慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞对HBsAg诱生γ干扰素的反应

本文用纯化的乙型肝炎表面抗原（HBsAg)诱生的γ干扰素（IFNγ）反应，对慢性乙型肝炎（慢乙肝）患者的特异性细胞免疫应答进行了研究。结果表明，大多数（7／9）血清抗－HBs阳性者，都能产生对HBsAg的IFNγ反应，平均滴度为3．589±1．694（log2U/50μl)；部分CAH患者（5／12）亦能产生对HBsAg的IFNγ反应，平均滴度为2．560±0．711（log2U/50l)，二组间IFNγ滴度无显著性差异（P＞0．05）。HBV血清标志阴性者不能产生对HBsAg的IFNγ反应，在CAH组及对照组中均未测到对HBsAg的特异性淋巴细胞转化反应。     

IL-12对干扰素α治疗的慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞产生细胞因子的影响

目的探讨干扰素α治疗慢性乙型肝炎过程中IL-12对其外周血单个核细胞(PBMC)产生IFNγ和IL-10的动态影响. 方法用ELISA法分别检测20例慢性乙型肝炎患者在干扰素α2b治疗前、治疗3个月、治疗6个月时PBMC在PHA(100μg/ml)、HBcAg(1μg/ml)、HBeAg(1μg/ml)单独或联合IL-12(10ng/ml)体外培养48h后培养上清液INFγ和IL-10的水平. 结果 12例干扰素应答患者联合IL-12诱导,同一诱导组在治疗3个月和6个月同治疗前比较,IFNγ水平明显增高(P＜0.01),同一治疗阶段,单独抗原诱导和联合IL-12诱导相比,联合诱导组IFNγ水平明显增高(P＜0.01),治疗3个月和6个月时,IL-12对IL-10的产生表现出明显的抑制作用(HBcAg诱导组例外).8例干扰素无应答患者联合IL-12诱导,同一诱导组在治疗3个月和6个月同治疗前相比,IFNγ水平明显增高(P＜0.01),同一治疗阶段,单独抗原诱导和联合IL-12诱导相比,联合诱导组IFNγ水平明显增高,并随治疗时间的延长,协同效应更为明显. 结论在干扰素治疗过程中,IL-12对乙型肝炎患者PBMC产生IFNγ表现明显的协同效应,特别对无应答患者产生IFNγ协同效应时间明显缩短,提示IL-12 联合干扰素α可能提高干扰素α治疗慢性乙型肝炎的疗效.     

慢性乙肝患者外周血单个核细胞凋亡及细胞因子检测的意义

探讨外周血单个核细胞凋亡和Th1/Th2型细胞因子表达在慢性乙肝发病中的作用。采用PI染色法检测单个核细胞凋亡 ,ELISA法检测IL - 2、IFN -γ、IL - 4、IL - 10等细胞因子水平。慢性乙肝患者单个核细胞凋亡明显高于对照组 (P <0 0 1) ,随着抗原刺激时间的延长细胞凋亡增加 ,有显著性意义 (P <0 0 1)。IL - 2、IFN -γ水平低于正常对照组 (P <0 0 1) ,其浓度随着培养时间的延长有轻度减低 ,但无显著意义 (P >0 0 5 )。IL - 4、IL - 10水平高于正常对照组 (P <0 0 1) ,其浓度随着培养时间的延长逐渐升高并且差异有显著意义 (P <0 0 1)。慢性乙肝患者外周血淋巴细胞凋亡增强及Th1/Th2免疫调节紊乱 ,使细胞免疫功能减弱 ,淋巴细胞凋亡和Th1/Th2的失衡在慢性乙肝发病中起一定的作用。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞Th1、Th2型细胞标记物及其细胞因子的表达

Ｔｈ1/Ｔｈ2 细胞在宿主抵御病毒感染中的作用日益受到重视 ,Ｔｈ1/Ｔｈ2 免疫应答与乙型肝炎的关系也是近年研究的热点。但由于缺乏特异性高且操作简便的Ｔｈ1、Ｔｈ2 细胞标记物 ,这方面的研究仅限于测定其所代表的细胞因子含量。由于细胞因子是以网络形式存在 ,影响其分泌的因素很多 ,所以仅从Ｔｈ分泌的细胞因子来分析Ｔｈ1/Ｔｈ2 功能有一定的局限性。近来发现 ,ＣＣＲ5、ＣＤ30分别为Ｔｈ1、Ｔｈ2细胞特异表达 ,且与激活Ｔｈ1、Ｔｈ2 密切相关 ,因此可作为其相应的表面标记物[1,2 ] 。为了阐明Ｔｈ1、Ｔｈ2 细胞在慢性乙型肝炎中的作…     

