PIK3R1对多发性骨髓瘤细胞侵袭转移的影响及其机制初探

目的:观察应用RNA干扰(RNAi)技术敲低PIK3R1表达后在体外对人类多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞侵袭的抑制作用。方法:将重组质粒表达载体pGenesil-1.1-PIK3R1转染至RPMI8226细胞。Realtime PCR和Western blot分别检测转染前后目的基因mRNA和蛋白的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞外基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9的浓度变化。Transwell实验评价肿瘤细胞侵袭能力的变化。结果:pGenesil-1.1-PIK3R1可以有效抑制PIK3R1mRNA及蛋白的表达,MMP-2、MMP-9表达下调,基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-2表达上调,ELISA证实细胞外MM9-2、MMP-9浓度在治疗组明显减低。Tramwell穿过细胞数:对照组(115.5±3.9)和无义序列组(112.8±6.0),pGenesil-1.1-PIK3R1转染组(73.7±4.0)。结论:靶向PIK3RI的RNAi技术可以序列特异性地抑制PI3KR1表达,在体外明显抑制RPMI8226细胞的侵袭能力。     

HIF-1α siRNA对非小细胞肺癌A549细胞TIMP1、MMP1表达的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP1)表达的影响。 方法 将siRNA-HIF-1α质粒载体稳定转染至A549细胞中,于缺氧环境下培养。应用MMT法和Transwell试验分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力。应用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测转染细胞内TIMP1、MMP1 mRNA和蛋白表达水平。 结果 与Control组相比,A549组HIF-1α mRNA和蛋白表达显著增加(均P<0.05)。与Blank组和si-NC组相比,si-HIF-1α组HIF-1α mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组在转染24、48和72 h后细胞增殖率均显著降低(均P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组A549细胞在转染24 h后的迁移和侵袭数量均显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组细胞内MMP1表达水平显著降低,而TIMP1表达水平显著增加(均P<0.05)。 结论 在缺氧状态下,HIF-1α siRNA靶向沉默HIF-1α在A549细胞内的表达,并可以通过下调MMP1表达和上调TIMP1的表达而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。      

RNAI沉默Grp94基因对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨RNAI沉默Grp94基因表达对人食管癌ECA109细胞迁移及侵袭能力的影响和可能机制.方法 设计、合成靶向Grp94基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染食管癌ECA109细胞,采用Real-time PCR和Western blot法分别检测转染后的细胞内Grp94、基质金属蛋白酶MMP2及MMP9的表达,采用Transwell实验检测沉默Grp94基因对细胞迁移及侵袭能力的影响.结果 SiGrp94组中Grp94mRNA和蛋白水平显著下调(P＜0.01),MMP2、MMP9表达明显下调(P＜0.05);SiGrp94组细胞迁移及侵袭能力明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默Grp94基因可明显抑制ECA109细胞的迁移及侵袭能力,Grp94可能通过影响MMP2、MMP9参与其中.     

老龄大鼠肺内基质金属蛋白酶2、9及基质金属蛋白酶组织抑制因子1、2、3表达变化

目的:对比观察老龄大鼠和成年大鼠肺胶原蛋白的改变、转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)水平的变化、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPS)MMP2,MMP9以及基质金属蛋白酶组织抑制因子(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMPS)表达调控的变化,寻找肺间质纤维化发病率随年龄增加的可能原因.方法:通过羟脯氨酸定量测定肺组织胶原含量,ELISA方法测定TGF-β1蛋白水平,荧光定量PCR(realtime PCR)技术测定MMP2,MMP9,TIMP1,TIMP2,TIMP3 mRNA表达量的变化.结果:与成年大鼠组相比,老龄大鼠肺细胞外胶原成分增加,TGF-β1蛋白水平升高[(756±160)pg/g vs(1 000±246)pg/g,P＜0.05],MMP2 mRNA(3.15±1.76 vs 0.17±0.13,P＜0.01)表达水平降低,MMP9 mRNA(1.66±0.67 vs 1.74±0.87,P＞0.05)表达水平没有明显变化.老龄大鼠组TIMP1 mRNA(2.00±1.74 vs 0.11±0.06,P＜0.01),TIMP2 mRNA(7.60±2.51 vs 2.69±1.76,P＜0.01),TIMP3 mRNA(1.32±0.46 vs 0.29±0.16,P＜0.01)表达水平均低于成年大鼠组.结论:肺老化后细胞外胶原比例增加,TGF-β1蛋白水平升高,MMP2和MMP9转录水平改变,TIMPS mRNA转录水平降低等多重因素共同构成肺间质纤维化发病率随年龄增加的基础.     

