锤头状核酶阻断雄激素受体基因表达的研究

目的　探讨核酶 (RZ)在细胞水平调节雄激素受体 (AR)基因表达的作用。方法　设计并合成针对AR的锤头状核酶序列 ,分子克隆技术构建活性核酶和无活性核酶表达载体 ,脂质体介导下转染雄激素受体表达阳性细胞株T47D。转染第 1～ 3天 ,应用免疫组织化学和逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测细胞内AR基因表达水平。结果　AR活性核酶表达载体转染后 ,T47D细胞ARmRNA水平降低 2 2 .4%～ 50 .7% (P <0 .0 5) ,AR蛋白阳性细胞减少 7.1 0 %～1 1 .90 % (P <0 .0 5)。而无活性核酶对细胞AR基因表达差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　成功构建AR锤头状核酶表达载体 ,能特异性切割ARmRNA ,阻断雄激素受体基因表达     

锤头型核酶特异性阻断雄激素受体表达对前列腺癌细胞生长的影响

目的：探讨核酶阻断雄激素受体（AR）基因表达治疗前列腺癌的可能性。方法：在脂质体介导下，锤头型抗雄激素受体核酶表达载体转染前列腺癌细胞，采用逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测ARmRNA，四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖活性，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期时相，原位末端转移酶标记法检测细胞凋亡。结果：核酶表达载体转染1－5d后，前列腺癌细胞AR mRNA水平降低32．6％－40．7％（P＜0．05），细胞生长抑制率18．28％－35．34％（P＜0．05），细胞周期阻滞于G2／M期，诱导细胞凋亡，细胞凋亡比率增加20．70％（P＜0．01）。结论：应用核酶特异性切割ARmRNA，能有效阻断AR基因的表达，诱导前列腺癌细胞凋亡，有可能成为前列腺癌基因治疗的有效方法之一。     

核酶研究概况

核酶是一类具有酶活性的RNA分子。由于能序列特异性地剪切底物RNA或修复突变的RNA ,因此在调节基因表达水平 ,阻止病毒复制 ,修复突变基因等基因治疗领域有广阔的应用前景。核酶按其分子大小和反应机制不同 ,大致可分为两类 ,即①大分子核酶 :RNaseP、Ⅰ组内含子和Ⅱ组内含子。其分子大小为几百到几千个核苷酸 ;②小分子核酶 :锤头状、发卡、hepatitisdeltavirus(HDV)和neurosporavarhudsatellite(VS)核酶。其大小为 35～ 1 5 5个核苷酸。其中 ,以锤头状核酶的结构最为简单 ,易于人工设计 ,对其进行的研究也最多 ;其次是发卡形核酶 ,…     

人瘢痕组织TIMP-1核酶表达载体的构建及临床意义

目的设计能特异性切割人类瘢痕组织中TIMP-1mRNA的核酶,构建其体外表达载体并大量制备核酶,以研究特异性阻断TIMP-1基因表达对瘢痕胶原降解的影响.方法根据Symons的“锤头结构”,以人TIMP-1的mRNA为靶RNA,设计核酶,以P1.5为载体,制备TIMP-1特异性核酶的克隆,并通过转录制备大量核酶.结果针对第123,299和353位这三个位点设计了三个核酶,合成核酶基因后,构建了其表达载体并完成了克隆,通过体外转录证实克隆正确.结论核酶体外表达载体的构建及克隆是研究核酶活性,抑制TIMP-1基因表达,调控胶原降解的关键步骤之一.人瘢痕组织TIMP-1核酶体外表达载体的成功构建及克隆,为进一步通过反义抑制,阻断人瘢痕组织TIMP-1过度表达,实现对病理性瘢痕胶原代谢的调控,奠定了坚实的基础.     