慢性乙型肝炎患者外周血调节性T细胞及其相关细胞因子水平检测及临床意义

目的探讨慢性乙型肝炎病毒感染者外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)、IL-18、IFN-γ、TGF-β水平变化及临床意义。方法选择乙型肝炎病毒携带者(ASC)112例、慢性乙型肝炎患者(CHB)63例和健康对照者50例,采用流式细胞术和ELISA法分别检测CD4+CD25+细胞和IL-18、IFN-γ、TGF-β水平;采用荧光定量聚合酶链反应法检测HBV DNA载量。结果CHB患者外周血CD4+CD25+Treg细胞数、IL-18、IFN-γ、TGF-β水平分别为(30.97±18.78)%、(448.51±75.75)ng/ml、(190.93±38.52)ng/ml和(331.22±71.67)ng/ml,ASC组分别为(28.17±18.52)%、(524.52±81.42)ng/ml、(204.93±47.77)ng/ml和(336.01±82.61)ng/ml,均显著高于健康人[分别为(27.30±17.59)%、(49.79±25.68)ng/ml、(14.41±11.75)ng/ml和(42.28±17.50)ng/ml,P0.05]。结论乙型肝炎病毒感染者存在CD4+CD25+Treg细胞数的变化,IL-18、IFN-γ和TGF-β可能参与了乙型肝炎患者肝损伤过程。     

慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞诱导特异性T淋巴细胞应答

目的 探讨慢性乙型肝炎患者外周血树突状细胞(Dc)是否诱导特异性T细胞应答。方法(1)将研究对象分为慢性乙型肝炎患者组、急性乙型肝炎痊愈组、健康志愿者组,分离各组研究对象的外周血单个核细胞(PBMC),细胞内细胞因子染色方法检测其对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)特异表位多肽乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27的记忆性免疫应答;(2)培养慢性乙型肝炎患者DC,将负载有乙型肝炎抗原表位多肽的DC诱导特异的T细胞应答。采用细胞内细胞因子染色方法检测诱导的T细胞分泌的细胞因子,乳酸脱氢酶释放法测定诱导的T细胞杀伤活性。结果(1)急性乙型肝炎患者PBMC对HBcAg 18-27 CTL特异表位多肽存在记忆的免疫应答,其分泌干扰素-γ的CD8+T细胞占CD8+T细胞总数的(4.3±2.5)％,分泌白细胞介素-2的占总细胞数的(4.8±2.2)％,分泌肿瘤坏死因子-α占总细胞数的(4.6±2.3)％。而慢性乙型肝炎患者和健康志愿者对其记忆应答很低,与急性乙型肝炎患者比较差异有显著性,t值为2.508-3.305,P<0.05。(2)用多肽共孵育过的慢性乙型肝炎患者DC多次诱导的T细胞慢性乙型肝炎患者组,加肽孵育的靶细胞比例为30:1、10:1、3:1时,其杀伤率分别为(57.0±20.3)％、(49.5±20.2)％、(21.8±12.9)％,均高于对照组,表明慢性乙型肝炎患者DC可以诱导特异的T     

干扰素治疗对慢性乙型肝炎患者细胞免疫应答的影响

目的探讨Th1／Th2类细胞因子在CHB患者PBMC表达,及干扰素治疗慢性乙型肝炎（CHB）对患者Thl／Th2类细胞因子的影响。方法30例CHB患者给予干扰素治疗,治疗前后采用双抗体夹心法检测外周血单个核细胞IL-4、IL-10和IFN-γ的水平,同时选择15例健康人群作对照组。结果CHB组PBMC培养上清分泌IL-4水平显著高于健康对照组（P〈0．05）,而IFN-1水平则显著低于健康对照组（P〈0．01）;HBVDNA水平与IL-4水平呈正相关,与IFN-γ水平呈负相关。治疗结束后IL-4、IL-10水平较治疗前显著降低（P〈0．01,P〈0．05）,IFN-γ水平较治疗前显著升高（P〈0．01）。结论CHB存在异常细胞免疫应答,干扰素治疗CHB可提高患者Th1型细胞因子水平、降低Th2型细胞因子的水平。     