实验性自身免疫性肌炎中MMP-2,MMP-9,TIMP-1的表达及甲基强的松龙的影响

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9)及基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMP 1)在实验性自身免疫性肌炎 (EAM)发病中的作用 ,以及甲基强的松龙对MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1基因mRNA和蛋白表达的影响。方法 :应用RT PCR及免疫组织化学技术 ,研究MMP 2 ,MMP 9及TIMP 1在EAM组、甲基强的松龙治疗组 (EAMM组 )和对照组 (NS组 )大鼠外周血、脾脏、肌肉组织中的表达水平。结果 :EAMM组大鼠发病程度低于EAM组 ,炎症细胞浸润和肌纤维坏死程度减轻。MMP 2 ,MMP 9mRNA在EAM大鼠外周血、脾脏淋巴细胞中的表达上调 ;MMP 2 ,MMP 9蛋白在EAM组大鼠肌肉组织表达增加 ,与对照组相比差异有显著性。EAMM组MMP 2 ,MMP 9mRNA的表达及蛋白的表达均受到抑制 ,与EAM组比较差异有显著性。EAMM组TIMP 1基因mRNA及蛋白的表达上调 ,与EAM组相比差异有显著性。结论 :MMP 2 ,MMP 9表达增加可能与EAM发病有关 ;TIMP 1可能参与了抑制免疫反应 ;甲基强的松龙能减轻EAM发病程度 ,其作用机制可能与MMP 2及MMP 9的表达下调、TIMP 1的表达上调有关     

缺氧对细胞滋养细胞MMP9/TIMP1基因表达及细胞侵袭力的影响

目的 探讨缺氧对细胞滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)及其抑制物1(TIMP1)mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭能力的影响.方法 将永生化的早孕细胞滋养细胞进行化学缺氧(150 μmol/L CoCl2),用免疫组化、荧光定量PCR、Western blot等方法检测正常和缺氧细胞滋养细胞系MMP9/TIMP1基因的表达,应用Transwell侵袭模型检测缺氧对细胞滋养细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧组的细胞滋养细胞MMP9、TIMP1 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05),MMP9/TIMP1比值升高,且呈时间依赖性.缺氧组细胞滋养细胞的侵袭力较对照组增强(P<0.05).结论 在生理性缺氧条件下,早孕细胞滋养细胞的侵袭力是增加的,并与MMP9/TIMP1比值的升高有关;同时TIMP1除了调节MMP9外,还可能促进细胞滋养细胞的增殖与分化.     

RNA干扰GCF2基因沉默对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响

目的 探讨沉默GCF2基因表达对人肝癌BEL-7404细胞侵袭能力的影响.方法 实验分为GCF2-siRNA组、NC-siRNA组及MOCK组,GCF2-siRNA组转染靶向GCF2基因的RNA干扰序列GCF2-siRNA,阴性对照组转染阴性对照序列NC-siRNA,MOCK组不转染任何序列.将靶向GCF2基因的RNA干扰序列 (GCF2-siRNA) 瞬时转染BEL-7404细胞以沉默GCF2表达,采用CCK-8法检测细胞增殖活性,体外侵袭实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测基质金属蛋白酶(MMP)-9及GCF2靶基因MMP-23蛋白表达.结果 转染GCF2-siRNA使GCF2表达下调,后者导致BEL-7404增殖受阻;GCF2-siRNA组的穿膜细胞数较阴性对照组(NC-siRNA)及未转染组(MOCK)明显减少(穿膜细胞数分别为41.5±0.95、61.3±1.57、64.5±1.65,P<0.05);MMP-9和MMP-23蛋白表达较两个对照组明显下降(P<0.05).结论 下调GCF2表达能抑制BEL-7404侵袭能力, 提示GCF2促进肝癌细胞的侵袭可能是其参与肝癌发展进程的重要途径.     

