HE染色的组织切片褪色的原因分析

组织切片的染色是使无色的组织结构呈现颜色 ,增加对比度 ,便于镜下分辨。最常用的染色方法是苏木精 (Ｈｅｍａ ｔｏｘｙｌｉｎ)和伊红 (Ｅｏｓｉｎ)染色法 ,简称ＨＥ染色法。通常应用于各种固定 ,包埋方法所制作的组织石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片、深片、印片等。在病理诊断、病理和组织学教学及科研中均有重要的价值。组织经ＨＥ染色后 ,细胞核和胞质内的嗜碱性物质被苏木精染成蓝紫色 ,细胞质基质和间质内的胶原纤维被伊红染成深浅不同的粉红色。具有色彩鲜艳、对比明显的特点。但在操作中 ,由于种种原因而至切片在保管过程中褪色 ,…     

COL2A1基因突变致先天性脊柱骨骺发育不良的软骨组织超微结构观察

目的:先天性脊柱骨骺发育不良(SEDC)是常染色体显性遗传疾病,主要累及患者脊柱和长骨骨骺,发病率约为1 ∶ 100000.研究编码Ⅱ型胶原α1链的COL2A1基因G504S突变致SEDC的软骨组织超微结构改变. 方法:对SEDC引产胎儿和正常对照的软骨组织分别用苏木精-伊红(H-E)染色和甲苯胺蓝染色,在光镜下观察其形态学改变,并重点应用透射电镜和扫描电镜观察软骨组织的超微结构变化. 结果:在光镜下未观察到引产胎儿软骨组织明显变化,而在透射电镜下观察到引产胎儿软骨细胞粗面内质网异常膨大,形成包涵体结构,细胞外基质胶原纤维数量减少.扫描电镜下发现,引产胎儿软骨胶原纤维为不规则"草莓样"结构. 结论:COL2A1基因G504S突变导致软骨细胞和胶原纤维超微结构的改变,可能是SEDC发生的基础.     

心肌纤维化病理染色鉴定方法的综合评价

目的 观察比较苏木精-伊红染色法（hematoxylin and eosin staining,HE staining）、Masson染色法和苦味酸-天狼猩红染色法（picric sirius red staining,PSR staining）在评价心肌纤维化的各自特征及优缺点。方法 20只SD大鼠予以盐酸异丙肾上腺素（isoprenaline,ISO）制备心肌纤维化模型,以5mg/（kg·d）于同一时间段注射,持续3周。取大鼠心脏组织行HE染色、Masson染色以及PSR染色,置于显微镜下观察纤维化面积及胶原沉积特点,并比较Masson染色和PSR染色纤维化面积所占心肌总面积比重。结果 3种染色方法均可显示心肌纤维化面积,Masson染色和PSR染色所示纤维化面积差异无统计学意义（P > 0.05）;PSR染色后进一步行免疫荧光染色能够明确区分Ⅰ型和Ⅲ型胶原纤维的表达,然而Masson染色和HE染色则不能区分。结论 PSR染色法结合免疫荧光技术较Masson染色法和HE染色法,能够更好的评价心肌纤维化程度及胶原纤维类型,对于心肌纤维化的治疗及预防具有重要意义。     

苦味受体激动剂苦精对哮喘气道炎症及重塑的影响

目的 观察苦精对哮喘小鼠α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、气道上皮下胶原纤维及气道炎症的影响.方法 45只BALB/c小鼠分为3组,每组15只.A组:正常对照;B组:哮喘模型组;C组:哮喘加苦精干预1周.采用免疫组织化学方法观察小鼠肺组织α-SMA的沉积,用马松(Masson)染色方法观察小鼠气道胶原纤维的沉积,苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠气道炎性程度,并对其进行计算机图像半定量分析.结果 C组小鼠肺内细支气管壁α-SMA、胶原纤维沉积、气道炎症程度较B组明显减少,图像半定量分析结果与B组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 苦精可以改善哮喘小鼠气道炎症及气道重塑.     