抗人病理性瘢痕TIMP-1核酶U6Rz182的体外活性鉴定

组织金属蛋白酶是胶原等细胞外基质降解的关键酶 ,其活性受组织金属蛋白酶抑制剂 (tissueinhibitorofthematrixmetalloproteinases,TIMPs)的抑制[1 ] 。病理性瘢痕中TIMP 1的高表达[2 ] 不仅强烈抑制金属蛋白酶的活性 ,还刺激瘢痕成纤维细胞强力增殖 ,介导TGFβ对胶原酶的抑制作用[3,4 ] 。因此 ,抑制TIMP 1的表达 ,就有望促进胶原的降解 ,抑制成纤维细胞的增殖 ,促使病理性瘢痕消退。核酶 (ribozyme,Rz)可以序列特异性的切割靶RNA ,在基因治疗方面具有广阔的应用前景[5] 。我们设计合成了针对TIMP 1mRNA的锤头状核酶基因 ,并构…     

人瘢痕组织TIMP-1核酶表达载体的构建及临床意义

目的　设计能特异性切割人类瘢痕组织中TIMP - 1mRNA的核酶 ,构建其体外表达载体并大量制备核酶 ,以研究特异性阻断TIMP - 1基因表达对瘢痕胶原降解的影响。方法　根据Symons的“锤头结构” ,以人TIMP - 1的mRNA为靶RNA ,设计核酶 ,以P 1.5为载体 ,制备TIMP - 1特异性核酶的克隆 ,并通过转录制备大量核酶。结果　针对第 12 3 ,2 99和 3 5 3位这三个位点设计了三个核酶 ,合成核酶基因后 ,构建了其表达载体并完成了克隆 ,通过体外转录证实克隆正确。结论　核酶体外表达载体的构建及克隆是研究核酶活性 ,抑制TIMP - 1基因表达 ,调控胶原降解的关键步骤之一。人瘢痕组织TIMP - 1核酶体外表达载体的成功构建及克隆 ,为进一步通过反义抑制 ,阻断人瘢痕组织TIMP - 1过度表达 ,实现对病理性瘢痕胶原代谢的调控 ,奠定了坚实的基础。     

胆囊癌hTR锤头状核酶基因真核表达载体的构建

目的 用反转录PCR法，调取胆囊癌细胞内的端粒酶RNA(hTR)基因，并针对其序列设计锤头状核酶切割基因序列，并将其构建入真核表达载体pTriEx-4内。方法 根据hTR cDNA序列．设计引物，经RT-PCR法从体外培养的胆囊癌细胞内调取hTR模板区基因，根据其测序结果，合成锤头状核酶基因，与经相应酶切的真核表达载体连接，酶切鉴定重组体的正确性。结果 经RT-PCR从细胞内调出68bp序列，与hTR cDNA比较，与模板区域碱基序列一致。核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。结论 RT-PCR法可调出胆囊癌hTR基因有效片段；成功构建了针对hTR模板区的核酶基因的真核表达载体，为胆囊癌的基因治疗奠定了基础。     

人瘢痕组织TIMP—1核酶表达载体的构建及临床意义

目的：设计能特异性切割人类瘢痕组织中TIMP－1mRNA的核酶,构建其体外表达载体并大量制备核酶,以研究特异阻断TIMP－1基因表达对瘢痕胶原降解的影响。方法：根据Symons的“锤头结构”,以人TIMP－1的mRNA为靶RNA,设计核酶,以P1．5为载体,制备TIMP－1特异性核酶的克隆,并通过转录制备大量核酶,结果：针对第123,299和353位这三个位点设计了三个核酶,合成核酶基因后,构建了其表达载体并完成了克隆,通过体外转录证实克隆正确,结论：核酶体外表达载体的构建及克隆是研究核酶活性,抑制TIMP－1基因表达,调控胶原降解的关键步骤之一,人瘢痕组织TIMP－1核酶体外表达载体的成功构建及克隆,为进一步通过反义抑制,阻断人瘢痕组织TIMP－1过度表达,实现对病理性瘢痕胶过原代谢的调控,奠定了坚实的基础。     