Skp2基因对大肠癌侵袭与转移的影响及其机制

目的:研究S期激酶相关蛋白2(Skp2)对大肠癌侵袭和转移的影响。方法:采用免疫组化SP法检测35例大肠癌及15例癌旁组织中Skp2、基质金属蛋白酶2(MMP2)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达水平,并分析它们与大肠癌临床病理特征之间的关系;构建Skp2干扰腺病毒与转录因子Sp1过表达腺病毒,转染人结肠癌SW480细胞;用Western blot检测蛋白表达情况;划痕实验检测细胞迁移能力;侵袭实验检测细胞侵袭能力变化。结果:免疫组化结果显示大肠癌中Skp2、MMP2和MMP9阳性表达率分别为(35.5±12.9)%、(78.8±11.8)%、(75.3±11.6)%(P<0.05);Skp2阳性表达率与淋巴结转移及肿瘤分化程度正相关(P<0.05);MMP2、MMP9阳性表达率与肿瘤TNM分期、淋巴结转移正相关(P<0.05),大肠癌中Skp2与MMP2、MMP9表达分别呈正相关(r=0.341,P=0.045;r=0.339,P=0.046)。沉默Skp2后,MMP2、MMP9、Sp1蛋白明显下调(P<0.05);伤口愈合能力明显降低,侵袭细胞数明显减少(P<0.05);加入Sp1过表达腺病毒上调Sp1蛋白后,细胞侵袭能力恢复。结论:Skp2、MMP-2和MMP-9与大肠癌的进展和转移密切相关;Skp2-shRNA可能通过下调Sp1减少MMP2、MMP9的表达从而抑制大肠癌细胞SW480的侵袭和转移。     

siRNA沉默MACC1基因表达对宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响

目的探讨siRNA沉默结肠癌转移相关基因1(MACC1)表达对Hela宫颈癌细胞增殖及侵袭的影响。方法通过脂质体将siRNA MACC1及siRNA NC转入Hela细胞中,RT-PCR及western blot检测转染效果,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,western blot检测细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、cyclin E,基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9蛋白表达及细胞外调节蛋白激酶(ERK)磷酸化水平。结果与siRNA NC组比较,siRNA MACC1组中MACC1蛋白及mRNA表达量降低(P0.01),细胞活力及侵袭能力下降(P0.01),细胞周期阻滞在G1期,cyclin D1、cyclin E、MMP2、MMP9及p-ERK表达量下调(P0.01)。结论siRNA MACC1能显著的抑制宫颈癌Hela细胞增殖与侵袭,可能与下调ERK磷酸化水平有关。     

miR-181b过表达对胶质瘤U87细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白表达和细胞侵袭能力的影响

目的:探讨微小RNA-181b(miR-181b)过表达对人胶质瘤细胞中膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)和金属蛋白酶组织抑制剂3(TIMP3)表达的调控作用及对细胞侵袭能力的影响。方法:将培养于DMEM培养基的人胶质瘤U87细胞分为阴性对照组(不做任何处理)、空载组(转染Lipofetamine 2000)、乱序组(转染乱序has-miR-181b寡核苷酸)和miR-181b组(转染has-miR-181b寡核苷酸)。qRT-PCR法检测各组细胞中miR-181b基因表达水平,Western blotting法检测各组细胞中MT1-MMP和TIMP3蛋白的相对表达水平,基质胶侵袭试验检测各组细胞的侵袭能力,测定各组细胞的趋化运动抑制率、迁移率和细胞黏附率;生物信息学数据库预测miR-181b的侯选靶基因。结果:miR-181b组U87细胞中miR-181b基因表达水平明显高于其他各组(P<0.01),呈过表达。miR-181b组U87细胞中MT1-MMP蛋白表达水平低于其他各组(P<0.01),miR-181b与MT1-MMP蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.787,P<0.05);miR-181b组U87细胞中TIMP3蛋白表达水平高于其他各组(P<0.01),miR-181b与TIMP3蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.801,P<0.05)。基质胶侵袭试验中miR-181b组穿膜细胞数明显低于其他各组(P<0.05)。与其他3组比较,miR-181b组U87细胞的趋化运动抑制率升高、迁移率和细胞黏附率降低(P<0.05)。生物信息学数据库预测,在MT1-MMP的3'非翻译区(3'UTR)有1个与miR-181b的结合位点,在TIMP3的3'UTR有2个与miR-181b的结合位点。结论:miR-181b过表达可下调MT1-MMP和上调TIMP3蛋白的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭能力;miR-181b作为关键性调节miR,可能成为胶质瘤治疗的重要靶标。     