个性化钛模板促进兔牙槽骨缺损区即刻牙种植体周围垂直骨量的扩增

  目的 探讨个性化钛模板在兔上颌牙槽骨缺损区即刻牙种植后对其周围垂直向骨增量的作用。方法 将8只雄性日本大耳白兔16侧上颌牙槽骨随机分为实验组(8侧)和对照组（8侧）。全麻下拔除2个上颌前磨牙,制作5 mm×10 mm牙槽骨缺损,植入直径2 mm,长8 mm的螺纹钛种植体3 mm,周围植入nHAC,实验组覆盖个性化钛模板,微螺钉固定,对照组不覆盖。术后4周及8周时观察2组种植体周围新骨高度扩增情况,了解X线照片及硬组织切片亚甲基蓝-碱性品红法染色牙种植体骨结合状况。结果 术后4周和8周时,大体标本、硬组织切片亚甲基蓝-碱性品红法染色及X线片均显示种植体骨结合界面良好,但覆盖个性化钛模板组种植体周围牙槽骨高度增加较对照组多。 结论 个性化钛模板具有屏障功能和支撑作用,对种植体周围缺损区可提供一定的时间和空间保障,有利于兔上颌牙槽骨高度的扩增。     

两种染色方法对神经元显示效果的比较

①目的探讨理想的显示神经元微细结构的方法。②方法取初生小牛脊髓横断切片，分别采用硫瑾-伊红与苏木精-伊红染色方法显示神经元结构。③结果硫瑾-伊红染色后神经元胞核大而圆，染色浅，核仁明显，胞体及树突内可见紫蓝色尼氏体分布。苏木精-伊红染色．胞核不清楚，尼氏体不明显，轴突与树突难以区分。④结论光镜下硫瑾-伊红染色比苏木精伊红染色更能清楚显示神经元的结构特征。     

痰液涂片染色检查细胞对肺部疾患诊断的fir值(附70例报告)

痰液涂片检查以往多局限于微生物学检查,很少涂片染色检查其中的细胞成分,即便染色,亦不外乎巴氏染色或苏木精-伊红染色做病理学检查.自2007年5月至2008年12月,笔者对肺炎、肺结核、过敏性哮喘和肺癌4个病种70位患者的痰液进行涂片瑞-姬氏染色观察,发现痰液中细胞成分对不同     

同种异体脱钙骨基质作为骨组织工程载体的实验研究

目的通过体外同种异体脱钙骨基质（DBM）和骨髓基质细胞（BMSC）的复合培养及体内异位成骨实验，研究DBM作为骨组织工程载体的生物相容性及成骨活性。方法参考Urist操作方法大量制备兔同种异体DBM。骨穿取兔骨髓单细胞悬液进行培养，将BMSC与同种异体DBM体外复合培养3～7d，相差显微镜、扫描电镜（SEM）和苏木精-伊红染色后光镜下观察结果。将DBM和BMSC复合培养3d的复合物植入家兔一侧骶棘肌肌袋内，分别在1、2、4周活体取材，扫描电镜和苏木精-伊红染色后光镜观察，对侧单纯植入DBM作为对照。结果体外培养发现BMSC在DBM中贴壁生长、增殖并有分泌活动。体内实验发现BMSC在DBM孔隙内均匀成骨，对照组则从DBM骨块的边缘到中心逐步成骨，成骨所需的时间长，而且成骨量要小于前者。结论DBM作为组织工程载体具有良好的生物相容性和成骨活性。     

痰液涂片染色检查细胞对肺部疾患诊断的价值（附70例报告）

痰液涂片检查以往多局限于微生物学检查,很少涂片染色检查其中的细胞成分,即便染色,亦不外乎巴氏染色或苏木精-伊红染色做病理学检查。自2007年5月至2008年12月,笔者对肺炎、肺结核、过敏性哮喘和肺癌4个病种70位患者的痰液进行涂片瑞-姬氏染色观察,发现痰液中细胞成分对不同肺部疾患有很大相关性。     