慢性乙型肝炎患者外周血Th17细胞检测及意义

目的探讨辅助性T细胞17（Th17）在慢性乙型肝炎（CHB）发生、发展中的作用。方法采用流式细胞术检测37例CHB患者（CHB组）和35例查体健康者（对照组）外周血Th17细胞比例;采用全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）水平;分析Th17细胞比例与血清ALT水平的相关性。结果 CHB组外周血Th17细胞比例明显高于对照组（P〈0.01）,Th17细胞比例与血清ALT水平呈显著正相关。结论 Th17细胞与CHB肝脏损伤程度有关。     

慢性乙型肝炎患者血清细胞因子的变化

目的观察慢性乙型肝炎患者血清细胞因子的变化。方法采用ELISA法测定50例慢性乙型肝炎中度、30例慢性乙型肝炎重度和20例健康对照人群血清IFN-γ、TNF-α、IL-8、IL-12、IL-15和IL-18水平。结果慢性乙型肝炎重度患者血清细胞因子水平比中度患者和对照人群高;在11例慢性乙型肝炎重度死亡患者中,血清细胞因子比19例存活患者高。结论IFN-γ、TNF-α、IL-8、IL-12、IL-15和IL-18参与了慢性乙型肝炎的免疫病理反应。     

氧化苦参碱对慢性HBV携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响

目的：研究氧化苦参碱对慢性乙型肝炎病毒（ HBV ）携带者外周血树突状细胞及细胞因子的影响。方法：分离60例慢性HBV携带者外周血单核细胞后在诱导培养树突状细胞过程中治疗组加入氧化苦参碱,对照组不加,每组各30例,然后提取两组成熟的树突状细胞,计数后采用双标记流式细胞分析技术检测其活性,再用表位多肽刺激后,和自体淋巴细胞共育,分别检测IL-2和IFN-γ（ Th1分泌）及IL-4和IL-10（ Th2分泌）。结果：治疗组其树突状细胞数目增多,共刺激分子CD1a、 CD80、 CD86明显高于对照组（P＜0.05）。与自体淋巴细胞共育后产生的IL-2、 IFN-γ明显高于对照组（P＜0.05）; IL-4、 IL-10与对照组差异无显著性意义（P＞0.05）。结论：氧化苦参碱可增多、增强HBV携带者外周血树突状细胞的活性,当其与自体淋巴细胞共育时,可增强Th1类细胞因子的表达,对Th2类细胞因子无明显影响。     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞内HBV DNA存在的意义

目的探讨外周血单个核细胞（PBMC）内HBVDNA与HBV标志物的关系及在慢性肝病发展过程中的作用．方法应用RCR技术结合斑点杂交技术测定血清HBVDNA及PBMC内HBVDNA血清学标志物采用ELISA法结果在HBsAg＋，HBeAg十组48例中，血清与PBMC内HBVDNA阳性检出率分别为93．8％和83．3％；在HBsAg＋，抗-HBe 组41例中，其阳性检出率分别为48．8％和58．5％.两组间存在显著性差异（P＜0．01）在其他各组中血清及PBMC内HBVDNA检出率均较抵有6例呈单纯PBMC内HBVDNA阳性.在不同类型慢性乙肝患者中，CSH和CMoH组PBMC-HBVDNA检出率分别为78．6％和61．8％，与CMiH组（25．0％）、ASC组（14．3％）比较，存在非常显著性差异（P＜0．01），呈随病情加重而检出率增高的趋势结论PBMC清除HBVDNA较血液缓慢，在病毒持续感染及造成肝细胞损伤过程中可能起一定作用．     