脑膜瘤MMPs和TIMPs的表达意义

目的 :研究基质金属蛋白酶 2和基质金属蛋白酶 9(matrixmetalloproteinase ,MMP 2 ,MMP 9)及其特异性抑制剂金属蛋白酶组织抑制剂 1和金属蛋白酶组织抑制剂 2 (tissuein hibitorofmetalloproteinase,TIMP 1,TIMP 2 )在脑膜瘤组织中的表达及其与肿瘤脑浸润 ,病理性质的关系 .方法 :用原位杂交法检测 4 5例脑膜瘤组织中MMP 2 ,MMP 9mRNA的表达 ;用免疫组化检测MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1和TIMP 2蛋白的表达 .结果 :有脑浸润的脑膜瘤MMP 2 ,MMP 9的表达阳性率较无脑浸润的脑膜瘤明显增高 (P <0 .0 5 ) ;非典型性及恶性脑膜瘤较良性脑膜瘤高表达MMP 2 ,MMP 9(P <0 .0 5 ) ;TIMP 1,TIMP 2的表达在各肿瘤中差异无显著意义 (P >0 .0 5 ) .结论 :MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1和TIMP 2对脑膜瘤的脑浸润有重要影响 .     

RNA干扰沉默桩蛋白对食管鳞癌EC9706细胞体外侵袭能力的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAi)沉默桩蛋白(Paxillin)基因表达对人食管鳞癌EC9706细胞系体外侵袭能力的影响.方法:将食管鳞癌EC9706细胞分为正常对照组、转染siRNA对照组以及Paxillin siRNA组,通过RTPCR和Western Blotting方法检测转染48 h后3组细胞Pariilin、FAK和MMP-2 mRNA和蛋白的表达;通过侵袭小室实验观察3组细胞体外侵袭能力的变化.结果:3组细胞中Palillin、FAK和MMP02 mRNA及蛋白的表达水平相比,差异具有统计学意义(mRNA:F＝7 021、388、20 147.737和5 992.522,P<0.001;蛋白:F=4 454.293,10 003.335和3 802.389,P〈0.001),正常对照组及转染siRNA对照组细胞Paxilliu、FAK和MMP-2 mRNA及蛋白的表达均高于Paxillin siRNA组(P<0.05);3组穿膜细胞数比较,差异具有统计学意义(F=288.741,P(0.001),正常对照组及转染siRNA对照组的穿膜细胞致高于Paxillin siRNA组(P<0.05).结论:RNAi沉默Ptaiilin基因表达可以使EC9706细胞的体外侵袭能力降低.     