缺血-再灌注对股骨头关节软骨细胞分化及基质稳定性的影响

目的:探讨缺血-再灌注对股骨头关节软骨退行性变的影响。方法:建立髋关节缺血再灌注模型,大鼠随机分为正常组、模型组。于术后不同时点取股骨头关节软骨进行苏木精-伊红染色观察缺血-再灌注后股骨头关节软骨的病理组织学结构改变;利用Van Gieson胶原纤维染色法观察胶原纤维沉积变化;观察VEGFmRNA原位杂交表达。结果:关节软骨形态结构逐渐紊乱,再灌注后软骨细胞明显减少,差异均有显著性意义(P﹤0.01)。结论:缺血-再灌注可加重股骨头关节软骨的损伤,细胞增殖活性下降及细胞环境不稳定可能是缺血-再灌注早期股骨头关节软骨损伤的重要机制。     

不同切片和染色技术在陶瓷支架体内植入中的组织学研究

目的探讨石蜡切片与硬组织切片及不同染色方法在体内组织工程研究中的应用。方法将大节段多孔生物陶瓷/聚乳酸复合支架植入犬4个不同的非骨部位,取材后分石蜡切片组和硬组织切片组做HE和M asson染色,在光镜下观察其组织学形态并做比较。结果石蜡切片组色彩鲜艳,可以清楚的观察到成骨细胞、类骨质等成分;硬组织切片组镜下观察未充分体现出其优越性。结论M asson染色是HE染色的有益补充,两者结合更有利于镜下组织形态学观察;硬组织切片工序多、难度大,质量控制尚需完善,在本实验研究中,石蜡切片仍是非常重要和有效的观察手段。     

愈合期对微螺钉种植体-骨界面压力侧与非压力侧的影响

【目的】通过动物实验,研究不同愈合时间微螺钉种植体-骨界面颈部压力侧与非压力侧的组织学变化,探讨愈合期对颈部界面结合方式的影响。【方法】成年雄性杂种犬3只,每只犬每侧上颌颊侧骨板植入4枚种植钉,共24枚,分别进行愈合0、4、8周后加载200 g牵引力,加载8周时处死动物,取材,标记压力侧和非压力侧,两侧均制备扫描电镜标本、脱钙的HE染色标本及不脱钙的硬组织标本,后者行甲苯胺蓝及亚甲基蓝-碱性品红染色,光镜及扫描电镜下观察界面组织变化。【结果】即刻加力组颈部四周被纤维包绕,压力侧骨改建不如非压力侧活跃;愈合4周组压力侧骨改建较非压力侧活跃;愈合8周组压力侧与非压力侧骨改建较活跃,两侧差异不显著。【结论】随着愈合期的延长,无论压力侧还是非压力侧都逐渐由纤维愈合向骨性愈合转化。但即刻加力影响骨改建。     

心房颤动对肺静脉肌袖结构影响的研究

目的：探讨心房颤动（atrial fibrillation，AF）时肺静脉肌袖结构的变化及其意义。方法：健康杂种犬17只，随机分为心房颤动组（11只）和对照组（6只），应用快速心房起搏建立慢性房颤动物模型，通过HE染色、Masson 染色研究犬右上肺静脉的结构变化。结果：与对照犬相比，AF犬肺静脉肌袖内心肌细胞增大、排列紊乱；细胞核大小不甚规则，核异型性明显，细胞内可见肌纤维断裂；心肌纤维之间连接组织积聚，使心肌细胞之间的间隔增宽。从左心房到肺静脉方向，心肌袖组织逐渐变薄，末端肌束被纤维组织隔离。心肌袖内可见肌纤维方向突然改变，心肌细胞在长轴切片上显示为横断面，而在短轴切片上显示为纵切面。AF犬肺静脉肌袖内胶原组织较对照犬明显增多，排列紊乱，分布不均匀，围绕单个心肌细胞的胶原纤维网减少或断裂。结论：肺静脉肌袖结构的特殊性及其结构重构可能是形成肺静脉局部微折返的组织学基础，是AF发生和维持的重要机制。     