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中细胞信号转导抑制因子-1mRNA的表达

目的检测慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中,细胞信号转导抑制因子-1（SOCS-1）mRNA的表达水平,分析其表达与肝脏不同炎症活动程度之间的关系。方法 CHB患者分为轻、中、重度组各15例,乙型肝炎病毒（HBV）携带者15例为携带组,15例健康体检者作为对照组。采集外周静脉血,密度梯度离心法分离PBMCs。RT-PCR检测SOCS-1 mRNA的表达。结果重度组SOCS-1 mRNA的表达（1.15±0.12）明显高于对照组（0.86±0.10）、携带组（0.89±0.18）和轻度组（0.93±0.12）（q=4.183～5.472,P〈0.01）。CHB患者SOCS-1 mRNA的表达水平与肝脏不同炎症活动程度呈正相关（rs=0.664,P〈0.01）。结论 CHB患者外周血PMBCs中SOCS-1 mRNA的表达与肝脏炎症活动程度有关。     

Cytokine profile of peripheral blood mononuclear cells from patients with different outcomes of hepatitis C virus infection

SUMMARY: The relationship between the balance of helper T-cell type 1 (Th1) or type 2 (Th2) cytokines and the clinical course of hepatitis C virus (HCV) infection is unclear. We evaluated Th1 [interleukin (IL)-2, interferon-gamma (IFN-gamma)] and Th2 cytokine (IL-4, IL-10) and 2,5-oligoadenylate synthetase (OAS, an IFN-induced antiviral protein) production by peripheral blood mononuclear cells from 10 healthy anti-HCV-positive individuals (group A), 10 HCV-RNA-positive with persistently normal alanine aminotransferase (ALT) levels (group B), 10 HCV-RNA-positive with abnormal ALT (group C) and 10 uninfected healthy controls. IL-2 production was significantly increased in group B when compared with all the other groups. No difference was found for IFN-gamma. IL-4 was significantly higher in group C than in both group B (P = 0.0006) and controls (P = 0.004). Compared with controls, IL-10 was significantly decreased in group A (P = 0.013) and B (P = 0.004). The production of 2,5-OAS was significantly higher in group B than in A (P = 0.04) and in C (P = 0.004). Finally, in all HCV-RNA-positive patients, a significant correlation was found between ALT and both IL-2 (r = -0.78; P = 0.0008) and IL-4 (r = 0.75; P = 0.0008). In conclusion: (i) subjects who cleared HCV showed a cytokine profile similar to controls; (ii) a preferential shift towards a Th1 profile seems associated with a more favourable clinical outcome in chronic hepatitis C; and (iii) a prevalent Th2 profile seems implicated in HCV pathogenesis and severity of liver disease.     

Intracellular levels of hepatitis B virus DNA and pregenomic RNA in peripheral blood mononuclear cells of chronically infected patients

Summary.  It remains uncertain whether hepatitis B virus (HBV) covalently closed circular DNA (cccDNA) and pregenomic RNA (pgRNA) can be detected in the serum or peripheral blood mononuclear cells (PBMC) of patients with chronic hepatitis B (CHB) infection. We examined HBV cccDNA and pgRNA in the serum and PBMC, and investigated the effect of lamivudine therapy on the viral loads in the PBMC of CHB patients. Paired serum and PBMC samples from 50 treatment-naïve CHB patients [25 hepatitis B e antigen (HBeAg) positive and 25 HBeAg negative] were quantified for total HBV DNA, cccDNA and pgRNA by real time polymerase chain reaction. HBV cccDNA and pgRNA were below the lower detection limit in all serum samples, and in 84% of PBMC. HBV DNA ( r  = 0.889, P  <   0.001) and pgRNA ( r  = 0.696, P  <   0.001) in PBMC correlated with the HBV DNA in serum. In the longitudinal study, 30 patients treated with lamivudine therapy for a median duration of 34 weeks (range 12–48 weeks) were examined. The median HBV DNA reduction in PBMC before and after treatment was 1.318 (range −0.471 to 3.846) log units, which was significantly lower than serum HBV DNA reduction [3.371 (range −0.883 to 9.454) log units, P  <   0.05]. HBV cccDNA and pgRNA were undetectable in the serum of CHB patients. HBV viral loads in PBMC correlated with serum HBV DNA. Lamivudine therapy had less effect on the HBV viral loads in PBMC compared with the serum viral loads.     