核酶切割技术对胆囊癌细胞端粒酶活性抑制作用的研究

目的探讨锤头状核酶切割技术对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对胆囊癌细胞生长增殖的作用。方法根据拟要切割的胆囊癌端粒酶RNA亚基模板两翼区的序列，体外合成锤头状核酶的基因序列，并构建入pTriEx-4真核表达载体。酶切及测序鉴定正确后，采用脂质转染法导入胆囊癌细胞，观察其对胆囊癌细胞端粒酶活性的影响及对细胞生长、增殖的作用，并设空载体转染组和单纯脂质体转染组作为对照。结果与对照组比较，实验组胆囊癌细胞的端粒酶活性明显减低；核酶基因作用后，G0／G1期细胞比例明显增高，S期细胞比例明显降低；细胞的分裂、增殖受到明显抑制。核酶作用后10d凋亡率为17、10％，13d后凋亡率为31．01％。结论核酶切割技术对胆囊癌细胞端粒酶活性有明显的抑制作用，并能抑制胆囊癌细胞的生长，促进细胞凋亡。     

肝内胆管癌hTR的反义RNA及锤头状核酶基因真核表达载体的构建

目的：用反转录PCR法，调取肝内胆管癌细胞内的端粒醅RNA(hTR)基因，并针对其序列设计反义RNA封闭基因及锤头状核酶切割基因序列，并将其构建入真核表达载体pTriEx-4内。方法：根据hTR cDNA序列，设计引物，RT-PCR法从体外培养的肝内胆管癌细胞内调取hTR模板区基因，根据其测序结果，合成反义RNA基因及核酶基因，与经相应酶切的真核表达载体连接，酶切鉴定重组体的正确性。结果：经RT-PCR从细胞内调出68bp序列，与hTR cDNA比较．与模板区域碱基序列一致。反义RNA与核酶基因重组子经酶切鉴定序列正确。结论：RT-PCR法可调出其hTR基因有效片段；成功构建了针对hTR模板区的反义RNA基因和核酶基因的真核表达载体。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。     

深圳市某两所小学流行性腮腺炎突发疫情的流行病学分析

目的：通过对深圳市某两所小学发生的流行性腮腺炎突发疫情的流行病学特点及差异性进行分析,为制定科学、高效的防控策略提供科学依据。方法2013年5～7月深圳市大鹏新区某两所小学爆发流行性腮腺炎,以学校为整体研究对象,分别标记为学校A（24个班,学生1210例）和学校B（27个班,学生1274例）,对比两所小学的疫情流行病学差异性。结果分析发现,学校A流行性腮腺炎发病率为4.30%,发病班级所占比54.17%,均较学校B1.73%和29.63%高,对比差异有统计学意义（P＜0.05）;分析显示学校A学生出现疫病平均年龄为（11.2±1.1）岁,较学校B（9.34±1.0）岁,对比差异明显（P＜0.05）;且两组疫病患儿在接种疫苗率对比上差异无统计学意义（P＞0.05）;但疫情发生时,学校B疫苗紧急接种率明显高于学校A,对比差异有统计学意义（P＜0.05）。结论小学作为流行性腮腺炎爆发的主要场所之一,疫病爆发高峰季节前,针对易感染人群给予相应的疫苗接种等预防控制措施,同时加强流行性腮腺炎的监测,对于降低感染人群数量,减轻、遏制疫情有着积极的意义,值得相关防控部门重视。     