华支睾吸虫分泌/排泄抗原致大鼠肝纤维化

目的 以大鼠为对象,初步探讨华支睾吸虫成虫分泌/排泄抗原(CsESAs)在华支睾吸虫致肝纤维化过程中的作用和可能机制.方法 无菌培养华支睾吸虫成虫,收集CsESAs;腹腔注射CsESAs,Masson染色观察CsESAs对大鼠肝脏胶原纤维增生的影响,HE染色和组织免疫荧光法检测α-SMA(α-smooth muscle actin)的表达以观察CsESAs对大鼠肝星状细胞增生和活化的影响;ELISA法检测实验动物血清中抗CsESAs抗体滴度以探讨抗原-抗体复合物的致病作用. 结果 腹腔注射CsESAs,大鼠肝脏表现出明显的纤维化、肝星状细胞增生和活化,但大鼠肝纤维化程度与注射的CsESAs量有关而与大鼠血清中抗CsESAs抗体存在量无关.结论 CsESAs可以导致肝星状细胞活化和肝纤维化的发生,但抗原-抗体复合物不是CsESAs引起肝星状细胞活化的主要途径.     

再造组织工程化平滑肌组织的实验研究

目的采用组织工程技术,将培养扩增的膀胱平滑肌细胞与国产可降解的聚合聚乙交酯丙交酯（PLGA）支架材料复合构建并植入裸鼠体内进行培育,探讨再造组织工程化平滑肌组织的可行性。方法从幼兔取膀胱,机械分离与酶消化获取培养平滑肌细胞,传代扩增平滑肌细胞后将其接种到国产PLGA支架材料的表面作为实验组,未接种细胞的单纯支架材料作为对照组。分别将它们植入到裸鼠体内进行培育。经裸鼠体内培育4周、8周后取材并进行大体观察、组织学及免疫组织化学检测。结果实验组标本经HE和Masson染色显示在材料表面形成数层平滑肌细胞层,经抗平滑肌α-肌动蛋白免疫组织化学染色呈棕黄色阳性。随着培育时间的延长,支架材料降解明显,而平滑肌细胞层进一步增殖形成平滑肌组织。对照组经HE染色材料表面见有少量成纤维细胞沉积,Masson染色示兰色,经抗平滑肌α-肌动蛋白免疫组织化学染色为阴性。结论采用国产PLGA聚合物为支架材料可再造出组织工程化平滑肌组织,为多种含平滑肌组织空腔脏器的组织工程研究奠定基础。     

人胎盘组织液抗腹膜粘连作用及其作用机制研究

目的：观察人胎盘组织液抗大鼠腹膜粘连作用并探讨其作用机制。方法：采用大鼠腹膜缺损/盲肠刮伤模型,设立模型组、假手术组和人胎盘组织液组,于术后7、14d麻醉下再次开腹,肉眼评定盲肠与周围组织的粘连情况,并取粘连组织进行组织病理学观察,包括HE染色、Masson染色、免疫组化TGF-β1测定。结果：与模型组相比,人胎盘组织液组粘连评分明显降低（P〈0.05）。HE染色和Masson染色显示人胎盘组织液组肉芽组织量少,肉芽组织疏松,炎细胞明显减少,胶原纤维明显减少。免疫组化结果显示人胎盘组织液抑制了TGF-β1的表达。结论：人胎盘组织液通过抑制TGF-β1表达,抑制成纤维细胞的增生和胶原蛋白的形成,减轻了大鼠术后粘连发生的程度和范围。     

