一氧化氮与细胞凋亡

一氧化氮是具有很强生物活性的介质，广泛分布于各种组织器官中。除公认的细胞毒性、抑制血小板聚集、参与神经内分泌活动、加重脑缺血性损伤等作用外，还发现ＮＯ参与细胞凋亡过程，但诸多报道意见不一，反映了其作用的复杂性。     

NO与细胞凋亡

自由基ＮＯ是体内ＮＯＳ催化Ｌ－精氨酸氧化生成的一种具有多种生物学效应的特殊介质，通过和细胞内的酶作用，形成ＯＨ－，直接损伤ＤＮＡ等方式发挥其影响。除在转录及表达水平经防止凋亡抑制基因ｂｃ１－２表达减少而阻止Ｂ细胞凋亡外，ＮＯ经损伤ＤＮＡ、抑制核酸和蛋白质合成、减少ＡＴＰ产生、降低ｐＨ和改变Ｃａ２＋分布、增强ｐ５３表达等途径介导其他多种细胞凋亡。     

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应

目的一氧化氮（ＮＯ）供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用３Ｈ－胍氨酸转换法进行ＮＯ合成酶（ＮＯＳ）活性测定；亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰＩ染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒、ｐＣＭＶ／ｉＮＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯ的重组细胞系（ＳＰｍｔ／ｉＮＯＳ），表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。利用该细胞作ＮＯ细胞性供体，成功地证实ＮＯ能诱导Ｓｐ２／０骨髓瘤细胞发生凋亡。结论所建细胞性ＮＯ供体应用于ＮＯ的生物学功能研究具有ＮＯ合成稳定；更能模拟体内细胞间ＮＯ的信息传递过程；不需任何外源刺激即可合成ＮＯ等独特优点。所建ＮＯ供体细胞可以用于肿瘤细胞凋亡的研究。     

bcl—2在一氧化氮诱导血管平滑肌细胞凋亡中的作用

目的：对一氧化氮（NO）作用下血管平滑肌细胞（VSMC）中bcl-2蛋白表达的变化进行定量检测,并进一步探讨bcl-2过表达对NO诱导VSMC凋亡的影响,以确定bcl-2在NO诱导VSMC凋亡中的作用。方法以亚硝基乙酰青霉胺（SNAP）作为NO供体,将5－8代的大鼠VSMC接种于Petri培养皿中,条件培养液培养24－48h,换成含0．5mmol/LSNAP的条件培养液8－10h后,固定细胞、间接免疫荧光法检测抗原,借助粘附式细胞仪对细胞中bcl-2蛋白表达进行定量检测,通过逆转录病毒载体将bcl-2基因导入VSMC,使其过量表达,检测SNAP作用下细胞的凋亡率,并与未经转染的VSMC进行比较,结果：SNAP使得VSMC中B蛋白表达下调,而bcl-2过表达能够抑制SNAP作用下VSMC的凋亡。结论下调bcl-2表达是SNAP诱导VSMC凋亡的途径之一。     

细胞性一氧化氮供体的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱 …

一氧化氮供体细胞系的建立及其对肿瘤细胞凋亡的诱导效应研究。方法采用＾３Ｈ－胍氨酸转移法进行了ＮＯ合成酶活性测定，亚硝酸盐检测；ＤＮＡ片段的提取及凝胶电泳分析；凋亡细胞的ＤＡＰ１染色观察；Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析。结果将ｉＮＯＳ真核表达质粒，ｐＣＭＶ／ｉＭＯＳ转染至Ｓｐ２／０骨髓瘤的变异株中，并获得能稳定表达ｉＮＯＳ和合成ＮＯＲ 重组细胞系，表达ｉＮＯＳ的效率为每升培养物含４００μｇ蛋白。     