Frequency of complications of manipulation of the spine

Summary A survey of all members of the Swiss Medical Association of Manual Medicine was undertaken for the year 1989. Informative data were given by 425 respondents on the frequency of complications of manipulation as related to the spine. The number of thoraco-lumbar manipulations during 1989 (225 working days) was 805 for each respondent, and the number manipulations of the cervical spine 354. Thus, the total number of thoraco-lumbar manipulations was 342 125, and the total number of cervical manipulations was 150 450. The overall incidence of side-effects of transient complications due to cervical spine manipulation such as disturbance of consciousness or radicular signs was 1: 16716. Seventeen patients (ratio 1: 20 125) after manipulation of the lumbar spine presented, in addition to increased pain, a transient sensorimotor deficit with precise radicular distribution. Nine of the 17 patients (ratio 1: 38013) developed a progressive radicular syndrome with sensorimotor defict and radiologically verified disc herniation and had to be referred for surgery. Side effects and complications of cervical and lumbar spine manipulation are rare. Taking in to account the yearly number of manipulations performed by a single physician in Switzerland and the rate of complications, it can be calculated that a physician practicing manual medicine will encoutner one complication due to manipulation of the cervical spine in 47 years and one complication due to lumbar spine manipulation in 38 years of practice. However, it is important that a careful clinical assessment is carried out to avoid complications due to manipulation carried out on the basis of inappropriate indications. Furthermore, the decision as to which technique is indicated for any particular functional disorder of the spine should be made on the basis of rational criteria resting on a knowledge of clinical biomechanics, functional anatomy and neurophysiology. The authors recommend a prospective morbidity study to be carried out among physicians, chiropractors, osteopaths and physiotherapists, taking into account the different indications and therapeutic techniques in relation to complications.     

骨盆骨折的治疗进展

对于骨盆骨折的治疗 ,传统方法以卧硬板床 ,股骨髁上持续骨牵引 ,骨盆兜等保守治疗为主 ,常常引起下肢不等长 ,骶髋痛 ,步态失常等而严重影响生活质量 ,同时长期卧床易引发肺部感染、褥疮、应激性溃疡、泌尿系统结石等并发症而危及生命。下面就骨盆骨折的治疗进展作一综述。1     

Oddi括约肌肌电活动实验模型的建立

目的建立研究Oddi括约肌肌电活动的动物模型和实验方法。方法将双极金属钩状电极通过浆膜层置入Oddi括约肌，记录不同条件干预下家兔的Oddi括约肌肌电活动信号，调整电生理实验参数并经放大、滤波及计算机处理后，对其大小、波形、幅度进行分析。结果不同条件干预下的家兔Oddi括约肌的肌电活动在波形、频率、幅度等方面均有明显的不同，具有明显的规律性。重复实验可得到相似的结果。结论使用双极金属钩状电极配以合理的电生理实验参数调整可以稳定地采集到在体的家兔Oddi括约肌肌电活动信号。这为今后广泛、深入地研究Oddi括约肌肌电活动搭建了一个技术平台。     

Pathogenesis of carcinoma of the papilla of Vater

Most adenomas and carcinomas of the small intestine and extrahepatic bile ducts arise in the region of the papilla of Vater. In familial adenomatous polyposis (FAP) it is the main location for carcinomas after proctocolectomy. In many cases symptoms due to stenosis lead to diagnosis at an early tumor stage. In about 80%, curative intended resection is possible. Operability is the most relevant prognostic factor. Most ampullary carcinomas resp. carcinomas of the papilla of Vater develop from adenomatous or flat dysplastic precursor lesions. They can be sited in the ampulloduodenal part of the papilla of Vater, which is lined by intestinal mucosa. They also can develop in deeper parts of the ampulla, which are lined by pancreaticobiliary duct mucosa. Intestinal-type adenocarcinoma and pancreaticobiliary-type adenocarcinoma represent the main histological types of ampullary carcinoma. Furthermore, there exist unusual types and undifferentiated carcinomas. Many carcinomas of intestinal type express the immunohistochemical marker profile of intestinal mucosa (keratin 7–, keratin 20+, MUC2+). Carcinomas of pancreaticobiliary type usually show the immunohistochemical profile of pancreaticobiliary duct mucosa (keratin 7+, keratin 20–, MUC2–). Even poorly differentiated carcinomas, as well as unusual histological types, may conserve the marker profile of the mucosa they developed from. These findings underline the concept of histogenetically different carcinomas of the papilla of Vater which develop either from intestinal- or from pancreaticobiliary-type mucosa of the papilla of Vater. Molecular alterations in ampullary carcinomas are similar to those of colorectal as well as pancreatic carcinomas, although they appear at different frequencies. In future studies, molecular alterations in ampullary carcinomas should be correlated closely with the different histologic tumor types. Consequently, the histologic classification should reflect the histogenesis of ampullary tumors from the two different types of papillary mucosa.     