DNMT3A与CTGF在AAC致大鼠心肌纤维化中的表达及相关性研究

目的 探讨经腹主动脉缩窄(AAC)导致大鼠心肌纤维化中DNA甲基转移酶3A(DNMT3A)与结缔组织生长因子(CTGF)的表达及相关性.方法 将60只8周龄雄性SD大鼠随机分为模型组及对照组.模型组行AAC术,对照组行假手术,术后2周处死大鼠获取血液标本,并取心脏.同时测定心重指数,采用ELISA法测量Ⅰ型胶原和CTGF在心肌组织匀浆中的含量,HE和Masson染色法观察心肌组织病理学改变;Western blot法测定DNMT3A和CTGF的表达.结果 与对照组比较,模型组大鼠的心重指数显著上升,且心肌组织中Ⅰ型胶原和CTGF的含量明显增加;HE和Masson染色显示,模型组心肌组织呈现明显的胶原沉积;Western blot检测表明模型组DNMT3A、CTGF的含量水平明显高于对照组;DNMT3A和CTGF在大鼠心肌纤维化组织中的表达呈正相关性(r--0.64,P＜0.01).结论 DNMT3A参与心肌纤维化的形成过程,并在其中起到一定的促进作用,可能与CTGF的升高有一定的相关性.     

褪黑素对糖尿病大鼠心肌细胞凋亡及MAPK通路的影响

目的 观察褪黑素(MLT)对2型糖尿病大鼠心肌损伤的保护作用及其抗凋亡机制.方法 24只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、治疗组.采用链脲佐菌素(STZ) 25 mg/kg 腹腔注射诱导糖尿病大鼠模型,造模成功后开始给予MLT治疗24周.24周后,取心脏组织, HE染色检测心肌组织的形态变化,Masson染色检测心肌组织的胶原纤维的变化,原位末端标记法(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡的变化,Western blot检测其相关凋亡蛋白和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路相关蛋白的表达水平.结果 HE染色显示MLT能改善心肌组织形态的紊乱情况,Masson染色显示MLT能缓解心肌组织胶原纤维的堆积.与糖尿病大鼠比较,MLT能明显改善糖尿病大鼠心肌组织的细胞凋亡情况.Western blot显示MLT能下调凋亡蛋白Bax和caspase3的表达(P<0.05),上调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达(P<0.05);此外,MLT也能明显下调p-JNK蛋白的表达(P<0.05).结论 MLT可能通过下调血糖、MAPK通路中p-JNK信号通路表达,改善糖尿病大鼠心肌组织的凋亡.     

近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞体外分泌 肝细胞生长因子延缓慢性肾脏病纤维化进展

目的：分离培养近交系五指山小型猪骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BM-MSCs), 并建立其慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型,体外研究同物种BM-MSCs对CKD肾纤维化的修复作用及其 可能机制。方法：采用密度梯度法分离培养BM-MSCs,并从细胞形态、表面抗原、分化能力等方面鉴定;采用左侧 输尿管部分梗阻(left partial ureteral obstruction,LPUUO)方法制作CKD模型,并通过B超、单光子发射计算机断层成像 术(single-photon emission computed tomography,SPECT)、病理染色等评估;体外实验分为肾组织与BM-MSCs共培养、 肾组织单独培养、BM-MSCs单独培养3组,体外培养7 d,每天收集3组上清液,酶联免疫吸附法测定肝细胞生长因子 (hepatocyte growth factor,HGF)累积分泌量。肾组织行HE染色,Masson染色。结果：分离培养的BM-MSCs表达抗原 CD29,CD90而不表达CD45,成骨诱导茜素红染色阳性,成软骨诱导阿利新蓝染色阳性。LPUUO术后12周,B超示 左肾皮质变薄、肾盂积液;SPECT示左肾充盈延迟、梗阻性肾功能受损。上清液HGF累积含量示BM-MSCs+CKD肾组 织共同培养组第1,5,6,7天HGF累积分泌量明显高于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。HE染色显示BM-MSCs+CKD 肾组织共同培养组和CKD肾组织单独培养组中肾均出现不同程度的病变,并随时间延长加重,但CKD肾组织单独培 养组病变更严重;Masson染色显示BM-MSCs+CKD肾组织共同培养组术后第5,6,7天肾组织被染成蓝色的胶原纤维 的累计光密度值明显低于CKD肾组织单独培养组(P<0.05)。结论：近交系五指山小型猪BM-MSCs体外分泌HGF,抑制 或延缓CKD纤维化进展。