高压氧抑制一氧化氮生成改善缺血性脑细胞凋亡

目的探讨高压氧对脑缺血再灌流脑皮层一氧化氮(NO)生成的影响及其对脑细胞的保护作用。方法采用沙土鼠双侧颈总动脉夹闭30min再灌流模型。用电化学及免疫细胞化学方法检测脑皮层一氧化氮生成、一氧化氮合酶(NOS)表达及神经细胞凋亡。结果缺血再灌流期沙土鼠脑皮层中NO的含量显著增加，3型NOS均有表达，缺血再灌流第2d，iNOS的表达最为明显，同时NO的生成达到高峰。缺血再灌流第1、2、3d，沙土鼠脑皮层均可见凋亡细胞，以第2、3d更为明显。高压氧暴露能明显抑制iNOS表达，减少NO生成，减轻神经细胞凋亡。结论高压氧能抑制沙土鼠脑缺血再灌流期脑皮层NO生成，减轻神经细胞凋亡，从而起到脑保护作用。     

一氧化氮诱导HL-60细胞凋亡及其机制探讨

目的：观察一氧化氮对人类白血病细胞是否具有致凋亡作用，并研究Bcl-2基因和P53基因在此过程中的作用。方法：将不同浓度的外源性一氧化氮供体亚硝基铁氰化钠与HL-60细胞作用，观察其作用的时间效应和剂量效应；用MTT法观察NO对细胞的抑制作用，用透射电镜观察细胞结构改变，用DNA凝胶电泳、细胞DNA含量、DNA末端标记、Annexin-V/PI法等分析细胞凋亡，并用流式细胞法进一步观察在NO作用过程中凋亡调控因子Bcl-2和P53蛋白及线粒体膜蛋白表达变化。结果：NO能抑制HL-60细胞生长，并在一定的剂量范围内显示作用时间和剂量的量效关系；典型的细胞形态改变、DNA片段化、亚G1峰检出、DNA末端标记、Annexin-V/PT^-表达增加等证实。NO能诱导白血病细胞凋亡；在此过程中，P53蛋白表达上调，而Bcl-2蛋白表达下调，线粒体膜蛋白表达增加。结论：NO对HL-60细胞有强的致凋亡作用，Bcl-2和P53参与NO诱导HL-60细胞凋亡的调控。     

细胞凋亡

论述了细胞凋亡的形态特征及生物学意义 ;阐述了细胞凋亡的基因调控。细胞凋亡是多细胞动物生命现象的自然属性之一 ,是自然的有规律的基因指导下的生物学程序化过程。一旦细胞自然凋亡规律失常 ,机体将发生病变 ,甚至死亡。因此 ,认识细胞凋亡的规律 ,揭示细胞凋亡的机理 ,对指导医学实践 ,提高人们健康水平有极其重要的意义     

NO与心血管疾病细胞凋亡

NO是重要生物活性物质,介导着心肌、血管平滑肌、巨噬细胞、血管内皮细胞等程序性死亡与凋亡,与心血管疾病有密切的关系.并对NO与心血管疾病细胞凋亡的机制和目前研究方向及存在问题进行了文献综述.     

c-Myc介导的细胞凋亡途径

细胞凋亡是细胞生物学行为中一复杂的主动过程,受细胞内外多种因子调控。本文阐述了c-Myc在细胞凋亡中与其它癌基因、抑癌基因bcl-2、p53等产物的相互作用,与蛋白酶类的关系以及与Fas/FasL凋亡途径的偶联。表明c-Myc不仅是促进细胞增殖的重要因子,也是介导细胞凋亡的重要成员。     

细胞凋亡的研究进展

细胞的发育、分化和成熟是发育生物学和细胞生物学研究的焦点。但长期以来，有关细胞凋亡（apoptosis）规律的研究一直未被重视。近年来，生物学家逐渐认识到细胞凋亡具有特殊的生物学意义，由此形成了新的研究热点。以下扼要介绍这一领域的研究进展。一、细胞凋亡的概念与形态特征在多细胞动物中，细胞的死亡有两种不同的形式。一种是细胞坏死（necrosis），它是由于某些外界的因素，如局部贫血、物理、化学损伤或生物的侵袭等造成细胞急速死亡。另一种称为细胞凋亡，它是指象秋天树叶凋谢一样，细胞遵循自身的程序，自己结束其生命，最后…     