MMP-2,MMP-9,TIMP-1和TIMP-2在肝癌中原位表达

目的 :探讨肝癌中基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9和组织金属蛋白酶抑制剂TIMP 1 ,TIMP 2的mRNA和蛋白质表达与临床病理特征和预后的关系。方法 :在 5 6例有完整随访资料的原发性肝癌标本中原位杂交检测MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ;免疫组化检测MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1 ,TIMP 2蛋白质的表达。结果 :MMP 2mRNA ,TIMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1和TIMP 2蛋白质在肝癌中的阳性表达分别为 4 8(85 .7% )例 ,35 (6 2 .5 % )例 ,4 4 (78.6 % )例 ,4 1 (73.2 % )例 ,30 (5 3.6 % )例 ,38(6 8% )例。MMP 2mRNA ,MMP 2 ,MMP 9在肝癌中呈高表达 ,而TIMP 1蛋白呈低表达 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。TIMP 2mRNA与TIMP 2蛋白 ;MMP 2mRNA与MMP 2蛋白在肝癌中的表达呈正相关 (分别为r=0 .31 6 ,P <0 .0 5 ;r=0 .35 6 ,P <0 .0 5 )。MMP 2mRNA的表达与肝癌肿瘤大小和临床分期呈正相关 (分别为r =0 .4 4 1 ,P <0 .0 1 ;r=0 .340 ,P <0 .0 5 ) ;MMP 9蛋白表达阳性的肝癌患者术后生存时间缩短 (P <0 .0 5 )。Kaplan Meier单因素分析发现MMP 2 ,MMP 9表达阳性患者的预后差 (P <0 .0 1 ,P <0 .0 5 )。多因素Cox回归分析显示MMP 2 ,MMP 9的蛋白表达可作为肝癌估测预后的指标。结论 :基质金属蛋白酶MMP 2 ,MMP 9的过表达以及其与TIMP 2 ,MMP     

缺氧共培养血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响

目的 探讨在缺氧共培养条件下血管内皮细胞对绒毛外滋养细胞侵袭力的影响.方法 绒毛外滋养细胞在缺氧下单独培养作为对照组,绒毛外滋养细胞与血管内皮细胞用Transwell小室建立缺氧共培养作为观察组.应用荧光定量PCR、Western blot方法分别检测绒毛外滋养细胞基质金属蛋白酶9(MMP9)/基质蛋白酶抑制剂1(TIMP1)mRNA及蛋白的表达;应用Transwell侵袭模型检测缺氧共培养下绒毛外滋养细胞侵袭力的变化.结果 与对照组比较,观察组的绒毛外滋养细胞MMP9 mRNA及蛋白的表达均明显降低(均P＜0.01),TIMP1 mRNA及蛋白的表达无明显变化(均P＞0.05);观察组的绒毛外滋养细胞侵袭力较对照组明显降低(P＜0.01).结论 缺氧共培养条件下,血管内皮细胞可下调绒毛外滋养细胞MMP9基因的表达并降低绒毛外滋养细胞侵袭力.     

缺氧微环境中CCL28高表达促进HCCLM3细胞迁移和侵袭

 目的  探讨缺氧条件下HCCLM3细胞趋化因子CCL28表达情况及作用 。方法  实时定量PCR和ELISA方法检测缺氧条件下肝癌细胞HCCLM3 趋化因子CCL28表达水平;运用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)和Lipofectamine 2 000细胞转染技术下调CCL28表达;用Transwell和 Matrigel观察肝癌细胞HCCLM3侵袭迁移情况;采用明胶酶谱法测定CCL28 siRNA干扰后细胞上清中的基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase enzyme,MMP)含量。应用实时定量PCR检测50例肝细胞癌组织中CCL28 mRNA表达情况,运用卡方检验和Kaplan Meier法分析CCL28表达与临床病例特征及患者总体生存时间的关系。结果  肝癌HCCLM3细胞内CCL28 mRNA在缺氧培养6 h后表达增高,蛋白水平在缺氧培养12 h后表达增高,呈时间依赖性。SiRNA抑制CCL28表达后,缺氧条件下HCCLM3细胞迁移数目(65.2±4.49)较siRNA阴性组(85±5.91)和空白组(87.4±8.44)有所减少(P<0.001);穿过Matrigel膜细胞数目(43.2±5.36)较siRNA阴性组(58±3.87)和对照组(54.6±9.53)有所减少(P=0.011)。明胶酶谱法发现CCL28表达抑制后HCCLM3分泌MMP 2减少。PCR结果提示,肝癌组织CCL28 mRNA表达量为0.0254 ±0.0755,与正常肝组织相比,23例(46%)呈高表达,CCL28表达高低与肿瘤最大径(P=0.027)、术后复发相关(P=0.019);CCL28高表达与低表达组之间总体生存无明显差异(χ2=0.008,P=0.927)。结论  缺氧条件下趋化因子CCL28高表达并参与肝癌细胞HCCLM3迁移侵袭过程。肝癌组织中CCL28表达增高与术后复发相关。     

