 / HO-1 / NQO1 信号通路的影响

【摘要】 目的 探讨皮肤再生医疗技术 (MEBT/ MEBO) 对大鼠慢性难愈合创面组织内核转录因子红系 2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶1(HO-1)/ 醌氧化还原酶1(NQO1)信号通路的影响。 方法 选取90只SPF级 Wistar雄性大鼠适应性饲养1周后,采用随机数表法将其随机分为空白组、对照组、模型组、MEBO 组和贝复新组,每组18只。 其中空白组大鼠只做备皮处理, 对照组大鼠建立急性创面模型, 模型组、MEBO组和贝复新组大鼠建立慢性难愈合创面模型。模型建立后,空白组大鼠备皮处皮肤及对照组、模型组大鼠创面予以生理盐水纱布换药处理, MEBO组大鼠创面予以湿润烧伤膏(MEBO)药纱换药处理,贝复新组大鼠创面予以重组牛碱性成纤维细胞生长因子凝胶药纱换药处理, 对比观察各组大鼠创面愈合率、组织病理学变化情况以及皮肤/ 创面组织内丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白与 HO-1、NQO1 mRNA 表达水平。结果 干预第 3 天, 各组大鼠创面愈合率尤以对照组最高、贝复新组次之 (P均＜0.05); 干预第 7、14 天, 各组大鼠创面愈合率尤以 MEBO 组最高、贝复新组次之 (P均＜0.05)。 HE 染色结果显示, 干预第 3、7、14 天,对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内坏死细胞及炎性细胞逐渐减少, 成纤维细胞与毛细血管逐渐增多,而模型组大鼠创面组织内坏死细胞和炎性细胞减少不明显; Masson 染色结果显示, 干预第 3、7、14 天, 对照组?MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内胶原纤维由细少且紊乱逐渐趋于粗大且平整, 而模型组大鼠创面组织内胶原纤维虽逐渐增粗、增多, 但排列仍较紊乱。 干预第 7 天, 对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 MDA 表达水平均明显低于模型组 (P均＜0.05); 干预第 3、7 天, 对照组、MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 SOD 表达水平均明显高于模型组 (P均＜0.05)。 干预第 3、7 天, MEBO 组和贝复新组大鼠创面组织内 Nrf2、HO-1、NQO1 蛋白以及 HO-1、NQO1 mRNA 表达水平均明显高于空白组、对照组和模型组 (P均＜0.05), 且干预第 7天, MEBO 组大鼠创面组织内 Nrf2、HO-1 蛋白以及 HO-1 mRNA 表达水平均明显低于贝复新组 (P均＜0.05)。结论 MEBT/ MEBO 可能能够通过激活 Nrf2 / HO-1 / NQO1 信号通路减轻大鼠慢性难愈合创面氧化应激损伤, 促进创面再生修复。     

Analysis of fentanyl and sufentanil in hair by GC/MS/MS

Fentanyl and sufentanil are potent narcotic analgesics used only in hospitals as anaesthetic agents. The dependence potential of fentanyl is known. As they are given in doses at the microgram level and their elimination half-life is in the order of a few hours, detection in body fluids is possible only for a short time after administration. Radioimmunological methods are the only ones capable of detecting fentanyl in hair, as normal GC/MS methods for hair analysis are not sensitive enough to detect the drugs after doses in the order of micrograms. We therefore chose GC/MS/MS to analyse fentanyl and sufentanil in two cases where the drugs were given under controlled conditions over several days. The concentration was in the order of less than 100 pg/mg hair.