主动脉窦瘤破裂外科治疗的临床研究

目的　探讨主动脉窦瘤破裂局部病理改变及其合并主动脉瓣关闭不全的手术方法。方法　 3 6例主动脉窦瘤破裂 (RASV)合并主动脉瓣关闭不全 (AI) 15例、室间隔缺损 (VSD) 2 6例。补片修补 3 5例 ,其中合并VSD的均以一片法修补 ,合并AI的主动脉瓣置换 (AVR) 6例 ,主动脉瓣成形 4例。手术取材作病理检查 5例。结果　本组 3 6例中手术死亡 2例 ( 5 .6% )。存活的 3 4例病人均经门诊复查或通信随访 0 .3～ 18年 ,其中 2例死亡。病理检查见RASV合并VSD的瘤壁为纤维素样坏死或玻璃样变性。结论　主动脉窦壁纤维素样或玻璃样变性可能是其形成的病理基础。合并主动脉瓣关闭不全时应探查其病变程度 ,酌情一期矫正 ,瓣膜损伤明显时宜行主动脉瓣置换 ,对主动脉瓣环细小的病例 ,可借修补VSD和RASV的补片扩大主动脉瓣环。     

鼻尖、鼻翼缺损修复方法的探讨

１９５７年以来共收治鼻尖、鼻翼缺损１１９例，据情分别采用以下四种方法修复：①全层皮片移植２７例；②游离耳廓复合组织片移植３６例；③鼻唇沟皮瓣移转１２例；④上臂内侧皮管移植４４例，效果较为满意。我们在文章中就选用的原则、手术方法及注意事项等进行了探讨     

食管穿孔83例分析

８３例不同原因引起的食管穿孔，保守治疗５７例；手术２６例，行单纯食管修补术２０例、开胸行纵隔和／或胸腔引流２例、切除贲门肿物行胃食管吻合１例、颈部食管外置２例（其中１例并行二期结肠代食管手术）、１例开胸取异物形成食管瘘后，行二期修补瘘术。全组死亡８例，其中死于纵隔胸腔感染和主动脉破裂出血各４例。总治愈率８５％。并指出异物假牙造成食管穿孔的重要性，对严重的腐蚀性食管灼伤应早期行食管镜检，并针对食管穿孔部位、种类、间隔期、纵隔与胸腔的感染程度及病人具体情况采取相应的治疗措施。     

手部深度烧伤的临床治疗分析

目的 总结手部深度烧伤的临床治疗经验. 方法 46例54只深度烧伤手,其中深Ⅱ度烧伤30例33只手,Ⅲ度烧伤16例21只手.根据伤情不同,早期选择不同手术方式修复创面,术后早期进行功能锻炼. 结果 54只手的修复方式:中厚皮片移植33只手,异体脱细胞真皮与自体薄皮片复合移植12只手,腹部带蒂皮瓣1只手,前臂骨问背动脉逆行皮瓣3只手,股前外侧皮瓣5只手.治疗后,51只手移植皮片、皮瓣均成活,仅3只手移植皮片后有局灶性坏死,创面得到有效覆盖.按关节活动范围( range of motion,ROM)评定,本组优31只手(57.4％),良17只手(31.5％),中4只手(7.4％),差2只手(3.7％). 结论 手部深度烧伤后,选择合适术式,早期手术修复创面及功能锻炼,可取得很好的疗效.