胰岛素对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞P PARγ2m RNA表达的影响

目的 探讨胰岛素对稳定表达人脂联素3T3-L1细胞PPARγ2mRNA表达的影响.方法 重组脂联素真核表达质粒(pcDNA3.1+-hADPN)脂质体法稳定转染3T3-L1细胞.用胰岛素(500ng/mL)处理未转染、转染空载载体、转染pcDNA3.1+-hADPN的3T3-L1细胞,RT-pCR检测PPARγ2 mRNA的表达量.结果 ①稳定转染了pcDNA3.1+-hADPN的未分化和已分化3T3-L1细胞,PPARγ2表达量较未转染组明显增加(P＜0.01).②胰岛素可明显抑制PPARγ2 mRNA的表达(P＜0.05).③稳定转染pcDNA3.1+-hADPN可改善胰岛素抑制作用(P＜0.05).结论 稳定转染pcDNA3.1+-hADPN可明显增加未分化和已分化的3T3-L1细胞PPARγ 2 mRNA表达.胰岛素抑制PPARγ 2 mRNA表达,转染PcDNA3.1+-hADPN可改善胰岛素抑制作用.     

巨噬细胞移动抑制因子在肾癌中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)在肾癌组织中的表达及对肾癌细胞侵袭能力的影响.方法 以内蒙古自治区人民医院和包头市肿瘤医院2013年3月至2015年3月病理室确诊的49例肾癌患者为研究对象,采用蛋白质印迹法(West-ern blot)及反转录(RT)-PCR法检测肾癌组织及癌旁正常组织、肾癌细胞株及正常肾小管上皮细胞HK 2中MIF蛋白及mRNA表达;利用脂质体将siRNA MIF及siRNA NC转染到肾癌细胞中,Western blot及RT-PCR检测转染效果,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)及基质金属蛋白酶9(MMP9)的表达.结果 肾癌组织中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(0.89±0.09 vs.0.18±0.02,1.19±0.04 vs.0.19±0.01,P＜0.05),肾癌细胞株ACHN、769-p、786-O、Caki-1中MIF蛋白及mRNA表达水平明显高于肾小管上皮细胞HK-2(P＜0.05).与siRNA NC组比较,siRNA MIF组中MIF蛋白及mRNA表达水平明显下调(P＜0.05),细胞活力及侵袭能力降低(P＜0.05),HIF-1α及MMP9表达水平下调(P＜0.05).结论 MIF在肾癌中高表达,下调MIF表达能明显抑制肾癌细胞的侵袭能力,可能与抑制HIF-1α/MMP9信号通路有关.     

调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜αvβ3、MMP9及TIMP1表达的影响

目的:探讨调经助孕胶囊对促排卵周期小鼠子宫内膜整合素αvβ3、基质金属蛋白酶(MMP-9)及其抑制物(TIMP-1)表达的影响。方法:60只8～9 w龄昆明种小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、实验组各20只。给予相应药物灌胃10 d后,造模,雌雄合笼。于妊娠第5天获取子宫内膜,检测小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达及MMP9/TIMP1 mRNA表达。结果:模型对照组小鼠着床期子宫内膜MMP9及TIMP1的表达低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。实验组小鼠着床期子宫内膜MMP9、TIMP1及其比值均高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。模型对照组小鼠着床期子宫内膜整合素αvβ3表达明显低于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05);实验组小鼠着床期子宫内膜αvβ3表达明显高于模型对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:促排卵可导致着床期子宫内膜MMP9及TIMP1mRNA表达下降,影响MMP9/TIMP1比值,整合素αvβ3蛋白表达下降,可能是促排卵影响子宫内膜容受性的机制之一。调经助孕胶囊可增加促排卵周期着床期小鼠子宫内膜整合素αvβ3蛋白表达,MMP9、TIMP1 mRNA表达,调节MMP9/TIMP1平衡。     