一氧化氮诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡机制研究

目的:研究一氧化氮(NO)诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMC)凋亡的作用机制。方法:体外培养Wistar大鼠PASMC,加入NO供体硝普钠(SNP)于常氧和低氧条件下孵育12h或24h,通过流式细胞术碘化丙啶染色法观察PASMC细胞周期时段及凋亡亚二倍体峰变化,应用细胞免疫化学法检测PASMCcaspase-3和NF-κB的表达,同时行DNA断裂琼脂糖凝胶电泳。结果:SNP作用后PASMC出现剂量-依赖性促凋亡作用(P＜0.01),表现为凋亡指数与caspase-3表达的不同程度的增强。随凋亡的进展,出现PASMC凋亡核小体DNAladder,同时PASMCNF-κB阳性核表达较对照组少(P＜0.01)。结论:外源性NO诱导大鼠PASMC凋亡,caspase-3与NF-κB可能涉及PASMC凋亡的调控信号途径。     

血管紧张素Ⅱ受体介导细胞凋亡及其功能的研究进展

肾素-血管紧张素系统(renin-angiotensin system，RAS)是机体调控内环境稳定的重要体液调节系统之一，它主要通过血管紧张素的作用而产生多种生物学效应。血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ，ANGⅡ)是肾素-血管紧张素系统的主要活性肽，愈来愈多的证据表明，在一些以组织器官发生进行性纤维化为特征的慢性疾病，尤其是心血管，肾脏疾病的进展中起着重要作用^[1]。已知RAS的生物学效应均通过ANGⅡ与相应的受体作用而介导的。     

DFF和CIDE介导细胞凋亡的分子机制

DNA裂解因子 (DFF)是由分子量分别为 4 5 k D和 4 0 k D两个亚单位组成的异源二聚体。在细胞凋亡信号启动的 caspase级联活化过程中作为下游 caspase的底物被活化并形成脱氧核糖核酸酶 (DNase) ,从而介导并调节 DNA断裂和染色质凝聚。 DFF作为细胞凋亡信号传递的主要途径在细胞凋亡中起着关键作用。诱导细胞死亡的 DFF4 5样效应因子 (CIDE)是与 DFF同源的诱导凋亡因子 ,CIDE与 DFF在结构、功能和作用上有很大的相似性 ,可发挥诱导凋亡的作用。本文阐述了 DFF和 CIDE在诱导细胞凋亡过程中担当的角色和它们相互作用的机制 ,从而揭示 DFF和 CIDE在细胞凋亡过程中作为传递凋亡信号—— caspase级联反应的下游因子在诱导凋亡时所处的关键地位和重要功能     

一氧化氮对慢性低氧大鼠肺循环组织细胞增殖/凋亡的影响

目的：探讨一氧化氮（NO）对低氧条件下细胞增殖/凋亡的影响，了解NO在肺循环结构改建的作用。方法：复制间断常压缺氧大鼠模型，N^ω-硝基L-精氨酸甲酯（L-NAME）和5-单硝酸异山梨酯干预内外源NO。测定mPAP、R/L+S、血NO、MDA和SOD水平，对肺、心肌、肺动脉组织作PCNA免疫组化染色和细胞凋亡原位缺口末端DNA碎片标记。结果：①HY和HY+NAME组大鼠mPAP高于NS组，NO和SOD水平低于NS组（P<0.01）；HY+IS组mPAP明显低于HY组（P<0.01）。②HY组大鼠肺组织、心肌、肺动脉壁细胞增殖指数（PI）明显高于NS组（P<0.01）；细胞凋亡指数（AI）无明显差异。③HY+NAME组大鼠肺、心肌、肺动脉PI/AI比值均显著高于NS组（P<0.01），而HY+IS组大鼠上述组织PI/AI比值明显低于HY组（P<0.05）。结论：①NO参与慢性低氧性PH的发生和发展。②慢性低氧性PH存在细胞增殖/凋亡失衡，细胞增殖大于凋亡，造成肺循环结构改建。③NO可通过诱导细胞凋亡来减轻肺循环结构重建。     