替比夫定治疗慢性乙肝血清Th1/Th2亚群细胞因子的水平变化

目的探讨慢性乙肝患者接受替比夫定抗病毒治疗后血清T淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞因子水平的变化及与肝功能ALT恢复、HBVDNA含量变化及血清HBeAg转换的关系。方法64例HBeAg（＋）慢性乙肝患者接受替比夫定抗病毒治疗,ELISA法检测治疗前及治疗24W后Th1细胞因子IL-2、IL-12及Th2细胞因子IL-4、IL-10的血清浓度变化,并同时检测肝功能ALT、HBVDNA含量的变化及HBeAg血清转换率。结果64例HBeAg（＋）慢性乙肝患者接受替比夫定治疗24W后,有55例患者ALT恢复正常,占85.9%,有34例HBVDNA〈5×10^2copies/ml,HBeAg（-）,占53.1%,治疗52W,有15例发生HBeAg血清学转换,比例为23.4%。治疗组患者血清Th1细胞因子水平低于对照组,Th2细胞因子水平高于对照组,替比夫定治疗后,HBeAg阴转及血清转换患者血清Th1细胞因子浓度比治疗前升高,Th2细胞因子浓度比治疗前降低均有统计学意义（P〈0.05）,ALT恢复正常,HB-VDNA含量下降显著（P〈0.01）。结论T细胞亚群Th1/Th2细胞因子与慢性乙肝替比夫定抗病毒治疗后血清ALT复常,HBVDNA含量下降及HBeAg阴转及血清学转换相关,Th1/Th2亚群细胞因子平衡是促进肝功能ALT恢复、HBVDNA含量下降的重要因素之一,HBeAg高阴转及血清学转换率可能与替比夫定能上调Th1细胞因子水平有关。     

苦参素治疗慢性乙型肝炎相关细胞因子的变化

目的研究苦参素治疗慢性乙型肝炎前后血清肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、干扰素γ（interferon-1,IFN-1）、白细胞介素8（interleukin-8,IL-8）、白细胞介素12（interleukin-12,IL-12）、白细胞介素18（interleukin-18,IL-18）水平的变化。方法根据治疗结果,将56名患者分为3组：完全应答组、部分应答组和无应答组。检测患者治疗前及治疗3、6个月时血清TNF—α、IFN-γ、IL-8、IL-12、IL-18水平。结果治疗3个月时血清TNF-α、IFN-γ、IL-8、IL-12、IL-18水平达到最高,其后逐渐下降,治疗6个月时大部分低于治疗前水平。结论用苦参素治疗慢性乙型肝炎患者,早期观察其血清TNF—α、IFN-γ、IL-8、IL-12、IL-18的变化对疗效及预后有-定的预测作用。     

接受恩替卡韦治疗的慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞B7-H1表达的动态变化

<正>近年的研究[1]逐渐揭示免疫学因素影响着慢性乙型肝炎(CHB)的临床进展。B7-H1(又称PD-L1,CD274)及其受体PD-1是近年发现在T细胞激活中介导负性共刺激信号的分子,已有众多研究证实其在外周免疫耐受、自身免疫性疾病及慢性感染中发挥着重要作用。有研究发现慢性HBV感染患者T淋巴细胞功能的降低可能与患者树突状细胞(dendritic cells,     

Functional analysis of peripheral blood lymphocytes isolated from patients with chronic hepatitis type B

Cell-mediated immunity, evaluated by lymphocyte proliferation and expression of the activation antigen interleukin-2 receptor in response to mitogens such as phytohemagglutinin and concanavalin-A, has been reported to be defective in chronic hepatitis B virus carriers. However, no definite conclusion on the functional state of T cells from these patients can be drawn. In the present study, we have investigated the expression of a wide set of lymphoid activation molecules as well as the proliferative response of peripheral blood lymphocytes isolated from patients with chronic hepatitis type B afterin vitro stimulation with monoclonal antibodies to both the T-cell receptor-CD3 complex and the CD2 molecule, which are the two main T-cell activation pathways. Our findings show that peripheral T lymphocytes from patients with chronic hepatitis type B express the activation antigens 4F2 molecule, interleukin-2 receptor, and activation inducer molecule (AIM) antigen, and proliferate normally after specific stimulation through either the T-cell receptor-CD3 complex or the CD2 molecule. These results suggest that the peripheral blood T cells of patients with chronic hepatitis B are fully operative and functionally competentin vitro.This work was supported in part by a grant from the INSALUD (FISS 89/0068).