双氢青蒿素对卵巢上皮癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响

目的 观察双氢青蒿素对体外培养的卵巢上皮癌细胞黏附、迁移和侵袭能力的影响,并探讨相关的分子作用机制.方法 以不用药物处理的SKOV3和OVCAR3卵巢上皮癌细胞为对照组,利用基质胶贴壁黏附法检测双氢青蒿素(研究组)对癌细胞体外黏附能力的影响,用跨膜小室模型检测双氢青蒿素对癌细胞迁移和侵袭能力的影响.用Western印迹和RT-PCR法分别检测双氢青蒿素对癌细胞聚焦黏附激酶(FAK)磷酸化的影响以及对基质金属蛋白酶(MMP)及其组织抑制因子(TIMP)表达的影响.结果 (1)与对照组相比,双氢青蒿素使SKOV3和OVCAR3细胞的体外黏附能力分别降低76.1%和57.9%(P<0.05),迁移能力降低59.3%和69.7%(P<0.05).(2)SKOV3和OVCAR3细胞的侵袭能力弱,双氢青蒿素对其侵袭能力无明确抑制作用.(3)与对照组比较,双氢青蒿素分别使SKOV3和OVCAR3细胞FAK蛋白磷酸化水平降低42.9%和44.8%(P<0.05).(4)SKOV3和OVCAR3细胞中未检测到MMP9的表达,双氢青蒿素能诱导TIMP1的表达,对MMP2和TIMP2的表达无影响.结论 双氢青蒿素对卵巢上皮癌细胞侵袭能力的影响不明显,但能抑制其黏附和迁移能力,后两者可能与药物抑制癌细胞FAK的磷酸化水平有关.     

镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞中基质金属蛋白酶9和基质金属蛋白酶抑制因子3表达的影响

目的研究不同浓度镁钙合金浸提液对人结肠黏膜上皮细胞NCM460中基质金属蛋白酶9(MMP9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP3)表达的影响。方法用镁钙合金制成不同浓度(体积分数10%、50%和100%)的浸提液,并将NCM460细胞制成5×10~6L~(-1)的细胞悬液,分为空白对照组及实验1、2、3组,空白对照组每孔加入含体积分数10%胎牛血清的达尔伯克改良伊格尔高糖培养基2 000μL,实验1、2、3组每孔分别加入体积分数10%、50%及100%的镁钙合金浸提液2 000μL,分别培养1、3、5 d,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3 mRNA的表达,免疫印迹法检测NCM460细胞中MMP9和TIMP3蛋白表达。结果培养1 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA、TIMP3 mRNA表达水平均显著低于空白对照组(P<0.05);培养3、5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平仍显著低于空白对照组(P<0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9mRNA表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);培养5 d后,实验3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平显著高于实验2组(P<0.05)。培养3、5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后;培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平与培养3 d后比较差异无统计学意义(P>0.05),实验2、3组NCM460细胞中MMP9 mRNA表达水平均显著高于培养3 d后(P<0.05)。培养1 d后,实验2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于实验1组(P<0.05)。培养3 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平显著低于对照组(P<0.05),实验2组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著低于实验1、3组(P<0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3 mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05)。实验1组NCM460细胞中培养3、5 d后的TIMP3 mRNA表达水平均显著高于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养3 d后(P<0.05)。实验2组NCM460细胞中培养3 d后的TIMP3mRNA表达水平显著低于培养1 d后(P<0.05),培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。实验3组NCM460细胞中培养5 d后的TIMP3 mRNA表达水平显著高于培养1、3 d后(P<0.05)。培养5 d后,实验1组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);实验2、3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平均显著高于空白对照组和实验1组(P<0.05);实验3组NCM460细胞中MMP9蛋白表达水平与实验2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。培养5 d后,实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平均显著高于对照组(P<0.05);实验1、2、3组NCM460细胞中TIMP3蛋白表达水平两两比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高浓度的镁钙合金浸提液对NCM460细胞中的MMP9及TIMP3基因表达有一定的影响,容易导致早期炎症反应的发生,其机制可能与浸提液中的钙离子浓度有关。