CD14介导凋亡细胞清除的研究进展

CD14是一种膜锚着糖蛋白,可作为内毒素的主要受体,激活巨噬细胞释放前炎症因子,引发炎性级联反应.另一方面,CD14作为巨噬细胞识别清除凋亡细胞的受体之一,介导凋亡细胞的非炎性清除.     

砷剂介导的细胞凋亡信号转导途径

砷剂是一种安全有效的治疗血液恶性肿瘤的诱导剂 ,亦可用于治疗其它实体瘤。砷剂诱导细胞凋亡的信号传导途径为线粒体 -细胞色素 C途径 ,它在细胞凋亡网络调控中起重要作用。阐明其诱导细胞凋亡的分子生物学机制 ,为在临床上的合理应用砷剂并扩大其抗瘤作用谱奠定理论基础     

LPS性肺损伤大鼠一氧化氮合酶表达和肺细胞凋亡变化

目的: 观察内毒素性肺损伤过程中肺细胞凋亡和一氧化氮合酶（NOS）mRNA表达的时程性变化及关系,探讨LPS性肺损伤（ALI）的发病机制。方法: 健康雄性SD大鼠48只,随机分成2组:①对照组：静注等量生理盐水；②模型组(LPS组)：静注LPS复制ALI模型,分别于给药1、3、6、9及12h后采集样品；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法测定肺组织中NOSmRNA表达变化；电镜、流式细胞术检测肺细胞凋亡率；免疫组化法测定Bcl-2和Bax；光镜、电镜观察肺组织病理变化。结果: 与对照组比较，LPS组iNOSmRNA表达随时间延长而增强，给予LPS 3 h后有显著差异(P<0.05)，eNOSmRNA随时间延长而降低，给LPS 3 h时有显著差异(P<0.05)，nNOSmRNA在观察时间内没有变化；光镜和电镜下可见在观察时间内1 h起肺损伤随时间延长加重；流式细胞术显示LPS组凋亡细胞随时间延长增多，9 h达高峰，12 h有所降低；免疫组化结果显示，LPS组随时间延长Bcl-2减少，主要表现在肺上皮细胞，Bax增多；对照组无明显变化。结论: 不同一氧化氮合酶在ALI中表达强度不同；抗凋亡蛋白Bcl-2和促凋亡蛋白Bax是ALI时调节细胞凋亡的途径之一；一氧化氮合酶可能通过调节Bcl-2和Bax平衡而影响凋亡。     

CDl4介导凋亡细胞清除的研究进展

CD14是一种膜锚着糖蛋白 ,可作为内毒素的主要受体 ,激活巨噬细胞释放前炎症因子 ,引发炎性级联反应。另一方面 ,CD14作为巨噬细胞识别清除凋亡细胞的受体之一 ,介导凋亡细胞的非炎性清除     

一氧化氮对鼻咽癌CNE-2细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨外源性NO对CNE-2细胞增殖与凋亡的影响.方法:分别用不同浓度NO供体药物硝普钠(sodium nitroprusside,SNP)干预CNE-2细胞,观察细胞形态学变化、检测细胞的抑制率及细胞的凋亡和坏死率.结果:SNP以浓度依赖性方式抑制CNE-2细胞增殖,SNP 100,200,400,600,800,1600,3200μmol/L各组细胞抑制率与药物浓度呈正相关;SNP以浓度依赖性方式促进CNE-2细胞凋亡,SNP(1000μmol/L)组细胞凋亡率较SNP(600μmol/L)组显著增高(P<0.05).结论:外源性NO能抑制CNE-2的增殖,促进CNE-2的凋亡,其抑制效应与NO浓度呈正相关.